Đặc điểm bệnh lý và triệu chứng lâm sàng của bệnh giảm bạch cầu chó.Triệu chứng lâm sàngmèo giảm bạch cầu.Các phương pháp chẩn đoán mèo giảm bạch cầu.Nhuộm Giemsa: • Phòng bệnh giảm bạch cầu ở chó.• Điều trị bệnh giảm bạch cầu ở chó.Tình hình nghiên cứu Ehrlichia canis.triệu chứng điển hình của chó mắc bệnh giảm bạch cầu
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM HUẾ Khoa Chăn ni - Thú y BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP NGÀNH: THÚ Y TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát tình hình mắc bệnh số triệu chứng điển hình bệnh giảm bạch cầu chó Ehrlichia canis gây bệnh viện thú y Danangpet, phường Hòa Xuân, quận Cẩm Lệ thành phố Đà Nẵng Sinh viên thực hiện: Lo Thị Thúy Lớp: Thú y 49A Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS.Nguyễn Xn Hịa Bộ mơn: Thú y NĂM 2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM HUẾ Khoa Chăn ni - Thú y BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP NGÀNH: THÚ Y TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát tình hình mắc bệnh số triệu chứng điển hình bệnh giảm bạch cầu chó Ehrlichia canis gây bệnh viện thú y Danangpet - phường Hòa Xuân - quận Cẩm Lệ - thành phố Đà Nẵng Sinh viên thực hiện: Lo Thị Thúy Lớp: Thú y 49A Thời gian thực hiện: Từ 16/9/2019 đến 06/12/2019 Địa điểm thực hiện: Bệnh viện thú y Danangpet – phường Hòa Xuân - quận Cẩm Lệ - thành phố Đà Nẵng Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS.Nguyễn Xn Hịa Bộ mơn: Thú y NĂM 2020 Låìi Cm Ån Để hồn thành chun đề báo cáo tốt nghiệp trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy, cô giáo khoa Chăn nuôi - Thú y trường Đại học Nông Lâm Huế Cảm ơn quý thầy cô tâm huyết, nhiệt tình truyền đạt kiến thức bổ ích cho tơi suốt thời gian học tập trường Nhiều hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến giảng viên hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Xuân Hòa, người dành nhiều thời gian, công sức định hướng bảo tơi suốt q trình thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Trong suốt trình học tập làm báo cáo n ỗ l ực c ố gắng nhiều để hoàn thành với kết tốt nhất, kiến thức kinh nghiệm thân hạn chế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong quý thầy, cô thông cảm Rất mong đóng góp ý kiến q thầy cơ, bạn bè để đề tài tơi hồn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC MỞ ĐẦU PHẦN I: PHỤC VỤ SẢN XUẤT 1.1 TỔNG QUAN CƠ SỞ THỰC TẬP 1.1.1 Sự hình thành phát triển 1.1.2.Cơ sở vật chất 1.1.3.Cơ cấu tổ chức hoạt động 1.2 CÁC QUY TRÌNH THỰC HIỆN TẠI CƠ SỞ4 1.2.1 Quy trình vệ sinh phịng khám 1.2.2 Quy trình tiếp nhận điều trị bệnh 1.2.3 Quy trình vaccine 5 1.2.4 Kit chẩn đoán nhanh 1.2.5.Truyền dịch 1.2.6.Quy trình chuẩn bị cho ca phẫu thuật 1.2.8 Xét nghiệm ghẻ Demodex canis 1.3.NỘI DUNG CÔNG VIỆC ĐÃ THỰC HIỆN PHẦN II: NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 2.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 12 12 2.1.1 Tính cấp thiết đề tài 12 2.1.2 Mục tiêu Nghiên cứu 12 2.1.3 Ý nghĩa đề tài 12 2.2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 13 2.2.1 Một số đặc điểm sinh lý chó 13 2.2.2 Sinh lý máu 14 2.2.3 Cơ sở khoa học đề tài 17 2.2.4 Đặc điểm bệnh lý triệu chứng lâm sàng bệnh giảm bạch cầu chó 19 2.2.5 Tình hình nghiên cứu Ehrlichia canis 23 2.3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.3.2 Vật liệu nghiên cứu 25 2.3.