Nghiên Cứu Sản Xuất Chế Phẩm Probiotic Chịu Nhiệt Sử Dụng Trong Thức Ăn Cho Chăn Nuôi Heo, Gà

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHỊU NHIỆT SỬ DỤNG TRONG THỨC ĂN CHO CHĂN NUÔI HEO, GÀ QUY MÔ PILOT Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS Phạm Huỳnh Ninh Sinh viên thực : Trần Lệ Quyên MSSV: 1311100608 Lớp: 13DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Các tài liệu tham khảo trích dẫn có nguồn gốc xác thực Sinh viên thực Trần Lệ Quyên LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực đồ án tốt nghiệp tốt nghiệp Phân Viện Chăn Nuôi Nam Bộ, hướng dẫn tận tình Thầy Cơ, anh chị bạn, em hoàn thành tốt đồ án Em xin chân thành gửi lời cám ơn đến: Em xin kính dâng lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Ba Mẹ tất người thân gia đình ni em khn lớn nên người tận tâm lo lắng, tạo điều kiện cho em học tập hoàn thành đồ án tốt nghiệp Ngôi trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh, nơi em gắn bó suốt bốn năm qua, giúp em tiếp cận điều bổ ích, kinh nghiệm sống Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Thầy Cô môn Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh trang bị cho em kiến thức bản, làm móng để em thực đề tài làm tốt công việc sau TS Phạm Huỳnh Ninh, Phó mơn Dinh Dưỡng Thức Ăn Chăn nuôi, Phân Viện Chăn Nuôi Nam Bộ, Thầy tạo điều kiện cho em làm đề tài đây, nhiệt tình hướng dẫn hỗ trợ cho em q trình hồn thành đồ án tốt nghiệp Chị Lê Hoàng Bảo Vi, anh Vũ Minh, anh Lê Quang Trí phòng Dinh Dưỡng Thức Ăn Chăn ni, Phân Viện Chăn Ni Nam Bộ tận tình bảo, giảng dạy giúp đỡ em suốt thời gian thực đồ án Cơ Nguyễn Hồi Hương, phòng vi sinh, khoa Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, trường Đại Học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh tận tình giúp đỡ em trình nhận đề tài MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG BIỂU v DANH MỤC HÌNH ẢNH vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương probiotic .3 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu probiotic 1.1.2 Định nghĩa probiotic 1.1.3 Các VSV probiotic thường gặp 1.1.4 Tiêu chuẩn lựa chọn chủng vi sinh vật probiotic 1.1.5 Cơ chế tác động Probiotic 1.1.6 Vai trò probiotic vật nuôi .11 1.1.7 Probiotic từ bào tử 12 1.1.8 Tình hình nghiên cứu sử dụng Probiotic giới Việt Nam 13 1.2 Đại cương vi khuẩn Bacillus 18 1.2.1 Đặc điểm sinh học Bacillus 18 1.2.2 Bào tử Bacillus 22 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 2.1 Thời gian địa điểm thực đề tài…… ……… ………………………… .25 2.2 Vật liệu 25 2.2.1 Chủng vi sinh vật: ……………………………….……… .………25 2.2.2 Hóa chất, thiết bị dụng cụ……………………………………….… … 25 2.3 Môi trường nghiên cứu……………………………………………… …………26 2.4 Các phương pháp nghiên cứu (theo sơ đồ bố trí TN tổng quát)………… 30 2.5 Phương pháp nhuộm Gram……………………………………………… …31 i 2.6 Phương pháp nhuộm bào tử theo Schaeffer Fulton ….32 2.7 Xác định mật độ TB phương pháp đếm khuẩn lạc……………… .