Nghiên cứu sản xuất chế phẩm Probiotic cho tôm thẻ chân trắng (Litopenaeu Vannamei) quy mô Pilot

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (LITOPENAEU VANNAMEI) QUY MÔ PILOT PHẠM VŨ BẢO NGUYỄN NGỌC TÙNG ĐỒNG NAI, THÁNG 12/2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC LẠC HỒNG KHOA KỸ THUẬT HĨA HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (LITOPENAEU VANNAMEI) QUY MÔ PILOT SVTH: PHẠM VŨ BẢO NGUYỄN NGỌC TÙNG GVHD: ThS ĐOÀN THỊ TUYẾT LÊ CN ĐỖ MINH ANH ĐỒNG NAI, 12/2017 i LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Lạc Hồng, Lãnh đạo Khoa Kỹ Thuật Hóa Học Mơi Trường trường Đại học Lạc Hồng, Liên Hiệp Hội Khoa Học Kỹ Thuật Đồng Nai tạo điều kiện cho chúng tơi hồn thành nghiên cứu thời gian qua Chúng xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến hướng dẫn Đồn Thị Tuyết Lê Đỗ Minh Anh thời gian qua tận tình hướng dẫn, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu, bồi dưỡng kiến thức hoàn thành đề tài nghiên cứu Nhóm xin chân thành cảm ơn Thầy, Cơ quản lý phịng thí nghiệm khoa Kỹ thuật Hóa Học Mơi trường tạo điều kiện sở, vật chất để nhóm thực đề tài cách thuận lợi Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người thân chia sẻ, động viên giúp có thêm nghị lực hồn thành tốt nghiên cứu Biên Hòa, Ngày 15 tháng 12 năm 2017 Sinh viên thực Phạm Vũ Bảo Nguyễn Ngọc Tùng ii MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH v ĐỒ THỊ vi DANH MỤC BẢNG vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan probiotic 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Cơ chế tác dụng probiotic 1.1.3 Các chủng vi sinh vật thường sử dụng để làm probiotic cho tôm 1.2 Tổng quan chế phẩm probiotic cho tôm 1.2.1.Dạng chế phẩm 1.2.2.Thành phần 1.2.3.Tổng quan quy trình sản xuất chế phẩm probiotic 1.3 Tổng quan tôm thẻ chân trắng 1.3.1 Đặc điểm hình thái tôm thẻ chân trắng 1.3.3 Tình hình dịch bệnh tơm thẻ chân trắng 10 1.4 Tổng quan tối ưu hóa 10 1.5 Tổng quan số cơng trình nghiên cứu ngồi nước sử dụng probiotic cho tôm 11 1.5.1 Trong nước 12 1.5.2 Ngoài nước 12 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Thời gian địa điểm thực 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.3 Vật liệu nghiên cứu 18 2.3.1 Nguồn mẫu 18 2.3.2 Hóa chất 18 2.3.3 Thiết bị sử dụng 18 2.3.4 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 19 iii 2.4 Phương pháp nghiên cứu 19 2.4.1 Hoạt hóa nhân giống 19 2.4.2.Tối ưu hóa môi trường lên men xác định thông số lên men 20 2.4.2.1.Tối ưu hóa thành phần môi trường lên men thu sinh khối 20 2.4.2.2 Bố trí thí nghiệm xác định thơng số lên men 33 2.4.3 Lên men thử nghiệm 36 2.4.4 Lên men quy mô phịng thí nghiệm 36 2.4.5 Thu sinh khối probiotic từ bồn lên men phối trộn với chất mang 36 2.4.6 Kiểm tra chất lượng chế phẩm 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết tối ưu hóa mơi trường lên men thu sinh khối 39 3.3.1 Kết tối ưu hóa thành phần môi trường nhân sinh khối chủng probiotic39 3.3.1 Kết bố trí thí nghiệm xác định thơng số lên men 53 3.3.1.1 Kết bố trí thí nghiệm xác định thời gian lên men thích hợp 53 3.3.1.2 Kết bố trí thí nghiệm xác định pH mơi trường lên men thích hợp 55 3.2 Kết lên men thử nghiệm 56 3.3 Kết thu sinh khối phối trộn chất mang 57 3.4 Kết kiểm