Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic cho người từ vi khuẩn lactobacillus reuteri LA5

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC  LUẬN VĂN THẠC SỸ Ngành: Công nghệ sinh học Mã ngành: 62.42.02.01 Đề tài: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO NGƯỜI TỪ VI KHUẨN LACTOBACILLUS REUTERI LA5 Giáo viên hướng dẫn: TS Đào Thị Hồng Vân ThS.Trần Thị Thu Phương Học viên thực hiện: Đặng Lan Anh Lớp: Cao học Công nghệ sinh học Hà Nội - 2016 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công nghệ sinh học Mã ngành: 62.42.02.01 Đề tài: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO NGƯỜI TỪ VI KHUẨN LACTOBACILLUS REUTERI LA5 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học LỜI CẢM ƠN Formatted: Font: 16 pt, Bold Formatted: Centered Tôi xin trân thành cảm ơn Formatted: Font: 16 pt, Bold, English (United States) Formatted: Font: Bold, Italic Ban giám hiệu, phòng đào tạo sau đại học trường Viện đại học Mở Hà Nội Formatted: Left, Indent: First line: 0.31" Formatted: Indent: First line: 0.31" tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian nghiên cứu Formatted: Font: Italic Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: Formatted: Justified, Indent: First line: 0.31" Ban lãnh đạo, cán nhân viên trung tâm Công nghệ sinh học – Viện thực phẩm chức quan tâm tạo điều kiện tốt cho học tập thực luận Formatted: Font: Bold, Italic Formatted: Indent: First line: 0.31" Formatted: Font: Italic Formatted: Justified, Indent: First line: 0.31" văn Tiến sĩ Đào Thị Hồng Vân, Khoa công nghệ sinh học – Viện đạo học Mở Hà Nội người trực tiếp dạy bảo, hướng dẫn suốt q trình nghiên cứu Cuối tơi xin cảm ơn bạn bè đồng nghiệp, người gia đình chăm lo động viên giúp yên tâm học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả Formatted: Centered, Tab stops: 3.5", Left Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Italic Formatted: Right Đặng Lan Anh Formatted: Centered Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Italic Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học Formatted: English (United States) LỜI CAM ĐOAN Formatted: Font: 16 pt Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu tôi, tất số liệu kết luận văn trung thực chưa công bố đề tài khác Formatted: Font: Not Bold Formatted: Justified, Indent: First line: 0.31" Formatted: Left Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả Đặng Lan Anh Formatted: Left, Tab stops: 3.44", Left + 3.5", Left Formatted: Font: Not Bold, English (United States) Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Probiotic 1.2 Đặc điểm phân loại Lactobacillus reuteri 15 1.3 Tình hình nghiên cứu nước Lactobacillus reuteri 19 1.4 Ứng dụng 20 PHẦN II : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Vật liệu 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Hố chất, mơi trường thiết bị 21 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Xác định mật độ tế bào [1] 22 2.2.2 Nhuộm gram [1] 23 2.2.3 Ảnh hưởng điều kiện môi trường 24 2.2.4 Khả chịu muối mật [1] 24 2.2.5 Lên men thu sinh khối vi khuẩn quy mơ 10 lít, 60 lít 24 2.2.6 Tính hiệu suất thu hồi sản phẩm 25 2.2.7 Tạo chế phẩm probiotic bảo quản chế phẩm .25 2.2.8 Xác định hàm lượng axit amin 26 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Một số đặc điểm sinh học chủng Lactobacillus reuteri LA5 27 3.1.1 Đặc điểm hình thái 28 3.