Ứng dụng kỹ thuật Real-time PCR để xác định kiểu gen, lượng virus trong máu và đặc điểm kháng thuốc điều trị của virus viêm gan B trên người của bệnh viện đa khoa Bình Phước

76 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REAL-TIME PCR ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN, LƯỢNG VIRUS TRONG MÁU VÀ ĐẶC ĐIỂM KHÁNG THUỐC ĐIỀU TRỊ CỦA VIRUS VIÊM GAN B TRÊN NGƯỜI BỆNH CỦA BỆNH VIỆN ĐA KHOA ĐỒNG THÁP Ngày nhận bài: 06/06/2014 Lao Đức Thuận, Trương Kim Phượng, 1 Ngày nhận lại: 17/07/2014 Mai Ngọc Lành, 2 Ngày duyệt đăng: 09/09/2014 Lê Thị Phượng, Phan Văn Bé Bảy, 3 Hồ Thị Thanh Thủy, 4 Lê Huyền Ái Thúy 5 TÓM TẮT Viêm gan siêu vi B là bnh gây ra bi virus viêm gan B (Hepatitis B virus-HBV), biu hin cp tính hoc mn tính. Nhim u gây viêm gan mn tính trên toàn th gii, kt qu dn ting tin b mi trong chu tr  trong vic hn ch nhng bin chng ca bc s dng các k thut sinh hc phân t n hình là real-n không nh vào công tác chu tr. Nghiên cu này vì vt ra nhm ng dng k thut real- nh virus trong máu, kiu m kháng thuu tr (Lamivudine-LAM, Adefovir-ADV) ci bnh ti Bnh ving Tháp. Chúng tôi ghi nhn (trên 100 bnh nhân có ch s     i nhi     i nam chim t l 59,0%, giá tr ALT bình ng trong 51,2%, HBeAg âm tính chim 23,0% và không có ch u tr trong 30,0% ng hp Có 82,0% HBV-m 59,1%. Nhóm có tm 36,0%. T lt hin trong 56,1%, nhiu nhi 86,0% và ADV vt bit bin ti 204I cao nht chi  i v  t bin A181T cao nht vi t l t bin kháng thu vi t l ng virus cao. ng ca kiu gen nhim ca HBV trên các yu t lâm sàng và cn lâm sàng không th hin rõ. Từ khóa: t bin kháng thuc, kiu gen, tng Virus, real-time PCR, virus viêm gan B. ABSTRACT Hepatitis B is caused by the hepatitis B virus (HBV) and may be either acute or chronic. Chronic hepatitis B virus (HBV) infection is the major global cause of chronic hepatitis, as a result, which leads to cirrhosis and increases the risk of liver cancer development (hepatocellular carcinoma). Recent advances in the diagnosis and treatment of hepatitis B have enormously contributed to reduce the side effects of this disease in which the real-time PCR technique had the significant contribution to diagnosis, monitoring and therapy. In the current study, therefore, our purpose is the application of real-time PCR method to detect hepatitis B 1 ThS, Trường Đại học Mở TP.HCM. 2 Sở Khoa học Công nghệ Tỉnh Đồng Tháp. 3 Bệnh viện Đa khoa Tỉnh Đồng Tháp. 4 Công ty Cổ phần Công nghệ Việt Á. 5 PGS.TS, Trường Đại học Mở TP.HCM. Email: lhathuy@gmail.com CÔNG NGHỆ 77 viral load, genotypes as well as lamivudine (LAM) and adefovir (ADV) resistance in patients at Dong Thap Hospital. The results figured that the mean age of HBV patients was 37.0 ± 0.34, the proportion of male infected was 59.0%. In addition, our results also showed that the rate of the patients with the normal ALT level and HBeAg negative were 51.2% and 23.0%, respectively. Moreover, the patients who were not indicated for treatment were approximately 30.0%. Among the group of HBsAg positive, the rate of HBV-DNA positive was 82.0% and a majority rate of 59.1% was HBV genotype B. The group of high viral load in those samples was equal to or greater than 20,000 IU/ml (36.0%). The total rate resistant mutation occurred in 56.1%, the rate of LAM resistant mutations was the most value of 86.0% and ADV resistant mutations were 68.0%. LAM resistant mutation 204I occurred at 84.0%. ADV resistant mutation A181T was the highest rate of 68.0%. Resistance mutations often associated with a higher proportion of HBeAg positive and the high viral loads. Meanwhile, the influence of genotype infections on the clinical, para-clinical characteristics were not clear. Keywords: Hepatitis B virus, genotypes, real-time PCR, resistance mutation,viral load. 1. Giới thiệu Theo báo cáo ca T chc Y t Th gii (WHO), có khong 2 t i nhim virus viêm gan B (HBV) trên toàn th gi khong 6% có viêm gan siêu vi B cp tính và 5-10% trong s này s chuyn sang mn tính  i l i vi tr em t l này lên n 90%. T l t    n cp tính là 1%. Bin chng ca viêm gan siêu vi B cp là viêm gan m nguyên phát, dn t vong vào khong mt tri i m  [25][26] . Ti Vit Nam có 15-i nhim HBV, và trên bnh nhân           l nhim HBV chin 80-92% [15][29][41] .   [15][29][41] .          [3][4][30]                                   i  theo th [20] . Hi      n                            -          [8][11][18][32][38] . Bnh viêm gan siêu vi B là bnh ph bin  tng Thápc tính khong 10% trên tng s xét nghim HBsAg. Vic trin u tr ti Bnh ving Tháp hin nay còn  m      tin ch     u tr  y . Nghiên c          nhim HBV tng Tháp. 2. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu ng nghiên cu Nghiên c c tin hành trên nhng bu tr ti bnh vin   nh Tây Ninh có ch s HBsAg ng xét nghim huyt thanh min d   u tr bng thuc kháng HBV. Mu máu s c b sung thêm xét nghim ALT và HBeAg, giá tr  tham chiu c tài này là < 42 UI/ml. -time PCR DNA t mu huyt thanh bnh nhân ly trích bi b kít tách chit DNA QIAamp DNA blood     c s d  thc hin real-time PCR. Các b kít Realtime- PCR do công ty C phn & Công ngh Vit Á cung cp, bao gm: LightPower iVA HBV qPCR 78 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 Plus Kit: VA.A02-001C (nh  nh ti ng virus trong máu vng phát hin là 60 UI/ml); LightPower iVA HBV LamR rPCR Plus Kit: VA.A02-001G và LightPower iVA HBV AdeR rPCR Plus Kit: VA.A02-001I (nhm kho sát các kit bii trà:    i trà: A181T, A181V, N236T); LightPower iVA HBV Genotype rPCR Plus Kit: VA.A02- 001E (nhnh ba kiu gen HBV ph bin ti Vit Nam: A, B và C).   MedCal (phiên bn 12.7.0.0) c s d  phân tích, tt c các phép ki        ng kê c chn là p < 0,05. 3. Kết quả và thảo luận  100     s   c thu nhn t các b            nhim HBV ta bàn tnh có s ng v tui là ln vi t l nam mc bnh có phn cao  . Ch s     ng chim 20   ng hp xét nghim       m 21  ng hp xét nghim (51,2%). S bnh nhân có ch  chính là s bnh nhân cu tr. V ch s ng hp có kt qu xét nghim, t lng h du n sinh hc cn thit trong theo dõi và u tr nhim HBV, tuy nhiên trong mt s ng h  t bin không tng hp c HBeAg thì vi    u tr nhim HBV s phi da trên t ng virus trong máu. Tng virus có m  i ch s HBeAg, HBeAg xut hi   trong nhng ca có ch s tng virus cao và c l   c s d  du ch m cho s nhân lên và lây nhim ca virus HBV. Hing HBeAg âm tính có th g  ng hp có xy ra  t bin precore, nên quá trình tng hp HBeAg không thc hic. Chính vì vy mà trong huyt thanh bnh nhân, kháng nguyên HBeAg có th ng tính.  - UI/ml, trong 100 m  c nhng c có ch s HBV-DNA xp x 300  ca bnh có t            thc áp d      s          c hình  sinh thit. Tng hp các yu t ng d u tr nhim HBV, bao gm HBeAg, men ALT và t ng virus, có 70,0% bnh nhân cu tr và 30,0% cn cân nhc u tr tùy tng hp c th. Dù tính an toàn và hiu qu phòng nga ca vaccine phòng bc chng p km HBV vn tip tc tin trin  mc toàn cu vi kho   n 1 tri i cht m  [41] . Có rt nhiu yu t    n s tin trin ca bnh sang mn     u t gm kiu gen, ti ng virus và các kit bin gen là có mi liên quan mt thit [21] .  -DNA, kt qu  nh kiu gen cho th           ng nhim hai kiu gen B và C. T l nhim gia kiu gen B/C vào kho               gen v  cp. Kt qu phát hin kiu gen trong nghiên cp vi nhn   c rút ra t các nghiên c c  phân b kii CÔNG NGHỆ 79 i châu lc, m king gp   Nam Á, Nht Bn và khu vc Thái Bình  l nhim ca king  [1][12][13][21-23] . Mt nghiên c   c thc hin trên 295 bnh nhân ti TP. H Chí Minh có bnh lý v gan ca Tran HT et al (2003) [41] . Các tác gi ghi nhn trong 234/295 ca có nhim virus, t l nhim HBV chim 31,2%, u gen B chim 43,0% và kiu gen C chim 57,0% [41] y, t l nhim gia p x 1/1; không mt kiu gen nào c ghi nhn qua nghiên cu này. Mt nghiên cc thc hin trong thi gian t n tháng 5/2006 ti phòng xét nghim Trung Tâm Y Khoa MEDIC, các tác gi s dng k thut gii trình t    ng hp bnh nhân Vit Nam viêm gan virus B mu tr LAM và ghi nhn ch có 2 kiu gen B và C,  king hp (62,3 %) và king hp (37,7 %) [2] . T l nhim gia kiu gen B/C là xp x 2/1. Mt nghiên cu khác ca Long H. Nguyen et al (2009) [29] thc hin trên nhóm bnh nhân viêm gan m i gc Vit và gc Trung Quc sinh sng ti Bc California t tháng 6/2005 n tháng 6/2008, các tác gi   n mt t l khá khác bit gii:  nhng bnh nhân Trung Quc, kiu gen B chim 49/89 ca (55,0%), kiu gen C chim ng hp nhim ki       i vi nhóm bnh nhân có ngun g i Vit Nam, t l này phân b: kiu gen B chim 335/478 ca (74,0%), kiu gen C chim 120/478 ca (chim 24,0%), kiu gen A chim 1/478 ca (1,0%) và kiu gen D chim 2/478 ca (1,  y, t l nhim gia kiu gen  c ghi nhn là vào khong 3/1. Mt nghiên cu khác cng Mai Anh Tun và cng s (2010) [6] , kho sát kiu gen HBV c thc hin b   -gii trình t hin trên c mu 894 bnh nhân, các tác gi ghi nhn có 3 kiu gen B, C và D, tuy nhiên kiu gen D ch có duy nht 1 mu chim 0,11%, còn li là kiu gen B vi 678 mu và kiu gen C vi 215 m ng vi t l  l gia kiu gen B/C là khong 3/1. Nghiên cu ca Phung TB et al (2010) [34]   y trong 87 mu nhim HBV t các bnh nhân ti Hà Ni, kiu gen B chim 67/87 mu (77,0%) và kiu gen C chim 19/87 mu (22,0%),  l gia king 3/1. Trong hai nghiên cc thc hia     dng các b kít phát hin kiu gen da trên k thut real-time PCR ca công ty Vit Á, thc hin trên 100 bnh nhân nhim HBV ti khu vc tk-lk ghi nhn kiu gen B là 63 mu, kiu gen C chim 21 m l nhim gia kiu gen B/C vào khong thi có 16 mu nhim c hai kiu gen B và C [1] và trên 200 bnh nhân nhim HBV ti bnh vi    Ninh, ghi nhn t l nhim gia kiu gen B và C xy x 4/1 [5] . G    et al   [28] công b t l nhim HBV trên 113 bnh nhân ti khu vc Hi Phòng là kiu gen B chim 80,5% trong khi kiu gen C chim gn 20%,  l nhim gia kiu gen B/C vào khong 4/1. Gt là xut bn ca