tra chất lượng sản phẩm 57 3.5 Kết hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm probiotic 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC VIẾT TẮT • B.subtilis: Bacillus subtilis • B-B: Box-Behken • BB: Bột bắp • BS: Bột sắn • CFU: Đơn vị tạo khuẩn lạc • CCD: Central composite design • ĐN: Đậu nành • L.plantarum: Lactobacillus plantarum • L salivarius: Lactobacillus salivarius • L reuteri: Lactobacillus reuteri • E coli: Escherichia coli • MRS agar: Man, Rogosa, Sharpe • MRSB: Man, Rogosa, Sharpe Broth • NA: Nutrient Agar • OD: Optical Density • P-B: Plackett – Burman • RSM: Response surface method • RĐ: Rỉ đường • FAO: Food and Agriculture Organization • VASEP: Vietnam Association of Seafood Exporter and Producers • V parahaemolyticus: Vibrio parahaemolyticus • V alginolyticus: Vibrio alginolyticus • YE: Yeast Extract v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ đề xuất quy trình nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic .15 Hình 3.1 Mặt đáp ứng sinh khối chủng L plantarum LH theo hai yếu tố 43 Hình 3.2 Mặt đáp ứng sinh khối chủng B subtilis LH theo hai yếu tố .50 Hình 3.3 Khuẩn lạc chủng L plantarum LH lấy mẫu từ chế phẩm trải đĩa thạch môi trường MRS Agar 55 Hình 3.4 Khuẩn lạc chủng B subtilis LH lấy mẫu từ chế phẩm trải đĩa thạch môi trường NA 56 Hình 3.5 Quy trình sản xuất probiotic cho tôm thẻ chân trắng (Litopennaeu vannamei) quy mô pilot 57 vi ĐỒ THỊ Đồ thị 3.1 Kết khảo sát OD nguồn cacbon chủng L plantarum LH 37 Đồ thị 3.2 Kết khảo sát OD nguồn Nitơ chủng L plantarum LH 38 Đồ thị 3.3 Kết khảo sát OD nguồn cacbon chủng Bacillus subtilis LH 44 Đồ thị 3.4 Kết khảo sát OD nguồn Nitơ chủng Bacillus subtilis LH 45 Đồ thị 3.5 Đường cong sinh trưởng chủng L plantarum LH môi trường lên men 51 Đồ thị 3.6 Đường cong sinh trưởng chủng B subtilis LH môi trường lên men 52 Đồ thị 3.7 Khả sinh trưởng theo pH L plantarum LH 53 Đồ thị 3.8 Khả sinh trưởng theo pH B subtilis LH 54 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các nguồn cacbon khảo sát 20 Bảng 2.2 Các nguồn Nitơ khảo sát 21 Bảng 2.3 Chú thích giá trị yếu tố thí nghiệm Plackett-Burman 22 Bảng 2.4 Ma trận thiết kế thí nghiệm Plackett-Burman 23 Bảng 2.5 Các biến ma trận Plackett-Burman 24 Bảng 2.6 Nồng độ yếu tố sử dụng Box-Behken 24 Bảng 2.7 Thiết kế Box-Behken 25 Bảng 2.8 Khảo sát nguồn cacbon 26 Bảng 2.9 Các nguồn nitơ khảo sát 27 Bảng 2.10 Chú thích giá trị yếu tố thí nghiệm Plackett-Burman 28 Bảng 2.11 Ma trận thiết kế thí nghiệm Plackett-Burman 29 Bảng 2.12 Các biến ma trận Plackett-Burman 30 Bảng 2.13 Nồng độ yếu tố sử dụng Box-Behken 30 Bảng 2.14 Thiết kế Box-Behken 31 Bảng 2.15 Mật độ tế bào (OD610nm) theo thời gian nuôi cấy chủng L plantarum LH33 Bảng 2.16 Ảnh hưởng pH môi trường đến hiệu thu sinh khối chủng L plantarum LH 33 Bảng 2.17 Mật độ tế bào (OD610nm) theo thời gian nuôi cấy chủng B subtilis LH 34 Bảng 2.18 Ảnh hưởng pH môi trường đến hiệu thu sinh khối chủng L plantarum LH 35 Bảng 3.1 Chú thích giá trị yếu tố thí nghiệm Plackett-Burman 38 Bảng 3.2 Ma trận thiết kế thí nghiệm Plackett-Burman 39 viii Bảng 3.3 Các biến ma trận Plackett-Burman 40 Bảng 3.4 Nồng độ yếu tố sử dụng Box-Behken 40 Bảng 3.5 Thiết kế Box-Behken 41 Bảng 3.6 Kết phân tích