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa thành phần axit amin 28 3.2 Khảo sát số điều kiện lên men thu sinh khối .30 3.2.1 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng 30 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học 3.2.3 Tối ưu hóa điều kiện lên men thu sinh khối 42 3.3 Lên men thu sinh khối quy mô 10 lít, 60 lít 44 3.4 Quy trình tạo chế phẩm 47 3.5 Tạo chế phẩm probiotic bảo quản 47 KẾT LUẬN 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC 59 DANH MỤC CÁC BẢNG Formatted: Left Formatted: English (United States) Bảng 1.1 Những vi sinh vật dùng làm probiotic [16] Bảng 1.2 Một số bacteriocin probiotic [16] Bảng 3.1 Các phản ứng sinh hóa L reuteri LA5 29 Bảng 3.2 Thành phần axit amin tế bào vi khuẩn 29 Bảng 3.3 Khả chịu muối mật chủng Lactobacillus reuteri LA5 30 Bảng 3.4 Sự tác động đồng thời yếu tố pH nhiệt độ đến trình phát triển chủng vi khuẩn L reuteri LA5 43 Bảng 3.5 Lên men thu sinh khối L reuteri LA5 quy mơ 10 lít .44 Bảng 3.6 Lên men thu sinh khối L reuteri LA5 quy mô 60 lít .45 Bảng 3.7.Tỷ lệ phối trộn sinh khối vi khuẩn với phụ gia để tạo chế phẩm probiotic 48 Bảng 3.8 Sự biến động số lượng tế bào chủng vi khuẩn L reuteri LA5 trình bảo quản 49 Bảng 1.1 Những vi sinh vật dùng làm probiotic 11 Bảng 1.2 Một số bacteriocin probiotic 13 Bảng 3.1 Các phản ứng sinh hóa Lactobacillus reuteri LA5 .31 Bảng 3.2 Thành phần axit amin tế bào vi khuẩn Lactobacillus reuteri LA5 32 Bảng 3.3 Khả chịu muối mật chủng Lactobacillus reuteri LA5 .32 Bảng 3.4 Mật độ lượng sinh khối thu sau lên men quy mơ thí nghiệm 10 lít .41 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Formatted: Heading 1, Centered Formatted: Space After: pt Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học Bảng 3.5 Mật độ lượng sinh khối thu sau lên men quy mơ thí nghiệm 60 lít .41 Bảng 3.6 Công thức trộn khối lượng thu 42 Formatted: English (United States) Formatted: Space After: pt Formatted: English (United States) Formatted: Centered, Indent: Left: -0.13" DANH MỤC CÁC HÌNH Formatted: Centered Hình 1.1 Tế bào Lactobacillus reuteri 15 Formatted: Space After: pt Hình 1.2 Lịch sử phát triển Lactobacillus reuteri [5] 16 Formatted: Font: Italic Formatted: Font: Italic Hình 1.3 Tế bào vi khuẩn Lactobacillus reuteri phóng đại 17 Formatted: Font: Italic Hình 1.4 Lactobacillus reuteri ATCC PTA 6475 ức chế sản xuất TNF 18 Formatted: Font: Italic Hình 1.5 Cơ chế sản xuất yếu tố miễn dịch từ L reuteri ATCC PTA 6475 .19 Formatted: Font: Italic Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng Lactobacillus reuteri LA5 28 Formatted: Font: Italic Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ đường glucose đến phát triển chủng Lactobacillus reuteri LA5 .31 Formatted: Font: Italic Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ cao thịt đến phát triển 32 chủng Lactobacillus reuteri LA5 32 Formatted: Font: Italic Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ pepton đến phát triển 34 chủng Lactobacillus reuteri LA5 .34 Formatted: Font: Italic Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến phát triển chủng Lactobacillus reuteri LA5 .35 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Formatted: Font: Italic Luận văn thạc sĩ Ngành Cơng nghệ sinh học Hình 3.6: Ảnh hưởng pH đến phát triển L reuteri LA5 37 Formatted: Font: Italic Hình 3.7 Ảnh hưởng nhiệt độ phát triển L reuteri LA5 .39 Formatted: Font: Italic Hình 3.8 Ảnh hưởng thời gian (khi không chỉnh pH) đến phát triển chủng L reuteri LA5 .40 Formatted: Font: Italic Hình 3.9 Ảnh hưởng thời gian (khi chỉnh pH) đến phát triển 42 chủng L reuteri LA5 42 Formatted: Font: Italic Hình 3.10 Chế phẩm probiotic có chứa chủng vi khuẩn L reuteri LA5 51 Formatted: Font: Italic Hình 1.1 Ảnh tế bào Lactobacillus reuteri 19 Hình 1.2 Lịch sử phát triển Lactobacillus reuteri 20 Hình 1.3 Tế bào vi khuẩn Lactobacillus reuteri phóng đại 22 Hình 1.4 Lactobacillus reuteri ATCC PTA 6475 potently ức chế sản xuất TNF .23 Hình 1.5 Cơ chế đề xuất yếu tố miễn dịch tiết từ Lactobacillus reuteri ATCC PTA 6475 23 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng Lactobacillus reuteri LA5 31 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ đường đến khả phát triển chủng Lactobacllus reuteri LA5 33 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ cao thịt đến sinh trưởng phát triển chủng Lactobacillus reuteri LA5 34 Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ peptone đến sinh trưởng phát triển chủng Lactobacillus reuteri LA5 34 Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men đến sinh trưởng phát triển chủng Lactobacillus reuteri LA5 35 Hình 3.6 Biểu diễn ảnh hưởng pH 36 Hình 3.7 Biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ 37 Hình 3.8 Ảnh hưởng thời gian(khi không chỉnh pH) 38 Hình 3.9 Ảnh hưởng cuả thời gian chỉnh pH 39 Hình 3.10 Biểu diễn mật độ kết hợp nhiệt độ với pH 40 Hình 3.11 Biểu diễn mật độ ổn định qua tháng 8-10 độ C .43 Hình 3.12 Biểu diễn mật độ ổn định qua tháng 25-30 độ C 44 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học Formatted: Centered Formatted: English (United States) Formatted: Centered, Indent: Left: -0.13" PHỤ LỤC Formatted: Font: Bold Hình PL1 Chuyển hóa citrate (âm tính) Hình PL2 Thử Cattanase (-) 59 Hình PL3 Sinh axit lactic Hình PL4 Thử MR (+) 59 Hình PL5 Thử VP (-) Hình PL6 Thử lên men đường (+) .60 Hình PL7 Thử khử nitrat (+) Hình PL8 Khả di động (-) 60 Formatted: Centered, Space After: pt Formatted: Space After: pt Hình PL9 Ni cấy Cấp bình tam giác 60 Hình PL10 Ni cấy Cấp bình duham Hình PL11 Chế phẩm probiotic có chứa chủng vi khuẩn Lactoabacillus reuteri LA5 61 Formatted: Font: Italic Formatted: Centered Hình PL1 Chuyển hóa citrate (âm tính) Hình PL2 Thử Cattanase (-) 51 Hình PL3 Sinh axit lactic Hình PL4 Thử MR (+) 51 Hình PL5 Thử VP (-) Hình PL6 Thử lên men đường (+) 51 Hình PL7 Thử khử nitrat (+) Hình PL8 Khả di động (-) 52 Hình PL9 Ni cấy Cấp bình tam giác 52 Hình PL10 Ni cấy Cấp bình duham Hình PL11 Chế phẩm probiotic có chứa