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 2.3.4 Nội dung nghiên cứu 26 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.5.1 Xác định chó bệnh, lấy mẫu 26 26 25 2.3.5.2 Xét nghiệm mẫu 2.3.6 Xử lý số liệu 26 29 2.4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 2.4.1 Tỉ lệ chó mắc bệnh dựa phương pháp chẩn đoán 30 2.4.2 Tỉ lệ triệu chứng điển hình chó mắc bệnh giảm bạch cầu 31 2.4.3 Kết tỉ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo giới tính 32 2.4.4.Tỉ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi 2.4.5 Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống 2.5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 2.5.1 Kết luận 36 2.5.2 Kiến nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 34 36 37 DANH MỤC BẢNG Bảng Chỉ số sinh lý máu chó 17 Bảng Tỉ lệ chó mắc bệnh phương pháp chẩn đoán dựa số ca mắc (n=54) 30 Bảng Một số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis 31 Bảng Tỉ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis theo tính bi ệt 33 Bảng Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi Bảng Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống 33 34 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tỉ lệ chó mắc bệnh phương pháp chẩn đoán so với số ca mắc bệnh 30 Biểu đồ.2 Tỉ lệ số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis 32 Biểu đồ Tỉ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis theo tính bi ệt 33 Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi 34 Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống 35 DANH MỤC HÌNH Hình Ehrlichia canis sống bạch cầu đơn nhân đại thực bào (Nguồn: vetshop, 2014) 19 Hình Chảy máu mũi miệng 20 Hình Niêm mạc miệng nhợt nhạt chó bị giảm bạch cầu 21 Hình Xuất huyết da 21 chó bị giảm bạch cầu 21 Hình Truyền máu cho chó bị giảm bạch cầu 23 Hình Que test Ehrlichia canis cho kết dương tính 29 Hình Kết xét nghiệm máu chó bị bệnh giảm bạch cầu 29 DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT PGS.TS : Phó Giáo Sư.Tiến Sĩ E.canis : Ehrlichia canis E chaffeensis : Ehrlichia chaffeensis R sanguineus : Rhipicephalus sanguineus Spp : Species pluralis CPV : Canine Parvovirus CDV : Canine Distemper Virus FPV : Feline Panleukopenia Virus AKC : American Kennel Club ALT : Alanine aminotransferase Cs : Cộng Ctv : Cộng tác viên DNA : Deoxyribonucleic Acid EDTA : Ethylene diamine tetra acid acetic ELISA : Enzyme-linked Immunosorbent Assay FA : Fluorescent Antibody test IFA : Immunofluorescence Assay NXB : Nhà xuất PBS : Phosphate Buffered saline PCR : Polymerase Chain Reaction TT : Thể trọng MỞ ĐẦU Ngành Thú y ngành địi hỏi phải có tay ngh ề cao Trong trình h ọc t ập, thời gian sinh viên thực hành Chính v ậy, th ực tập t ốt nghi ệp có vai trị quan trọng giúp sinh viên học hỏi thêm nhiều kinh nghi ệm áp d ụng kiến thức học vào thực tiễn Mặt khác, mục tiêu thực tập tốt nghi ệp giúp sinh viên nắm rõ công việc cụ thể ngành nghề học từ có định hướng cho nghề nghiệp tương lai Bản thân tơi mong muốn tìm hiểu, nghiên cứu sâu lĩnh vực thú cưng theo ngành sau trường, đăng ký th ực tập t ốt nghi ệp t ại b ệnh vi ện thú y Danangpet Là phòng khám thú y đánh giá uy tín đảm bảo Đà Nẵng, phịng khám nơi chun chăm sóc, khám chữa b ệnh cho thú cưng với trang thiết bị, phương tiện đầy đủ, đại Các ca bệnh đa dạng nơi phù hợp với mục tiêu rèn nghề tơi q trình thực tập tốt nghiệp Bên cạnh đó, xã hội ngày phát triển, nhiều người có sở thích ni chó làm thú cảnh làm cho số lượng đàn chó ngày gia tăng Kéo theo đó, tình hình mắc bệnh truyền nhiễm, bệnh ký sinh trùng ngày tăng, có ký sinh trùng đường máu, bệnh giảm bạch cầu chó Ehrlichia canis gây bệnh phổ biến bệnh ký sinh trùng đường máu chó, cao h ơn c ả bệnh Babesia.spp hay Anaplasma… Bệnh ảnh hưởng lớn tới sức khỏe chó cưng gây thiệt hại lớn cho người ni chó, m ột b ệnh r ất đáng lưu tâm, nhiên chủ thú cưng cịn thi ếu thơng tin hi ểu biết bệnh dẫn đến số lượng thú cưng bị nhiễm bệnh ngày tăng Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành nghiên cứu đề tài : “ Khảo sát tình hình mắc bệnh số triệu chứng điển