xây dựng quy trình sản xuất bộ mẫu có kháng nguyên ns1 của virus dengue sử dụng trong kiểm tra chất lượng phòng xét nghiệm về test nhanh ns1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HUỲNH PHƯƠNG THẢO XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU CĨ KHÁNG NGUYÊN NS1 CỦA VIRUS DENGUE SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG PHÒNG XÉT NGHIỆM VỀ TEST NHANH NS1 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HUỲNH PHƯƠNG THẢO XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU CÓ KHÁNG NGUYÊN NS1 CỦA VIRUS DENGUE SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG PHÒNG XÉT NGHIỆM VỀ TEST NHANH NS1 Chuyên ngành: Kiểm nghiệm Thuốc – Độc chất Mã số: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN TS NGUYỄN VŨ THƯỢNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan là cơng trình nghiên cứu của riêng tơi Các số liệu, kết luận văn này là trung thực và chưa được công bố bất kỳ công trình nào khác Tác giả Huỳnh Phương Thảo Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2018 – 2020 Chuyên ngành: Kiểm nghiệm Thuốc & Độc chất – Mã số: 8720210 XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU CĨ KHÁNG NGUN NS1 CỦA VIRUS DENGUE SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG PHÒNG XÉT NGHIỆM VỀ TEST NHANH NS1 Huỳnh Phương Thảo Thầy hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn, TS Nguyễn Vũ Thượng Từ khóa: Bộ mẫu NS1, ngoại kiểm, test nhanh NS1, virus Dengue Mở đầu: Kết test nhanh phát kháng nguyên NS1 của virus Dengue được sử dụng rộng rãi chẩn đoán công tác phòng chống dịch sốt xuất huyết Dengue Tuy nhiên, chưa có đơn vị nước cung cấp mẫu chuẩn NS1 để đánh giá chất lượng phòng xét nghiệm test nhanh NS1 Từ nhu cầu thực tế trên, đề tài này được thực với mục tiêu xây dựng quy trình sản xuất mẫu có kháng nguyên NS1 của virus Dengue sử dụng kiểm tra chất lượng phòng xét nghiệm test nhanh NS1 Đối tượng Phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Huyết tương bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue của 20 tỉnh/thành phố khu vực phía Nam được thu thập từ mẫu giám sát của Chương trình Phịng chống Sốt xuất huyết Quốc gia mẫu NS1 âm tính được thu thập từ viện Truyền máu huyết học TP.HCM Phương pháp nghiên cứu: Sau sàng lọc với tác nhân HIV, viêm gan B, viêm gan C, sởi, Rubella, Leptospira, Zika, Chikungunya, mẫu NS1 dương tính được phối trộn cho đủ thể tích mẫu âm tính được sử dụng để sản xuất lô được xác định các đặc tính realtime RT-PCR Dengue, ELISA phát NS1 của công ty SD test nhanh NS1 của số công ty sản xuất khác Bộ mẫu được bảo quản dạng đông lạnh và đông khô Độ đồng của mẫu được thực mẫu ngẫu nhiên với lần lặp lại và độ ổn định được xác định điều kiện bảo quản 2-8 oC -20 oC tháng test nhanh SD Kết quả: Đã sản xuất được mẫu ngoại kiểm bao gồm mẫu dương tính và mẫu âm tính dạng đơng lạnh và đông khô đạt yêu cầu độ đồng độ ổn định tháng -20 oC Bộ mẫu đông khô của lô được sử dụng để triển khai ngoại kiểm, được gửi dạng bưu phẩm tới 23 phòng xét nghiệm đánh giá chất lượng xét nghiệm NS1 cho kết tương đồng với Viện Pasteur TP.HCM Kết luận: Bộ mẫu ngoại kiểm cho test nhanh NS1 Dengue dạng đông khô và đông lạnh được sản xuất thành công, đảm bảo độ đồng và độ ổn định -20 oC tháng, đáp ứng tiêu chí của mẫu dùng chương trình kiểm tra chất lượng phòng xét nghiệm Master’s Thesis – Academic course: 2018 – 2020 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 8720210 DEVELOPMENT OF PRODUCTION PROCESS OF DENGUE NS1 ANTIGEN PANEL FOR EXTERNAL QUALITY ASSESSMENT OF DENGUE NS1 RAPID TEST Huynh Phuong Thao Supervisor: Assoc Prof Dr Nguyen Duc Tuan, Dr Nguyen Vu Thuong Keywords: NS1 panel, external quality assessment, NS1 rapid test, Dengue virus Introduction: Dengue NS1 antigen testing is a popular method to diagnose Dengue fever in the early stages of the disease It uses the Dengue NS1 test result not only in diagnosis but also in Dengue prevention and control program So far, there have been no local Dengue NS1 standard panel for external quality assessment of Dengue NS1 rapid test in Vietnam For that reason, this study was conducted to develop production process of Dengue NS1 antigen panel for external quality assessment of Dengue NS1 rapid test Methods: Object of study: Dengue patient plasma were collected from 20 southern Vietnam provinces in the National Dengue Control Program and the NS1 negative samples were collected from Hematology and Blood Transfusion hospital at Ho Chi Minh city Methods: After screening for HIV, hepatitis B, hepatitis C, measles, Rubella, Leptospira, Zika, Chikungunya, the NS1 pooled positive samples and the negative samples were used to produce three batches and characterized by Dengue virus realtime RT-PCR, SD Dengue NS1 Ag ELISA and some different brands of NS1 rapid tests The panels were stored in freeze-drying condition, and freezing at -20 oC By using SD rapid tests, the frozen and freeze-dried panels were evaluated homogeneity by performing on random samples with two replicates, and stability at two storage conditions at 2-8 °C and -20 °C for three months Results: The sample panels including three positive samples and two negative samples in frozen and lyophilized form were produced and conformed homogeneity and stability for three months at -20 oC The lyophilized samples of the first batch were shipped to 23 laboratories for external quality assessment of Dengue NS1 test and the results of testing showed