chủng vi khuẩn Lactoabacillus reuteri LA5 .52 Formatted: Space After: pt Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 Luận văn thạc sĩ Ngành Công nghệ sinh học Formatted: Space Before: pt Formatted: Normal, Left Formatted: Normal Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 TÀI LIỆU THAM KHẢO Formatted: English (United States) Tiếng việt Nguyễn Lân Dũng (người dịch), Egorov N.X (1976) Thực tập vi sinh vật học Formatted: Font: Italic NXB Mir, Maxcova Đại học THCN, Hà Nội Tú Uyên (7 tháng năm 2011) “Sữa chua bổ sung Probiotics - "trợ lý đắc lực" Formatted: Font: Italic hệ miễn dịch” Báo điện tử VietNamNet Truy cập 27 tháng năm 2013 Tú Uyên (29 tháng năm 2011) “Bổ sung "vệ sỹ" Probiotics cho sức khỏe” Formatted: Font: Italic Báo điện tử VietNamNet Truy cập 27 tháng năm 2013 Nguyễn Văn Thanh, Công nghệ sinh học dược (2011) “Lợi ích Probiotics Formatted: Not Highlight Formatted: Not Highlight sữa chua ăn” Báo điện tử Nông thôn ngày Formatted: Font: Italic, Not Highlight Báo điện tử báo Nông thôn Ngày 23 tháng năm 2011 Formatted: Font: Italic Nguyễn Anh Tuấn, Giảng viên, Bác sỹ điều trị khoa tiêu hóa, bệnh viện Nhi đồng Formatted: Not Highlight 1,(2016) “Men vi sinh Golden LAB nằm top sản phẩm Tin Dùng 2016” Formatted: Not Highlight Formatted: Font: Italic Goldenlab.vnhttp://goldenlab.vn/ TCVN 8764:2012(ISO 13903:2005): Xác định hàm lượng axit amin Tiếng Anh Abrahamsson T, Jakobsson T, Sinkiewicz G, Fredriksson M, Björkstén B "Intestinal microbiota in infants supplemented with the probiotic bacterium Lactobacillus reuteri" J Ped Gastroenterol Nutr 40 (5): 692, abstract PN 1–17 Casas IA, Dobrogosz WJ (1997) "Lactobacillus reuteri: An overview of a new probiotic for humans and animals" Microecol Therap 25: 221–31 Casas, Ivan A., Dobrogosz, Walter J (December 1, 2000 Microbial Ecology in Health and Disease 12 (4) 10 Cleusix V, Lacroix C, Vollenweider S, Le Blay G ((January 2008) FEMS Microbiol Ecol 63 (1): 56–64 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 55 11 Chengli Hou, Xiangfang Zeng, Fengjuan Yang, Hong Liu, and Shiyan Qiao Field Code Changed (2015) Lactobacillus reuteri I5007 modulates tight junction protein expression in Field Code Changed IPEC-J2 cells with LPS stimulation and in newborn piglets under normal Field Code Changed conditions.BMC Microbiolv.15; 2015PMC4350629 Field Code Changed Formatted: Not Highlight Field Code Changed 12 Dellaglio F, Arrizza FS, Leda A (1981) "Classification of citratefermenting Formatted: Font: Italic lactobacilli isolated from lamb stomach, sheep milk, and pecorino romano cheese" Formatted: Font: Not Bold, Italic, Not Superscript/ Subscript Zbl Bakt Hyg Abt Orig C2: 349–56 Formatted: Font: Not Italic 13 Evidence of a glucose proton motiveforce-dependent permease and a fructose Formatted: Font color: Black phosphoenolpyruvate:phosphotransferase transport system in Lactobacillus reuteri CRL 1098” Taranto MP1, Font de Valdez G, Perez-Martinez G (1999) “Evidence of a glucose proton motiveforce-dependent permease and a fructose phosphoenolpyruvate:phosphotransferase transport system in Lactobacillus reuteri