Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm định lượng hbv dna

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN VĂN HỒNG SƠN XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Y HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN VĂN HOÀNG SƠN XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA Chuyên ngành: XÉT NGHIỆM Y HỌC Mã số: 60720333 Luận Văn Thạc Sĩ Kỹ Thuật Y Học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS BS VŨ QUANG HUY THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu hồn tồn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Tác giả NGUYỄN VĂN HỒNG SƠN MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục hình Danh mục sơ đồ Danh mục bảng Trang ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ VIÊM GAN B .3 1.2 KỸ THUẬT REAL-TIME PCR 13 1.3 KHÁI QUÁT CHUNG VỀ NGOẠI KIỂM 14 1.4 TIÊU CHUẨN SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM 17 1.5 TÌNH HÌNH CUNG CẤP NGOẠI KIỂM TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƢỚC 20 1.6 CÁC THIẾT KẾ BỘ MẪU TRONG CHƢƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA TRÊN THẾ GIỚI 22 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 24 2.2 CỠ MẪU 24 2.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 24 2.4 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 24 2.5 TIÊU CHUẨN CHỌN MẪU 24 2.6 QUÁ TRÌNH THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA 26 2.7 ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG MẪU SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM 28 2.8 PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA .30 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 37 3.1 THU THẬP NGUYÊN LIỆU 37 3.2 ĐÁNH GIÁ NGUYÊN LIỆU BAN ĐẦU .37 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA SAU PHA LOÃNG .38 3.4 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐỒNG NHẤT 40 3.5 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH 43 3.6 SO SÁNH KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA HUYẾT THANH PHA LOÃNG TỪ HUYẾT TƢƠNG VÀ HUYẾT THANH .51 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 55 4.1 THỬ NGHIỆM QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA 55 4.2 SO SÁNH PHƢƠNG PHÁP SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM TỪ HUYẾT TƢƠNG VÀ HUYẾT THANH 60 KẾT LUẬN 66 KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt AT : Âm tính TB : Trung bình TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam VGB : Viêm Gan B Tiếng Anh AFB : Acid Fast Bacillus (Vi khuẩn kháng axit) Anti-HBc : Anti – Hepatitis B core (Kháng thể lõi viêm gan B) Anti-HBe : Anti – Hepatis B envelope (Kháng thể hòa tan viêm gan B) Anti-HBs : Anti – Hepatitis B surface (Kháng nguyên bề mặt viêm gan B) CV : Coefficient of variation (Độ biến thiên) DNA : Deoxyribonucleic Acid EQA : External quality Assessment (Ngoại kiểm) HBc-Ag : Hepatitis B core – Antigen (Kháng nguyên lõi viêm gan B) HBe-Ag : Hepatitis B envelope – Antigen (Kháng nguyên hòa tan viêm gan B) HBs-Ag : Hepatitis B surface – Antigen (Kháng nguyên bề mặt viêm gan B) HBV : Hepatitis B Virus (Viêm gan B) N/A : Not applicable (Không áp dụng) ISO : The International Organization for Standardization (Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế) PCR : Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi Polymerase) RNA : Ribonucleic Acid SD : Standard deviation (Độ lệch chuẩn) DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Cấu trúc HBV Hình 1.2: Sự phân bố viêm gan B giới Hình 2.1: Phản ứng real-time PCR 31 Hình 2.2: Kết định lƣợng HBV-DNA 31 Hình 2.3: Kết phản ứng real-time PCR 34 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Tóm tắt quy trình nghiên cứu sản xuất mẫu HBV-DNA 25 Sơ đồ 2.2: Q trình đánh giá tính đồng 35 Sơ đồ 2.3: Quá trình đánh giá độ ổn định 36 Sơ đồ 4.1: Quy trình sản xuất thử nghiệm mẫu ngoại kiểm định lƣợng HBV-DNA từ huyết tƣơng 65 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Cách dán nhãn mẫu đƣợc sản xuất 27 Bảng 2.2: Hóa chất sử dụng tách chiết DNA 32 Bảng 2.3: Hóa chất phản ứng real-time PCR 32 Bảng 3.1: Kết định lƣợng HBV-DNA ban đầu 37 Bảng 3.2: Tỉ lệ pha loãng lý thuyết tạo mẫu 38 Bảng 3.3: Kết nồng độ HBV-DNA lý thuyết sau pha loãng 38 Bảng 3.4: Kết định lƣợng HBV-DNA huyết sau pha loãng huyết tƣơng 39 Bảng 3.5: Kết định lƣợng HBV-DNA huyết sau pha loãng huyết 40 Bảng 3.6: Kết định lƣợng HBV-DNA tỉ lệ pha loãng 1:64000 đánh giá tính đồng 41 Bảng 3.7: Kết định lƣợng HBV-DNA tỉ lệ pha lỗng 1:64 đánh giá tính đồng 42 Bảng 3.8: Kết định