Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất kháng huyết thanh phục vụ công tác giám định sinh học pháp lý tại viện khoa học hình sự

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LÊ THU TRANG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH PHỤC VỤ CÔNG TÁC GIÁM ĐỊNH SINH HỌC PHÁP LÝ TẠI VIỆN KHOA HỌC HÌNH SỰ - BỘ CƠNG AN LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC HÀ NỘI - 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Đề tài : NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH PHỤC VỤ CÔNG TÁC GIÁM ĐỊNH SINH HỌC PHÁP LÝ TẠI VIỆN KHOA HỌC HÌNH SỰ - BỘ CƠNG AN Học viên: Lê Thu Trang Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 Ngƣời hƣớng dẫn: PGS TS Nguyễn Văn Hà HÀ NỘI - 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Đại tá, PSG TS Nguyễn Văn Hà – Phó Giám đốc Trung tâm giám định sinh học Pháp lý – Viện Khoa học hình sự, thời gian qua dìu dắt tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn cán Trung tâm giám định sinh học Pháp lý – Viện Khoa học hình tận tình giúp đỡ bảo cho tơi suốt thời gian thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô giáo Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật – Viện Hàn lâm khoa học Việt Nam dạy dỗ tận tình tạo mơi trƣờng học tập lành mạnh điều kiện trang thiết bị vật chất tốt cho tơi học tập tốt Bên cạnh tơi xin tỏ lịng biết ơn lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè, ngƣời chia sẻ, động viện giúp đạt đƣợc kết học tập tốt nhƣ hoàn thành tốt khóa luận Một lần tơi xin chân thành cảm ơn Hà Nội, tháng 12 năm 2013 Học viên Lê Thu Trang Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT APC Antigen presenting cell (Tế bào trình diện kháng nguyên) CD Cluster of differentiation (Danh pháp dấu ấn bề mặt bạch cầu tiểu cầu đƣợc xác định kháng thể đơn dòng) Ig Immunoglobulin (Globulin miễn dịch) KN-KT Kháng nguyên – Kháng thể MHC Major histocampatibility complex (Các kháng nguyên phù hợp tổ chức) NK Natural killer (Tế bào giết tự nhiên) TCR T cell receptor (Thụ quan bề mặt tế bào T) TH Lympho T helper cell (Tế bào lympho T hỗ trợ) Tế bào B Tiền thân tế bào plasma sản xuất kháng thể Tế bào T Quần thể tế bào lympho biệt hóa tuyến ức TC Cytotoxic T cell (Tế bào T gây độc tế bào) TDTH Delayed type hypensensitivity T cell (Tế bào T gây mẫn muộn) Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU I Một số vấn đề miễn dịch học Lịch sử phát triển miễn dịch học Các trạng thái miễn dịch 2.1 Cơ chế bảo vệ không đặc hiệu 2.2 Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu Các phản ứng miễn dịch 3.1 Miễn dịch thể dịch 3.2 Miễn dịch qua trung gian tế bào Chất sinh miễn dịch kháng nguyên 4.1 Chất sinh miễn dịch 4.2 Tính đặc hiệu kháng nguyên 4.3 Các loại kháng nguyên 4.4 Cách gây miễn dịch đƣờng vào kháng nguyên Kháng thể 5.1 Tính chất kháng thể 5.2 Các loại kháng thể 10 5.3 Cấu trúc kháng thể miễn dịch 10 5.4 Cơ sở di truyền tính khơng đồng kháng thể 12 5.5 Cơ chế sinh tổng hợp kháng thể 13 5.6 Kháng thể đơn dòng (monoclonal antibodies) 14 Phản ứng kháng nguyên – kháng thể 15 6.1 Phản ứng kháng thể với kháng nguyên hữu hình 15 6.2 Phản ứng với kháng nguyên hoà tan (phản ứng kết tủa Ouchterlony) 16 Tình hình nghiên cứu kháng huyết nƣớc Việt Nam 17 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 7.