CRL 1098”.http://dx.doi.org/10.1111/j.1574-6968.1999.tb08832.x 14 Hall RH, Stern ES (1950) "Acid-catalysed hydration of acrylalde Kinetics of the reaction and isolation of β-hydroxypropionaldehyde" J Chem Soc: 490–8 15 Kandler O., Stetter K., Kohl R (1980) "Lactobacillus reuteri sp nov a new species of heterofermentative lactobacilli" Zbl Bakt Hyg Abt Orig C1: 264–9 16 Lerche M, Reuter G (1965) "Das vorkommen aerob wachsender grampositiver stabchen des genus Lactobacuillus beijerinck im darminhalt erwachsener menchen" Zbl Bak Parasit Infec Hyg I Orig 185 (S): 446–81 17 Molin G, Jeppsson B, Johansson ML, et al (March 1993) "Numerical taxonomy of Lactobacillus spp associated with healthy and diseased mucosa of the human intestines" J Appl Bacteriol 74 (3): 314–23 18 Molin G, Johansson ML, Ståhl M, et al (April 1992) "Systematics of the Lactobacillus population on rat intestinal mucosa with special reference to Lactobacillus reuteri" Antonie Van Leeuwenhoek 61 (3): 175–83 19 Mitsuoka T (1992) "The human gastrointestinal tract" In Wood BJB The lactic acid bacteria in health and disease The lactic acid bacteria New York: Elsevier Applied Science pp 69–114 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 56 Formatted: Font: Italic 20 Nielsen AT, Moore DW, Schuetze Jr A "13C and 1H NMR (2003) “Sstudy of formaldehyde reactions with acetaldehyde and acrolein Synthesis of 2(hydroxymethyl)-1,3-propanediol”" Pol J Chem 55: 1393–1403 21 Naito S, Hayashidani H, Kaneko K, Ogawa M, Benno Y (August 1995) "Development of intestinal lactobacilli in normal piglets" J Appl Bacteriol 79 (2): 22 Orla-Jensen, S 1919 The lactic acid Bacteria Det Kongelige Danske Videnskasbernes Selskab Naturvidenskabelige mathematiske Afdeling, NS 8.5.2 23 Talarico TL, Casas IA, Chung TC, Dobrogosz WJ (December 1988) Antimicrob Agents Chemother 32 (12): 1854–8 24 Talarico TL, Casas IA, Chung TC, Dobrogosz WJ (December 1988) Antimicrob Agents Chemother 32 (12): 1854–8 25 Reuter G (1965) "Das vorkommen von laktobazillen in lebensmitteln und ihr verhalten im menschlichen intestinaltrakt" Zbl Bak Parasit Infec Hyg I Orig 197 (S): 468–87 26 Ruiz-Palacios G, Tuz F, Arteaga F, Guerrero ML, Dohnalek M, Hilty M (1992) "Tolerance and fecal colonization with Lactobacillus reuteri in children fed a beverage with a mixture of Lactobacillus spp" Pediatr Res 39: 1090 Abstract 27 Ruiz-Palacios G, Guerrero ML, Hilty M (1996) "Feeding of a probiotic for the prevention of community-acquired diarrhea in young Mexican children" Pediatr Res 39 (4 Part 2): 184A, abstract 1089 28 Sarra PG, Dellaglio F, Bottazzi V (1985) "Taxonomy of lactobacilli isolated from the alimentary tract of chickens" Syst Appl Microbiol 6: 86–9 29 Sinkiewicz G, Nordström EA (2005) "Occurrence of Lactobacillus reuteri, lactobacilli and bifidobacteria in human breast milk" Pediatr Res 58 (2): 415, abstract 353 30 Shornikova AV, Casas IA, Mykkänen H, Salo E, Vesikari T (December 1997) Pediatr Infect Dis J 16 (12): 1103–7 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 57 Formatted: Not Highlight Formatted: Font: Italic, Not Highlight Formatted: Font: Italic 31 Vollenweider S, Grassi G, König I, Puhan Z (May 2003) "Purification and structural characterization of 3-hydroxypropionaldehyde and its derivatives" J Agric 32 Wolf BW, Garleb KA, Ataya DG, Casas IA (1995) "Safety and tolerance of Lactobacillus reuteri in healthy adult male subjects" Microbial Ecol Health Dis (2): 41–50 33 Wolf BW, Wheeler KB, Ataya DG, Garleb KA (December 1998) Food Chem Toxicol 36 (12): Safety and tolerance of Lactobacillus reuteri supplementation to a Formatted: Font: Italic population infected with the human immunodeficiency virus.1085–94 Food Chem Toxicol 36 (12) Tài liệu web 34 http://www.khoahoc.net/baivo/nguyenthuongchanh/030507-yogurt.htm 35 http://www.sachyhoc.com/2013/07/prescott-harley-klein-vi-sinh-vat-hoc-7e.html 36.http://www.cesti.gov.vn/kh-cn-trong-nuoc/khao-sat-kha-nang-chiu-dung-acid- Formatted: Normal, Left muoi-mat-va-khang-sinh-cua-mot-so-vi-sinh-vat-la-nguyen-lieu-san-xuat-probioticdung-duong-uong.html Formatted: Normal, Left Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 58 Formatted PHỤ LỤC Hình PL1 Chuyển hóa citrate (âm tính) Hình PL3 Sinh axit lactic Hình PL2 Thử Cattanase (-) Hình PL4 Thử MR (+) Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 59 Hình PL6 Thử lên men đường (+) Hình PL5 Thử VP (-) Hình PL8 Khả di động (-) Hình PL7 Thử khử nitrat (+) Hình PL9 Ni cấy Cấp bình tam giác Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 60 Hình PL10 Ni cấy Cấp bình duham Hình PL11 Chế phẩm probiotic có chứa chủng vi khuẩn Lactoabacillus reuteri LA5 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 61 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 62 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 63 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 64 Đặng Lan Anh Mã ngành: 62.42.02.01 65 Bảng kết ảnh hưởng mật độ Lactobacillus reuteri LA5 Nồng độ đường glucose Số lần / Nồng độ 0.5% 0.35×108 6.3×108 7.0×108 1% 1.2x109 1.97x109 1.5x109 1.5% 1.48×109 2.48×109 2.17x109 2% 1.25x109 1.42x109 5.5×109 GC (cfu/ml) (cfu/ml) (cfu/ml) 0.5% 0.35×108 nhiễm 1.86×108 0.75% 1.2×109 1.57×109 1.8×109 1% 1.48×109 2.43×109 1.81×109 1.25% 1.25×109 0.86×109 2.0×109 GC (cfu/ml) (cfu/ml) (cfu/ml) Nồng độ cao thịt Số lần / Nồng độ 3 Nồng độ peptone Số lần / Nồng độ Nồng độ cao men 0.5% 1.2×108 9.4×108 2×109 0.75% 0.2×109 1.53×109 1.85×109 1% 2.1×109 1.65×109 2.37×109 1.25% 1.75×109 2.2×109 2.4×109 GC cfu/ml cfu/ml cfu/ml Số lần / Nồng độ 0.5% 1.59×109 0.93×109 1.2 × 109 0.75% 2.05×109 1.42×109 2.3 × 10 1% 3.3×109 2.68×109 2.7 × 109 1.25% 0.5×109 0.12×109 0.8 × 109 GC cfu/ml cfu/ml cfu/ml 7.5 0.5×109 0.12×109 1,1 ×109 GC cfu/ml cfu/ml cfu/ml pH Số lần / Nồng độ 8.2×108 1.1×109 1.3 ×109 6.5 2.56×109 1.79×109 1.25 ×109 8.7×109 8.1×109 3.8 ×109 Nhiệt độ Số lần / 30ºC 5.1×109 9.5×109 6.3×109 35ºC 8.5×109 2.34×1010 1.72×1010 Đặng Lan Anh 37ºC 1.16×1010 7.35×1010 1.17×1010 40ºC 9.3×109 7.1×109 2.03×109 GC cfu/ml cfu/ml cfu/ml Mã ngành: 62.42.02.01 66 Formatted Table Thời gian Khi không chỉnh pH Số lần / thời gian 18h 1.7×109 1.07×109 1.2 x 109 20h 0.95×109 0.75×109 1,4 x 109 22h 2.3×109 3.4×109 5.3 