hình bệnh giảm bạch c ầu chó Ehrlichia canis gây bệnh viện thú y Danangpet - phường Hòa Xuân Quận Cẩm Lệ -thành phố Đà Nẵng” PHẦN I: PHỤC VỤ SẢN XUẤT 1.1 TỔNG QUAN CƠ SỞ THỰC TẬP 1.1.1 Sự hình thành phát triển Bệnh viện thú y Danangpet thành lập từ đầu năm 2014 Là bệnh viện lĩnh vực thú cưng phòng khám thú y đánh giá uy tín đảm bảo Đà Nẵng Trong giai đoạn đầu thành lập bệnh viện xây dựng Nhà D16 - Khu gia đình QĐ K38 - Ngũ Hành S ơn Đà Nẵng, để đáp ứng yêu cầu ngày tăng nhu cầu khách hàng chất lượng phục quy mơ phịng khám mở rộng bệnh viện có tất bốn sở bốn quận khác nằm thành phố Đà Nẵng Bệnh viện thú y Danangpet-Cẩm Lệ(cơ sở ) nằm địa ch ỉ ngã tư đ ường Ph ạm Xuân Ẩn đường nguyễn Thị Sáu - Hoà Xuân - Cẩm Lệ - Đà Nẵng, c s l ớn đầy đủ trang thiết bị đại bốn sở hệ thống Danangpet Bệnh viện trang bị đầy đủ thiết bị kỹ thuật đại bao gồm: - Máy siêu âm: Ngoài siêu âm thơng thường, bác sĩ siêu âm cịn siêu âm đ ược tim thai, xác đ ịnh tuổi thai, phát bệnh lý bất thường khác - Máy X-quang: Chụp bao quát toàn thể v ật, cho hình ảnh rõ nét giúp bác sĩ xác định trường hợp bất thường thể vật - Máy xét nghiệm: Xét nghiệm sinh hóa - sinh lý máu cho k ết qu ả xác - Kính hiển vi: Phát ký sinh trùng, nấm, ghẻ , ký sinh v ật Ngoài khám, chữa bệnh cho thú cưng bệnh vi ện thú y Danangpet cịn có d ịch vụ: - Spa, grooming làm đẹp cho thú cưng - Cung cấp sản phẩm thiết yếu cho việc chăm sóc thú cưng như: V ật dụng, thức ăn, sản phẩm dinh dưỡng - Tư vấn sức khỏe thú cưng Doxycycline có hiệu điều trị chó có biểu lâm sàng c ấp tính khơng có hiệu chó bị mãn tính (vetshop, 2014) Tetracycline dùng giai đoạn cấp tính mãn tính giúp cho gi ảm thi ểu biểu lâm sàng vòng 24 – 28 sau sử dụng, s ố l ượng ti ểu c ầu b đầu gia tăng suốt thời gian thường ổn định sau 10 gi đ ến 14 gi điều trị (vetshop, 2014) Oxytetracycline tồn dư thể ảnh hưởng tới thần kinh Chloramphenicol khuyến cáo nên dùng chó tháng tu ổi Chloramphenicol nên dùng điều trị cho chó bị nhiễm dai dẳng li ệu pháp điều trị dùng tetracyclines Tuy nhiên, chloramphenicol gây nên tình tr ạng thiếu máu khơng nên dùng (vetshop, 2014) Khi chó hồi phục khơng có khả tạo miễn dịch suốt đời chó v ẫn có th ể b ị nhiễm lại nên việc phịng ngăn ngừa bệnh đóng vai trị quan tr ọng (vetshop, 2014) Hình Truyền máu cho chó bị giảm bạch cầu 2.2.5 Tình hình nghiên cứu Ehrlichia canis Trường hợp Ehrlichiosis mèo mô tả năm 80 (Charpentier Groulade, 1986) Để phát Ehrlichia spp mèo từ vùng trung tây Brazil, mẫu máu huyết thu thập từ dân số khu vực gồm 212 cá th ể có ngu ồn gốc từ thành phố Cuiabá Várzea Grande Các động vật đ ược th nghiệm phương pháp Immunofluorescence Assay (IFA) phản ứng chuỗi Polymerase (PCR) thiết kế để khuếch đại đoạn 409 bp gen K ết qu ả thu cho thấy 88 (41,5%) mèo có huyết dương tính b ởi IFA 20 (9,4%) mèo dương tính PCR Nghiên cứu báo cáo vi ệc phát hi ện huy ết phân tử E canis mèo nhà nằm vùng lưu hành đề cập trước (Wen cs, 1997; Aguirre cs, 2004) Tại Braxin, Almosny Massard báo cáo lần v ề nhiễm Ehrlichia suốt trình quan sát Ehrlichia máu, năm 2009 lần phát phương pháp PCR (Oliveira cs, 2009) Ngoài ra, truyền tự nhiên Ehrlichia mèo chưa thiết lập đầy đủ (Amyx Huxsoll, 1997) Tuy nhiên, đánh dấu Rhipicephalus sanguineus cho thấy phân bố địa lý rộng rãi khu đô thị Braxin (Labruna Pereira, 2001) báo cáo trước mèo từ vùng đông bắc Brazil (Ferreira c ộng s ự, 2009, Ferreira cộng sự, 2010) cho thấy việc truyền bệnh Ehrlichia R sanguineus (Amyx Huxsoll, 1997) Nghiên cứu khảo sát diện Ehrlichia spp mèo nhà từ khu vực đô thị Cuiabá, khu vực lưu hành đặc biệt vi khuẩn bang Mato Gross (Amyx Huxsoll, 1997) Trong số 212 mèo đánh giá, 93 (43,8%) mẫu lấy từ HOVET, 31 (14,7%) từ nơi trú ẩn đề cập, 23 (10,8%) 65 (30,7%) đến