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc ngồi 17 7.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 18 II Một số đặc điểm thỏ 19 III Tá chất (Adjuval) 21 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH 23 I Thiết bị dụng cụ 23 Thiết bị 23 Dụng cụ 23 Hóa chất 24 II Phƣơng pháp thu kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch thỏ 24 III Phƣơng pháp gây miễn dịch 26 Kết hợp kháng nguyên - tá chất 26 Phác đồ gây miễn dịch 26 IV Phƣơng pháp lấy máu thỏ gây miễn dịch 27 V Phƣơng pháp tách kháng huyết 27 VI Phản ứng khuếch tán miễn dịch kép (Phƣơng pháp Ouchterlony) 28 VII Xác định thành phần kháng huyết phƣơng pháp điện di miễn dịch 30 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 32 I Kết thử nghiệm liều tiêm kháng huyết 32 II Kiểm tra tính đặc hiệu kháng huyết thu đƣợc 32 Kết mũi tiêm thứ 32 Kết mũi tiêm thứ 33 Kết mũi tiêm thứ 34 Kết mũi tiêm thứ 35 III Xác định hiệu giá kháng huyết 36 Pha loãng kháng nguyên 37 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Thực phản ứng Ouchterlony 37 IV Kết xác định thành phần kháng huyết phƣơng pháp điện di miễn dịch 40 V Bảo quản kháng huyết thanh: 41 VI Bàn luận 41 Diễn biến sinh lý thỏ 41 Chất lƣợng kháng huyết 42 Ứng dụng 43 CHƢƠNG SƠ ĐỒ QUY TRÌNH TỔNG QUÁT SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH 45 QUY TRÌNH CHI TIẾT SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG Bảng 32 Hình 3.1 Kết kháng huyết ngƣời thu đƣợc sau tuần tiêm mũi thứ 33 Hình 3.2 Kết kháng huyết ngƣời thu đƣợc sau tuần tiêm mũi thứ 34 Hình 3.3 Kết kháng huyết ngƣời thu đƣợc sau tuần tiêm mũi thứ 35 Hình 3.4 Kết kháng huyết ngƣời thu đƣợc sau tuần tiêm mũi thứ 36 Hình 3.5 Kháng huyết ngƣời đạt hiệu giá 1/512 38 Hình 3.6 Kháng huyết chó đạt hiệu giá 1/512 38 Hình 3.7 Kháng huyết lợn đạt hiệu giá 1/512 39 Hình 3.8 Kháng huyết gia cầm đạt hiệu giá 1/512 39 Hình 3.9 Kháng huyết trâu bị đạt hiệu giá 1/1024 40 Hình 3.10 Điện di đồ huyết kháng protein huyết ngƣời 40 Hình 3.11 Sản phẩm kháng huyết đóng lọ theo lơ phục vụ cơng tác giám định 41 Hình 3.12 Hiệu giá kháng huyết ngƣời nƣớc cung cấp 42 Hình 3.13 Hiệu giá kháng huyết ngƣời đề tài sản xuất 42 Hình 3.14 Kháng huyết miễn dịch xác định dấu vết máu ngƣời nƣớc sản xuất 42 Hình 3.15 Kháng huyết miễn dịch xác định dấu vết máu ngƣời đề tài sản xuất 43 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Do mặt trái chế thị trƣờng, năm gần đây, tình hình tội phạm có nhiều diễn biến phức tạp, số lƣợng vụ phạm tội không ngừng gia tăng địi hỏi lực lƣợng cơng an nói chung lực lƣợng kỹ thuật hình nói riêng phải khơng ngừng nâng cao chất lƣợng cơng tác góp phần tích cực công đấu tranh trấn áp tội phạm, giữ gìn trât tự an tồn