để chẩn ựoán bệnh này có thể sử dụng một số phương pháp sau:
Có thể dựa vào triệu chứng, bệnh tắch ựại thể, vi thể ựể chẩn ựoán bệnh, nhưng phương pháp huyết thanh thanh học phát hiện kháng thể và phương pháp phát hiện vi rút là những phương pháp tin cậy và cần thiết.
2.6.3.1 Phương pháp huyết thanh học
Có thể phát hiện kháng thể trong huyết thanh của lợn, dịch của cơ thể, từ thai chết lưu bằng nhiều phương pháp, nhưng hiện nay thường sử dụng bốn phương pháp sau (William T. Christianson và Han Soo Joo, 2001).
+ IPMA (Immunoperoxidase monolayer assay)- Phương pháp miễn dịch có gắn enzyme trên thảm tế bào một lớp. đây là phương pháp sử dụng
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 25
một thảm tế bào ựã gây nhiễm vi rút chuẩn ựể phát hiện kháng thể. Nếu huyết thanh có kháng thể thì có sự kết hợp của kháng nguyên, kháng thể và kháng kháng thể, khi cho cơ chất vào sẽ xuất hiện màu ựậm, ựó là phản ứng dương tắnh. Phản ứng âm tắnh nếu thảm tế bào có màu hồng nhạt.
+ Phản ứng kháng thể huỳnh quang gián tiếp: Cơ chế giống phản ứng ELISA hay IPMA, nhưng khác là kháng kháng thể có gắn chất phát quang, khi soi dưới kắnh hiển vi huỳnh quang có hiện tượng phát màu.
+ Phản ứng trung hoà huyết thanh SN (Serum Neutrolization)
+ Phản ứng ELISA (Enzyme- linked immunosortbent assay) trực tiếp và gián tiếp, nhưng người ta thường sử dụng phản ứng ELISA gián tiếp. Thực chất giống phương pháp IPMA, ựó là sự kết hợp của kháng nguyên, kháng thể, kháng kháng thể có gắn enzyme nên khi cho cơ chất vào có hiện tượng phát màu.
Phản ứng IPMA là phản ứng ựược dùng ựầu tiên ựể phát hiện kháng thể PRRS và hiện nay vẫn ựang ựược sử dụng nhiều ở Châu Âu. IPMA có thể ựược làm trên thảm tế bào PAM, CL2621 hoặc MA104, MARC145.
Phản ứng ELISA ựược sử dụng nhiều ở Mỹ, ựây là phản ứng sử dụng kháng nguyên gắn vào ựĩa mà vi rút chuẩn ựược gây nhiễm trên tế bào PAM.
2.6.3.2 Phương pháp phát hiện vi rút
để phát hiện vi rút có thể sử dụng một số phản ứng sau:
+ Phương pháp IPMA sử dụng phân lập vi rút trên một số loại tế bào, tế bào phế nang lợn (PAM), tế bào MA- 104, tế bào MARC 145, tế bào CL- 2621 và tế bào CRL- 11171.
+ Phương pháp hoá ựỏ chắn miễn dịch (Immunohisto- Chemistry). + Phương pháp huỳnh quang gián tiếp phát hiện kháng nguyên. + Phương pháp nhân gen (Realtime RT- PCR).
+ Phương pháp lai phân tử tại chỗ.