similarity with the result from Pasteur Institute HCMC Conclusion: The freeze-dried and frozen Dengue NS1 panels have been successfully produced, ensuring uniformity and stability at -20 °C for three months, and can be used for external quality assessment scheme MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ iv MỞ ĐẦU .1 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sốt Dengue sốt xuất huyết Dengue 1.2 Các phương pháp chẩn đoán sốt xuất huyết Dengue 1.3 Kiểm tra chất lượng xét nghiệm 13 1.4 Bộ mẫu NS1 yếu tố ảnh hưởng tới chất lượng mẫu chuẩn 16 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Thiết kế nghiên cứu 20 2.3 Dân số mục tiêu 20 2.4 Dụng cụ - Trang thiết bị - Sinh phẩm – Hóa chất 21 2.5 Phương pháp nghiên cứu 23 2.5.1 Thu thập mẫu từ mẫu giám sát 23 2.5.2 Xác định đặc tính mẫu thu thập 24 2.5.3 Sản xuất mẫu ngoại kiểm kháng nguyên NS1 của virus Dengue 34 2.5.5 Triển khai thí điểm ngoại kiểm kháng nguyên NS1 của virus Dengue tỉnh phía Nam .35 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Thu thập mẫu từ mẫu chương trình giám sát SXH quốc gia 37 3.2 Xác định đặc tính mẫu thu thập 38 3.2.1 Kết xét nghiệm sàng lọc HIV Ab, VGB Ag, VGC Ab, sởi, Rubella, Leptospira, Zika, chikungunya .38 3.2.2 Kết sàng lọc kháng nguyên NS1 mẫu huyết tương 41 3.3 Sản xuất mẫu ngoại kiểm kháng nguyên NS1 virus Dengue 43 3.3.1 Phối trộn mẫu huyết tương 43 3.3.2 Bất hoạt mẫu 43 3.3.3 Xác định đặc tính mẫu .45 3.3.4 Sản xuất mẫu ngoại kiểm 51 3.4 Kết đánh giá chất lượng mẫu ngoại kiểm 53 3.4.1 Đánh giá độ đồng .53 3.4.2 Đánh giá độ ổn định mẫu 54 3.5 Quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm kháng nguyên NS1 virus Dengue 56 3.6 Kết triển khai ngoại kiểm kháng nguyên NS1 virus Dengue tỉnh phía Nam .57 3.6.1 Độ ổn đinh của mẫu ngoại kiểm 58 3.6.2 Kết triển khai của các đơn vị tham gia 59 Chương 4: BÀN LUẬN 63 4.1 Mẫu thu thập 63 4.2 Quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm kháng nguyên NS1 của virus Dengue 65 4.3 Chất lượng mẫu ngoại kiểm kháng nguyên NS1 của virus Dengue .66 4.4 Kết triển khai mẫu ngoại kiểm tỉnh phía Nam 67 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 KẾT LUẬN 69 KIẾN NGHỊ 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ Nghĩa tiếng Việt Từ nguyên viết tắt CHIKV Virus Chikungunya CRM Certified refence material DENV Virus Dengue ELISA Mẫu chuẩn được chứng nhận Enzyme linked immunosorbent Phản ứng hấp phụ miễn dịch assay gắn men ER Endoplasmic reticulum Mạng lưới nội chất EQA External Quality Assessment The ENIVD European Network Đánh giá chất lượng bên for Mạng lưới PXN Châu Âu Diagnostics of Imported Viral bệnh virus du nhập Diseases HCSD Hội chứng sốc Dengue HRPO Horseradish Peroxidase HTg