từ ZCC c Cuiabá Várzea Grande có 120(48,1%) 110 (51,9%) đực 59 (28,6%) nhỏ 147 (71,4%) lớn Thơng tin độ tuổi khơng có s ẵn cho sáu mèo (Amyx Huxsoll, 1997) Có 20 (9,4%) mèo chẩn đốn PCR dương tính v ới Ehrlichia spp trình tự nucleotide tạo PCR giống gửi vào Genbank Theo ngu ồn gốc, 8(2,6%) mèo dương tính từ HOVET, (4.3%) từ ZCC Cuiabá 11 (16.9%) mèo từ ZCC Várzea Grande Khơng có mẫu từ mèo nhà dương tính với PCR (p ≤ 0,05) Có (40,0%) dương tính mèo nh ỏ 12(60,0%) mèo l ớn (p> 0,05) Cả hai giới có tỷ lệ (50,0%, p> 0,05) mẫu dương tính (Amyx Huxsoll, 1997; Doyle cs, 2005) Xét nghiệm huyết học có đến 88 (41,5%) mèo huy ết d ương tính đ ối với E canis 45 (45,1%) từ HOVET, (13,0%) từ ZCC Cuiabá, 27 (41,5%) t ZCC Várzea Grande 16 (51,6%) từ nơi trú ẩn (p ≤ 0,05) 26(31,7%) mèo nh ỏ 59(71,9%) mèo lớn 45 mẫu lấy mẫu từ mèo 43 (48,9%) t đ ực (p> 0,05) Có 12 (5.6%) mèo dương tính xét nghiệm phân tử huy ết học mèo dương tính với PCR(p> 0.05) Khơng có ve tìm th mèo đánh giá Aguirre cs, 2004; Doyle cs, 2005) Các mẫu ADN khuyếch đại phân tích phản ứng trình tự gi ống hệt với trình tự E canis GenBank, điều cho thấy dòng E canis lây nhiễm cho chó mèo, cộng tác với phát hi ện c Oliveira c ộng s ự, (2009) 2.3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Đối tượng nghiên cứu - Chó gia đình đưa tới khám điều trị bệnh viện thú y Danangpet - Bệnh giảm bạch cầu Erhlichia canis gây 2.3.2 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu máu chó thu thập bệnh viện thú y Danangpet * Thiết bị dụng cụ nghiên cứu: - Kính hiển vi quang học - Bơm tiêm 1ml - Phiến kính - Lam kính - Nước cất - Pipet - E.canis test kit Kit chẩn đoán nhanh bệnh E.canis nhập từ Cơng Ty Thời Đại Xanh, Tịa nhà ICDC i2, đường D1, khu cơng nghệ cao Sài Gịn, ph ường Tân Phú, qu ận 9, thành phố Hồ Chí Minh * Hóa chất nghiên cứu: - Thuốc nhuộm giemsa mẹ - Dung dịch đệm nước cất - Giấy thử pH - Các dung dịch điều chỉnh pH: NaH2PO4 2%, KH2PO4 2% - Cồn tuyệt đối Cách pha dung dịch đệm (phosphat buffer solution): - KH2PO4: 0,7g - NaH2PO4: 1,0g Cân loại muối trên, loại vào cốc chứa 150ml nước cất, dùng đũa thu ỷ tinh khuấy cho tan hết Đổ loại vào ống đong r ồi cho thêm n ước c ất cho đ ủ 1000ml Khuấy đều, kiểm tra điều chỉnh pH 7,2 - Cách pha dung dịch giemsa nhuộm: + Nhuộm thường quy: Dung dịch giemsa 3- 4%: Pha 9,7 ml dung d ịch đ ệm v ới 0,3ml giemsa mẹ, nhuộm để 30- 45 phút + Nhuộm nhanh: Dung dịch giemsa 10%: Pha 9ml dung dịch đ ệm v ới 1ml giemsa mẹ Khi nhuộm để 15- 20 phút 2.3.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu - Địa điểm thực tập: Bệnh viện thú y Danangpet - Cẩm Lệ - T.P Đà Nẵng - Địa điểm lấy mẫu: Lấy mẫu bệnh viện thú y Danangpet - Xét nghiệm mẫu bệnh viện thú y Danapet - Thời gian nghiên cứu: Từ tháng năm 2019 đến tháng 12 năm 2019 2.3.4 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu triệu chứng điển hình bệnh gi ảm bạch c ầu chó t ại b ệnh viện thú y Danangpet - Xác định tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo tính biệt - Xác định tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi - Xác định tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo giống 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu 2.3.5.1 Xác định chó bệnh, lấy mẫu - Xác định chó bệnh: Đầu tiên chúng tơi tiến hành hỏi bệnh, sau quan sát tri ệu ch ứng lâm sàng vật : Chó sốt, yếu ớt, lờ đờ, run rẩy, chảy máu cam, xuất huyết lấm để có kết luận sơ tiến hành lấy mẫu - Lấy mẫu: Chó cố định giá giữ gia chủ cách an tồn Sau v ị trí l máu tĩnh mạch chân trước, garo cho tĩnh mạch n ỗi rõ, ểm đâm kim đ ược sát trùng cồn 70 độ, dùng kim tiêm 1ml lấy máu trực ti ếp cho vào ống có ch ứa chất chống đông EDTA Mẫu sau lấy xong làm sau: + Thứ nhất: Phết tiêu trực