ANOVA 42 Bảng 3.7 Chú thích giá trị yếu tố thí nghiệm Plackett-Burman 45 Bảng 3.8 Ma trận thiết kế thí nghiệm Plackett-Burman 46 Bảng 3.9 Các biến ma trận Plackett-Burman 47 Bảng 3.10 Nồng độ yếu tố sử dụng Box-Behken 47 Bảng 3.11 Thiết kế Box-Behken 48 Bảng 3.12 Kết phân tích ANOVA 49 57 3.3 Kết thu sinh khối phối trộn chất mang ❖ Chủng Lactobacillus plantarum LH Sau thời gian 10 lên men chủng L plantarum LH tiến hành lấy mẫu đếm khuẩn lạc để xác định mật độ tế bào sống, kết thu mật độ vi khuẩn L plantarum LH 9.4 x 107 CFU/ml Kết xác định mật độ tế bào sống đầu vào chế phẩm sau đóng gói 4.2 x 1011 CFU/ml Kết xác định mật độ tế bào sống chế phẩm sau tuần 1.48 x 1011 CFU/ml điều kiện bảo quản 40C ❖ Chủng Bacillus subtilis LH Sau thời gian 12 lên men chủng B subtilis LH tiến hành lấy mẫu đếm khuẩn lạc để xác định mật độ tế bào sống, kết thu mật độ vi khuẩn B subtilis LH x 108 CFU/ml Kết xác định mật độ tế bào sống đầu vào chế phẩm sau đóng gói 9.4 x 109 CFU/ml Kết xác định mật độ tế bào sống chế phẩm sau tuần 2.21 x 109 CFU/ml điều kiện bảo quản 40C 3.4 Kết kiểm tra chất lượng sản phẩm ✓ Kiểm tra độ tinh khiết Kết thí nghiệm kiểm tra độ tinh khiết cách trải mẫu pha loãng đĩa thạch, sau 48 quan sát khuẩn lạc Hình 3.3 Khuẩn lạc chủng L plantarum LH lấy mẫu từ chế phẩm trải đĩa thạch môi trường MRS Agar 58 Hình 3.4 Khuẩn lạc chủng B subtilis LH lấy mẫu từ chế phẩm trải đĩa thạch mơi trường NA 3.5 Kết hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm probiotic Quy trình sản xuất chế phẩm probiotic cho tôm thẻ chân trắng (Litopennaeu vannamei) bao gồm hoạt hóa nhân giống, lên men L plantarum LH, B subtilis LH; Nhân giống L plantarum LH môi trường MRS Broth, B subtilis LH môi trường NB Lên men chìm theo mẻ chủng L plantarum LH B subtilis LH môi trường lên men tối ưu hóa; Sau thời gian lên men tiến hành thu hồi sinh khối, phối trộn chất mang, đóng gói sản phẩm, kiểm tra mật độ tế bào độ tinh khiết sản phẩm Quy trình hồn chỉnh tóm tắt hình: 59 Giống B subtilis LH Giống L plantarum LH Hoạt hóa Mơi trường MRS Mơi trường NB Thời gian 24 Thời gian 24 Nhiệt độ: 37 C Nhiệt độ: 37 C o Lắc: 180 v/p Lắc: 180 v/p pH 6.4  0.2 Nhân giống pH 7.2  0.2 Môi trường MRS Môi trường NB Thời gian 24 Thời gian 24 Nhiệt độ 37 oC Nhiệt độ 37 oC Lắc: 180 v/p pH 7.2  0.2 MT lên men MT lên men Thời gian 10 Thời gian 12 Nhiệt độ 37 oC Nhiệt độ 37 oC Khuấy 60 v/p Khuấy 60 v/p pH 6.0  0.2 Thu hồi sinh khối Nhân giống Lắc: 180 v/p pH 6.4  0.2 Lên men chìm, theo mẻ Hoạt hóa o Lên men chìm, theo mẻ pH 7.0  0.2 Tốc độ ly tâm 10000 v/p Thu hồi sinh khối Thời gian 10 phút Nhiệt độ oC Phối trộn chất mang Phối trộn chất mang 5% mantodextrin 2% glycerol Chiết chai/lọ Chiết chai/lọ Hình 3.5 Quy trình sản xuất probiotic cho tơm thẻ chân trắng (Litopennaeu vannamei) quy mô pilot 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết trên, đề tài xây dựng thành cơng quy trình sản xuất probiotic cho tôm thẻ chân trắng (Litopennaeu vannamei) quy mô pilot, cụ thể sau: Đã chọn lọc tối ưu hóa thành phần mơi trường lên men cho chủng vi sinh vật dung để sản xuất probiotic Lactobacillus plantarum LH Bacillus subtilis LH, đồng thời xác định thơng số thích hợp cho q trình lên men chủng quy mô pilot, cụ thể chủng L