…………32 2.7.1 Xác định mật độ TB phương pháp đo mật độ quang………… .….33 2.7.2 Lập đường cong tăng trưởng……………………………… .34 2.7.3 Khảo sát tạo thành bào tử…………………………………… 35 2.8 Khảo sát đặc điểm probiotic……………………………………… … … ….35 2.8.1 Khảo sát khả chịu axit dày…………………………………… …35 2.8.2 Khảo sát khả chịu muối mật…………………………………… … 36 2.8.3 Khảo sát khả sinh enzyme ngoại bào ….…………………… … 37 2.8.4 Khảo sát khả đối kháng với vi khuẩn kiểm định phương pháp đường vng góc Cross Streak……………………………………………… .….40 2.8.5 Khảo sát môi trường tạo bào tử…………………………………… …….40 2.8.6 Khảo sát phương pháp tạo bào tử nhiều nhất…………………… .….41 2.8.7 Sản xuất bào tử dạng pilot…………………………………………… ….42 2.8.8 Phân tích thống kê liệu…………………………………………… ….44 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………… ….45 3.1 Khảo sát đặc điểm probiotic………………………… ……………………… 45 3.1.1 Khả chịu axit dày…………………………………… ……………… 45 3.1.2 Khả chịu muối mật………………………………………… ………46 3.1.3 Khả sinh enzyme ngoại bào ( amylase, protease, cellulase)…… …48 3.1.4 Khả đối kháng kháng với vi khuẩn kiểm định phương pháp đường vng góc Cross Streak………………………………………….… ……51 3.2 Đặc tính sinh học phân loại chủng tuyển chọn………………… .………… 53 3.2.1 Đặc tính hình thái chủng Sub Yoi………………………… …… 53 3.2.2 Tổng hợp số đặc tính probiotic chủng Sub Yoi……… …… 54 3.3 Thiết lập đường cong tăng trưởng chủng Sub…………… .……………………….54 3.3.1 Thiết lập đường chuẩn……………………………………………… .… 54 ii 3.3.2 Thiết lập đường cong tăng trưởng……………………………… ……….56 3.4 Thiết lập đường cong tăng trưởng chủng Yoi…………… ……………………….56 3.4.1 Thiết lập đường chuẩn……………………………………………… 56 3.4.2 Thiết lập đường cong tăng trưởng………………………… …………….58 3.5 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tạo thành bào tử chủng Sub Yoi…………………………………………………………… … .……58 3.6 Kết khảo sát điều kiện tạo bào tử tốt nhất………………… .…………… 59 3.7 Sản xuất bào tử quy mô pilot……………………………………………… .…… 61 3.7.1 Kết khảo sát thời gian thích hợp để đạt sinh khối cao với quy mô pilot………………………….……………………………………… … ……61 3.7.2 Tiến hành tạo bào tử………… ……………………………… .… … 62 3.8 Tạo chế phẩm……………………………………………………………… …… 64 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ……………………… ………………… 65 4.1 Kết luận……………………………………………………… ……… … …….65 4.2 Kiến nghị……………………………………………………………….… ………65 TÀI LIỆU THAM KHẢO……………………………………………… …66 PHỤ LỤC…………………………………………………………………….… 74 Phụ lục I: Bảng biểu…………………………………………… ………………….….74 Phụ lục II: Hình ảnh……………………………… ………….