tiếp để khô tự nhiên + Thứ hai: Dùng test chẩn đoán nhanh kiểm tra mẫu + Thứ ba: Tiến hành xét nghiệm kiểm tra số sinh lí máu 2.3.5.2 Xét nghiệm mẫu a) Nhuộm mẫu - Một giọt máu nhỏ lên phiến kính Cạnh phiến kính khác đ ược đặt lên giọt máu cho giột máu dàn dàn mỏng cách đẩy cạnh phiến kính phía theo góc 45 độ - Tiêu để khô tự nhiên, tránh bụi, tránh côn trùng ăn máu Tiêu sau để khơ hồn tồn cố định cách, tay trái c ầm nghiêng 30 độ, tay phải cầm cầm pipet nhỏ - giọt cồn tuyệt đối lên phần đầu tiêu máu Pipet gạt ngang cho cồn tràn phủ khắp di ện tích máu, v ừa g ạt v ừa nghiêng tiêu cho cồn chảy hết đuôi tiêu máu Tiêu cắm lên giá cho khô - Nhỏ dung dịch giemsa 10% phủ kín diện tích máu, để thời gian 15 - 20 phút - Tiêu rửa vịi nước chảy nhẹ, khơng đổ thuốc nhuộm trước, không để nước xối vào giọt máu, tiêu để khơ tự nhiên có th ể dùng qu ạt cho tiêu nhanh khô không dùng nhiệt độ - Soi kính hiển vi với vật kính 40x Đối với phương pháp nhuộm mẫu cần phải có thời gian, ngồi q trình thao tác nhuộm dễ sai sót, q trình soi dễ nhầm E canis v ới d ị vật hay tế bào khác nên độ xác khơng cao Vì v ậy trình nghiên c ứu phương pháp thực với mục đích quan sát hình thái E canis nâng cao kỹ thao tác phịng thí nghiệm b) E.canis test kit * Nguyên lý: Test dựa vào nguyên lý ph ản ứng ELISA đ ể phát hi ện kháng thể kháng vi khuẩn E.canis chó từ mẫu máu xét nghiệm Hai kháng kháng thể (KKT) đơn dòng thiết bị kết hợp với điểm định kháng nguyên khác kháng thể cần chẩn đốn Sau cho bệnh phẩm thấm vào vị trí đệm cellulose thiết bị, kháng th ể mẫu xét nghiệm di chuy ển k ết hợp với hợp chất thể keo màu vàng chứa kháng kháng th ể đơn dòng kháng vi khuẩn để tạo thành phức hợp ‘KT - KKT’ Sau đó, phức hợp kết hợp với kháng thể đơn dòng khác kháng vi khuẩn E.canis màng nito-cellulose thiết bị, để tạo thành phức hợp hoàn chỉnh ‘KT – KKT - KT’ Kết xét nghiệm biểu lộ qua xuất vạch C T thi ết bị sử dụng “ phép s ắc ký mi ễn dịch’’ * Đặc tính: - Xét nghiệm nhanh giai đoạn để phát hi ện kháng th ể kháng E.canis chó - Kết nhanh vòng 5-10 phút - Dễ dự trữ bảo quản - Các nguyên liệu xét nghiệm có độ tinh khiết chất lượng cao, làm tăng đ ộ nhạy độ đặc hiệu thiết bị * Vật liệu: 10 test/hộp - Thiết bị xét nghiệm 10 đơn vị - Ống nhỏ giọt 10 đơn vị * Thành phần: Thiết bị xét nghiệm có đánh dấu vùng S ( vị trí nhỏ gi ọt ), v ạch k ết qu ả xét nghiệm T vạch đối chứng C Thiết bị gồm thành phần ch ất đ ệm mẫu, chất đệm, màng nito-cellulose (giấy xét nghiệm) chất đệm hấp thu * Tác dụng: Phát kháng thể kháng E.canis từ mẫu máu lấy từ chó bị bệnh * Cách sử dụng - Mẫu xét nghiệm: Máu chó nghi mắc bệnh giảm bạch cầu E.canis - Cách bảo quản mẫu: Bảo quản mẫu - 7℃ 24 - Thao tác xét nghiệm: + Mẫu máu đem ly tâm để tách làm phần riêng bi ệt g ồm: Huy ết tương huyết + Lấy ống nhỏ giọt hút huyết cho vào vùng S que test - giọt + Đọc kết xét nghiệm vịng - 10 phút * Giải thích kết xét nghiệm: - Vệt màu đỏ tía xuất vạch đối chứng C không liên quan đến k ết qu ả xét nghiệm Sự diện vệt khác vạch mẫu T xác đ ịnh k ết qu ả xét nghiệm - Vạch đối chứng C: Vạch luôn xuất hi ện bất k ể có s ự hi ện di ện hay khơng kháng thể kháng E.canis Nếu vạch không xuất hiện, test xem khơng có giá trị; chất pha lỗng khơng tinh ết thi ếu m ẫu xét nghiệm Cần làm lại với chất pha loãng - Vạch mẫu T: Xác định diện kháng th ể kháng E.canis * Kết âm tính: Chỉ xuất vạch đối chứng C * Kết dương tính: Khi xuất vạch mẫu T vạch đối chứng C * Kết không hợp lệ khi: + Cả hai vạch mẫu T vạch đối chứng C không xuất + Chỉ có vạch mẫu T xuất Hình Que test Ehrlichia canis cho kết dương tính c) Xét nghiệm máu Qua kết xét nghiệm máu xác định chó có mắc bệnh hay không dựa vào tiêu sau: Chỉ số hồng cầu tổng số (RBC) chó có trạng thái bình thường 