nhóm nghiên cu Dunford L et al (2012) [15] cho thy trong s 185 mu nhim nh kiu gen t bnh nhân thu nhn t 5 tnh thành trong c c, bao gm: Hà Ni, Hng, Khánh Hòa và C l kiu gen B chim xp x 85%, kiu gen C chim xp x y, t l nhim gia ki     ng ln y, có th nói rng kiu gen B và C là hai kiu gen nhim chi  các chng tc châu Á; kiu gen B luôn chim t l  u, gp khong 3 ln so vi kiu ng nhim ca kiu gen B  t qu ca nghiên cu này và ca Nguyen CH et al (2011); 5/1 trong nghiên cu ca Dunford L et al, 2012) [15] , rt có th là mt kiu nhii Vit Nam. T l ng nhim trong nghiên cu này n công b  kho sát trên 200 ca nhim t    Tây Ninh (4,1t công b        Xin Ding et al (2003) [14]        ng thi B và C là 4,4%), tuy nhiên thi t l ng nhim trên 100 bnh nhân nhim HBV ti khu 80 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 vc Tây Nguyên trong công b ca  TTD HAT (2011) là 16,0% [1]  là k thut s d  genotyping trong các nghiên cu là real-time PCR và PCR trc tip bng các mi phân bic hiu tng kiu gen. Rt có th     giúp vinh tính chng nhim hin din mà k thut gii trình t có th b sót mt khi mt trong hai kiu gen chim s ng rt thp trong qun th virus nhim. Dù vy, cn nhiu nghiên cu khác n  kh nh nhnh này ca chúng tôi.  rút ra m ngh khác n d dàng trong vic ng dng trong lâm sàng, k thu  nh kiu gen có th tin hành nhanh, c mu ln, và giá c phù hp, vc thù kiu gen nhim ch yu là B và C, real-   c la chn nu c áp dng t    ng Tháp.  ng h    c bng real-time PCR (nu có) s c kim tra bng gii trình t trc tip sn phm PCR.                          c tìm kim (44,0%). Trong s 37 ca kháng thu 32 ca         t bin kháng kép LAM t  m M204I và M204V và kháng kép ADV t  m A181V và A181T chim t l  ng 10/32 ca (31,0%) và 2/25 ca (8,0%).     c phát hi     So sánh vi kt qu nghiên cu g nht c dng cùng các b n cu này, thc hin t 200 ca nhim HBV t nh              [5]   y t l kháng ca 66 ca ghi nhn t ng Tháp (56,0%) là th t l kháng ca tng loi thuc, trong s 99 ca kháng t                    l kháng ti BV.      l kháng kép LAM (M204I và M204V), ADV (A181V và A181T) ca nghiên cu này có phn th   i Tây Ninh (t bin kháng kép LAM tm M204I và M204V và kháng kép ADV ti 2 m A181V và A181T chim t l lt là 41/78 ca (52,6%) và 27/56 ca (48,2%) [5]  so vi kt qu nghiên cu  BV. Tây Ninh, chúng tôi có phát hi      c phát hi và mt ca duy nht xut hit bin L180M riêng l; thì nghiên c    n ng hp nào b   t bin k             u  Tây     n ca nào kháng N236T) [5] . Nghiên cu ca H   ng s [2] , thc hin t   n tháng 5/2006 trên 122 bnh nhân ti phòng xét nghim Trung Tâm Y Khoa MEDIC. Các tác gi s dng k thut gii trình t trên h thng OpenGene vi b thuc th TruGene (Bayer), kt qu cho th   ng hp (63,9%) t bin kháng LAM, t l và các kiu t bi     L180M & M204V (36,1%); L180M, M204V & V173L (0,8%); L180M, M204V & V207I (0,8%); M204I (12,3%); M204I & V207I (0,8%); M204V (1,6%). So vi kt qu này, th m 2014, t     t qu nghiên cu ca chúng tôi, nu ch tính riêng kháng LAM, t l      Nghiên ca Nguyn CV và cng s (2008) [7] cho thy: s dng k thut Nested PCR-  t bi   c phát hin vi tn sut khá cao chim 74,4%, ph bin  2 dng là M204I (39,2%) và L180M/M204I (14,7%). Các tác gi  rng k thut Nested PCR-RFLP th hi  m trong vic phát hin-phân