Luận văn nghiên cứu chất lượng một số loại vacxin nhập khẩu phòng bệnh rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRS) nhập khẩu sử dụng tại việt nam

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ---------------------- TĂNG ANH VINH NGHIÊN CỨU CHẤT LƯỢNG MỘT SỐ LOẠI VẮC XIN NHẬP KHẨU PHÒNG BỆNH RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN (PRRS)NHẬP KHẨU SỬ DỤNG TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học : GS.TS. ðẬU NGỌC HÀO HÀ NỘI – 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan rằng, ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan, mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 11 năm 2011 Tác giả luận văn Tăng Anh Vinh Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành Luận văn này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi luôn nhận ñược sự quan tâm giúp ñỡ của các thầy cô giáo và bạn bè ñồng nghiệp. Nhân dịp này, trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp ñỡ của các thầy cô giáo khoa Thú y, Viện sau ñại học trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã giảng dạy tôi trong suốt thời gian học tập tại Trường. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn: GS.TS ðậu Ngọc Hào. Thầy ñã tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn. Tôi xin trân trọng cảm ơn Cục Trưởng Cục Thú y Hoàng Văn Năm và Ban lãnh ñạo Cục Thú y, Ban lãnh ñạo và cán bộ công nhân viên chức của Trung tâm Chẩn ñoán Thú y trung ương ñã giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian qua. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới người thân trong gia ñình và bạn bè ñồng nghiệp ñã luôn giúp ñỡ, ñộng viên giúp tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, tháng 11 năm 2011 Tác giả luận văn Tăng Anh Vinh Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình ảnh viii Danh mục biểu ñồ ix Danh mục phụ lục ix 1 MỞ ðẦU 1 1.1 ðặt vấn ñề 1 1.2 Mục ñích và ý nghĩa của ñề tài 2 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (PRRS) 3 2.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về PRRS 7 2.3 Vi rút học PRRS 10 2.4 ðáp ứng của vật chủ chống lại PRRSV 19 2.5 Cơ chế gây bệnh 20 2.6 Hội chứng rối hô hấp và sinh sản ở lợn- PRRS 22 2.7 Vắc xin và vắc xin phòng PRRS 26 3 ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1 ðối tượng nghiên cứu 35 3.2 ðịa ñiểm nghiên cứu 35 3.3 Nội dung nghiên cứu 35 3.4 Nguyên liệu, dụng cụ, hoá chất 36 3.5 Phương pháp nghiên cứu 37 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 4.1 ðánh giá chất lượng vắc xin Ingelvac PRRS MLV 50 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. iv 4.1.1 Kết quả kiểm tra an toàn của vắc xin 50 4.1.2 ðánh giá hiệu lực vắc xin 51 4.2 ðánh giá chất lượng vắc xin PRRS nhược ñộc chủng JXA1-R. 68 4.2.1 Kết quả kiểm tra an toàn của vắc xin 69 4.2.2 ðánh giá hiệu lực vắc xin 69 4.3 ðánh giá về hai loại vắc xin 82 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 87 5.1 Kết luận 87 5.2 Kiến nghị 88 TÀI LIỆU THAM KHẢO 93 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT + AEC : 3 amino- 9 ethyl- carbazale + cs : Cộng sự. + CP : Chính phủ. + Ct : Cycle threshold + ðC : ðối chứng. + ELISA : Enzyme linked immunosorbent assay. + EMEM : Eagle’s Minium Esential Medium + IPMA : Immunoperoxidase monolayer assay. + NC : negative control. + NP 40 : Nonidet P 40 . + NHC antigen : Normal host cell antigen. + NXB : Nhà xuất bản. + OIE : Office International des Epizooties. + PBS : Phosphate Buffered Saline. + PC : Positive control. + PRRS : Porcine reproductive and respiratory syndrome. + PRRSV : Porcine reproductive and respiratory syndrome virus. + TB : Trung bình. + TCID 50 : Tissue Culture Infectious Dose 50. + TW : Trung ương. + PCR : Polymerase