4.8-9.3 (tera/l) Chỉ số bạch cầu tổng số (WBC) chó có trạng thái bình thường 4-15.5 (giga/l) Chỉ số tiểu cầu tổng số (PLT) chó có trạng thái bình thường 150- 400 (k/ul) Nếu ba số số bạch cầu tiểu cầu có kết bất thường chẩn đốn chó mắc bệnh, chó mắc bệnh giảm bạch cầu s ố bạch cầu thường thấp, số tiểu cầu giảm nhẹ nặng, thiếu máu Hình Kết xét nghiệm máu chó bị bệnh giảm bạch cầu 2.3.6 Xử lý số liệu Xử lý số liệu theo phương pháp thống kê sinh học máy tính ph ần m ềm Excel Tỷ lệ nhiễm (%) = Số mẫu dương tínhSố mẫu điều tra x 100 So sánh sai khác thống kê cặp giá trị thực hi ện cách s dụng bảng tương liên 2.4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2.4.1 Tỉ lệ chó mắc bệnh dựa phương pháp chẩn đốn Trong thời gian nghiên cứu có tổng 79 ca khảo sát, có 54 ca chẩn đốn mắc bệnh giảm bạch cầu E canis dựa kết hợp ba phương pháp chẩn đoán sử dụng đồng thời Tỉ lệ chẩn đốn xác ba phương pháp thể qua bảng biểu đồ sau: Bảng Tỉ lệ chó mắc bệnh phương pháp chẩn đoán dựa số ca m ắc (n=54) Phương pháp chẩn đoán Số ca chẩn đoán mắc bệnh Tỷ lệ (%) Xét nghiệm máu 41 75.9 Ehrlichia canis test kit 48 88.9 Khám lâm sàng 43 79.6 Biểu đồ Tỉ lệ chó mắc bệnh phương pháp chẩn đoán so với số ca mắc bệnh Qua kết thể bảng biểu đồ cho thấy ba phương pháp chẩn đốn khơng cho kết tuyệt đối Đối với phương pháp dùng E canis test kit thời gian cho k ết qu ả nhanh t ỉ lệ xác cao với tỉ lệ chẩn đoán mắc bệnh 88.9% Các trường h ợp cịn lại cho kết âm tính, q trình thao tác m ắc số sai sót que test chất lượng dẫn đến kết sai Trong 54 ca chẩn đoán mắc bệnh phương pháp chẩn đoán qua kết qu ả xét nghiệm máu 41 ca với tỉ lệ mắc bệnh 75.9% lại cho kết âm tính, trường hợp cho kết xét nghiệm máu âm tính chủ yếu y ếu t ố v ề khách quan cách lấy máu sai, lượng máu để xét nghiệm không đủ th ời gian v ận chuyển mẫu máu đến nơi xét nghiệm q lâu,… Ngồi cịn m ột s ố nguyên nhân chủ quan từ vật vật giai đoạn đầu nên ch ỉ s ố máu chưa có nhiều chênh lệch so với lúc bình thường, tr ước l máu cho v ật ăn no, chạy nhảy hoạt động mạnh,… Đối với phương pháp quan sát lâm sàng cho kết chẩn đoán 43 ca chi ếm t ỷ lệ 79.6%, thấp so với hai phương pháp s ố trường h ợp giai đoạn ủ bệnh nên chữa triệu chứng Một số trường hợp có triệu chứng chưa biểu rõ, dễ nhầm lẫn với bệnh khác Qua kết phân tích cho thấy ba phương pháp chẩn đốn phương pháp sử dụng que test nhanh có kết chẩn đốn xác cao nh ất, nhiên để đạt độ xác cao chẩn đốn nên kết hợp phương pháp sử dụng que test nhanh kết hợp với phương pháp xét nghiệm máu quan sát lâm sàng 2.4.2 Tỷ lệ triệu chứng điển hình chó mắc bệnh giảm bạch cầu Trong thời gian thực tập theo dõi 54 ca có nh ững tri ệu ch ứng điển hình chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis gây số chó tới khám điều trị bệnh viện thú y Danangpet Kết trình bày bảng biểu đồ Bảng Một số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis Triệu chứng Số mẫu điều tra Số biểu hiện(con) Tỉ lệ (%) Sốt 54 32 68.5% Bỏ ăn 54 48 88.9% Niêm mạc nhợt nhạt 54 42 77.8% Xuất huyết da 54 28 51.9% Chảy máu cam 54 13 24.1% Biểu đồ.2 Tỷ lệ số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis Triệu chứng bệnh giảm bạch cầu chó đa dạng th ể rõ bỏ ăn, niêm mạc nhợt nhạt, sốt >39 ℃, xuất huyết da chảy máu cam Sốt biểu thấy hầu hết chó khảo sát, nhi ệt đ ộ dao động khoảng 39,5 - 41 C nguyên nhân sinh vật nhân lên bạch cầu đơn nhân đại thực bào hệ thống miễn dịch b ằng s ự đ ồng phân gây nhiễm trùng lây lan khắp thể vỡ màng tế bào v ật ch ủ giai đo ạn cuối hình thành phơi dâu dẫn đến vật sốt Bỏ ăn triệu chứng thường xuyên chó mắc bệnh chiếm 88.9% s ốt cao kết hợp vi khuẩn cơng Tỷ lệ chó có triệu chứng sốt chiếm 68.5% Đồng th ời 77.8% chó b ệnh có bi ểu xuất triệu chứng lờ đờ, niêm mạc