xã hội Trong cơng tác giám định hình sự, đặc biệt giám định sinh học pháp lý, việc xác định rõ nguồn gốc dấu vết, mẫu vật có ý nghĩa đặc biệt quan trọng góp phần làm sáng tỏ vụ án nhƣ truy tìm thủ phạm Tuy nhiên thực tế, vụ án xảy ra, quan điều tra thƣờng thu nhiều dấu vết, mẫu vật, có khơng dấu vết, mẫu vật khơng có nguồn gốc từ thể ngƣời thể sinh vật khác, để tiến hành giám định, giám định viên phải loại trừ dấu vết mẫu vật khơng có nguồn gốc sinh vật đồng thời phải xác định dấu vết, mẫu vật có nguồn gốc từ ngƣời, dấu vết có nguồn gốc từ động vật thƣờng gặp khác Việc loại trừ nhƣ khẳng định nguồn gốc (loài) dấu vết, mẫu vật gửi giám định khơng ghóp phần tiết kiệm thời gian, cơng sức, tiền bạc mà cịn sở để thực bƣớc giám định nhƣ giám định nhóm máu, giám định gen (ADN) Để xác định đƣợc nguồn gốc (loài) dấu vết, mẫu vật sinh học nhƣ dấu vết máu, dấu vết lông tóc, dấu vết mơ, tổ chức thể, dấu vết nƣớc bọt,… cách nhanh chóng tiết kiệm nhất, phịng thí nghiệm sinh học hình thƣờng sử dụng kháng huyết loài Từ trƣớc tới nay, kháng huyết lồi mua từ số công ty chuyên sản xuất kháng huyết để phục vụ công tác giám định, việc làm cho cơng tác giám định hồn tồn bị động tốn tiền nhà nƣớc Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hàng năm, Trung tâm giám định sinh học pháp lý – Viện Khoa học hình tiến hành giám định 500 vụ án với hàng nghìn mẫu vật có nguồn gốc sinh vật khác nhau, đó, dấu vết có nguồn gốc từ thể ngƣời động vật chiếm tới 80% (khoảng 300 vụ) Để giải vụ án bắt buộc phải sử dụng lƣợng lớn kháng huyết loài nhằm xác định nguồn gốc dấu vết để lại trƣờng, phục vụ cho công tác giám định Để không bị động công tác, đáp ứng đƣợc yêu cầu thực tiễn đặt phải chủ động sản xuất đƣợc kháng huyết loài khác nhau, việc “Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất kháng huyết phục vụ cho công tác giám định sinh học pháp lý” cấp thiết, có ý nghĩa thực tiễn cao, giúp cho quan giám định tự sản xuất đƣợc kháng huyết thanh, không thụ động chờ mua từ bên ngồi, góp phần thúc đẩy tiến độ giám định giải vụ án đƣợc nhanh chóng Do điều kiện kinh phí hạn hẹp, chúng tơi nghiên cứu quy trình sản xuất kháng huyết số lồi có dấu vết thƣờng gặp vụ án nhƣ ngƣời, chó, lợn, trâu bị gia cầm Mục tiêu nghiên cứu đề tài Xây dựng quy trình chuẩn để sản xuất kháng huyết phục vụ cho công tác giám định sinh học viện Khoa học hình Phịng Kỹ thuật hình Cơng an địa phƣơng nƣớc Nội dung nghiên cứu đề tài vấn đề cần giải - Xây dựng quy trình sản suất kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bò gia cầm - Thu nhận xác định hiệu giá loại kháng huyết sản xuất đƣợc - Đóng gói bảo quản kháng huyết Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hình 3.9 Kháng huyết trâu bò đạt hiệu giá 1/1024 Hiệu giá loại kháng huyết ngƣời, chó, lơn gia cầm thu đƣợc đạt hiệu giá tƣơng đối đồng 1/512, chí kháng huyết trâu – bò đạt hiệu giá 1/1024 Hiệu giá loại kháng huyết qua đợt nuôi thỏ để thu lấy máu thay đổi tùy thuộc vào loại thỏ tình trang sức khỏe, cân nặng thỏ IV Kết xác định thành phần kháng huyết phƣơng pháp điện di miễn dịch Hình 3.10 Điện di đồ huyết kháng protein huyết ngƣời Protein (huyết thanh) chất tích điện mà phần lớn tích điện âm, dƣới tác dụng dịng điện chiều mơi trƣờng đệm thích hợp, phân tử protein di chuyển điện trƣờng với vận tốc khác tùy thuộc cấu trúc trọng lƣợng phân tử Do cho kết hợp với kháng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ huyết miễn dịch tƣơng ứng tạo vạch kết tủa khác quan sát đƣợc tiêu điện di V Bảo quản kháng huyết thanh: - Sau tách li tâm, kháng huyết phải đƣợc bổ xung Azit Natri theo tỉ lệ 1ml kháng huyết thanh: 0,001 ml Azit Natri (nồng độ 0,1%) để chống khuẩn - Chuẩn bị ống lọ thủy tinh dung tích ml nút cao su khử trùng, dán mác ghi rõ thông tin mác bao gồm loại kháng huyết ngày sản xuất, hiệu giá thời hạn sử dụng kháng huyết - Kháng huyết đạt tiêu chất lƣợng đƣợc phân chia vào lọ thủy tinh, bảo quản -200C thời hạn năm - Nếu bảo quản chế độ làm lạnh -8 C hạn sử dụng tháng - Không để kháng huyết đông tan đông nhiều lần lần nhƣ hiệu giá kháng huyết giảm nhiều Hình 3.11 Sản phẩm kháng huyết đóng lọ theo lơ phục vụ cơng tác giám định VI Bàn luận Diễn biến sinh lý thỏ - Sau lần tiêm, thỏ thƣờng mệt mỏi, ăn, sau trở lại bình thƣờng - Những thỏ đáp ứng miễn dịch tốt mũi tiêm thứ thƣờng hay bị sốc, có trƣờng hợp bị chết Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ - Thỏ có màu lơng hỗn hợp thƣờng khỏ mạnh có đáp ứng miễn dịch tốt - Khả đáp ứng miễn dịch thỏ phụ thuộc vào địa thỏ Chất lƣợng kháng huyết - Chất lƣợng kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bị gia cầm thu đƣợc từ thỏ sau tiêm mũi thứ đạt hiệu giá từ 1/512, so sánh với kháng huyết ngƣời Đức, Hà Lan mà Viện Khoa học hình sử dụng trƣớc cho kết tƣơng đƣơng: Hình 3.12.Hiệu giá kháng huyết Hình 3.13.Hiệu giá kháng huyết ngƣời nƣớc cung cấp đạt 1/512 ngƣời đề tài sản xuất đạt 1/512 - Thành phần kháng huyết ngƣời mà sản xuất đƣợc so với thành phần kháng huyết ngƣời nƣớc ngồi cho kết tƣơng tự: Hình 3.14 Kháng huyết miễn dịch xác định dấu vết máu ngƣời nƣớc ngồi sản xuất Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Hình 3.15 Kháng huyết miễn dịch xác định dấu vết máu ngƣời đề tài sản xuất Albumin Alpha Antitrypsin Alpha lipoprotein Alpha Macroglobulin Haptoglobulin Beta1 A globulin Transferin Gammaglobulin Ứng dụng Kháng huyết sản xuất đƣợc theo quy trình đề tài nghiên cứu xây dựng vào xác định loài dấu vết sinh vật số vụ án: - Ngày 29/3/2013, Km 15+800 Quốc lộ (Hà Giang - Tuyên Quang) thuộc địa phận xã Đạo Đức, huyện Vị Xuyên, tỉnh Hà Giang xảy vụ tai nạn giao thông xe mô tô nhãn hiệu HOLYDAZX loại xe nam, biển kiểm soát 23 K1 - 4340 ông L.M.N (SN 1972) điều khiển với ngƣời chiều Hậu ngƣời (chƣa rõ tung tích) bị thƣơng nặng, tử vong hồi 19h30 ngày 30/3/2013 Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hà Giang; Ông N bị thƣơng nặng phải điều trị Khám nghiệm trƣờng, Công an thu giữ hai dấu vết máu nâu trƣng cầu giám định Viện khoa học hình kết luận dấu