Ứng dụng kỹ thuật real time pcr định týp hpv trong tổn thương tiền ung thư, ung thư cổ tử cung và âm đạo

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ******************* NGUYỄN ĐẠI THỨC ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REAL TIME PCR ĐỊNH TÝP HPV TRONG TỔN THƢƠNG TIỀN UNG THƢ, UNG THƢ CỔ TỬ CUNG VÀ ÂM ĐẠO LUẬN VĂN THẠC SỸ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐẠI THỨC ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REAL TIME PCR ĐỊNH TÝP HPV TRONG TỔN THƢƠNG TIỀN UNG THƢ, UNG THƢ CỔ TỬ CUNG VÀ ÂM ĐẠO CHUYÊN NGÀNH XÉT NGHIỆM Y HỌC LUẬN VĂN THẠC SỸ KỸ THUẬT Y HỌC Hƣớng dẫn khoa học: TS BS ĐOÀN THỊ PHƢƠNG THẢO THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2016 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Đại Thức iii MỤC LỤC Trang TRANG PHỤ BÌA i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iiiii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT - ANH vii DANH MỤC CÁC BẢNG viiviii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ iix DANH MỤC CÁC HÌNH x ĐẶT VẤN ĐỀ CÂU HỎI NGHIÊN CỨU MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nhiễm HPV Việt Nam giới 1.2 Đặc điểm chung Human Papillomavirus (HPV) 1.2.1 Hình thái cấu trúc HPV 1.2.2 Đặc điểm cấu trúc chức gen HPV 1.3 Phân loại HPV 12 1.3.1 Lịch sử phân loại 12 1.3.2 Phân loại HPV 12 1.4 Chu kỳ sống HPV 15 1.5 Cơ chế gây bệnh HPV 17 1.6 Đƣờng lây truyền, yếu tố nguy gây nhiễm HPV 18 1.6.1 Đƣờng lây truyền HPV 18 1.6.2 Các yếu tố nguy gây nhiễm HPV 19 1.7 Cách phòng nhiễm HPV 19 iv 1.8 Các bệnh lý thƣờng gặp HPV điều trị 20 1.8.1 Các bệnh lý thƣờng gặp HPV 20 1.8.2 Điều trị: 20 1.9 Các phƣơng pháp phát HPV mức độ mô bệnh học phân tử 21 1.9.1 Chẩn đốn mơ bệnh học 21 1.9.1.3 Ung thƣ tế bào gai cổ tử cung: 24 1.9.2 Chẩn đoán kỹ thuật sinh học phân tử: 25 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Thiết kế nghiên cứu 28 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 28 2.3 Tiêu chuẩn chọn mẫu 28 2.4 Tiêu chuẩn loại trừ 28 2.5 Cỡ mẫu 28 2.6 Qui trình kỹ thuật lấy mẫu phân tích mẫu nghiên cứu 29 2.6.1.Ghi nhận thông tin lâm sàng: 29 2.6.2.Thực xử lý mẫu thƣờng quy: 29 2.6.3.Quy trình chạy máy xử lý mẫu Microm SP 120 hãng Thermo: 29 2.6.4.Thực lấy mẫu: 30 2.6.7 Qui trình kỹ thuật thực Real-time PCR: 33 2.6.8 Quy trình thực đọc kết Realtime PCR: 35 2.6.6 Thống kê, xử lý số liệu dự kiến kết nghiên cứu: 37 2.6.7 Ý nghĩa khoa học đề tài: 38 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39 3.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu: 39 3.1.1 Đặc điểm giải phẫu bệnh: 39 3.1.2 Phân bố mức độ tổn thƣơng mơ bệnh học theo nhóm tuổi 40 3.2 Tỷ lệ nhiễm HPV mẫu mô bệnh học 41 3.2.1 Tỷ lệ nhiễm HPV nghiên cứu: 41 v 3.2.2 Tỷ lệ phân týp nhiễm HPV nghiên cứu: 42 3.3 Mối liên quan tỷ lệ nhiễm HPV nhóm tuổi 45 3.3.1 Phân bố tỷ lệ nhiễm HPV theo nhóm tuổi: 45 3.3.2 Phân bố tỷ lệ nhiễm tỷp HPV theo nhóm tuổi: 46 3.4 Các mối liên quan tỉ lệ nhiễm HPV theo mức độ tổn thƣơng mô bệnh học 47 CHƢƠNG BÀN LUẬN 54 4.1- Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu: 54 4.1.1- Đặc điểm mô bệnh học 54 4.1.2- Độ tuổi bệnh nhân nhóm nghiên cứu: 54 4.2- Tỷ lệ nhiễm HPV mẫu mô bệnh học cổ tử cung: 55 4.2.1- Tỷ lệ nhiễm HPV 54 4.2.2- Tỷ lệ nhiễm týp HPV 60 4.3- Mối liên quan tỷ lệ nhiễm HPV phân týp HPV theo nhóm tuổi …………………………………………………………… 62 4.3.1 Tỷ lệ nhiễm HPV theo nhóm tuổi………………………… …62 4.3.2 Tỷ lệ nhiễm týp HPV theo nhóm tuổi 63 4.4- Các mối tƣơng quan tỉ lệ nhiễm HPV mức độ tổn thƣơng mô bệnh học: 64 HẠN CHẾ CỦA NGHIÊN CỨU 67 KẾT LUẬN 68 KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BV : Bệnh viện ĐHYD : Đại Học Y Dƣợc TP.HCM : Thành Phố Hồ Chí Minh CTC : Cổ tử cung HPV: : Human Papilloma Virus UTCTC : Ung thƣ cổ tử cung MBH : Mô bệnh học PCR : Polymerase Chain Reaction CIN : Cervical Intraepithelial Neoplasia CIN : Cervical Intraepithelial Neoplasia CIN : Cervical Intraepithelial Neoplasia CIS : Cervical Carcinoma In Situ ORF : Open Reading Frame URR : Upstream Regulatory Region LCR : Long Control Region vii BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH Tế bào chết theo chƣơng trình Apoptosis Tân sinh biểu mô cổ tử cung độ Cervical Intraepithelial Neoplasia Tân sinh biểu mô cổ tử cung độ Cervical Intraepithelial Neoplasia Tân sinh biểu mô cổ tử cung độ Cervical Intraepithelial Neoplasia Carcinôma chỗ cổ tử cung Cervical Carcinoma In Situ Condyloma sùi Condyloma acuminatum Vùng gen sớm Early region Kiểu gen HPV Genotype HPV Nguy cao High-risk type Vi rút gây u nhú ngƣời Human papilloma virus U nhú đảo ngƣợc Inverted papilloma Vùng gen muộn Late region Vùng điều hòa dài Long Control Region Nguy thấp Low-risk type Khung đọc mở Open Reading Frame Phản ứng khuếch đại chuỗi Polymerase Chain Reaction Gen câm Silencing gene Chƣa xác định nguy Unknown-risk type Vùng điều hòa thƣợng nguồn Upstream Regulatory Region viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự cặp mồi 33 Bảng 2.2 Bảng đỉnh chảy tƣơng ứng týp HPV đƣợc ghi nhận 33 Bảng 3.1 Tỷ lệ nhiễm HPV qua xét nghiệm Realtime PCR MBH 41 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm HPV mẫu mô bệnh học theo nhóm tuổi 45 Bảng 3.3 Tỷ lệ týp HPV mẫu mơ bệnh học theo nhóm tuổi 46 Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm HPV mẫu mô bệnh học 47 Bảng 3.5 Sự phân bố týp HPV “nguy cao” HPV “nguy thấp” UTCTC theo mức độ tổn thƣơng mô bệnh học 48 Bảng 3.6 Tỷ lệ nhiễm HPV theo mức độ tổn thƣơng biểu mô cổ tử cung 51 Bảng 3.7 Sự phân bố týp HPV theo mức độ tổn thƣơng biểu mô CTC 52 Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm HPV cặp mồi khác nghiên cứu 58 Bảng 4.2 So sánh tỷ lệ nhiễm HPV với nghiên cứu khác 59 Bảng 4.3 Tỷ lệ nhiễm genotype HPV16 HPV18 so với nghiên cứu 60 ix DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, SƠ ĐỒ DANH MỤ C BIỂ U Đ Ồ Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ phân bố mức độ tổn thƣơng mô bệnh học 39 Biểu đồ 3.2 Tần số phân bố mơ bệnh học theo nhóm tuổi 40 Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ phân týp nhiễm HPV 42 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình phân tích mẫu nghiên cứu 31 66 phân týp đƣợc phát cho thấy hầu hết phân týp có liên quan đến ung thƣ cổ tử cung đƣợc phát HPV 16 phân týp có liên quan chiếm tới 68% phân týp HPV tìm thấy u tế bào vảy HPV 18 phân týp có liên quan chiếm 71% phân týp virus tìm thấy carcinom tuyến Mối liên quan phân týp virus với phân týp mơ học đƣợc ghi nhận từ trƣớc, nhƣng sở sinh học khác biệt chƣa rõ[17] - Lý chủ yếu dẫn đến kết HPV âm tính việc lấy mẫu khơng đúng, chẩn đốn mơ bệnh học chƣa phù hợp, xuất týp týp không khuyếch đại mồi đƣợc sử dụng, số lƣợng DNA đích thấp đứt gãy đoạn gen đích Khi sử dụng nhiểu cặp mồi từ nhiều vùng khác gen virus kiểm định chặt chẽ chất lƣợng mẫu bệnh phẩm tỷ lệ nhiễm HPV toàn 99,7% [17] 67 HẠN CHẾ CỦA NGHIÊN CỨU Với bƣớc đầu đạt đƣợc kết nhƣ nhƣng nghiên cứu thực mẫu mô bệnh học Thành Phố Hồ Chí Minh Sự xác định nhiễm HPV chƣa đƣợc thực rộng rãi mẫu mô bệnh học vùi nến ảnh hƣởng nhiều hóa chất quy trình xử lý mơ làm ức chế đứt gãy DNA HPV nên việc phát kỹ thuật PCR chƣa đƣợc nhƣ mong đợi nhiều HPV chƣa xác định đƣợc nguy DNA bị đứt gãy mẫu mơ vùi nến hay týp HPV nằm gen đích đoạn mồi đặc hiệu phản ứng Realtime PCR Điều cần đƣợc thực thêm nhiều nghiên cứu mô bệnh học vùi nến để xác định rõ thêm nguyên nhân Với nghiên cứu chúng tơi tìm hiểu khắc phục đƣợc hạn chế ban đầu để tiến hành nghiên cứu nhƣng thời gian hạn hẹp chƣa cho phép thực nhiều cỡ mẫu phƣơng pháp PCR để xác định đƣợc nhiều týp HPV Nhƣ biết HPV có 100 týp đƣợc xác định tính biến đổi phức tạp gen HPV gây nhiều khó khăn cho việc xác định týp HPV nhóm “nguy cao” gây UTCTC 68 KẾT LUẬN Hiện có nhiều nghiên cứu nhiễm HPV Việt Nam, nhƣng nghiên cứu tỷ lệ nhiễm HPV mẫu mô bệnh học chƣa đƣợc thực Thành Phố Hồ Chí Minh Do mẫu mơ vùi nến bị ảnh hƣởng nhiều yếu tố bảo quản mẫu nên làm ức chế phản ứng PCR hay âm giả Vì vậy, bƣớc đầu nghiên cứu tìm hiểu khắc phục đƣợc số yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng PCR ghi nhận đƣợc kết nhƣ sau: 1- Đặc điểm tỷ lệ nhiễm HPV: - Tỷ lệ nhiễm HPV tổn thƣơng tiền ung thƣ cổ tử cung với Condyloma (77,8%), Condyloma kèm CIN1 (100%), CIN1 (37,5%), CIN2 (50%), CIN3 (64,5%) ung thƣ nhƣ Carcinôm tế bào gai cổ tử cung (90%) 2- Mối liên quan tổn thƣơng mô bệnh học CTC genotype HPV: - Tỷ lệ nhiễm genotype HPV nguy thấp HPV nguy cao gây UTCTC khác biệt có ý nghĩa thống kê theo mức độ tổn thƣơng loạn sản cổ tử cung với P=0,006 - Nhƣng khác biệt tỷ lệ nhiễm HPV dƣơng tính hai nhóm có tổn thƣơng tiền ung thƣ Condyloma, CIN CIN 2, CIN với P=0,990 - Với tỷ lệ nhiễm HPV nguy cao loạn sản độ cao Carcinôm tế bào gai cao tổn thƣơng tiền ung thƣ với mức độ tổn thƣơng Condyloma, loạn sản nhẹ loạn sản vừa cổ tử cung có ý nghĩa thống kê, (P< 0,001) 69 KIẾN NGHỊ Trong hoàn cảnh cụ thể Việt Nam nay: - Hiện với phát triển vƣợt trội sinh học phân tử giúp nhiều việc chẩn đoán xác định, đặc biệt phát týp HPV “nguy cao” gây UTCTC Nhƣng việc tìm HPV mẫu mơ bệnh học cịn nhiều hạn chế, để phát nhiều týp HPV đáng tin cậy cần phát triển kỹ thuật Real time PCR với nghiên cứu tạo nhiều sản phẩm đoạn mồi đặc hiệu cho gen đích DNA HPV để tăng độ nhạy cho phản ứng PCR định đƣợc nhiều týp HPV - Cần triển khai thêm nhiều nghiên cứu mô bệnh học để đƣa đƣợc quy trình chuẩn tin cậy chẩn đốn kỹ thuật Real-time PCR phát HPV có nguy cao hay nguy thấp gây UTCTC cách xác TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Trịnh Quang Diện (2007) Phát condylôm, tân sản nội biểu mô ung thư sớm cổ tử cung Y học Việt Nam tháng 1/2007 Số đặc biệt: Virus sinh u nhú người (HPV) mối liên quan với viêm u đường sinh dục đặc biệt ung thư cổ tử cung Tr 143-150 Hứa Thị Giang (2008) Nghiên cứu phát nhiễm virus gây u nhú người viêm tân sản cổ tử cung qua xét nghiệm tế bào học, mô bệnh học, PCR Luận văn Thạc Sĩ Y Học Trường Đại Học Y Hà Nội Nguyễn Trọng Hiếu (2004) Tần xuầt nhiễm HPV phụ nữ Thành Phố Hồ Chí Minh Thời y học 4(9): 195-199 Nguyễn Phi Hùng (2011) “ Nghiên cứu xác định týp HPV thường gặp ung thư cổ tử cung Y học Thành Phó Hồ Chí Minh Phụ số 2, tr 165-166 Nguyễn Thúy Hương (2004) Nghiên cứu hình thái học ung thư biểu mơ xâm nhập cổ tử cung có liên quan với số đặc điểm lâm sàng, tiên lượng bệnh Luận án tiến sĩ y học Trường đại học y Hà Nội Vũ Thị Nhung (2007) Khảo sát tình hình nhiễm týp HPV phụ nữ Thành Phố Hồ Chí Minh kỹ thuật sinh học phân tử Y học Thành Phố Hồ Chí Minh Phụ chuyên đề ung bướu học (tập 10), (số 4), tr 402-407 Lê Minh Nguyệt (2002) “Mối liên quan tình trạng nhiễm HPV với nghịch sản ung thư cở tử cung” Luận án chuyên khoa cấp II chuyên ngành sản phụ khoa Đòan Thị Phương Thảo cộng (2006) Khảo sát thay đổi hình thái tế bào Condylom cổ tử cung Y học Thành Phố HCM Chuyên đề giải phẫu bệnh, phụ số 4, Tr50-53 Phạm Việt Thanh (2006) Chương trình tầm sốt HPV ung thư cổ tử cung Tạp chí Y học thực hành 550, Tr 13-24 10 Nguyễn Sào Trung (2015) Giải Phẫu Bệnh Học Nhà xuất giáo dục Việt Nam Tr 431-443 11 Phạm Hùng Vân (2009) PCR Real-time PCR Các vấn đề áp dụng thường gặp Nhà xuất Y học Tr 35-69 TIẾNG ANH 12 Adiba Siddiqa , Maidah Zainab (2014) Prevalence and Genotyping of high risk HPV in cercical cancer samples from Punjab, Pakistan Virus 2014,6, 2762-2777 13 Anco M., Berhard K., Wim Q., Leen-J.D (2005) Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections Journal of Clinical Virology 32:43-51 14 Bao Y.P., Smith J.S., Qiao Y.L., ACCPAB members (2008) Human papillomavirus type distribution in women from Asia: a meta-analysis International Journal of Gynecologycal cancer.18(1):71-9 15.Bhatia N, Lynde C, Vender R, Bourcier M Understanding genital warts: epidemiology, pathogenesis, and burden of disease of human papillomavirus.J Cutan Med Surg 2013 Dec;17 Suppl 2:S47-54 16 Bodaghi S., Wood L.V., Roby G., Ryder C., et al (2005) Could human papillomaviruses be spread through blood? Journal of Clinical Microbiology 43(11):5428-34 17 Bosch FX, Manos MM, Muuoz N, Sherman M, Jansen AM, Peto J, Schiffman MH, Moreno V, Kurman R, Shah KV (1995) Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer: a worldwide perspective International biological study on cervical cancer (IBSCC) Study Group J Nalt Cancer Inst Jun 7; 87 (11): 796-802 18 Burd EM (2003) Human papillomavirus and cervical cancer Clinical Microbiology Review 16(1):1-17 19 Bouvard V., Baan R., Straif K., et al (2009) A review of human carcinogens-Part B: biological agents Lancet Oncology.10:321322 20 Clifford G., Franceschi S., Diaz M., Munoz N., Villa L.L (2006) Chapter 3: HPV type-distribution in women with and without cervical neoplastic diseases Vaccine 24S3: 26-34 21 Clifford G.M., Gallus S., Herrero R., Muñoz N., et al (2005) Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for research on Cancer HPV prevalence surveys: a pooled analysis Lancet 366: 991-998 22 Choi B S., Kim O., Park M.S.,et al (2003) Genital human papillomavirus genotyping by HPV oligonucleotide microarray in Korean commercial sex workers Journal of Medical Virology 71(3): 440-445 23 Chang L1, Ci P, Shi J, Zhai K, Feng X, Colombara D, Wang W, Qiao Y, Chen W, Wu Y Distribution of genital wart human papillomavirus genotypes in China: a multi-center study J Med Virol 2013 Oct;85(10):1765-74 24 De Sanjose’S,Diaz M, Castellsague’X, Clifford G, Bruni I, Munoz N, Bosch FX (2007) Worldwide prevalence and gynotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women with normal cytology: A meta-analysis Lancet Infections disease 7: 453-459 25 De Roda Husman A.M., Walboomers J.M., van den Brule A.J., et al (1995) The use of general primers GP5 and GP6 elongated at their 3′ ends with adjacent highly conserved sequences improves human papillomavirus detection by PCR J Gen Virol 76:1057-1062 26 Frappart L, B Fontaniere, Histopathology and cytopathology of the uterine cervix (2004), The inernational Agency for Research on Cancer 27 Harper D.M., Franco E.L., Wheeler C.M., et al (2006) Sustained efficacy up to 4.5 years of a bivalent L1 virus-like particle vaccine against human papillomavirus types 16 and 18: Follow-up from a randomized control trial Lancet 367: 1247-1255 28 Hebner C.M., Laimins L (2006) Human papillomaviruses: basic mechanisms of pathogenesis and oncogenicity Reviews in medical virology 16(2): 83-97 29 Lehoux M (2009) Molecular Mechanisms of HPV- induced Carcinogenesis Carcinogenesis 90: 432-465 30 Lowy D.R., Howley P.M., (2004), Papillomaviruses, Field Virology, 2, pp 2231-2257 31 Li H., Liang G., Yin Y.P., et al (2012) Prevalence and genotype distribution of human papillomavirus infection among female sex workers in Guangxi, China: implications for interventions Journal of Medical Virology 84(5): 798-803 32 Lin H., Ma Y.Y., Mo J.S., Ou Y.C., Shen S.Y., Chang Chien C.C (2006) High prevalence of genital human papillomavirus type 52 and type 58 infection in women attending gynecologic practitioners in South Taiwan Gynecologic Oncology 101:40-45 33 Matthew G Hawkins,#1 David M Winder,#1 Siolian L R Ball,1 Katie Vaughan,1 Christopher Sonnex,2 Margaret A Stanley,1 Jane C Sterling,1,3 and Peter K C Goon Detection of specific HPV subtypes responsible for the pathogenesis of condylomata acuminate Published online 2013 May 34 Matsushita K., Miyashita M., Ishizaki A., et al (2011) Oral and cervical Human Papillomavirus infection among female sex workers in Japan Japan journal of infectious disease 64: 34 – 39 35 Miyashita M., Agdamag D.M., Sasagawa T., et al (2009) High-risk HPV types in lesions of the uterine cervix of female commercial sex workers in the Philippines Journal of Medical Virology 81:545-551 36.Munoz N., Bosch F.X., de Sanjose´ S., et al Epidemiologicclassification of human papillomavirus (2003) types associated with cervical cancer New England Journal of Medecine 348:518-527 37.Pezhman Mahmoodi, Molecular detection and typing of Human Papillomaviruses in Paraffin-Embedded cervical Cancer and Precancer tissue specimens, Iran J CancerPrev.2016; 9(1), Published 2016 Feb 22 10.17795/ijcp-3752 38.Pontén J1, Guo Z Precancer of the human cervix Cancer Surv 1998;32:201-29 39 Potocnik M1, Kocjan B, Seme K, Poljak M Distribution of human papillomavirus (HPV) genotypes in genital warts from males in Slovenia Acta Dermatovenerol Alp Pannonica Adriat 2007 Sep;16(3):91-6, 98 40 Schiffman M, Clifford G, Buonaguro FM (2009) Classification of weakly carcinogenic human papillomavirus types: addressing the limits of epidemiology at the borderline Infectious Agent Cancer.1; 4: 41 Seyed Jalal Kiani, Detection and Typing of Human Papilloma viruses by Nested Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay in Cervical Cancer Jundishapur J Microbiol 2015Dec; 8(12) 42 Sturegård E1, Johansson H, Ekström J, Hansson BG, Johnsson A, Gustafsson E, Dillner J, Forslund O Human papillomavirus typing in reporting of condyloma Sex Transm Dis 2013 Feb;40(2):123-9 43 WHO (2012) Human Papillomavirus and Related Cancers 44 Zhao F, Li N, Ma j (2001), Study of he association between human papillomavirus infection and cervical cancer in Xianguan county Shanxi province, Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi, 22(5),pp 375-378 45 Zur Hausen H (2011) Vaccines: what remains to be done? Vaccine (10).11: 1505-1507 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN Mã bệnh nhân mã hóa HỌ VÀ TÊN NĂM SINH NGUYỄN THỊ T 1957 BÙI THỊ KIM D 1981 NGUYỄN THI NGỌC C 1989 BÙI THỊ K 1978 NGUYỄN THỊ QUỲNH H 1960 MONICA ROSE M 1983 NGUYỄN PHƯƠNG T 1991 NGUYỄN T MỘNG H 1990 NGUYỄN THỊ TỪ C 1970 10 NGUYỄN THỊ LAN H 1978 11 LÊ THỊ D 1974 12 NGUYỄN THỊ L 1962 13 NGUYỄN THỊ S 1949 14 TIÊU T HUỲNH N 1988 15 ĐỖ THỊ H 1952 16 NGUYỄN THỊ T 1977 17 DƯƠNG T NGỌC D 1982 18 NGUYỄN THỊ C 1948 19 NGUYỄN THỊ N 1970 20 NGUYỄN THỊ BÍCH N 1967 21 NGUYỄN THỊ MINH T 1960 22 VŨ THỊ BÍCH P 1962 23 DƯƠNG MỸ T 1961 24 DANG MINH T 1981 25 HUỲNH MINH H 1984 26 HOÀNG THỊ TUYẾT M 1964 27 TRẦN T H 1938 28 NGUYỄN T P 1946 29 HUỲNH T CẨM MI 1988 30 LƯ B 1935 31 HUỲNH THỊ T 1963 32 THẠCH THỊ S 1939 33 NG T Đ 1958 34 LÊ THỊ T 1990 35 NGUYỄN THỊ MỘNG T 1984 36 ĐAN THANH TƯỜNG V 1969 37 NGUYỄN THỊ H 1978 38 LẠI THỊ B 1949 39 LÊ THỊ P 1950 40 ĐAN THANH TƯỜNG V 1969 41 LÊ THỊ QUỲNH N 1984 42 NGUYỄN THỊ H 1942 43 VÕ THỊ VÂN H 1967 44 VÕ YẾN N 1994 45 LÊ THỊ KIM C 1966 46 TRẦN THỊ KIM T 1964 47 NGUYỄN THỊ Đ 1986 48 NGUYỄN THI K 1966 49 ĐAN THANH TƯỜNG V 1969 50 BÙI T L 1939 51 LÊ T M 1974 52 NGUYỄN T S 1961 53 NGÔ KIM D 1969 54 TRƯƠNG THỊ T 1983 55 TRẦN THỊ V 1969 56 VŨ THỊ BÍCH P 1962 57 NGUYỄN THIỊ K 1966 58 NGUYỄN THI Đ 1986 59 VƯƠNG HẢI L 1952 60 NGUYỄN THỊ T 1961 61 ĐỖ THỊ THU T 1987 62 PHÙNG THỊ NGỌC S 1969 63 PHÙNG THỊ L 1969 64 NGUYỄN THỊ D 1962 65 ĐẶNG THỊ N 1961 66 TRẦN THỊ H 1951 67 TRẦN THỊ T 1975 68 ĐỖ KIM N 1959 69 ĐỖ THỊ T 1977 70 NGUYỄN THỊ THU T 1969 71 NGUYỄN THỊ NGỌC L 1966 72 NGUYỄN THỊ THIÊN K 1962 73 LY H 1970 74 NGUYỄN THỊ M 1959 75 NGUYỄN THỊ TUYẾT N 1982 76 TRƯƠNG THỊ S 1967 77 THÂN THỊ L 1975 78 THÁI T HỒNG 1980 79 NGUYỄN THỊ N 1977 80 ĐƯỜNG THỊ KIM D 1979 81 LÊ T BÉ Q 1987 82 ĐINH THANH H 1967 83 LÊ T H 1964 84 NGUYỄN THỊ P 1985 85 TRẦN T M 1993 86 NGUYỄN THỊ BÍCH T 1968 87 PHAN T BÍCH T 1974 Xác nhận Trưởng Bộ Môn ... việc định týp HPV nhƣ xuất phát từ thực tiễn nêu trên, đề tài "Ứng dụng kỹ thuật Real- time PCR để xác định týp HPV mẫu mô tổn thƣơng tiền ung thƣ cổ tử cung, âm đạo. " CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Kỹ thuật. .. GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐẠI THỨC ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REAL TIME PCR ĐỊNH TÝP HPV TRONG TỔN THƢƠNG TIỀN UNG THƢ, UNG THƢ CỔ TỬ CUNG VÀ ÂM ĐẠO CHUYÊN... Condyloma cổ tử cung, nhuộm H&E x40 [26] 22 1.9.1.2 Các tổn thƣơng tiền ung thƣ [1],[8],[10] - Theo phân loại WHO 2014, tổn thƣơng tiền ung thƣ tế bào gai cổ tử cung bao gồm tổn thƣơng biểu mô cổ tử