Huyết tương ICT Immunochoromatography test INF Interferon IQC Internal quality control IgM MAC-ELISA Antibody captured Thử nghiệm sắc ký miễn dịch Nội kiểm tra – Phản ứng hấp phụ miễn dịch Enzyme Linked Immunosorbent gắn enzym thu bắt kháng thể assay IgM KVPN Khu vực phía Nam NS1 Nonstructural protein Protein khơng cấu trúc OD Optical density Mật độ quang PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại gen PXN Phòng xét nghiệm ii PT RCPA Proficiency testing Thử nghiệm thành thạo Royal College of Pathologists of Hội nghiên cứu bệnh học Australasia Hoàng gia Úc RM Reference material Mẫu chuẩn RNA Ribonucleic acid RT-PCR Reverse transcriptase Phản ứng khuếch đại chuỗi Polymerase chain reaction gen sau chép ngược SCF Soluble complement-fixing SD Sốt Dengue SXHD Bệnh sốt xuất huyết Dengue TLR Toll-like receptor TMB 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine TTYT Trung tâm y tế WHO World Health Organization ZIKV Virus Zika Kháng nguyên cố định bổ thể hòa tan Thụ thể giống Toll Tổ chức Y tế giới iii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Biểu mẫu dùng chọn mẫu sản xuất mẫu ngoại kiểm .24 Bảng 3.1 Số lượng mẫu thu thập từ chương trình giám sát SXH năm 2019 37 Bảng 3.2 Phân bố mẫu huyết tương theo thời gian thu thập 37 Bảng 3.3 Kết sàng lọc HBsAg của 20 mẫu G10 của nhóm G200 .39 Bảng 3.4 Kết sàng lọc HIV Ab, VGC Ab, sởi, Rubella, Leptospira 40 Bảng 3.5 Kết sàng lọc mẫu realtime RT-PCR 41 Bảng 3.6 Kết xét nghiệm ELISA 42 Bảng 3.7 Kết xác định đặc tính mẫu realtime RT-PCR 46 Bảng 3.8 Kết xác định đặc tính mẫu kỹ thuật ELISA phát NS1 47 Bảng 3.9 Kết xác định đặc tính mẫu test nhanh NS1 50 Bảng 3.10 Kết đánh giá độ đồng của mẫu huyết tương đông lạnh 53 Bảng 3.11 Kết đánh giá độ đồng của mẫu huyết tương đông khô 54 Bảng 3.12 Kết đánh giá độ ổn định mẫu ngoại kiểm điều kiện vận chuyển của mẫu đông lạnh 54 Bảng 3.13 Kết đánh giá độ ổn định mẫu ngoại kiểm điều kiện bảo quản 55 Bảng 3.14 Kết đánh giá độ ổn định của mẫu huyết tương đông khô gửi đến đơn vị tham gia 58 Bảng 3.15 Các test nhanh được sử dụng các đơn vị tham gia ngoại kiểm 61 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DENV-2 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-24 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DEN-1 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-25 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DEN-4 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-26 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DENV-3 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-27 TC Protocol Block Type: 96-Well 0.1-mL Block Run Mode: Standard Sample Volume: 25.0 Cover Temperature: 105.0 PCR Filter Set: m1,x1 m2,x1 m2,x2 m3,x2 m3,x3 