Luận văn nghiên cứu một số đặc tính sinh học của vi khuẩn escherichia coli gây bệnh phù đầu ở lợn tại tỉnh phú thọ và thử nghiệm điều trị

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN XN THÌN Nghiªn cøu mét sè đặc tính sinh học vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh phù đầu lợn tỉnh Phú Thọ thử nghiệm điều trị LUN VN THC S NễNG NGHIP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS TRẦN THỊ LAN HƯƠNG HÀ NỘI - 2010 J Lêi cam ®oan Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn ñã ñược rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Xn Thìn Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i J Lời cảm ơn Để hoàn thành luận văn cố gắng thân nhận đợc quan tâm giúp đỡ nhà trờng, bạn bè đồng nghiệp Trớc tiên xin chân thành cám ơn giúp đỡ quý báu thầy cô giáo môn Ngoại sản, thầy cô giáo khoa Thú y, Viện Đào tạo sau đại họcTrờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội đ; dành nhiều thời gian công sức giúp đỡ trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thị Lan Hơng - ngời đ; tận tình giúp đỡ, hớng dẫn qua trình thực hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban l;nh đạo Viện Thú y TW, Bộ môn Vi trùng bạn bè đồng nghiệp gia đình đ; giúp đỡ động viên hoàn thành chơng trình học tập cao học hoàn thành Luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Nguyễn Xuân Thìn Trng i hc Nụng nghip H Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii J Mục lục Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng v Phần mở đầu Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh phù đầu lợn (edema disease of swine) 1.1.1 Tình hình nghiên cứu nớc 1.1.2 Tình hình nghiên cứu ë n−íc ngoµi 1.2 Vi Khn E coli vµ bệnh phù đầu lợn 10 1.2.1 Vi khuẩn E coli 10 1.2.2 Bệnh phù đầu lợn 19 Chơng Đối tợng, nội dung, nguyên liệu phơng pháp nghiên cứu 33 2.1 Đối tợng, địa điểm thời gian nghiªn cøu 33 2.2 Néi dung nghiªn cøu 33 2.3 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 34 2.4 Phơng pháp nghiên cứu 35 Chơng Kết nghiên cứu thảo luận 45 3.1 Một số đặc điểm dịch tễ học bệnh phù đầu lợn tỉnh Phú Thọ 45 3.1.1 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu huyện thuộc tỉnh Phú Thọ 45 3.1.2 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo lứa tuổi 49 3.1.3 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo mùa vụ 52 3.1.4 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo phơng thức chăn nuôi 54 3.2 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ phân, phủ tạng lợn nghi mắc bệnh phù đầu Trng ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii 57 J 3.3 KÕt giám định số đặc tính sinh học chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 3.4 Kết Xác định yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 3.4.1 62 Kết xác định yếu tố dung huyết gen m; hóa kháng nguyên bám dính chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 3.4.2 60 62 Kết xác định gen m; hóa độc tố đờng ruột Verotoxin chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 64 3.4.3 Tổ hợp yếu tố gây bệnh chủng E coli phân lập đợc 66 3.5 Kết xác định Serotyp kháng nguyên O chủng E coli phân lập đợc 3.6 Kết kiểm tra độc lực chủng khuẩn E coli phân lập đợc chuột bạch 3.7 69 Kết kiểm tra khả mẫn cảm vi khuẩn E coli phân lập đợc với kháng sinh 3.8 67 71 Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli 74 Kết luận đề nghị 77 Kết luận 77 Đề nghị 78 Tài liệu tham kh¶o Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv 79 J Danh mục bảng STT 3.1 Tên bảng Trang Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu đàn lợn nuôi tỉnh Phú Thọ 46 3.2 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo lứa tuổi 49 3.3 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo mùa vụ 52 3.4 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu theo phơng thức chăn nuôi 55 3.5 Kết phân lập vi khuẩn E coli từ phân phủ tạng 58 3.6 Kết giám định số đặc tính sinh học chủng E coli phân lập đợc 3.7 Kết xác định chủng E coli có yếu tố dung huyết mang gen sản sinh kháng nguên bám dính 3.8 64 Tổ hợp yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 3.10 62 Kết xác định chủng E coli cã mang gen m; hãa ®éc tè ®−êng ruột verotoxin 3.9 61 66 Kết xác định Serotyp kháng nguyên O chủng E coli phân lập đợc 68 3.11 Kết xác định độc lực chủng vi khuẩn E coli chuột bạch 3.12 70 KÕt qu¶ kiĨm tra tÝnh mÉn c¶m cđa chủng E coli phân lập đợc với kháng sinh 3.13 Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị bệnh phù đầu lợn Trng i hc Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v 72 75 J Phần mở đầu Trong năm gần đây, với phát triển mạnh mẽ ngành kinh tế, ngành chăn nuôi có bớc phát triển nhanh chóng Sự phát triển ngành chăn nuôi không đáp đợc ứng nhu cầu ngày tăng số lợng chất lợng thực phẩm đời sống nhân dân mà mang lại hiệu kinh tế cao thông qua xuất sản phẩm chăn nuôi Cùng với phát triển ngành chăn nuôi nớc, chăn nuôi lợn địa bàn tỉnh Phú Thọ đà phát triển Là tỉnh miền núi, với tổng diện tích 3.519,1km2, bao gồm 13 huyện, thành, thị với 277 x;, phờng, thị trấn Cách trung tâm Hà Nội 80 km phía Bắc, Phú Thọ tỉnh có nhiều điều kiện tự nhiên vị trí địa lý thích hợp cho phát triển chăn nuôi Trong năm gần đây, chăn nuôi lợn địa bàn tỉnh Phú Thọ có tốc độ tăng trởng nhanh, mức tăng đàn lợn bình quân - 6%/ năm Nhờ có sách hỗ trợ tỉnh nên chăn nuôi lợn thịt hớng nạc đ; phát triển nhanh chóng Hiện nay, đ; có nhiều trang trại, gia trại đ; đẩy mạnh chăn nuôi lợn nái, lợn thịt hớng nạc với quy mô 50 - 150 nái/trại Chăn nuôi lợn đ; bắt đầu chuyển theo hớng sản xuất hàng hoá xuất Tuy nhiên, việc áp dụng biện pháp kỹ thuật chăn nuôi cha triệt để nên dịch bệnh thờng xuyên xảy ra, gây thiệt hại kinh tế không nhỏ cho ngời chăn nuôi Những bệnh thờng gặp lợn nh: Tụ huyết trùng, phó thơng hàn, suyễn bệnh nguy hiểm nh dịch tả, lở mồm long móng v.v đ; đợc khoanh vùng, tổ chức tiêm vacxin bớc đợc khống chế Nhng nay, nhiều địa phơng nớc nói chung tỉnh Phú Thọ nói riêng, bệnh mối quan tâm hàng đầu ngời chăn nuôi, bệnh phù đầu lợn vi khuẩn E coli gây Trng ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc s nụng nghip J Bệnh phù đầu lợn bệnh vi khuẩn E coli gây Bệnh thờng xảy giai đoạn sau cai sữa Lợn mắc bệnh thờng có triệu chứng thần kinh, sng phù đầu, mí mắt, chết nhanh Bệnh vi khuẩn gây nên điều trị kháng sinh Tuy nhiên, khả kháng kháng sinh vi khuẩn cao lợn bệnh đ; có triệu chứng lâm sàng tỷ lệ điều trị khỏi bệnh không cao Do đó, Bệnh phù đầu lợn nguyên nhân làm giảm nhiều số lợng chất lợng đàn lợn giống Theo số liệu thống kê 01/10/ 2009, tổng đàn lợn tỉnh Phú Thọ 614.089 Trong đó, số lợn sữa có khoảng 220.000 con, đối tợng dễ nhiễm bệnh, có bệnh phù đầu lợn Qua kết tổng hợp phân tích báo cáo dịch bệnh hàng tháng Trạm thú y huyện tỉnh Phú Thọ cho thấy: Trên đàn lợn, bệnh phù đầu lợn mắc với tỷ lệ cao, chiếm tỷ lệ 12,33% tỷ lệ chết trung bình 22,5% số lợn chết mắc bệnh Tuy nhiên, số liệu báo cáo cha hoàn toàn phản ánh đầy đủ thực tế bệnh phù đầu Nh vậy, với đàn lợn sữa có trung bình khoảng 220.000 con, tỷ lệ mắc bệnh 10% có khoảng 22.000 mắc bệnh cần điều trị Với tỷ lệ chết 22% tổng số lợn ốm có 4.840 chết thiệt