bit hn hp HBV hoang d  t bin. So vi kt qu này, thm 2014, tt qu nghiên cu ca chúng tôi, nu ch tính riêng kháng LAM, t l 86,0%  lên, tuy nhiên d t bin ph bin trong nghiên cu chúng tôi khác bit: dt bin CÔNG NGHỆ 81    chim 47,0% so v t bin kép M204I/V chim 31,0%. Tuy nhiên, so vi mt nghiên cu khác cng Mai Anh Tun và cng s (2010) [6] , các tác gi phát hin 83 bnh nhân viêm gan virus B mn tính b kháng thuc chim t l 9,28% trong tng s  i; trong s  i kháng t bin kháng kép (kháng c LMV và ADV) (4,14%).  vy, so vi kt qu   t cao, c kháng LAM, kháng ADV và kháng kép. M kháng kép trong nghiên cu ca chúng tôi khá cao (31,0%). Hin ng này giúp virus có th tip tc tn ti và sinh sng ca thuc tr. S liu trong nghiên cu này vi t l kháng LAM tip t      vi nhc các tác gi ng MAT và cng s (2010) [6]       kháng này phù hp vi thc t ti Vit Nam do chi phí LAM r  n 10 ln so vi ADV u tr c s d   u này khin LAM tr thành tác nhân chn l c vi thi gian nhi     kháng, ADV mi c s dng. Tuy nhiên, vi nh nh da trên kt qu kháng LAM và ADV trong nghiên cu c ng MAT và cng s (2010) [6] chim ng bnh nhân viêm gan mn tính, t     cho rng thuc LAM vn còn là loi thuc rt hu du tr viêm gan B; thì qua nghiên cu này vi t l n 86,0%, có l LAM không còn là mt la chu tr HBV na. Dù xét v    n sut xut hin rt cao c  t bi        nt bin này ht hin kèm v  t bi  ng xuyên khác; quy trình phát hit bin da trên k thut real-time PCR s dng trong nghiên cu này t bin. Vi 29/66 ca (43,9%)      các bt bin nào, hoc do k thut real-t các t bin khác xut hin m    (có th có), chúng tôi tm thi kt lun các ca bnh này không     kháng thuc tìm kim. D kin thc hin thêm k thut gii trình t  thc hi  kinh phí trong nghiên cu này. Có rt nhiu nguyên nhân n vic xut hit bi  u tr, tuy nhiên có mt yu t quan trng có th làm cho t l t bi cao là v  s dng thu    ng du tr u tr thành nhic khi bc                   g hai loi thu  trn                       nghiên c      Nhm tìm m   i các ch tiêu lâm sàng và c    n bnh, chúng tôi ghi nht bin kháng thuc i t l (Bng 1) và tng virus cao (Bng 2). i có t i ch s ng kê (Bng 3).     ng ca kiu gen nhim ca HBV trên các yu t lâm sàng và cn lâm sàng khác không th hin rõ. 82 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 Bảng 1. Mối liên quan giữa đột biến kháng LAM, ADV và HBeAg Đột biến kháng LAM Đột biến kháng ADV HBeAg (%) Âm tính  Tng Âm tính  tính Tng Âm tính 29 (74,4) 10 (25,6) 39 (62,9) 34 (87,2) 5 (12,8) 39 (62.9) Dương tính 4 (17,4) 19 (82,6) 23 (37,1) 4 (17,4) 19 (82,6) 23 (37.1) Tổng 33 (53,2) 29 (46,8) 62 (100,0) 36 (61,3%) 24 (38,7%) 62 (100,0) p <0,0001 <0,0001 Bảng 2. Mối liên quan giữa đột biến kháng LAM, ADV và tải lượng virus Đột biến kháng LAM Đột biến kháng ADV Tng virus (IU/mL) (%) Âm tính  Tng Âm tính  Tng <2000 20 (87,0) 3 (13,0) 23 (34,8) 23 (100,0) 0 (0,0) 23 (34,8) 2000-20000 4 (57,1) 3 (42,9) 7 (10,6) 7 (100,0) 0 (0,0) 7 (10,6)  10 (27,8) 26 (72,2) 36 (54,5) 11 (30,6) 25 (69,4) 36 (54,5) Tng 34 (51,5) 32 (48,5) 66 (100,0) 41 (62,1) 25 (37,9) 66 (100,0) p <0,0001 <0,0001 Bảng 3. Mối liên quan giữa tải lượng virus và HBeAg HBeAg Tng Tải lượng virus (IU/mL) (%) Âm tính tính Âm tính <2.000 16 (100,0) 36 (100,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 16 (17,6%) 36 (39,6%) 5 (5,5%) 2.000-20.000 5 (100,0) 0 (0,0) ≥ 20.000 11 (32,4) 23 (67,6) 34 (37,4%) 68 (74,7%) 23 (25,3%) 91 (100,0) p < 0,0001 CÔNG NGHỆ 83 S xut hi  t bin kháng các thu u tr        phân nucleoside (nucleoside analogs  NUCs) trong nghiên cu này cho thy có liên quan n ch tiêu HBeAgt bin kháng LAM và i t l  và c li (Bng 1). Kt qu  hp vi kt qu nghiên cu   a chúng tôi [5] và ca Tan YW et al (2012) [39] . Bnh nhân  t bin kháng thuc có t       ng hp kháng LAM và ADV (Bng 2  công b  c         -                p  0,001 [5]          DNA virus ca hai thu có th suy lun r   u ki   Trong nghiên cu ca Sinn DH et al (2011) [37] , các tác gi n tng      nhóm bnh nhân kháng LAM kèm xut hin kháng ADV (rtA181V/T và/ho    na, ch s ti       i ch s    ng kê va c minh chng qua kt qu ca nghiên cu này (Bng  u này càng cng c    dng ch s tt ch m quan trng trong sut quá trình theo u tr mà rt nhiu công b  dng. i vi nhng hp kháng thuc, liu pháp la chn sao cho hiu qu chng virus cao nht và gi   o s        ng d u tr  cp [16] . Hin nay, liu pháp s dng  c chp nhn s dng rng rãi i vi các b      nhng công b cho thy vic s dng ADV mt mình và ADV kt hp vi LAM cho hiu qu ch     ng thu tr 16 tun  nhng bnh nhân  t bin kháng LAM [33] . Tuy nhiên, nghiên cu vi thu tr   dng liu pháp kt hp LAM  ADV, vic xut hi t bin kháng      t 1, 2, 4 và 4% [18] u ch s dng liu pháp   t bi g vt lên 21% sau 15-18 tháng so vi lúc bu tr (p = 0,0174) [35] . T nhng thông tin mà chúng tôi tham khc trong các tng quan,      s d  ng dn u tr  Study of the Liver), APASL (Asia-Pacific consensus Statement), US algorithm (Treatment algorithm in the United States), EASL (European Association for the Study of Liver) và AASLD (American Association for  phân tích, mt : kháng ADV có th qun lý bng cách thêm vào mt thuc NUCs không kháng chéo. Nhng bnh nhân kháng   t bin rtN236T, nhy cm vi Lamivudine, Telbivudine, Entecavir và    i vi kiu kháng A181T/V, tính nhy vi Lamivudine gim trong khi vn duy trì vi các thuc khác [10][17] . Entecavir v   ngh s dng cho nhng bnh nhân mi tip nhu tr bng NUCs và nhng bnh nhân kháng Lamivudine [9][19][36] , thung c hiu qu rõ ri vi nhng bnh nhân mi s d   t qu có ph c li vi các bnh nhân kháng Lamivudine [9][19][31] . Nh t bin kháng LAM (M204I/V +/- L180M) tn tc khi tip nhn liu pháp Entecavir là rào cn làm gim hiu qu s dng thu t bin kháng Entecavir [10][40] . Telbivudine và t hit bi y vic qun lý tính kháng các thu       kháng Lamivudine [27] . Qua nhng ý ki c tng hp trên  rõ ràng vic tm soát các t bi         t cn thit. Vi tính cht bin kháng LAM, ADV c phát hin qua nghiên cu này, nu áp d   u tr NUCs +/- inteferon t khoa tng Tháp, rõ ràng, vic sàng l   t bin là rt hu ích. Các quy trình da trên k thut real-  kít mà nghiên cu 84 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 này s dng s vn chc hiu qu trong ng dng lâm sàng. 3. Kết luận Dù nghiên cu ch m c thc hin trên c mu không lt qu cho thy vic ng d  t real-time PCR trong giám sát bnh nhim VGSVB là rt cn thit. T l a DNA HBV chim 82 ca trong tng s   s DNA HBV này li là ch m v s tn ti    a virus. Ch s  cho thy có mi ch s kháng     m v các ki t bin kháng thu u tr LAM và ADV. S phân b kiu gen ca các ba bàn t g cho thy nhim kiu gen B là t hing nhim hai kiu gen B và C. Rõ ràng, các kt qu nêu trên là hoàn toàn hu ích phc v cho công tác chn   u tr bnh. Nghiên c  c tip tc trong thi gian ti vi c mu l. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1.  - , 1(19), tr.118-123. 2. H Tt, Phm Th Thu Thy, Nguyn Bo Toàn, Nguyn Th Kiu Oanh, Nguyn ng dng k thut gii trình t chu nh kit bin kháng thuc cTrung Tâm Y Khoa MEDIC, TPHCM Trích t ngun: http://www.drthuthuy.com/reseach/HBVGenotype.html 3. H Th Thanh Th    t bin rtL180M và rtM204V/I kháng Lamivudine  bnh nhân nhim HBV mn tính bng k thut real-Hi ngh khoa hc k thui hc TP. HCM ln th 27. 4. H Th Thanh Thy, Nguyn Bo Toàn, Lê Huyn Ái Thuý. (2009). t bin rtN236T và rtA181T/V kháng adefovir dipivoxil  nhng bnh nhân nhim virus HBV mn tính bng real- Báo cáo khoa hc Hi ngh CNSH toàn quc, tr. 888-890. 5. Lê Huyng dng k thut real- nh kim kháng thuu tr ca virus viêm gan B trên i bnh ca bnh viBáo cáo nghi tài NCKH cp Tnh  S Khoa hc Công ngh Tng Tháp. 6. ng Mai Anh Tuc Xuyên An, PhTìm hi t bin kháng adefovir và lamivudine trên HBV tách chit t huyt thanh bnh nhân viêm gan B Tp chí Y Hc TP. H Chí Minh, 14(2), tr. 287-293. 7. Nguy  ng quy trình phát hi t bin kháng Lamivudine rt180  rt204 và th nghim ng dng quy trình trên huyt thanh bnh nhân. Báo cáo nghim thu, S KHCN, TPHCM. 8. Abe A, Inoue K, Tanaka T et al        DNA by real-J Clin Microbiol, 37, p.2899-2903. 9. Chang TT, Gish RG, de Man R et al for HBeAg-N Engl J Med, 354, p. 1001-1010. CÔNG NGHỆ 85 10. Choi MS, Yoo BC.  Management of Chronic Hepatitis B with Nucleoside or  Gut and Liver, 4(1), p.15-24. 11. Chopra GS, Gupta PK, Anand AC et al-time PCR HBV-DNA analysis: significance and first experienMJAFI, 61, p.234-237. 12. Chu CJ, Keeffe EB, Han SH, Perrillo RP, Min AD, Soldevila-Pico C. (2003).  Hepatology, 38, p.619-628 13.               Journal of Virology, 47(2), p.337-343. 14.             distribution Hepatitis B and C virus in HaJpn.J.Infect, 56(1), p.19-22. 15. Dunford L, Carr MJ, Dean J, Nguyen LT, Ta TT et al Analysis of Hepatitis B and Blood-PLoS ONE, 7(6), p.1-11. 16. European Association for the St        J Hepatol, 50, p.227-242. 17. Fung SK, Andreone P, Han SH et al  -resistant hepatitis B can be associated with viral rebound and hepatic decompenJ Hepatol, 43, p.937-943. 18. Garson JA, Grant PR, Ayliffe U et al-time PCR quantitation of Hepatitis B  J Virol Methods, 126, p.207-213. 19. Gish RG, Lok AS, Chang TT et al          patients with HBeAg-Gastroenterology; 133, p.1437-1444. 20. Hadziyannis SJ, Tassopoulos NC, Heathcote EJ et al-term therapy with adefovir dipivoxil for HBeAg-negative chronic hepatitis B for up to 5 yea Gastroenterology, 13, p.1743-1751. 21.    Korean J InternMed, 26, p.255-261. 22.           N Engl J Med, 356(14), p.1445-1454. 23. The Lancet, 362, p.2089-2094. 24. Low resistance to adefovir combined with lamivudine: a 3-year study of 145 lamivudine- Gastroenterology, 133, p.1445-1451. 25. Lee WM. (N Engl J Med, 337, p.1733-1745. 26. Liang TJ. Hepatology, 49(5S), p.13-21. 27.           Hepatology, 50, p.661-662. 