m4,x3 m4,x4 m5,x4 m5,x5 m6,x5 Melt Curve Filter Set: Not Applicable Stage Starting Cycle No of Repetitions Hold Stage Cycling Stage Stage Step Collection Flag Auto Enabled Delta 1 false 45 false Ramp Rate Temperature Auto Delta Auto Temperature Delta Hold Time Hold Time Hold Stage Disabled 1.6 °C/s 50.0 1800 0.0 Hold Stage Disabled 1.6 °C/s 95.0 120 0.0 Cycling Stage Disabled 1.6 °C/s 95.0 15 0.0 Cycling Stage Enabled 1.6 °C/s 60.0 60 0.0 B Lô lô Experiment Summary Experiment Name: realtime DENGUE Experiment Type: Standard Curve File Name: realtime DENGUE-NS1 lo 2-3 edit.eds Run Started: 06-19-2020 14:12:00 ICT Run Finished: 06-19-2020 16:15:05 ICT Run Duration: 123 minutes seconds Date EDS Modified: 08-23-2020 14:40:13 ICT PL-28 Number of Wells Used: 15 Number of Wells with Results: 15 Instrument Name: 272510875 Instrument Type: QuantStudio™ System Instrument Serial Number: 272510875 Model/Block Type: QuantStudio™ System / 96-Well 0.1-mL Block Quantification Cycle Setting: Cт Stage/Step for Analysis: Stage2, Step2 Comments: Results Summary Sample Target Qty Mean Qty SD Cт Mean Cт SD DEN-1 DEN-1 DEN-2 DEN-1 DEN-3 DEN-1 DEN-4 DEN-1 14.239 IP-1 (1/100) lo DEN-1 29.560 IP-1(1/100) lo DEN-1 30.231 IP-3 (1/100) lo DEN-1 32.203 IP-3 (1/100) lo DEN-1 31.458 IP-4 (1/100 lo DEN-1 29.192 IP-4 (1/100) lo DEN-1 28.919 IP-2 lo DEN-1 IP-2 lo DEN-1 IP-5 lo DEN-1 IP-5 lo DEN-1 NTC DEN-1 DEN-1 DEN-2 DEN-2 DEN-2 DEN-3 DEN-2 DEN-4 DEN-2 14.992 IP-1 (1/100) lo DEN-2 31.905 IP-1(1/100) lo DEN-2 33.024 IP-3 (1/100) lo DEN-2 30.962 IP-3 (1/100) lo DEN-2 30.672 IP-2 lo DEN-2 IP-2 lo DEN-2 PL-29 IP-4 (1/100 lo DEN-2 25.567 IP-4 (1/100) lo DEN-2 25.151 IP-5 lo DEN-2 Sample Target Qty Mean Qty SD Cт Mean Cт SD IP-5 lo DEN-2 NTC DEN-2 DEN-1 DEN-3 DEN-2 DEN-3 DEN-3 DEN-3 DEN-4 DEN-3 13.598 IP-1 (1/100) lo DEN-3 IP-1(1/100) lo DEN-3 IP-2 lo DEN-3 IP-2 lo DEN-3 IP-3 (1/100) lo DEN-3 IP-3 (1/100) lo DEN-3 IP-4 (1/100 lo DEN-3 IP-4 (1/100) lo DEN-3 IP-5 lo DEN-3 IP-5 lo DEN-3 NTC DEN-3 DEN-1 DEN-4 DEN-2 DEN-4 DEN-3 DEN-4 DEN-4 DEN-4 15.793 IP-1 (1/100) lo DEN-4 IP-1(1/100) lo DEN-4 IP-2 lo DEN-4 IP-2 lo DEN-4 IP-3 (1/100) lo DEN-4 IP-3 (1/100) lo DEN-4 IP-4 (1/100 lo DEN-4 IP-4 (1/100) lo DEN-4 Sample Target Qty Mean Qty SD Cт Mean Cт SD IP-5 lo DEN-4 IP-5 lo DEN-4 NTC DEN-4 PL-30 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DEN-2 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-31 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DENV-1 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-32 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DENV-4 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-33 Biểu đồ khuếch đại phản ứng realtime RT-PCR phát DENV-3 (Tín hiệu huỳnh