hại kinh tế chi phí điều trị thất thu lợn chết ớc khoảng 3,52 tỷ đồng, cha kể số lợn điều trị khỏi tăng trọng chậm, tiêu tốn thức ăn, hiệu chăn nuôi thấp Để phòng bệnh, nhiều địa phơng đ; nghiên cứu sản xuất vaccine chuồng (Autovaccine), sử dụng đạt hiệu cao Trên địa bàn tỉnh, hộ chăn nuôi sử dụng vaccine Viện thú y sản xuất Tuy nhiên, hiệu phòng bệnh cha cao, đạt khoảng 50% Nhiều đàn lợn đ; đợc tiêm vaccine song bị phát bệnh Nh vËy cã thĨ thÊy, chđng vi khn E.coli g©y bƯnh địa bàn tỉnh Phú Thọ có khác biệt so với kháng nguyên Trng i hc Nụng nghip Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp J vaccine ViƯn thó y s¶n xt Ngành chăn nuôi đ; đợc tỉnh Phú Thọ quan tâm đạo Mục tiêu tỉnh đến 2015, ngành chăn nuôi chiếm tỷ trọng 40 -50% sản xuất nông nghiệp Chăn nuôi lợn chơng trình trọng điểm phát triển nông nghiệp nông thôn tỉnh Để ngành chăn nuôi phát triển công tác phòng, chống bệnh phải đợc đặt lên hàng đầu Trong đó, phòng bệnh phù đầu lợn biện pháp cần thiết để nâng cao hiệu chăn nuôi, đồng thời đảm bảo đủ nguồn cung cấp giống cho phát triển chăn nuôi Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành đề tài Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh phù đầu lợn tỉnh Phú Thọ thử nghiệm điều trị với mục tiêu nghiên cứu: - Xác định số chủng vi khuẩn E.coli gây bệnh phù đầu cho đàn lợn tỉnh Phú Thọ - Là sở cho việc lựa chọn chủng vi khuẩn E.coli để sản xuất thử nghiệm vaccine phòng bệnh phù đầu địa bàn tØnh Phó Thä Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp J Chơng : Tổng quan tài liệu 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh phù đầu lợn (edema disease of swine) 1.1.1 Tình hình nghiên cứu nớc Nhiều nghiên cứu đ; cho thấy, bệnh phù đầu lợn xảy phổ biến xuất với tần suất cao lợn con, đặc biệt giai đoạn lợn sau cai sữa Trong năm qua, đ; có nhiều nhà khoa học nớc nghiên cứu nguyên nhân gây bệnh biện pháp phòng, chống bệnh phù đầu lợn Khi nghiên cứu bệnh phù đầu lợn Đồng sông Cửu Long, tác giả Nguyễn Khả Ngự cộng (2000) [15] thấy tỷ lệ lợn ốm chiếm 58,78%, tỷ lệ chết 53,54% C¸c chđng E coli chđ u thc Serotyp: O26 O119 Trong đó: 38,14% chủng có khả gây dung huyết, 83,33% chủng sản sinh độc tố chịu nhiệt, 56,66% chủng sản sinh độc tố không chịu nhiệt, 50,00% chủng sản sinh hai loại độc tố chịu nhiệt không chịu nhiệt số 30 chủng đợc xác định độc tố đờng ruột Nguyễn Khả Ngự (2000) [14] cho biết, 90,48% chủng mang kháng nguyên K88 40% số chủng phân lập đợc có khả gây dung huyết mạnh thạch máu Các chủng có khả kháng nhiều loại kháng sinh thông thờng dùng điều trị bệnh vi khuẩn đờng ruột nồng độ kháng sinh cao Nguyễn Ngọc Hải cs (2000) [4], đ; xác định serotyp kháng nguyên cđa E coli g©y bƯnh gåm: O138: K81; O139: K82; O141: K45ab; O141: K45ab: K88: K87 øng dông kü thuËt PCR, Nguyễn Ngọc Hải cs (20O1) [5] đ; xác định đợc độc tố verotoxin thấy độc tố ®−êng rt ST, LT ë c¸c chđng E coli O141, rÊt Ýt thÊy ë E coli O138 vµ O139 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... tài Nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh phù đầu lợn tỉnh Phú Thọ thử nghiệm điều trị với mục tiêu nghiên cứu: - Xác định số chủng vi khuẩn E .coli gây bệnh phù đầu. .. Phơng pháp nghiên cứu 35 Chơng Kết nghiên cứu thảo luận 45 3.1 Một số đặc điểm dịch tễ học bệnh phù đầu lợn tỉnh Phú Thọ 45 3.1.1 Tỷ lệ lợn mắc chết bệnh phù đầu huyện thuộc tỉnh Phú Thọ 45 3.1.2... O141 khả gây dung huyết đặc tính sinh học đặc trng vi khuẩn E coli gây phù Tác giả Bùi Xuân Đồng (2002) [3] nghiên cứu bệnh phù đầu vi khuẩn E coli Hải Phòng cho rằng, bệnh phù đầu lợn có tỷ