plantarum LH: rỉ đường 40 g/l, tryptone 10 g/l, nguồn khoáng: MgSO4 g/l, (NH4)3C6H5O7 g/l, K2HPO4 1.3 g/l, lên men 37 oC, pH 5.5, 10 Đối với chủng B subtilis LH: rỉ đường 10 g/l, (NH4)2SO4 15 g/l, nguồn khoáng: MgSO4 g/l, CaCl2 0.2 g/l, K2HPO4 2.13 g/l, NaCl 7.5 g/l, lên men 37 oC, pH 7.0, 12 từ hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm probiotic Mật độ tế bào chế phẩm đạt từ chủng Lactobacillus plantarum LH là: 4.2 x 1011 CFU/ml Mật độ tế bào chế phẩm đạt từ chủng Bacillus subtilis LH là: 2.21 x 109 CFU/ml KIẾN NGHỊ Từ kết mật độ tế bào sống chế phẩm probiotic cho thấy hiệu quy trình sản xuất khả quan Tuy nhiên, đề tài cịn điểm hạn chế phịng thí nghiệm thiếu thiết bị cần thiết để bố trí thí nghiệm xác định thông số nhiệt độ tốc độ lắc q trình lên men Do đó, cần thời gian thiết bị để xác định thông số Kiểm tra, theo dõi thời hạn sử dụng phương thức bảo quản chế phẩm thích hợp Thử nghiệm sản phẩm môi trường ao nuôi thử nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Bùi Quang Tề (2009), Bệnh học thủy sản toàn tập, Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I, tr 32-39 [2] Đặng Thị Yến, Lại Thúy Hiền, Nguyễn Thị Thu Huyền (2013), “ Ảnh hưởng số yếu tố đến khả sinh khí hydro chủng vi khuẩn clostridium sp Tr2 điều kiện lên men vi hiếu khí với nguồn chất rỉ đường, tạp chí cơng nghệ sinh học 2013, số 35(3se): tr 66-72 [3] Khuất Hữu Thanh (2010), “Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học hồn thiện chế phẩm BIO TS3 có khả tăng sức đề kháng tôm nuôi tôm sú thâm canh”, Trường đại học quốc gia Hà Nội, Viện Công Nghệ Sinh Học Công Nghệ Thực Phẩm, truy cập ngày tháng năm 2016 [4] Lê Đình Đức (2012), “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic ứng dụng bổ sung thức ăn nuôi cá chim vây vàng (Trachinotus blochii LACEPEDE, 1801) giai đoạn giống, Trường Đại học Nha Trang [5] Lê Tấn Hưng, Võ Thị Hạnh, Lê Thị Bích Phượng, Trương Thị Hồng Vân., Võ Minh Sơn (2003), “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm probiotic BIO II kết thử nghiệm ao nuôi tôm”, Tuyển tập báo cáo Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc năm 2003, tr 75-79 [6] Phạm Trần Thùy Hương, Đỗ Thị Bích Thủy (2012), “ Ảnh hưởng số yếu tố lên trình thu nhận chế phẩm amylase ngoại bào từ bacillus subtilis DC5”, tạp chí khoa học, Đại học Huế, tập 71, số 2,năm 2012 [7] Nguyễn Cảnh (2004), “Quy hoạch thực nghiệm”, NXB Đại Học Quốc Gia TP.HCM [8] Nguyễn Tử Cương cs (2005), “Sổ tay hướng dẫn thực hành nuôi tôm sú (GAP) thâm canh Việt Nam”, Nhà xuất Nơng nghiệp [9] Nguyễn Trọng Nghĩa, Đặng Thị Hồng Oanh, Trương Quốc Phú Phạm Anh Tuấn (2015), “Phân lập xác định khả gây hoại tử gan tụy vi khuẩn vibrio paraheamolyticus phân lập từ tôm nuôi Bạc Liêu”, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Phần B: Nông nghiệp, thủy sản Công nghệ sinh học: 39, tr 99-107 [10] Trần Quốc Tuấn Cs (2014), “Tối ưu hóa thành phần mơi trường lên men chủng Bacillus subtillis thu nhận nattokinase tái tổ hợp phương pháp đáp ứng bề mặt”, Tạp chí sinh học, số 36(1se): tr 130-137 [11] Trần Vũ Đình Nguyên (2013), “ Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm probiotic nhằm bổ sung vào thức ăn cho tôm hùm ni lồng”, Trưịng Đại học Nha Trang [12] Võ Thị Lan Chi Huỳnh