quang chu kỳ nhiệt) PL-34 TC Protocol Block Type: 96-Well 0.1-mL Block Run Mode: Standard Sample Volume: 25.0 Cover Temperature: 105.0 PCR Filter Set: m1,x1 m2,x1 m2,x2 m3,x2 m3,x3 m4,x3 m4,x4 m5,x4 m5,x5 m6,x5 Melt Curve Filter Set: Not Applicable Stage No of Repetitions Hold Stage Cycling Stage Stage Step Collection Flag Starting Cycle Auto Enabled Delta 1 false 45 false Ramp Rate Temperature Auto Delta Auto Temperature Delta Hold Time Hold Time Hold Stage Disabled 1.6 °C/s 50.0 1800 0.0 Hold Stage Disabled 1.6 °C/s 95.0 120 0.0 Cycling Stage Disabled 1.6 °C/s 95.0 15 0.0 Cycling Stage Enabled 1.6 °C/s 60.0 60 0.0 PL-35 PHỤ LỤC HỒ SƠ THỰC HÀNH ELISA DENGUE NS1 XÁC ĐỊNH ĐẶC TÍNH Số plate: Bộ sinh phẩm: STT 1 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 MÃ SỐ MẪU NC1 NC2 NC3 PC1 PC2 PI-1 (lô 1)-1/1 PI-1 (lô 1)-1/2 PI-1 (lô 1)-1/4 PI-1 (lô 1)-1/8 PI-1 (lô 1)-1/16 PI-1 (lô 1)-1/32 PI-1 (lô 1)-1/64 PI-1 (lô 2)-1/1 PI-1 (lô 2)-1/2 PI-1 (lô 2)-1/4 PI-1 (lô 2)-1/8 PI-1 (lô 2)-1/16 PI-1 (lô 2)-1/32 PI-1 (lô 2)-1/64 PI-1 (lô 3)-1/1 PI-1 (lô 3)-1/2 PI-1 (lô 3)-1/4 PI-1 (lô 3)-1/8 PI-1 (lô 3)-1/16 PI-1 (lô 3)-1/32 PI-1 (lô 3)-1/64 PI-3 (lô 1)-1/1 PI-3 (lô 1)-1/2 PI-3 (lô 1)-1/4 PI-3 (lô 1)-1/8 PI-3 (lô 1)-1/16 PI-3 (lô 1)-1/32 PI-3 (lô 1)-1/64 PI-3 (lô 2)-1/1 PI-3 (lô 2)-1/2 PI-3 (lô 2)-1/4 PI-3 (lô 2)-1/8 11E50E002 LOẠI BP HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg OD 0.120 0.128 0.103 3.866 4.000 3.155 2.337 1.287 0.627 0.318 0.201 0.148 3.163 2.278 1.119 0.548 0.277 0.168 0.113 3.314 2.174 1.032 0.561 0.282 0.190 0.129 3.199 3.268 2.672 1.407 0.748 0.446 0.291 3.613 3.087 2.618 1.418 Ngày làm: Hạn sử dụng: DEN OD TB 0.117 3.933 Cutoff 0.417 17/06/20 07/01/21 KẾT QUẢ S 10.55 0.01 2.41 0.095 Đạt Đạt Dương Dương Dương Dương Âm Âm Âm Dương Dương Dương Dương Âm Âm Âm Dương Dương Dương Dương Âm Âm Âm Dương Dương Dương Dương Dương Dương Âm Dương Dương Dương Dương PL-36 CV DEN STT 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 MÃ SỐ MẪU PI-3 (lô 2)-1/16 PI-3 (lô 2)-1/32 PI-3 (lô 2)-1/64 PI-3 (lô 3)-1/1 PI-3 (lô 3)-1/2 PI-3 (lô 3)-1/4 PI-3 (lô 3)-1/8 PI-3 (lô 3)-1/16 PI-3 (lô 3)-1/32 PI-3 (lô 3)-1/64 PI-4 (lô 1)-1/1 PI-4 (lô 1)-1/2 PI-4 (lô 1)-1/4 PI-4 (lô 1)-1/8 PI-4 (lô 1)-1/16 PI-4 (lô 1)-1/32 PI-4 (lô 1)-1/64 PI-4 (lô 2)-1/1 PI-4 (lô 2)-1/2 PI-4 (lô 2)-1/4 PI-4 (lô 2)-1/8 PI-4 (lô 2)-1/16 PI-4 (lô 2)-1/32 PI-4 (lô 2)-1/64 PI-4 (lô 3)-1/1 PI-4 (lô 3)-1/2 PI-4 (lô 3)-1/4 PI-4 (lô 3)-1/8 PI-4 (lô 3)-1/16 PI-4 (lô 3)-1/32 PI-4 (lô 3)-1/64 PI-2 (lô 1) PI-2 (lô 2) PI-2 (lô 3) PI-5 (lô 1) PI-5 (lô 2) PI-5 (lô 3) IHC LOẠI BP OD HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg HTg 0.712 0.414 0.251 3.341 3.149 2.629 1.442 0.726 0.427 0.264 3.419 2.875 