vết máu ngƣời phƣơng pháp Ouchterlony sử dụng kháng huyết ngƣời, chó, lợn trâu bị - Ngày 01/9/2013, Phịng CSĐTTP TTXH cơng an tỉnh Hƣng n nhận đƣợc tin báo thơn 2, xã Ơng Định, huyện Khối Châu, tỉnh Hƣng n, xảy vụ xơ sát đánh hai nhóm niên, dẫn đến hậu anh Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ L.V.K (SN 1992) bị chết Khám nghiệm trƣờng, Công an thu giữ dấu vết trƣng cầu giám định, Viện Khoa học hình tiến hành giám định, sử dụng phƣơng pháp Ouchterlony sử dụng kháng huyết ngƣời, trâu bò, lợn gia cầm phân loại đƣợc dấu vết máu ngƣời, dấu vết máu ngƣời để tiến hành bƣớc giám định - Ngày 19/9/2013, Cơ quan CSĐT – Cơng an TP Ninh Bình, tỉnh Ninh Bình nhận đƣợc tin báo khu vực cổng vào Tỉnh ủy Ninh Bình có nhóm ngƣời dân tụ tập gây trật tự, phát phụ nữ có vết loang màu đỏ quần áo mặc Ngƣời phụ nữ đƣợc đƣa cấp cứu đƣợc xác định L.T.H (SN 1978) Cơ quan CSĐT – Cơng an tỉnh Ninh Bình tiến hành thu mẫu nghi máu trƣờng áo dính chất màu đỏ nghi máu nạn nhân H để trƣng cầu giám định Viện Khoa học hình tiến hành giám định, sử dụng phƣơng pháp Ouchterlony sử dụng kháng huyết ngƣời, trâu bò, lợn gia cầm kết luận máu trƣờng máu dính áo nạn nhân H máu lợn Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ CHƢƠNG SƠ ĐỒ QUY TRÌNH TỔNG QUÁT SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ QUY TRÌNH CHI TIẾT SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH Chọn thỏ - Thỏ có màu lơng hỗn hợp : trắng - đen, vàng trắng, nâu - trắng - Trọng lƣợng thỏ từ 2,5 - 3,0 kg, tức thỏ khoảng tháng tuổi (thỏ trƣởng thành) Nên dùng thỏ - Thỏ khoẻ, nhanh nhẹn Khơng có bệnh ngồi da, khơng dị tật Ni thỏ - Mỗi thỏ khoang riêng để không cắn tránh thỏ chửa đẻ gây miễn dịch - Thức ăn: loại rau, lá, củ ( khoai ) cơm nấu với đậu Các loại rau phải khô, sạch, thuốc bảo vệ thực vật, thuốc kích thích tăng trƣởng - Cung cấp nƣớc uống phòng trị bệnh cho thỏ Thu kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch thỏ 3.1 Thu máu ngƣời (chó, lợn, trâu bò gia cầm) Khối lƣợng máu cần lấy gấp 2,5 - lần khối lƣợng huyết cần có - Để máu đơng hồn tồn, quay li tâm 3000 vịng/15 phút để loại hồn tồn hồng cầu tách lấy huyết thanh, bảo quản lạnh - độ C 3.2 Kết hợp kháng nguyên - tá chất - Lấy thể tích huyết + thể tích tá chất (1:1) - Cho lên máy khuấy từ, khuấy thời gian - giờ, hỗn dịch sánh đồng màu đƣợc Phác đồ gây miễn dịch 4.1 Mũi tiêm thứ - Chất tiêm: ml hỗn hợp kháng nguyên - tá chất toàn vẹn - Sau tuần, kiểm tra tính đặc hiệu kháng nguyên 4.2 Mũi tiêm thứ 2: Sau mũi thứ tuần - Chất tiêm: ml huyết + ml dung dịch NaCl 0,9% Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ - Sau tuần, kiểm tra tính đặc hiệu kháng huyết c Mũi tiêm thứ 3: Sau mũi thứ hai tuần - Chất tiêm: ml hỗn hợp kháng ngun - tá chất khơng tồn vẹn - Sau tuần, kiểm tra tính đặc hiệu kháng huyết d Mũi tiêm thứ 4: Sau mũi thứ ba tuần - Chất tiêm: 1ml Huyết + ml dung dịch NaCL 0,9% - Sau mũi thứ từ đến 10 ngày, lấy máu thỏ để tách kháng huyết - Kiểm tra tính đặc hiệu kháng huyết thu đƣợc Thu