….85 iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT KL Khuẩn lạc MT Môi trường N Mật độ tế bào TB Tế bào TN Thí nghiệm VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật iv DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Tóm tắt số thơng tin vài sản phẩm probiotic có mặt thị trường 17 Bảng 1.2 Các đặc điểm khác tế bào sinh dưỡng bào tử .23 Bảng 3.1 Tỷ lệ sống sót 11 chủng vi khuẩn vi khuẩn mơi trường pH thấp 45 Bảng 3.2 Tỷ lệ sống sót 11 chủng vi khuẩn môi trường muối mật 2% 47 Bảng 3.3 Hoạt tính enzyme ngoại bào chủng Bacillus 49 Bảng 3.4 Hoạt tính đối kháng chủng Bacillus với vi khuẩn kiểm định 51 Bảng 3.5 Tổng hợp số đặc tính probiotic chủng Sub Yoi 54 Bảng 3.6 Kết khảo sát đường chuẩn chủng Sub .55 Bảng 3.7 Kết khảo sát đường chuẩn chủng Yoi 57 Bảng 3.8 Tỷ lệ hình thành bào tử khoảng thời gian khác với quy mô pilot .63 Bảng 5.1 Số lượng khuẩn lạc mật độ tế bào vi khuẩn sống sót mơi trường pH thấp 74 Bảng 5.2 Số lượng khuẩn lạc mật độ tế bào vi khuẩn sống sót mơi trường muối mật 2% 75 Bảng 5.3 Số liệu đường chuẩn chủng Sub 76 Bảng 5.4 Kết phân tích tuyến tính giá trị OD log N chủng Sub 77 Bảng 5.5 Số liệu đường cong tăng trưởng chủng Sub 78 Bảng 5.6 Số liệu đường chuẩn chủng Yoi 79 Bảng 5.7 Kết phân tích tuyến tính giá trị OD log N chủng Yoi 80 Bảng 5.8 Số liệu đường cong tăng trưởng chủng Yoi 81 v Bảng 5.9 Số liệu khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tạo thành tế bào bào tử chủng Sub 82 Bảng 5.10 Số liệu khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tạo thành tế bào bào tử chủng Yoi 82 Bảng 5.11 Tỷ lệ hình thành bào tử qua môi trường chủng Sub Yoi .83 Bảng 5.12 Mật độ bào tử phương pháp tạo bào tử tốt khoảng thời gian khảo sát khác .83 Bảng 5.13 Tỷ lệ hình thành bào tử theo thời gian phương pháp khác 84 Bảng 5.14 Kết khảo sát thời gian thích hợp để đạt sinh khối cao với quy mô pilot 85 Bảng 5.15 Kết khảo sát mật độ bào tử theo thời gian với quy mô piot 86 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơ chế tác động chung probiotic động vật…… … Hình 1.2 Các cấu trúc bào tử B Subtilis .23 Hình 1.3 Chu trình hình thành bào tử nảy mầm trở lại Bacilllus .24 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát .30 Hình 3.1 Vòng phân giải gelatin (protease), tinh bột (amylase), cellulose (cellulase) chủng Bacillus…… …………………………… 50 Hình 3.2 Hoạt tính đối kháng với VK kiểm định chủng Bacillu… .52 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào bào tử chủng Sub 53 Hình 3.4 Hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào bào tử chủng Yoi 53 Hình 3.5 Đường tương quan giá trị OD Log N chủng Sub 55 Hình 3.6 Đường cong tăng trưởng chủng Sub theo thời gian 56 Hình 3.7 Đường tương quan giá trị OD Log N chủng Yoi .57 Hình 3.8 Đường cong tăng trưởng chủng Yoi theo thời gian… 58 Hình 3.9 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy đến hình thành bào tử chủng Sub Yoi………………… ……………………59 Hình 3.10 Tỷ lệ hình thành bào tử phương pháp khác theo thời gian chủng Bacillus subtilis ……………… 60 Hình 3.11 Mật độ tế bào với quy mô pilot chủng Bacillus subtilis 61 Hình 5.1 Máy ly tâm Avanti JXN Series .87 Hình 5.2 Chế phẩm thử nghiệm bào tử