28. Nguyen CH, Ishizaki A, Chung PT, Hoang HT, Nguyen TV et al HBV infection among different HIV-risk groups in Hai J Med Virol, 83(3), p.399-404. [...]... Hepatology, 49, p.1503-1514 41 Tran HT, Ushijima H, Quang VX., Phuong N, Li TC, Hayashi S et al (2003) Pr val nc of hepatitis virus < /b> types B through E and genotypic distribution of HBV and HC in Ho Chi Minh City, i tnam Hepatol Res 26(4), p.275-280 eal-time PCR < /b> assay using molecular J Clin Microbiol, 42, p.3438-3440 ... iru 39 Tan YW, Ge GH, Zhao W, Gan < /b> JH, Zhao Y, et al 2012 YM moti mutation in chronic hepatitis B antiviral treatment naïve patients: a multi- c nt r tu y The Brazillian Journal of Infectious Diseases, 16(3), p.250-255 40 Tenney DJ, Rose RE, Baldick CJ et al (2009 ong-term monitoring shows hepatitis B virus < /b> resistance to entecavir in nucleoside-naive patients is rare through 5 years of th rapy Hepatology,... with nucleotide binding-site mutations, increasing hepatitis B virus < /b> replication and drug r i tanc J Clin Invest, 107, p.449-455 32 Pas SD, Fries E, De Man RA et al 2000 v lopm nt o a uantitativ r al-time t ction a ay or H patiti viru an comparition with two comm rcial a ay J Clin Microbiol, 38, p.2897-2910 33 Peters MG, Hann HH, Martin P et al 2004 ovir ipivoxil alon or in combination with lamivudine...86 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 29 Nguyen LH, Ha NB, Vutien P, Ruel TG, Trinh HN et al 2009 Pr val nc o h patiti viru g notyp in i tnam pati nt with chronic h patiti Hepatol Int, 3, p.461-467 30 Norder H, Couroucé AM, Magnius LO 1998 Compl t g nom , phylog n tic relatedness and structural proteins of six strains of the hepatitis B virus,< /b> four of which repr... 34 Phung T , l tig E, guy n T , Hannoun C, in h M 2010 G notyp X/C recombinant (putative genotype I) of hepatitis B virus < /b> is rare in Hanoi, Vietnam-g notyp 4 an C1 pr ominat J Med Virol, 82(8), p.1327-1333 35 Rapti I, Dimou E, Mitsoula P, Hadziyanni J 200 ing-on versus switching-to adefovir therapy in lamivudine-resistant HBeAg-n gativ chronic h patiti Hepatology, 45, p.307-313 36 Sherman M, Yurdaydin... chronic hepatitis B: improved virologic, biochemical, and serology outcomes throughw k Hepatology, 48, p.99-108 37 Sinn DH, Lee HI, Gwak GY, Choi MS, Koh KC et al 2011 Virological response to a ovir monoth rapy an th ri k o a ovir r i tanc World J Gastroenterol, 17(30), 3526-3530 38 Sum SS, Wong DK, Yuen MF et al 2004 acon or uantitation o H patiti iru 39 Tan YW, Ge GH, Zhao W, Gan < /b> JH, Zhao Y, et . CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM – SỐ 6 (39) 2014 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REAL-TIME PCR ĐỂ XÁC ĐỊNH KIỂU GEN, LƯỢNG VIRUS TRONG MÁU VÀ ĐẶC ĐIỂM KHÁNG THUỐC ĐIỀU TRỊ CỦA VIRUS VIÊM GAN B TRÊN NGƯỜI. hin rõ. Từ khóa: t bin kháng thuc, kiu gen, tng Virus, real-time PCR, virus viêm gan B. ABSTRACT Hepatitis B is caused by the hepatitis B virus (HBV) and may be either acute or chronic Lê Thị Phượng, Phan Văn B B y, 3 Hồ Thị Thanh Thủy, 4 Lê Huyền Ái Thúy 5 TÓM TẮT Viêm gan siêu vi B là b nh gây ra b i virus viêm gan B (Hepatitis B virus- HBV), biu hin cp tính hoc