nhợt nhạt Triệu chứng xuất huyết da chiếm 51.9%, không chiếm tỉ lệ cao nh ất chó giai đoạn nhẹ chưa xuất vết xu ất huy ết nh ưng tri ệu chứng điển hình để phân biệt bệnh Ehrlichia canis v ới b ệnh ký sinh trùng đường máu khác Khi theo dõi 54 ca bệnh triệu chứng chảy máu cam chiếm tỉ lệ 24.1% Con vật chảy máu cam mạch máu mũi mỏng v ới áp lực máu đ ến cao đáp ứng thể dẫn đến thiếu máu dẫn đến vật suy sụp nhanh có th ể ch ết Vì cần truyền dịch truyền máu kịp thời để vật khỏi tình trạng nguy hiểm 2.4.3 Kết tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo giới tính Để so sánh tỷ lệ nhiễm bệnh đực tổng s ố 54 ca m ắc bệnh, có bảng biểu đồ sau: Bảng Tỉ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis theo tính bi ệt Tính biệt Số ca mắc bệnh Tỉ lệ (%) 26 48.1% Cái 28 51.9% Tổng 54 100% Đực Biểu đồ Tỷ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis theo tính bi ệt Qua kết kiểm tra dựa vào bảng 4.3 bi ểu đồ 4.3 nhận th chó ni nhiễm bệnh giảm bạch cầu hai giới nhiên có khác cụ thể là: Trong tổng số 54 ca kiểm tra có 26 đực bị bệnh chiếm tỷ lệ 48.1% Có 28 bị bệnh chiếm tỷ lệ 51.9% Như tỷ lệ nhiễm chó đực thấp chó Việc khảo sát ảnh hưởng giới tính đến tỉ lệ mắc bệnh giảm bạch cầu chó Việt Nam chưa nghiên cứu 2.4.4.Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi Kết tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi tổng s ố 54 ca theo dõi trình bày bảng biểu đồ Bảng Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi Nhóm tuổi Số ca mắc Tỉ lệ (%) 6 tháng 39 72.2% Tổng 54 100% Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tuổi Qua bảng biểu đồ cho thấy chó tới khám ều tr ị t ại b ệnh vi ện thú y Danangpet nhiễm bệnh giảm bạch cầu lứa tuổi m ỗi độ tu ổi l ại có khác cụ thể là: Trong số 54 mẫu điều tra có 15 thuộc nhóm tháng tu ổi nhi ễm bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis chiếm tỉ lệ 27.8% 39 tháng tuổi chiếm tỷ lệ 72.2% Từ kết thu theo cho thấy: Chó tháng tuổi tỷ lệ nhiễm cao chó trưởng thành có xu hướng ngồi tiếp xúc v ới mơi tr ường nh ững chó khác nhiều hơn, nguy lây nhiễm ve từ ngồi mơi tr ường từ khác cao Vì cần phải ý quan tâm tiêu di ệt lồi ve bét hút máu xung quanh mơi trường sống chó phịng ve cho chó, hạn ch ế để chó ti ếp xúc v ới khác để tránh lây lan mầm bệnh 2.4.5 Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống Để biết ảnh hưởng giống chó đến tỷ lệ mắc bệnh, đưa tỷ lệ chênh lệch giống chó nội chó ngoại, kết trình bày bảng biểu đồ đây: Bảng Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống Giống chó Số ca mắ c Tỉ lệ (%) Nội 30 55.6% Ngoại 24 44.4% Tổng 54 100% Biểu đồ Tỷ lệ nhiễm giảm bạch cầu chó theo giống Từ bảng biểu đồ cho thấy, tỷ lệ mắc bệnh giảm bạch c ầu chó x ảy giống chó nhiên có chênh lệch gi ữa gi ống chó n ội chó ngoại Cụ thể, tổng số 54 ca chẩn đoán mắc bệnh gi ống chó ngo ại nhiễm bệnh 24 chiếm tỷ lệ 44.4%, chó nội có 30 bị nhi ễm bệnh chiếm tỷ lệ 55.6% Có thể thấy giống chó nội có tỷ l ệ mắc bệnh cao h ơn so v ới gi ống chó ngoại, chó nội chủ yếu ni để trơng nhà nên chủ ni ý đến sức khỏe tẩy ký sinh trùng, ngồi chó n ội ch ủ y ếu đ ược nuôi vùng quê hay ngoại thành nên hay lại tự do, ti ếp xúc nhiều h ơn v ới môi trường bên khác Ngược lại, gi ống chó ngo ại đ ược ni ch ủ yếu làm thú cưng nên chăm sóc kỹ sức khỏe, tiêm phòng tẩy ký sinh trùng đầy đủ, chủ yếu ni theo hình th ức ni nh ốt nên nguy c ti ếp xúc v ới mầm bệnh 2.5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 2.5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu trình bày tơi đưa s ố kết luận sau: Trên tổng số 97 ca khảo sát q trình nghiên cứu có s ố ca nhi ễm bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis 54 ca, tỷ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu so với số ca khảo sát chiếm 55.67% Kết cho thấy tỷ l ệ m ắc b ệnh gi ảm bạch cầu Ehrlichia canis chó cao so với bệnh ký sinh trùng máu loài khác gây nên Tỷ lệ nhiễm bệnh theo giới tính có khác biệt ít, chó đ ực có tỷ l ệ nhi ễm th ấp chó 3,8% Tuy nhiên ảnh hưởng giới tính đến tỷ l ệ mắc bệnh v ẫn chưa nghiên cứu nhiều Việt Nam Có chênh lệch lớn tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó theo lứa tu ổi Nhìn chung tỷ lệ nhiễm chó tháng tuổi cao 44,4% so với chó tháng tuổi, cho thấy chênh lệch rõ rệt, qua cho thấy chó l ớn tu ổi m ắc bệnh cao Tỷ lệ nhiễm bệnh theo giống có khác biệt gi ống chó n ội gi ống chó ngoại, giống chó nội có tỷ lệ mắc bệnh cao 11,2% 2.5.2 Kiến nghị Bệnh giảm bạch cầu chó Ehrlichia canis bệnh nguy hiểm chó, dễ lây từ chó bệnh sang chó khỏe qua ve, ngồi cịn gây t ốn v ề kinh tế cho gia chủ chi phí điều trị cao thời gian ều tr ị dài Vì v ậy c ần ti ếp t ục nghiên cứu bệnh lý, tiêu sinh lý máu với lượng mẫu lớn để có đánh giá cách toàn diện Thử nghiệm nhiều phương pháp chẩn đoán khác để phát hi ện bệnh kịp thời tăng độ xác TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Cù Xuân Dần cộng (1977) Sinh lý gia súc, NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr.263268 Tô Dung, Xuân Giao (2006) Kỹ thuật ni chó mèo bệnh thường gặp, NXB Lao động xã hội Nguyễn Tài Lương (1982) sinh lý bệnh hấp thu, NXB KHKT Hà Nội, tr.25-205 TS.Vũ Như Qn (2008) Bệnh chó mèo, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Phạm Hồng Sơn (2013) Vi sinh vật học thú y, NXB Đại học Huế Hoàng Văn Tiếu cộng tác viên (1995) Sinh lý học gia súc , NXB Nông nghiệp Hà Nội, Lê Văn Thọ (2006) Những điều người ni chó cần bi ết, NXB Nơng nghiệp Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Xuân Tịnh, Tiết Hồng Ngân, Nguyễn Bá mùi, Lê Mộng Loan (1996) sinh lý học gia súc, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Petshop (2014) Bệnh giảm bạch cầu chó – Ehrlichia canis 14/10/2014 truy cập http://www.vetshop.com.vn/2014/10/benh-giam-bach-cau-tren-choehrlichia.html Tài liệu nước 10 Aguirre E, Tesouro MA, Amusategui I, Rodríguez-Franco F, Sainz A (2004) Assessment of feline ehrlichiosis in central spain using serology and a polymerase chain reaction technique Ann NY Acad Sci 1026, pp 103–105 10 Amyx HL, Huxsoll DL (1997) Red and gray foxes - Potential reservoir hosts for Ehrlichia canis J Wild Dis, pp 47–50 10 Buoro IBJ,Atwel RB, Kiptoon JC, lhiga MA (1989) Feline anemia associated with Ehrlichia-like bodies in three domestic shorthaired cats Vet Rec 125, pp 434-436 10 Doyle CK, Labruna MB, Breitschwerdt EB, Tang YW, Corstvet RE, Hegarty BC, Bloch KC, Li P, Walker DH, McBride JW (2005) Detection of medically important Ehrlichia by quantitative multicolor taqman real-time polymerase chain reaction of the dsb gene J Mol Diagn, pp 504–510 10 Oliveira LS, Mourão LC, Oliveira KA, Agostini MM, Oliveira AC, Almeida MR, Fietto JLR, Conceiỗóo LG, Filho JDR, Galvóo MAM, Mafra C (2009) Molecular detection of Ehrlichia canis in cats in Brazil Clin Microbiol Infec, pp 15-5354 10 http://en.wikipedia.org/wiki/Ehrlichia canis ...NGÀNH: THÚ Y TÊN ĐỀ TÀI: Khảo sát tình hình mắc bệnh số triệu chứng điển hình bệnh giảm bạch cầu chó Ehrlichia canis g? ?y bệnh viện thú y Danangpet - phường Hòa Xuân - quận Cẩm Lệ - thành phố. .. Bảng Một số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis 31 Bảng Tỉ lệ chó mắc bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis theo tính bi ệt 33 Bảng Tỷ lệ nhiễm bệnh giảm bạch cầu chó. .. Ehrlichia canis g? ?y số chó tới khám điều trị bệnh viện thú y Danangpet Kết trình b? ?y bảng biểu đồ Bảng Một số triệu chứng điển hình thường gặp bệnh giảm bạch cầu Ehrlichia canis Triệu chứng Số mẫu