Bacillus subtilis… 87 Hình 5.3 Hệ thống lên men L……………… 88 vii PHỤ LỤC PHỤ LỤC I: BẢNG BIỂU Bảng 5.1 Số lượng KL mật độ TB vi khuẩn sống sót mơi trường pH thấp ST Kí Khuẩn lạc Mật độ tế Khuẩn lạc Mật độ tế Khuẩn lạc Mật độ tế T hiệu lúc phút bào lúc lúc 60 phút bào lúc 60 lúc 180 phút bào lúc chung phút phút (cfu/ml) 10 10 11 BI1 BI2 BI3 BI4 MN1 MN2 Sub Yoi Liche Natto BA -5 -6 10 220 57 180 30 >250 55 >250 66 >250 129 >250 98 >250 74 >250 130 >250 84 >250 70 >250 50 >250 86 213 43 283 52 207 79 161 52 146 19 124 34 32 19 148 25 135 25 (cfu/ml) 10 2,21 × 108 6,05 × 108 1,13 × 10 1,02 × 10 7,70 × 108 6,80 × 108 2,57 × 10 2,27× 108 1,44 × 108 2,91 × 107 1,51 × 10 180 phút -4 10 -5 16 69 34 38 46 18 68 23 19 33 10 40 38 60 11 78 54 34 67 36 12 1 5 0 1 74 (cfu/ml) 10 3,52 × 108 1,84 × 108 2,90 × 10 1,68 × 10 1,98 × 108 3,52 × 108 2,24 × 10 2,62 × 108 0 -3 10 -4 112 37 100 21 131 20 120 17 235 41 241 98 210 31 187 31 41 37 209 41 88 31 186 27 235 55 150 40 197 39 198 40 24 3 16 13 23 6,04 × 107 6,40 × 107 1,43 × 108 1,06 × 108 7,60 × 107 7,69 × 107 1,11 × 108 1,10 × 108 0 Bảng 5.2 Số lượng khuẩn lạc mật độ tế bào vi khuẩn sống sót mơi trường muối mật 2% ST Kí Khuẩn lạc Mật độ tế Khuẩn lạc Mật độ tế Khuẩn lạc Mật độ tế T hiệu lúc phút bào lúc lúc 60 phút bào lúc 60 lúc 180 phút bào lúc chung 10-5 10-6 10-4 phút 10-5 (cfu/ml) 10 11 BI1 BI2 BI3 BI4 MN1 MN2 Sub Yoi Liche Natto BA >250 42 >250 53 194 42 125 27 >250 100 >250 72 >250 61 >250 59 162 58 166 68 >250 110 >250 127 78 27 132 25 >250 21 >250 25 >250 71 >250 74 >250 67 >250 92 >250 97 >250 109 4,75 × 108 1,76 × 108 8,60 × 10 6,00 × 10 2,06 × 108 1,19 × 109 1,19 × 10 2,50 × 10 7,25 × 108 7,95 × 108 1,03 × 10 10-3 phút 10-4 (cfu/ml) 81 12 85 17 29 16 55 57 10 25 57 47 29 62 50 76 56 110 12 49 52 63 21 90 58 15 109 12 75 4,23 × 108 1,48 × 108 2,85 × 10 1,28 × 10 2,65 × 108 2,32 × 108 3,21 × 10 4,23 × 10 2,58 × 108 3,90 × 108 4,26 × 10 180 phút (cfu/ml) 67 32 115 119 128 24 126 33 36 70 16 47 95 85 96 184 31 112 75 107 39 197 25 130 18 140 46 144 128 194 73 211 83 >250 85 230 60 >250 84 >250 45 7,72 × 107 6,97 × 107 6,50 × 107 6,70 × 107 9,31 × 107 8,53 × 107 7,67 × 107 6,93 × 107 1,30 × 108 1,59 × 108 3,29 × 108 Bảng 5.3 Số liệu đường chuẩn chủng Sub Tỷ lệ pha Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Mật độ tế loãng độ pha độ pha độ pha bào loãng 10-4 lỗng 10-5 lỗng 10-6 (cfu/ml) 204 29 2,10 × 108 0,541 200 28 >250 151 37 1,73 × 108 0,474 >250 160 32 >250 137 1,51 × 108 0,4 >250 165 >250 140 1,38 × 108 0,354 >250 135 >250 122 1,18 × 108 0,27 >250 114 >250 100 1,02 × 108 0,215 >250 103 >250 96 9,70 × 107 0,16 >250 98 1:3,5 1:4 1:5 1:6 1:8 1:11 1:13 76 OD Bảng 5.4 Kết phân tích tuyến tính giá trị OD log N chủng Sub Regression Statistics Multiple R 0,995667 R Square 0,991353 Adjusted R Square 0,989623 Standard Error 0,012448 