x109 24h 3.6×108 5×108 4.2 x 109 26h 4.8×108 6×108 1.1 x 109 48h 1.5×108 2.7×108 8.5 x 108 GC (cfu/ml) (cfu/ml) (cfu/ml) Khi chỉnh pH NaOH 20% Số lần / thời gian 2.8×10 2×10 12 5×10 5.9×10 16 18 10 2.7×10 10 2.3×10 10 3.9×10 10 1.8×10 20 22 10 6.7×10 10 8.5×10 109 3.3×10 109 2.5×10 24 26 1.79×10 1.02×10 10 10 5.1×10 1.45×10 28 1.08×10 1.49×10 9 48 GC 1.84×10 0.75×10 cfu/ml Kết hợp nhiệt độ pH Nhiệt độ (oC) 30 35 37 40 pH môi trường ban đầu 6.5 6.5 6.5 6.5 Mật độ tế bào chủng vi khuẩn L reuteri LA5 (cfu/ml) Lần Lần Trung bình 7.5 × 108 8.2 × 108 7.85 × 108 9 1.26 × 10 1.5 × 10 1.38 × 109 9 3.33 × 10 2.7 × 10 3.02 × 109 8 9.3 × 10 6.9 × 10 8.1 × 108 2.52 × 10 2.4 × 10 1.36 × 109 9 7.72 × 10 8.32 × 10 8.04 × 109 8.7 × 10 1.03 × 10 9.5 × 108 9 3.06 × 10 3.64 × 10 3.35 × 109 10 1.7 × 10 8.0 × 10 1.25 × 1010 8 1.52 × 10 1.61 × 10 1.57 × 108 8 2.94 × 10 4.0 × 10 3.47 × 108 5.0 × 10 1.17 × 10 8.35 × 108 Biến động tế bào trình bảo quản Lần thực Nhiệt độ (oC) – 10 Lần 25 - 30 Thời gian bảo quản (tháng) 12 Đặng Lan Anh Mật độ tế bào chủng L reuteri LA5 chế phẩm (cfu/g) CT1 CT2 1.41 × 1011 2.79 × 1011 2.2 × 1010 1.657 × 1011 9.6 × 1010 1.6 × 1011 10 8.4 × 10 1.26 × 1011 10 2.15 × 10 8.7 × 1010 10 1.83 × 10 7.2 × 1010 11 1.41 × 10 2.79 × 1011 10 6.8 × 10 1.04 × 1011 10 5.4 × 10 8.6 × 1010 10 4.3 × 10 5.7 × 1010 10 1.28 × 10 3.4 × 1010 Mã ngành: 62.42.02.01 67 cfu/ml – 10 Lần 25 - 30 7.6 × 109 2.1 × 109 8.2 × 108 1.36 × 1011 7.9 × 1010 6.4 × 1010 8.4 × 109 2.15 × 109 8.3 × 108 1.36 × 1011 6.1 × 1010 2.3 × 1010 5.3 × 109 1.28×109 7.6 × 108 2.1 × 108 8.2 × 107 12 12 12 Đặng Lan Anh 2.6 × 1010 1.3 × 1010 6.2 × 109 1.38 × 1011 4.5 ×1010 2.53 × 1010 1.5 × 1010 4.78 × 109 1.32 × 109 1.38 × 1011 9.8 × 1010 6.4 × 109 3.35 × 109 3.4 × 109 2.6 × 109 7.1 × 108 6.3 × 108 Mã ngành: 62.42.02.01 68 Page 49: [1] Formatted lenovo 2/22/2017 4:13:00 PM Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li Page 49: [2] Formatted lenovo 2/22/2017 4:13:00 PM Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li Page 50: [3] Formatted lenovo 2/22/2017 4:13:00 PM Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li Page 50: [4] Formatted lenovo 2/22/2017 4:13:00 PM Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li Page 50: [5] Formatted lenovo 2/22/2017 4:13:00 PM Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li Page 50: [6] Formatted lenovo Space Before: pt, Line spacing: Multiple 1.15 li 2/22/2017 4:13:00 PM ... vào sản xuất với quy mơ công nghiệp Với đặc điểm bật mục tiêu đặt trình bày Lactobacillus reuteri tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic cho người từ vi khuẩn Lactobacillus reuteri. .. trở vi? ??c hấp thu cholesterol vào hệ thống ruột Nhiều nghiên cứu người động vật chứng tỏ vi khuẩn lactic có khả làm giảm cholesterol Theo nhà nghiên cứu, vi khuẩn probiotic khống chế tăng cholesterol... học VI? ??N ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA ĐÀO TẠO SAU ĐẠI HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công nghệ sinh học Mã ngành: 62.42.02.01 Đề tài: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO NGƯỜI TỪ VI KHUẨN LACTOBACILLUS