Chain Reaction Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Sự tương ñồng về Nucleotid của các chủng vi rút phân lập ở một số nước với VR2332 11 2.2 Protein cấu trúc của PRRSV 13 2.3 Sự tương ñồng về nucleotide của các chủng PRRS khi so sánh với chủng Bắc Mỹ VR2332 14 2.4 Sức ñề kháng của vi rút với ñiều kiện ngoại cảnh 15 4.1 Kết quả kiểm tra kháng thể sau khi tiêm vắc xin Ingelvac bằng phương pháp ELISA 52 4.2 Kết quả bảo hộ của lợn tiêm vắc xin Ingelvac PRRS MLV 53 4.3 Kết quả theo dõi triệu chứng lâm sàng của lợn thí nghiệm 55 4.4 Kết quả theo dõi thân nhiệt của lợn sau khi công cường ñộc 56 4.5 Kết quả kiểm tra biến ñộng về số lượng bạch cầu trong máu của lợn sau công cường ñộc (nghìn/mm 3 máu) 59 4.6 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phương pháp ELISA sau công cường ñộc 61 4.7 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phương pháp IPMA sau công cường ñộc 62 4.8 Kết quả phát hiện PRRSV trong huyết thanh của lợn thí nghiệm sau công cường ñộc (Ct) 64 4.9 Tăng trọng của lợn thí nghiệm 66 4.10 Kết quả kiểm tra kháng thể sau khi tiêm vắc xin 69 4.11 Kết quả bảo hộ của vắc xin nhược ñộc PRRS chủng JXA1-R 70 4.12 Kết quả theo dõi triệu chứng lâm sàng 70 4.13 Kết quả theo dõi thân nhiệt 73 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. vii 4.14 Kết quả kiểm tra biến ñộng về số lượng bạch cầu trong máu của lợn sau công cường ñộc (nghìn/mm 3 máu) 75 4.15 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phương pháp ELISA 76 4.16 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phương pháp IPMA 77 4.17 Kết quả phát hiện PRRSV trong huyết thanh của lợn thí nghiệm sau công cường ñộc (Ct) 78 4.18 Tăng trọng của lợn thí nghiệm 79 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Cấu trúc hạt của PRRS vi rút 12 2.2 Cấu trúc bộ gen của PRRS vi rút 12 2.3 Bộ gen của vi rút PRRS 13 2.4 Hình ảnh PRRSV phá huỷ ñại thực bào ở phổi 18 4.1 Triệu chứng lâm sàng lợn thí nghiệm 54 4.2 Ảnh kết hợp kháng nguyên và kháng thể bằng phương pháp IPMA 63 4.3 Bệnh tích ñại thể của lợn thí nghiệm vắc xin Ingelvac PRRS MLV 67 4.4 Bệnh tích vi thể lợn thí nghiệm với vắc xin Ingelvac PRRS MLV 68 4.5 Triệu chứng lâm sàng lợn thí nghiệm vắc xin nhược ñộc JXA1-R 71 4.6 Bệnh tích ñại thể lợn thí nghiệm với vắc xin nhược ñộc chủng JXA1-R 81 4.7 Bệnh tích vi thể lợn thí nghiệm với vắc xin nhược ñộc chủng JXA1-R 81 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ………………………. ix DANH MỤC BIỂU ðỒ STT Tên biểu ñồ Trang 4.1 Diễn biến thân nhiệt lợn thí nghiệm vắc xin Ingelvac PRRS MLV 57 4.2 Biến ñộng bạch cầu 58 4.3 Mức ñộ virus huyết (ñánh giá bằng RRT-PCR) 65 4.4 Diễn biến thân nhiệt 73 4.5 Biến ñộng bạch cầu 74 4.6 Mức ñộ virus huyết (ñánh giá bằng RRT-PCR) 79 4.7 Diễn biến thân nhiệt của lợn tiêm hai loại vắc xin 82 4.8 Biến ñộng bạch cầu của lợn tiêm hai loại vắc xin 82 4.9 Hiệu giá kháng thể của 2 loại vắc xin 83 4.10 Mức ñộ virus huyết của 2 loại vắc xin 85 DANH MỤC PHỤ LỤC STT Tên phụ lục Trang 4.1 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trước khi tiến hành thí nghiệm với vắc xin Ingelvac PRRS MLV 89 4.2 Kết quả kiểm tra an toàn của vắc xin Ingelvac PRRS MLV 90 4.3 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trước khi tiến hành thí nghiệm với vắc xin PRRS nhược ñộc chủng JXA1-R 91 4.4 Kết quả kiểm tra an toàn của vắc xin nhược ñộc JXA1-R 92 4.5 Hệ phả di truyền gen NSP2 93 . y và Chủ nhiệm ñề tài, chúng tôi tiến hành nghiên cứu Nghiên cứu ñánh giá chất lượng một số loại vắc xin phòng bệnh rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn nhập. khẩu sử dụng tại Việt Nam 1.2 Mục ñích và ý nghĩa của ñề tài - ðánh giá ñược thực trạng chất lượng một số loại vắc xin phòng bệnh rối loạn hô hấp và sinh