Observations ANOVA Regression Residual Total Df SS 0,088822 0,000775 0,089596 Intercept OD Standard Coefficients Error 7,831245 0,013509 0,879174 0,036721 77 Significance MS F F 0,088822 573,2107 2,37E-06 0,000155 t Stat P-value Lower 95% 579,6901 2,9E-13 7,796518 23,94182 2,37E-06 0,784779 Bảng 5.5 Số liệu đường cong tăng trưởng chủng Sub Giờ OD Độ pha loãng Log N 0,327 7,119 0,162 7,974 0,422 8,202 0,382 8,468 0,247 8,650 10 0,308 8,704 12 0,327 8,819 14 0,33 8,820 16 0,314 8,806 18 0,324 8,815 20 0,21 8,803 22 0,28 8,776 24 0,276 8,773 78 Bảng 5.6 Số liệu đường chuẩn chủng Yoi Tỷ lệ pha Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc Mật độ tế loãng độ pha độ pha độ pha bào loãng 10-4 loãng 10-5 loãng 10-6 (cfu/ml) 111 1,15 × 108 0,527 119 14 65 6,75 × 107 0,394 70 10 4,90 × 107 0,316 2,25 × 107 0,151 1,51 × 107 0,103 1:3 1:3,5 1:5 1:11 1:18 >250 50 >250 48 207 38 209 42 149 29 20 140 15 79 OD Bảng 5.7 Kết phân tích tuyến tính giá trị OD log N chủng Yoi Regression Statistics Multiple R 0,995242 R Square 0,990506 Adjusted R Square 0,987342 Standard Error 0,040078 Observations ANOVA Regression Residual Total Df SS 0,50277 0,004819 0,507589 Intercept OD Standard Coefficients Error 7,016377 0,038675 2,033253 0,114926 80 MS 0,50277 0,001606 Significance F F 313,0037 0,000394 t Stat P-value Lower 95% 181,4197 3,69E-07 6,893296 17,69191 0,000394 1,667508 Bảng 5.8 Số liệu đường cong tăng trưởng chủng Yoi Giờ OD Độ pha loãng Log N 0,55 7,135 0,142 7,305 0,336 7,700 0,372 8,074 0,45 8,232 10 0,4 8,432 12 0,371 8,674 14 0,334 10 8,700 16 0,344 10 8,716 18 0,337 10 8,702 20 0,326 10 8,679 22 0,341 10 8,710 24 0,328 10 8,683 81 Bảng 5.9 Số liệu khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tạo thành tế bào bào tử chủng Sub Môi trường Mật độ tế bào Mật độ tế bào lúc Mật độ bào tử lúc (OD600nm) lúc 24 24 (cfu/ml) 72 (cfu/ml) MT1 2,009 ± 0,008 1,43 × 109 2,03 × 108 MT2 1,843 ± 0,005 1,54 × 108 2,50 × 107 MT3 1,823 ± 0,009 2,68 × 108 2,10 × 108 MT4 1,976 ± 0,006 7,75 × 108 3,20 × 108 MT5 1,558 ± 0,002 2,81 × 108 1,55 × 108 MT6 1,731 ± 0,008 1,49 × 109 1,19 × 109 MT7 1,948 ± 0,005 8,70 × 108 5,35 × 108 Bảng 5.10 Số liệu khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tạo thành tế bào bào tử chủng Yoi Môi trường Mật độ tế bào Mật độ tế bào lúc Mật độ bào tử lúc (OD600nm) lúc 24 24 (cfu/ml) 72 (cfu/ml) MT1 2,193 ± 0,017 1,15 × 109 2,98 × 108 MT2 1,571 ± 0,073 1,54 × 108 1,08 × 108 MT3 2,030 ± 0,002 9,90 × 108 1,47 × 108 MT4 2,192 ± 0,008 8,85 × 108 2,44 × 108 MT5 2,126 ± 0,001 8,15 × 108 2,55 × 108 MT6 1,738 ± 0,019 2,17 × 109 2,27 × 108 MT7 2,149 ± 0,020 8,60 × 108 2,07 × 108 82 Bảng 5.11 Tỷ lệ hình thành bào tử qua mơi trường chủng Sub Yoi Môi trường STT Tỷ lệ hình thành bào tử (%) Sub Yoi MT1 14,20 25,91 MT2 16,23 70,13 MT3 78,36 14,85 MT4 41,29 27,57 MT5 55,16 31,29 MT6 79,87 