kháng huyết - Chọn thỏ tiêm mũi thứ đáp ứng miễn dịch tốt - Cố định thỏ bàn mổ, thu máu, lƣợng máu thu đƣợc từ 60 - 80 ml đạt yêu cầu (100 ml tốt nhất) - Bảo quản nhiệt độ phòng khoảng để huyết tách hết khỏi cục máu đông - Li tâm 3000 vòng/15 phút lƣợng huyết thu đƣợc để loại hết hồng cầu - Hút lớp dịch nổi, thực ly tâm nhƣ thêm lần Hút thu lƣợng huyết phía trên, loại bỏ phần cặn - Thêm Azit Natri với nồng độ không 0,1% để chống vi khuẩn bảo quản – 80 C Xác định hiệu giá kháng huyết - Tiến hành pha loãng kháng huyết 4096 lần (theo trình tự pha lỗng bƣớc) - Xác định hiệu giá kháng huyết thạch (theo mức độ pha lỗng) - Chọn kháng huyết có hiệu giá đạt tối thiểu 1/512 để thử nghiệm vụ án thực tế Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Đóng gói bảo quản kháng huyết - Kháng huyết đƣợc đóng gói lọ thủy tinh 2ml, ghi rõ loại kháng huyết thanh, ngày sản xuất thời hạn sử dụng - Bảo quản kháng huyết tủ lạnh sâu Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đã xây dựng thành công quy trình sản xuất kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bò gia cầm - Đã xác định hiệu giá kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bị gia cầm - Đã thử nghiệm thành công loại kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bị gia cầm vào số vụ án hình xác định đƣợc nguồn gốc dấu vết để lại trƣờng vụ án phục vụ cho công tác giám định Kiến nghị - Nên đầu tƣ nguồn kinh phí để ứng dụng quy trình sản xuất kháng huyết quy mơ lớn đảm bảo sản xuất đủ kháng huyết ngƣời, chó, lợn, trâu bị gia cầm với số lƣợng đáp ứng phục vụ cơng tác giám định hình khơng Viện khoa học hình - Bộ Cơng an mà cịn Phịng kỹ thuật hình - Công an tỉnh nƣớc - Triển khai nghiên cứu sản xuất kháng huyết số loài động vật khác, nhƣ loài động vật quý nhằm truy nguyên nguồn gốc loài động vật vụ án săn bắt động vật quý - Sử dụng công nghệ đông khô kháng huyết để bảo quản đƣợc lâu hơn, vận chuyển dễ dàng Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Từ điển miễn dịch học tập (1978) NXB Y học Hà Nội Phạm Văn Ty (2001) Miễn dịch học NXB Đại học quốc gia Hà Nội Đỗ Trung Phấn (1978) Miễn dịch trung gian tế bào NXB Y học Hà Nội Vũ Triệu An – Nguyễn Ngọc Lanh (1997) Miễn dịch học NXB Y học Hà Nội Bài giảng huyết học truyền máu NXB Y học Hà Nội (2004) Tổng cục hậu cần kỹ thuật – Bộ Công an, số 3/2008 Tạp chí khoa học kỹ thuật mơi trƣờng Tổng cục hậu cần kỹ thuật – Bộ Công an, số 9/2010 Tạp chí khoa học kỹ thuật mơi trƣờng Nguyễn Nhƣ Thanh, 1966 Miễn dịch học NXB Nơng nghiệp Hà Nội 10 Đinh Thị Bích Lân (2006) Giáo trình miễn dịch học thú y Đại học nơng lâm Thái Nguyên Websites: 11 Website: http://www.benhhoc.com 12 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11739546 Tài liệu tiếng anh: 13 The Royal tropical institute (1987), Manual of International couse in serological diagnostic techniques, Amsterdam 14 Harlow Ed and Lane David, 1988 Antibodies: a laboratory manual Cold Spring Harbor Laboratory 15 Dress W D Immunization of experimental animals