Minh Hiếu (2016), “Phân lập, tuyển chọn xác định đặc tính sinh học số chủng vi khuẩn probiotic từ tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus Vannamei)”, Kỷ yếu hội nghị, 2016 [13] Võ Thị Thứ (2006), “Hồn thiện triển khai cơng nghệ sản xuất chế phẩm sinh học phục vụ xử lý môi trường nuôi trồng thủy sản”, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật, Hà Nội tháng 3/2006, tr 64-72 [14] Võ Thị Thứ, Lã Thị Nga, Trương Ba Hùng, Nguyễn Minh Dương, Nguyễn Liêu Ba (2003), “Nghiên cứu tạo chế phẩm BIOCHE đánh giá tác dụng chế phẩm đến môi trường nước nuôi tôm cá”, Tuyển tập báo cáo Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc năm 2003, tr 119-122 Tiếng Anh [15] Appukuttan Saraniya, Kadirvelu Jeevaratnam (2014), Optimization of nutritional and non - nutritional factors involved for production of antimicrobial compounds from Lactobacillus pentosus SJ65 using response surface methodology, Brazilian Journal of Microbiology 45, 1, tr 81-88 [16] Ann Sutton (2008), Product Development of Probiotics as Biological Drugs, CID 46, tr 130 [17] Bergey et al (1923), Bergey's manual of determinative bacteriology [18] Boone (1931), Cultured Aquatic Species Information Programme, Penaeus vannamei, FAO Fisheries and Aquaculture Department [19] Castillo E Del (2007), Process Optimization A Statistical Approach, Springer Science, New York, USA, tr 118-122 [20] Chiu-Hsia Chiu · Yuan-Kuang Guu · Chun-Hung Liu · Tzu-Ming Pan ·Winton Cheng (2007), Immune responses and gene expression in white shrimp, Litopenaeus vannamei, induced by Lactobacillus plantarum, Fish Shellfish Immunol, 23(2), tr 364-77 [21] Dorsey ER, Beck CA, Darwin K, Nichols P, Brocht AF, Biglan KM, Shoulson I, (2013), Natural history of Huntington disease, JAMA Neurol 70(12), tr 1520-30 [22] El-Dakar A.Y., S.M Shalaby & I.P Saoud (2007), Assessing the use of a dietary probiotic/prebiotic as an enhancer of spinefoot rabbitfish Siganus rivulatus survival and growth, Aquaculture Nutrition, 13, tr 407-412 [23] Eric Hummel, Anne Osterrieder, David G Robinson and Chris Hawes (2010), Inhibition of Golgi function causes plastid starch accumulation, J Exp Bot 2010 Jun; 61(10): tr 2603–2614 [24] FAO (2016), Probiotic in animal nutrition – Production, impact and regulation by Yadav S Bajagai, Athol V Klieve, Peter J Dart and Wayne L.Bryden Editor Harinder P.S Makkar, FAO Animal Production and Health Paper No 179, Rome, tr 5-6 [25] Genaro Alberto Paredes Juárez, Milica Spasojevic, Marijke M Faas and Paul de Vos (2011), Immunological and technical considerations in application of alginatebased microencapsulation systems, Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, Vol 2, Article [26] Gomez-Gil B., Roque A., Turnbull J F (2000), The use and selection of probiotic bacteria for use in the culture of larval aquatic organisms, Aquaculture, tr 191, tr 259-270 [27] Havenaar, R and Huis in't Veld, J.H.J (1992), Probiotics: A General Review' in the Lactic Acid Bacteria in Health and Disease, In: Wood, B., Ed., Elsevier, London, tr 151 - 170 [28] Jorge Olmos and J Paniagua-Michel, Bacillus subtilis A Potential Probiotic Bacterium to Formulate Functional Feeds for Aquaculture, Olmos and PaniaguaMichel, J Microb Biochem Technol 2014, tr 6-7 [29] J.W von Mollendorff cs (2009), Optimization of growth medium for production of bacteriocins produced by Lactobacillus plantarum jw3bz and jw6bz, and Lactobacillus fermentum jw11bz and jw15bz isolated from boza, Trakia Journal of Sciences, Vol , No 1, tr 22-33 [30] Kenneth H Wilson and Fulvio Perini (1998), Isolation and characterization of type IV procollagen, laminin, and heparan sulfate proteoglycan from the EHS sarcoma, Biochemistry, 21 (24), tr 6188–6193 [31] Krishnaprakash R, R Saravanan, P Murugesan and S Rajagopal (2009), Usefulness of Probiotics in the Production of High quality shrimp Penaeus monodon seeds in Hatcheries, World Journal of Zoology, 4(2), tr 144-147 [32] Laurent Verschuere, Geert Rombaut, Patrick Sorgeloos, and Willy Verstraete (2000), Probiotic Bacteria as Biological Control Agents in Aquaculture, Microbiol Mol Biol Rev, 2000 Dec; 64(4): tr 655–671 [33] Maeda K, et al, (2014), A generic protocol for the purification and characterization of water-soluble complexes of affinity-tagged proteins and lipids, Nat Protoc 9(9): tr 2256-66 [34] Mathieu Castex and Jérôme Panes (2012), Producing quality probiotics is an art and science, AQUA Culture Asia Pacific Magazine, tr 35-37 [35] Parker R.B (1974), Probiotics: the other half of the antibiotic story, Animal Nutrition and Health, December, tr 4-8 [36] Plackett R L., Burman J P (1946), The design of optimum multifactorial experiments, Biometrika, 33, tr 305-325 [37] Ram C Sihag and Parvati Sharma (2012), Probiotics: The New Ecofriendly Alternative Measures of Disease Control for Sustainable Aquaculture, Journal of Fisheries and Aquatic Science, Vol 7, Issue: 2, tr 72-103 [38] R Fuller (1989), A Review: Probiotics in man and animals, Journal of Applied Bacteriology 1989, tr 66, tr 365-378 [39] Saddam S Awaisheh (2012), Probiotic Food Products Classes, Types, and Processing, Probiotics, Prof Everlon Rigobelo (Ed.), InTech, tr 558-559 [40] Sajid Maqsood, Soottawat Benjakul (2010), Comparative studies of four different phenolic compounds on in vitro antioxidative activity and the preventive effect on lipid oxidation of fish oil emulsion and fish mince, Food chemistry, Vol 119 (1), tr 123-132 [41] Senthong, Latypov, V.F, Tubbs, J.L, Watson, A.J, Marriott, A.S, McGown, G., Thorncroft, M., Wilkinson, O.J., P., Butt, A., Arvai, A.S., et al (2012), Alkyltransferase-like Proteins: Brokers Dealing with Alkylated DNA Bases, Mol Cell 47, this issue, tr 50–60 [42] Seval Dagbagli, Yekta Goksungur (2008), Optimization of β-galactosidase production using Kluyveromyces lactis NRRL Y-8279 by response surface methodology, Electronic Journal of Biotechnology, Vol.11, No.4 [43] Vaseeharan B, Ramasamy P (2003), Control of pathogenic Vibrio spp by Bacillus subtilis BT23, a possible probiotic treatment for black tiger shrimp Penaeus monodon, Lett Appl Microbiol, 36(2): tr 83-7 [44] Veena Venugopalan cs (2010), Regulatory Oversight and Safety of Probiotic Use, Emerg infect Dis, Vol 16, tr 1661-1665 [45] Watchariya Purivirojku (2007), Application of Probiotic Bacteria for Controlling Pathogenic Bacteria in Fairy Shrimp Branchinella thailandensis culture, Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 