1.836 0.853 0.448 0.251 0.162 3.165 3.124 1.847 0.904 0.464 0.308 0.146 3.509 2.848 1.713 0.905 0.501 0.250 0.185 0.204 0.255 0.260 0.186 0.139 0.172 0.937 OD TB Cutoff KẾT QUẢ Dương Âm Âm Dương Dương Dương Dương Dương Dương Âm Dương Dương Dương Dương Dương Âm Âm Dương Dương Dương Dương Dương Âm Âm Dương Dương Dương Dương Dương Âm Âm Âm Âm Âm Âm Âm Âm Dương PL-37 CV S Kết đo OD Đọc OD 450 nm/620nm 10 0.120 0.627 0.277 0.190 0.291 3.341 2.875 1.847 0.905 0.139 B 0.128 0.318 0.168 0.129 3.613 3.149 1.836 0.904 0.501 0.172 C 0.103 0.201 0.113 3.199 3.087 2.629 0.853 0.464 0.250 0.937 3.866 0.148 3.314 3.268 2.618 1.442 0.448 0.308 0.185 E NaN 3.163 2.174 2.672 1.418 0.726 0.251 0.146 0.204 F 3.155 2.278 1.032 1.407 0.712 0.427 0.162 3.509 0.255 2.337 1.119 0.561 0.748 0.414 0.264 3.165 2.848 0.260 1.287 0.548 0.282 0.446 0.251 3.419 3.124 1.713 0.186 A D G H 11 12 Sơ đồ plate 10 A NC1 PI-1 (lô 1) 1/8 PI-1 (lô 2) 1/16 PI-1 (lô 3) 1/32 PI-3 (lô 1) 1/64 PI-3 (lô 3) 1/1 PI-4 (lô 1) 1/2 PI-4 (lô 2) 1/4 PI-4 (lô 3) 1/8 PI-5 (lô 2) B NC2 PI-1 (lô 1) 1/16 PI-1 (lô 2) 1/32 PI-1 (lô 3) 1/64 PI-3 (lô 2) 1/1 PI-3 (lô 3) 1/2 PI-4 (lô 1) 1/4 PI-4 (lô 2) 1/8 PI-4 (lô 3) 1/16 PI-5 (lô 3) C NC3 PI-1 (lô 1) 1/32 PI-1 (lô 2) 1/64 PI-3 (lô 1) 1/1 PI-3 (lô 2) 1/2 PI-3 (lô 3) 1/4 PI-4 (lô 1) 1/8 PI-4 (lô 2) 1/16 PI-4 (lô 3) 1/32 IHC D PC1 PI-1 (lô 1) 1/64 PI-1 (lô 3) 1/1 PI-3 (lô 1) 1/2 PI-3 (lô 2) 1/4 PI-3 (lô 3) 1/8 PI-4 (lô 1) 1/16 PI-4 (lô 2) 1/32 PI-4 (lô 3) 1/64 E PC2 PI-1 (lô 2) 1/1 PI-1 (lô 3) 1/2 PI-3 (lô 1) 1/4 PI-3 (lô 2) 1/8 PI-3 (lô 3) 1/16 PI-4 (lô 1) 1/32 PI-4 (lô 2) 1/64 PI-2 (lô 1) F PI-1 (lô 1) 1/1 PI-1 (lô 2) 1/2 PI-1 (lô 3) 1/4 PI-3 (lô 1) 1/8 PI-3 (lô 2) 1/16 PI-3 (lô 3) 1/32 PI-4 (lô 1) 1/64 PI-4 (lô 3) 1/1 PI-2 (lô 2) G PI-1 (lô 1) 1/2 PI-1 (lô 2) 1/4 PI-1 (lô 3) 1/8 PI-3 (lô 1) 1/16 PI-3 (lô 2) 1/32 PI-3 (lô 3) 1/64 PI-4 (lô 2) 1/1 PI-4 (lô 3) 1/2 PI-2 (lô 3) H PI-1 (lô 1) 1/4 PI-1 (lô 2) 1/8 PI-1 (lô 3) 1/16 PI-3 (lô 1) 1/32 PI-3 (lô 2) 1/64 PI-4 (lô 1) 1/1 PI-4 (lô 2) 1/2 PI-4 (lô 3) 1/4 PI-5 (lô 1) PL-38 11 12 ... ngành: Kiểm nghiệm Thuốc & Độc chất – Mã số: 8720210 XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU CÓ KHÁNG NGUYÊN NS1 CỦA VIRUS DENGUE SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG PHÒNG XÉT NGHIỆM VỀ TEST NHANH NS1. .. phòng xét nghiệm Xuất phát từ thực tiển trên, đề tài ? ?Xây dựng quy trình sản xuất mẫu có kháng nguyên NS1 virus Dengue sử dụng kiểm tra chất lượng phòng xét nghiệm test nhanh NS1? ?? được thực...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HUỲNH PHƯƠNG THẢO XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU CĨ KHÁNG NGUYÊN NS1 CỦA VIRUS DENGUE SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG