Khảo sát hàm lượng progesterone và cortisol trong huyết thanh sau khi đặt vòng prob vào âm đạo ở bò cắt buồng trứng

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN ĐÌNH TÙNG KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROGESTERONE VÀ CORTISOL TRONG HUYẾT THANH SAU KHI ĐẶT VÒNG PROB VÀO ÂM ĐẠO Ở BÒ CẮT BUỒNG TRỨNG Chuyên ngành: Thú y Mã ngành: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS Sử Thanh Long NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Trần Đình Tùng i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn ban giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Ban chủ nhiệm khoa Thú y tạo điều kiện để tơi học tập thực nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy Cô khoa Thú y giảng dạy, chia sẻ kinh nghiệm quý báu cho Đặc biệt, xin cảm ơn TS Sử Thanh Long trưởng môn Ngoại-Sản hướng dẫn, bảo, uốn nắn tạo điều kiện cho tơi để tơi thực nghiên cứu đạt kết tốt Tôi xin chân thành cảm ơn cán công tác Viện kỹ thuật nhiệt đới thuộc Viện hàn lâm khoa học Việt Nam - 18 Hoàng Quốc Việt nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình tơi thực nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn tồn thể cán cơng nhân viên trang trại giáo dục Edufarm bạn thực tập sinh giúp đỡ tạo điều kiện tốt để thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 10 năm 2016 Tác giả luận văn Trần Đình Tùng ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục biều đồ vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần I Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài Phần II Tổng quan tài liệu 2.1 Progesterone ứng dụng sinh sản 2.1.1 Vai trò progesterone 2.1.2 Vai trò LH điều hoà phân tiết progesterone 2.1.3 Vai trò prostaglandin F2α phân giải progesterone 2.1.4 Sự phân tiết progesterone bò 2.1.5 Progesterone hoạt động buồng trứng 2.1.6 Progesterone ứng dụng chăn nuôi 2.1.7 Định lượng progesterone để chẩn đoán có thai sớm 2.2 Đặc điểm cấu tạo cortisol 10 2.3 Các loại vòng tẩm giới 13 2.4 Các nghiên cứu nước 19 2.5 Các nghiên cứu nước 21 Phần III Nội dung phương pháp nghiên cứu 23 3.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 23 3.2 Vật liệu nghiên cứu 23 3.3 Nội dung nghiên cứu 24 iii 3.4 Phương pháp nghiên cứu 24 Phần IV Kết thảo luận 34 4.1 Kết cắt buồng trứng bò 34 4.2 Nghiên cứu phân tích vịng nhập ngoại từ New Zealand 35 4.3 Định lượng progesterone máu bị thí nghiệm 38 Phần V Kết luận kiến nghị 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Đề nghị 50 Tài liệu tham khảo 51 iv DANH MỤC VIẾT TẮT Pro.B : Progesterone bovine/buffalo CIDR : Controlled Internal Drug Release PRID : Progesterone Releasing Intravaginal Device FSH : Follicilin stimulin hormone LH : Lutein hormone GnRH : Gonadotropin releasing hormone F.RH : Folliculin Realeasing hormone P.RH : Prolactin realeasing hormone L.RH : Lutein Realeasing hormone LTH : Luteino trofic hormone DAG/DG : Diacylglycerol/diglycerid PLC : Phospholipaza C GTP : Guanosine triphosphate GDP : Guanosine diphosphate PGF2α : Prostaglandin F2α PMSG : Pregnant mare serum gonadotropin HCG : Human chorionic gonadotropin HTNC : Huyết ngựa chửa P : Progesterone v DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng lý lịch bò 24 Bảng 3.2 Thức ăn mùa mưa 24 Bảng 3.3 Thức ăn mùa khô 25 Bảng 4.1 Kết phẫu thuật cắt bỏ buồng trứng bò 34 Bảng 4.2 Hàm lượng progesterone máu bị thí nghiệm 39 Bảng 4.3 Hàm lượng cortisol máu bị thí nghiệm trước đặt vòng ProB (ng/ml) 46 Bảng 4.4 Hàm lượng cortisol máu bị thí nghiệm đặt vòng ProB (ng/ml) 48 vi DANH MỤC BIỀU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Biến thiên progesterone máu bò SL-01 40 Biểu đồ 4.2 Biến thiên hàm lượng progesterone máu bò SL-04 41 Biểu đồ 4.3 Biến thiên nồng độ progesterone máu bò SL-05 41 Biểu đồ 4.4 Trung bình mẫu thử 42 Biểu đồ 4.5 Biến thiên hàm lượng progesterone máu bò SL-02 43 Biểu đồ 4.6 So sánh mức độ biến thiên hàm lượng progesterone mẫu với vòng CIDR nhập từ New Zealand 44 Biểu đồ 4.7 Nồng độ progesterone huyết máu bị thí nghiệm đặt mẫu vòng tẩm khoảng 1,36g progesterone mẫu vòng CIDR (tẩm 1,9g progesterone) 45 Biểu đồ 4.8 Biến thiên hàm lượng cortisol máu bị thí nghiệm trước đặt vòng ProB 46 Biểu đồ 4.9 Biến thiên hàm lượng cortisol trung bình máu bị thí nghiệm trước đặt vịng ProB 47 Biểu đồ 4.10 Biến thiên hàm lượng cortisol máu bị thí nghiệm đặt mẫu vịng ProB 48 Biểu đồ 4.11 Biến thiên hàm lượng cortisol trung bình máu bị thí nghiệm sau đặt vòng ProB 49 Biểu đồ 4.12 So sánh hàm lượng cortisol máu bị thí nghiệm trước đặt vòng ProB 49 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Công thức cấu tạo cortisol 11 Hình 2.2 Cơng thúc phân tử 3D cortisol 11 Hình 2.3 Vịng CIDR 14 Hình 2.4 Vịng PRID 15 Hình 2.5 Vòng DIB 15 Hình 2.6 Vịng Cue Mate 16 Hình 2.7 Vịng Procrear Synkro xy 17 Hình 2.8 Vịng Pro – Ciclar 17 Hình 2.9 Vòng PRIMER 18 Hình 2.10 Vịng Sincrogest 18 Hình 2.11 Vịng Cronipres (TriU-B) 19 Hình 3.1 Chăm sóc bị thí nghiệm 25 Hình 3.2 Phương pháp Soxhlet 28 Hình 3.3 Mẫu thử nghiệm vòng CIDR 30 Hình 3.4 Vịng ProB 31 Hình 3.5 Lấy máu bị 32 Hình 3.6 Đặt mẫu thử vào âm đạo bị 33 Hình 4.1 Một số hình ảnh phẫu thuật cắt bỏ buồng trứng bị 34 Hình 4.2 Lưu mẫu (Buồng trứng) formol 35 Hình 4.3 Vịng CIDR thái nhỏ, bọc giấy lọc 35 Hình 4.4 Lỗ chứa hormone progesterone vịng CIDR 36 Hình 4.5 Cơng thức progesterone P4 37 Hình 4.6 Phổ hồng ngoại vịng CIDR 37 Hình 4.7 Phổ hồng ngoại progesterone dự kiến tẩm vào vịng tẩm progesterone 37 Hình 4.8 Đối chiếu hai phổ hồng ngoại 38 Hình 5.1 Mẫu vịng nghiên cứu 50 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Trần Đình Tùng Tên luận văn: “Khảo sát hàm lượng progesterone cortisol huyết sau đặt vòng ProB vào âm đạo bò cắt buồng trứng” Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Theo dõi biến thiên hàm lượng progesterone sau đặt vòng ProB Đánh giá mức độ ảnh hưởng vòng ProB Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu Đối tượng Vòng tẩm progesterone Việt Nam nghiên cứu sản xuất Địa điểm Bộ môn Ngoại-Sản, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Viện Kỹ thuật nhiệt đới thuộc viện Hàn lâm Khoa học Việt Nam, 18 Hoàng Quốc Việt Trang trại giáo dục Edufarm thuộc thôn Xuân Linh, xã Thủy Xuân Tiên, huyện Chương Mỹ, thành phố Hà Nội Trung tâm xét nghiệm thuộc công ty Công nghệ Xét nghiệm Y học (Medical laboratory and technology company, viết tắt MEDLATEC)số 42-44 Nghĩa Dũng, Phúc Xá, Ba Đình, Hà Nội Thời gian Bắt đầu từ tháng 10 năm 2015 đến tháng 11 năm 2016 2.2 Vật liệu nghiên cứu Vòng CIDR New Zealand sản xuất, vòng tẩm chứa 1,9 gr 1,36gr progesterone Việt Nam sản xuất thử nghiệm bò (3 bò HF bò Lai Sind) 2.3 Nội dung nghiên cứu Trong nghiên cứu tập trung vào nội dung lớn Nội dung 1: Kỹ thuật cắt buồng trứng bò ix Đối chiếu hai phổ hồng ngoại cho thấy hormone progesterone vòng CIDR trùng với hormone progesterone dự kiến tẩm vào vịng tẩm Hình 4.8 Đối chiếu hai phổ hồng ngoại Qua hình ta thấy phổ hồng ngoại hai hormone progesterone vòng CIDR hormone progesterone dự kiến tẩm vào vòng tẩm nghiên cứu trùng khớp, chênh lệch khác hình ảnh chụp quang phổ chênh lệch nhiệt độ Tuy vậy, thấy chọn loại progesterone, dùng loại progesterone P4 để tẩm vào sản phẩm đưa sản phẩm vào sản xuất thực tế 4.3 Định lượng progesterone máu bị thí nghiệm Thí nghiệm Tiến hành lấy máu bò trước đặt vòng để kiểm tra hàm lượng progesterone trước đặt vòng Sau đặt vòng tiến hành lấy máu lần 2, sau 24 lấy máu lần 13 ngày sau Kết thu sau Nồng độ progesterone huyết định lượng phương pháp enzyme miễn dịch (ELISA), kết thể bảng 4.2 38 Bảng 4.2 Hàm lượng progesterone máu bị thí nghiệm Hàm lượng Progesterone (ng/ml) Thời gian SL-01 Sl-02 Sl-04 Sl-05 Trước đặt vòng 0,232 0,969 0,246 0,1296 Sau h 6,692 10,349 7,874 2,123 ngày 3,33 8,616 10,824 4,953 ngày 4,406 8,739 10,623 4,296 ngày 5,752 6,343 6,3301 1,5881 ngày 2,726 8,541 5,261 2,852 ngày 0,623 9,154 5,358 3,113 ngày 0,3931 6,855 4,3491 2,752 ngày 0,318 6,245 3,651 1,211 ngày 0,352 7,613 3,044 1,962 ngày 0,306 4,274 2,846 1,7201 10 ngày 0,186 2,638 1,808 1,384 11 ngày 0,3491 0,6321 0,358 0,478 12 ngày 0,321 0,286 0,136 0,219 13 ngày 0,274 0,827 0,175 0,259 Qua bảng 4.2 cho thấy trước đặt mẫu vào âm đạo bị thí nghiệm, chúng tơi tiến hành lấy máu tất bò để kiểm tra nồng độ progesterone, kết cho thấy nồng độ progesterone đạt 0,1296 - 0,969 ng/ml hay nói cách khác khơng có xuất thể vàng (Cordoba Fricke 2002; Rivera cs 2004), đồng nghĩa với nồng độ progesterone huyết tăng thời gian thí nghiệm hoàn toàn thải trừ từ mẫu silicone tẩm Sau đặt mẫu thí nghiệm, mẫu hàm lượng progesterone tăng cao, đặc biệt mẫu CIDR đặt vào bò SL-02 tăng cao 39 đạt 10,349 ng/ml Trong q trình thí nghiệm cá biệt có mẫu E đặt vào bị SL – 01 vào ngày thứ hàm lượng progesterone máu giảm xuống đạt 0,623 ng/ml, nhỏ ng/ml, mẫu silicon phụ gia khơng đạt nên progesterone không thải trừ Sau ngày rút mẫu ta thấy, thứ nhất, bị SL – 01 khơng cịn tìm thấy mẫu E chứng tỏ vào ngày thứ mẫu E bị rơi ngồi khơng phải silicon cách tẩm có vấn đề Thứ hai, vào ngày thứ 10 hàm lượng progesterone máu tất bò giảm xuống ng/ml liên tục thấp ngày sau Bị SL–01 (mẫu E) Biểu đồ 4.1 Biến thiên progesterone máu bị SL-01 Qua biểu đồ 4.1 thấy trước ta đặt mẫu vào hàm lượng progesterone máu bò SL-01 nhỏ 0,232 ng/ml Tuy nhiên, sau ta đưa mẫu vào hàm lượng tăng lên đến 6,692 ng/ml, sau ngày kể từ đặt mẫu hàm lượng giảm 3,33 ng/ml Đặc biệt vào ngày thứ hàm lượng progesterone máu đột ngột giảm mạnh xuống ng/ml, không theo dự đốn phải trì ng/ml rút vòng 40 Bò SL-04 (mẫu DA) Biểu đồ 4.2 Biến thiên hàm lượng progesterone máu bị SL-04 Qua biểu đồ 4.2 ta thấy trước đặt mẫu hàm lượng đạt 0.246 ng/ml Nhưng sau đặt mẫu DA vào bị hàm lượng progesterone tăng nhanh đạt tới 7,874 ng/ml, đạt cao 10,840 ng/ml vào ngày thứ 1,808 ng/ml vào ngày thứ 10 Mặc dù hàm lượng progesterone máu đạt 1,811 ng/ml vào ngày thứ 10 lớn ng/ml Vào ngày thứ 11 sau rút vịng ngày hàm lượng progesterone giảm mạnh đạt 0,358 ng/ml trì nhỏ ng/ml liên tục ngày sau Sự giảm đột ngột nồng độ progesterone máu tác nhân làm cho bị động dục trở lại sau rút vòng bò thí nghiệm (Harpreet Singh cs, 2006) Bị SL-05 (mẫu DS) Biểu đồ 4.3 Biến thiên nồng độ progesterone máu bò SL-05 41 Qua biểu đồ 4.3 thấy trước đặt mẫu hàm lượng progesterone máu bị thấp có 0,1296 ng/ml sau hàm lượng progesterone tăng cao tới 2,123 ng/ml, ngày thứ đạt giá trị cao 4,953 ng/ml Tuy nhiên đến ngày thứ lại giảm cịn 1,591 ng/ml, sau hàm lượng progesterone lại tăng lên 2,852 ng/ml vào ngày thứ 3,119 ng/ml vào ngày thứ sau lại giảm dần 1,7201 ng/ml vào ngày thứ Ngay sau đó, vào ngày thứ 10 rút vịng hàm lượng progesterone tụt xuống ng/ml cịn 1,384 ng/ml Tuy hàm lượng progesterone có biến động lên xuống không quan trọng giá trị ng/ml Từ giá trị mẫu ta có Biểu đồ 4.4 Trung bình mẫu thử Qua biểu đồ 4.4 ta thấy hàm lượng progesterone huyết bò mẫu nghiên cứu đạt cao (>1 ng/ml) lúc đặt mẫu âm đạo Và nồng độ giảm nhanh rút vòng sau ngày (