13: tr.187-196 [46] Xuxia Zhou and Yanbo Wang (2009), Probiotics in Aquaculture – Benefits to the Health, Technological Applications and Safety, Health and Environment in Aquaculture, tr 216-221 [47] Yuan Kun Lee, Seppo Salminen (2009), Handbook of Probiotics and Prebiotics, John Wiley & Sons, Inc, 2nd Edition PHỤ LỤC Phụ lục Giá trị OD 610nm chủng L plantarum LH theo pH pH Lacto 4,5 5,5 6,5 7,5 Lần 0,92 0,911 1,039 1,003 0,937 0,847 0,703 0,648 0,628 Lần 0,922 0,912 1,04 1,004 0,938 0,848 0,704 0,649 0,63 Lần 0,872 0,912 1,04 1,004 0,975 0,843 0,704 0,649 0,63 Lần 0,875 0,964 0,985 1,014 0,975 0,863 0,788 0,664 0,569 Lần 0,876 0,965 0,986 1,013 0,976 0,864 0,789 0,665 0,57 Lần 0,922 0,965 0,987 0,988 0,976 Lần 0,905 1,005 0,911 0,989 0,927 Lần 0,904 1,005 0,912 0,99 0,928 Lần 0,904 1,005 0,913 1,013 0,928 0,789 0,724 0,726 0,726 0,665 0,7 0,7 0,7 0,571 0,6 0,601 0,601 Phụ lục Giá trị OD 610nm chủng B subtilis LH theo pH pH Ba 5,5 6,5 7,5 8,5 Lần 0,126 0,126 0,14 0,137 0,135 0,141 0,149 0,136 0,136 Lần 0,126 0,125 0,141 0,136 0,129 0,142 0,143 0,141 0,135 Lần 0,126 0,126 0,124 0,137 0,16 0,141 0,143 0,137 0,135 Lần 0,116 0,155 0,123 0,127 0,161 0,132 0,143 0,128 0,129 Lần 0,119 0,157 0,123 Lần 0,119 0,158 0,148 Lần 0,156 0,206 Lần 0,157 0,207 Lần 0,159 0,208 0,132 0,148 0,129 0,13 0,131 0,147 0,128 0,129 0,128 0,111 0,141 0,126 0,145 0,112 0,141 0,126 0,146 0,125 0,14 0,126 Phụ lục Giá trị OD 610nm đường cong sinh trưởng L plantarum LH Đường cong sinh trường Lactobacillus plantarum LH Thời gian Lần Lần Lần 0h 0,096 0,086 0,086 4h 0,248 0,252 0,253 8h 0,969 0,917 0,989 12h 1,352 1,412 1,407 16h 1,513 1,496 1,491 20h 1,527 1,513 1,5 24h 1,611 1,609 1,582 28h 1,59 1,633 1,619 32h 1,65 1,726 1,749 36h 1,738 1,736 1,768 40h 1,749 1,81 1,68 44h 1,725 1,766 1,822 48h 1,769 1,758 1,708 Phụ lục Giá trị OD 610nm đường cong sinh trưởng B subtilis LH Đường cong sinh trưởng Bacillus subtilis LH Thời gian Lần Lần 0h 0,012 0,011 4h 0,043 0,026 8h 0,139 0,139 12h 0,191 0,214 16h 0,309 0,346 20h 0,224 0,371 24h 0,277 0,353 28h 0,328 0,329 32h 0,304 0,304 36h 0,367 0,382 40h 0,55 0,585 44h 0,791 0,534 48h 0,722 0,626 Lần 0,011 0,021 0,171 0,228 0,315 0,3 0,337 0,333 0,319 0,389 0,486 0,739 0,71 Phụ lục Thiết kế Plackett – Burman B subtilis LH Phụ lục Thông số Plackett – Burman B subtilis LH Phụ lục Thiết kế Plackett – Burman L plantarum LH Phụ lục Thông số Plackett – Burman L plantarum LH Phụ lục Thiết kế Box – Behken B subtilis LH Phụ lục 10 Thông số Box – Behken B subtilis LH Phụ lục 11 Thiết kế Box – Behken L plantarum LH Phụ lục 12 Thông số Box – Behken L plantarum LH ... HỒNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC CHO TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (LITOPENAEU VANNAMEI) QUY MÔ PILOT SVTH: PHẠM VŨ BẢO NGUYỄN... tơm thẻ chân trắng diễn có xu hướng lan rộng khu vực nuôi tôm đặc biệt tôm thẻ chân trắng nay, nhiều nghiên cứu probiotic tiến hành Trong nghiên cứu nước sử dụng probiotic cho tôm tôm thẻ chân trắng. .. quan quy trình sản xuất chế phẩm probiotic Để xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm probiotic hồn thiện có tính khả thi cao, nhóm tham khảo số cơng trình sản xuất chế phẩm probiotic trước quy trình