10,46 MT7 61,49 24,07 Bảng 5.12 Mật độ bào tử phương pháp tạo bào tử tốt khoảng thời gian khảo sát khác ST Phương T pháp pH Mật độ bào tử khoảng thời gian khác (cfu/ml) Tổng TB ban đầu 19 29 43 53 65 75 1,01 × 107 3,75 × 106 5,05 × 106 7,50 × 106 6,80 × 106 6,60 × 106 6,75 × 106 6,80 × 106 pH 10 9,00 × 107 7,20 × 106 7,25 × 106 2,52 × 107 5,35 × 107 6,20 × 107 6,05 × 107 6,75 × 107 pH 11 1,15 × 107 6,25 × 106 5,65 × 106 7,15 × 106 9,48 × 106 9,05 × 106 8,55 × 106 9,24 × 106 6,05 × 107 8,65 × 106 6,25 × 106 5,70 × 106 7,90 × 106 9,30 × 106 7,80 × 106 9,90 × 106 (cfu/ml) MT nghèo dinh dưỡng Cơ đặc 1,52 × 108 5,15 × 107 4,85 × 107 6,60 × 107 5,25 × 107 6,95 × 107 8,20 × 107 8,90 × 107 Nhiệt độ 4,05 × 107 1,06 × 107 1,03 × 107 1,08 × 107 1,16 × 107 9,62 × 106 9,05 × 106 9,05 × 106 83 Bảng 5.13 Tỷ lệ hình thành bào tử theo thời gian phương pháp khác STT Phương Tỷ lệ hình thành bào tử theo thời gian phương pháp pháp khác (%) 19 29 43 53 65 75 pH 37,13 50 74,26 67,33 65,35 66,83 67,33 pH 10 8,06 27,99 59,44 68,89 67,22 75 pH 11 54,35 49,13 61,17 82,4 78,67 74,35 80,33 MT 14,3 10,33 9,42 13,06 15,37 12,89 16,38 nghèo dinh dưỡng Cô đặc 33,8 31,83 43,31 34,45 45,61 53,81 58,41 Nhiệt 26,17 25,31 26,67 28,57 23,75 22,34 22,35 độ 84 Bảng 5.14 Kết khảo sát thời gian thích hợp để đạt sinh khối cao với quy mô pilot Thời gian (giờ) 12 24 Khuẩn lạc Khuẩn lạc Khuẩn lạc độ pha độ pha độ pha loãng 10-4 loãng 10-5 loãng 10-6 148 25 167 30 177 12 167 13 >250 77 >250 87 >250 40 >250 45 >250 39 >250 35 85 Mật độ tế Log N bào (cfu/ml) 1,68 × 106 6,23 1,72 × 107 7,24 8,20 × 108 8,91 4,25 × 108 8,62 3,70 × 108 8,56 Bảng 5.15 Kết khảo sát mật độ bào tử theo thời gian với quy mô piot Giờ 12 24 28 32 36 Khuẩn lạc 10-4 10-5 10-6 85 12 90 19 >250 69 >250 67 >250 >250 100 >250 >250 114 Khuẩn lạc sau xử Mật độ tế Mật độ lý nhiệt bào bào tử (cfu/ml) (cfu/ml) 8,75 × 106 6,80 × 107 1,07 × 109 10-4 10-5 >250 53 >250 45 10-6 4,90 × 107 >250 39 >250 31 >250 50 >250 48 >250 63 >250 76 >250 81 >250 92 86 3,50 × 108 4,90 × 108 6,95 × 108 8,65 × 108 PHỤ LỤC 2: HÌNH ẢNH Hình 5.1 Máy ly tâm Avanti JXN Series Hình 5.2 Chế phẩm thử nghiệm bào tử Bacillus subtilis 87 Hình 5.3 Hệ thống lên men L 88 ... cầu ngày cao ngành chăn ni an tồn góp phần hạn chế nhập khẩu, chủ động nguồn sản phẩm làm giảm giá thành sản phẩm Đây sở cho việc thực khóa luận “ Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic chịu nhiệt. .. hạn chế số lượng nghiên cứu Từ trạng nghiên cứu sản xuất probiotic cho thấy, việc nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic chứa bào tử Bacillus quy mô pilot yêu cầu cấp thiết nhằm tiến tới sản xuất. .. thiện tăng trọng giảm tiêu tốn thức ăn Năm 2009, Trần Quốc Việt cộng thuộc Viện Chăn nuôi Việt Nam nghiên cứu sản xuất probiotic enzyme tiêu hóa dùng chăn ni Kết tìm quy trình sản xuất chế phẩm probiotic