Application of Immunological methods in Biomedical Sciences, Volume (Edited by D M Weir, Co – editors L A Herzenberg, Caroline black well, Leonone A Herzenberg) Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ PHỤ LỤC Hình Kết kháng huyết Hình Kết kháng huyết trâu bò sau tiêm mũi thứ gia cầm sau tiêm mũi thứ Hình Kết kháng huyết Hình Kết kháng huyết lợn sau tiêm mũi thứ Số hóa Trung tâm Học liệu chó sau tiêm mũi thứ http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Bảng Bảng thống kê hiệu giá kháng huyết ngƣời STT Giới tính Đực Đực Cái Đực Đực Cái Cân nặng (kg) 2,10 2,15 2,4 1,95 2,0 2,3 Màu lông Hiệu giá Trắng-Đen Nâu – Trắng Trắng Trắng Xám - trắng Đen 1/512 1/512 1/256 1/512 1/512 1/512 Độ đáp ứng miễn dịch Tốt Tốt Kém Tốt Tốt Tốt Ghi Chết sốc Tổng số: thỏ (Đực 4, 2) Đáp ứng miễn dịch tốt: 05 Thỏ chết: 01 Bảng Bảng thống kê hiệu giá kháng huyết chó STT Giới tính Đực Đực Đực Cái Cái Cái Cân nặng (kg) 2,20 2,15 2,15 2,1 2,0 1,8 Màu lông Hiệu giá Trắng Trắng Trắng-Xám Trắng-Đen Nâu-Xám Xám 1/512 1/512 1/512 1/256 1/512 1/512 Độ đáp ứng miễn dịch Tốt Tốt Tốt Kém Tốt Tốt Tổng số: thỏ (Đực 3, 3) Đáp ứng miễn dịch tốt: 05 Đáp ứng miễn dịch kém: 01 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Ghi Bảng Bảng thống kê hiệu giá kháng huyết trâu bò STT Giới tính Đực Đực Đực Cái Cái Đực Cân nặng (kg) 1,9 2,30 2,10 2,0 2,10 2,10 Màu lông Hiệu giá Trắng-Xám Trắng-Đen Đen Trắng Trắng Trắng-Xám 1/512 1/1024 1/512 1/128 1/256 1/512 Độ đáp ứng miễn dịch Tốt Tốt Tốt Kém Kém Tốt Ghi Chết sốc Tổng số : thỏ (Đực 4, 2) Đáp ứng miễn dịch tốt: 04 Đáp ứng miễn dịch kém: 01 Thỏ chết: 01 Bảng Bảng thống kê hiệu giá kháng huyết lợn STT Giới tính Đực Đực Đực Đực Đực Cái Cân nặng (kg) 2,50 2,25 2,40 2,0 2,10 2,15 Màu lông Hiệu giá Trắng Xám-Trắng Đen-Trắng Trắng-Đen Trắng Trắng-Nâu 1/256 1/512 1/512 1/256 1/512 1/512 Độ đáp ứng miễn dịch Kém Tốt Tốt Tốt Kém Tốt Tổng số : thỏ (Đực 5, 1) Đáp ứng miễn dịch tốt: 04 Đáp ứng miễn dịch kém: 02 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Ghi Bảng Bảng thống kê hiệu giá kháng huyết gia cầm STT Giới tính Đực Đực Đực Đực Đực Đực Cân nặng (kg) 2,2 2,3 2,3 2,2 2,10 2,15 Màu lông Hiệu giá Xám Trắng Đen-Trắng Trắng-Đen Trắng - Đen Trắng 1/256 1/512 1/512 1/512 1/512 1/512 Độ đáp ứng miễn dịch Kém Tốt Tốt Tốt Tốt Tốt Tổng số : thỏ (Đực 6) Đáp ứng miễn dịch tốt: 05 Đáp ứng miễn dịch kém: 01 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Ghi ... TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Đề tài : NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT KHÁNG HUYẾT THANH PHỤC VỤ CÔNG TÁC... tiễn đặt phải chủ động sản xuất đƣợc kháng huyết loài khác nhau, việc ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất kháng huyết phục vụ cho công tác giám định sinh học pháp lý? ?? cấp thiết, có ý nghĩa... nghiệm sinh học hình thƣờng sử dụng kháng huyết lồi Từ trƣớc tới nay, kháng huyết lồi mua từ số cơng ty chun sản xuất kháng huyết để phục vụ công tác giám định, việc làm cho cơng tác giám định