lƣợng HBV-DNA tỉ lệ pha loãng 1:64000 đánh giá độ ổn định dài hạn 44 Bảng 3.9: Kết thống kê giá trị P đánh giá độ ổn định dài hạn tỉ lệ pha loãng 1:64000 phép kiểm định T-test 45 Bảng 3.10: Kết định lƣợng HBV-DNA pha loãng tỉ lệ 1:64 đánh giá độ ổn định dài hạn 45 Bảng 3.11: Kết thống kê giá trị P đánh giá độ ổn định dài hạn tỉ lệ pha loãng 1:64 phép kiểm định T-test 46 Bảng 3.12: Bảng nhiệt độ đánh giá độ ổn định ngắn hạn 47 Bảng 3.13: Kết định lƣợng HBV-DNA tỉ lệ pha loãng 1:64000 đánh giá độ ổn định ngắn hạn 47 Bảng 3.14: Kết thống kê giá trị P đánh giá độ ổn định ngắn hạn tỉ lệ pha loãng 1:64000 phép kiểm định T-test 49 Bảng 3.15: Kết định lƣợng HBV-DNA tỉ lệ pha loãng 1:64 đánh giá độ ổn định ngắn hạn 49 Bảng 3.16: Kết thống kê giá trị P đánh giá độ ổn định ngắn hạn tỉ lệ pha loãng 1:64000 phép kiểm định T-test 50 Bảng 3.17: So sánh kết định lƣợng HBV-DNA sau pha loãng huyết tƣơng huyết 51 Bảng 3.18: So sánh kết định lƣợng HBV-DNA đánh giá tính đồng huyết tƣơng huyết 51 Bảng 3.19: So sánh kết định lƣợng HBV-DNA đánh giá độ ổn định dài hạn 52 Bảng 3.20: So sánh kết định lƣợng HBV-DNA đánh giá độ ổn định ngắn hạn 53 ĐẶT VẤN ĐỀ Vi rút viêm gan B (HBV) thuộc họ Hepadnaviridae, có cấu trúc DNA chuỗi kép gồm 10 týp riêng biệt từ A đến J [47] HBV loại vi rút công vào gan, gây bệnh cho ngƣời nhiều loại động vật, HBV có cấu trúc, hình thái, thành phần kháng ngun, đặc điểm sinh học độc đáo khác với họ vi rút khác VGB bệnh phổ biến hầu hết nƣớc giới Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) ƣớc tính có tỷ ngƣời nhiễm HBV tồn giới, 350 triệu ngƣời mang HBV mạn, 60 triệu ngƣời chết ung thƣ gan 45 triệu ngƣời chết xơ gan [53] Những ngƣời mang HBV mạn khả ung thƣ cao gấp 100 lần so với không mang HBV Do đó, HBV đƣợc coi thủ phạm quan trọng gây ung thƣ gan [5] Việt Nam nƣớc nằm vùng dịch lƣu hành cao, tỉ lệ nhiễm VGB từ 10-20% dân số, bệnh liên quan đến VGB tiếp tục gánh nặng cho y tế Việt Nam năm [50] Nhƣ vậy, VGB vấn đề y tế mang tính chất tồn cầu, việc chẩn đoán VGB phƣơng diện cận lâm sàng chủ yếu dựa vào xét nghiệm ALT, AST, Bilirubin tăng cao kết hợp HBsAg (+) (-) anti-HBc IgM (+) [3], [53] Trong đó, việc định lƣợng HBV-DNA kết hợp số định phác đồ điều trị bệnh nhân [53] Đối với phòng xét nghiệm thực xét nghiệm HBV-DNA quan trọng việc điều trị bệnh nhân họ cần có phƣơng pháp kiểm soát chất lƣợng thực xét nghiệm Ngoại kiểm cơng cụ giúp phịng xét nghiệm kiểm sốt chất lƣợng họ Về chất, External quality Assessment (EQA)– ngoại kiểm phòng xét nghiệm y học thuật ngữ dùng để mô tả phƣơng pháp so sánh kết xét nghiệm phòng xét nghiệm y học nhóm với phịng xét nghiệm tham chiếu đƣợc thực quan, tổ chức bên ngồi phịng xét nghiệm EQA giúp cho phịng xét nghiệm việc kiểm sốt chất lƣợng xét nghiệm giai đoạn xét nghiệm, đồng thời EQA nhƣ công cụ minh chứng cho hồn thiện hệ thống chất lƣợng phịng xét nghiệm góp phần khơng nhỏ việc chẩn đốn điều trị cho bệnh nhân [52] Ở nƣớc ta, cung cấp chƣơng trình EQA nhƣng chủ yếu hợp tác với quan tổ chức uy tín nƣớc ngồi chƣa có cơng trình đƣợc cơng bố sản xuất mẫu ngoại kiểm viêm gan B nƣớc Tiến tới nâng cao hệ thống quản lý chất lƣợng xét nghiệm, tự lực phát triển hệ thống ngoại kiểm nƣớc bảo đảm chất lƣợng xét nghiệm cho phòng xét nghiệm y học, nâng cao chất lƣợng phục vụ bệnh nhân, cần phải thật chủ động việc sản xuất cung cấp mẫu EQA Chính để bảo đảm chất lƣợng xét nghiệm tiến hành thực đề tài “XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV-DNA” với mục tiêu sau: Nghiên cứu thử nghiệm sản xuất mẫu ngoại kiểm định lƣợng HBV-DNA từ chất pha loãng huyết tƣơng huyết Đánh giá tính đồng độ ổn định mẫu sản xuất thử nghiệm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 35 Medina Gonzalez R., Orta Mira N., Guna Serrano Mdel R., Latorre Martinez J C., Gopegui E R., Rosario Ovies M., Poveda M., Gimeno Cardona C (2016), "[Analysis of the results of the HIV-1, HCV and HBV viral load of SEIMC External Quality Control Program Year 2014]" Enferm Infecc Microbiol Clin, Analisis de resultados del Programa de Control de Calidad Externo de carga viral del VIH-1, del VHC y del VHB Ano 2014., 34 Suppl 3, 8-13 36 Migliarino G A (2015), "External Quality Assessment Schemes in Latin America" EJIFCC, 26 (4), 226-37 37 Mullis K., Faloona F., Scharf S., Saiki R., Horn G., Erlich H (1986), "Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction" Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 51 Pt 1, 263-73 38 Murphy B M., Swarts S., Mueller B M., van der Geer P., Manning M C., Fitchmun M I (2013), "Protein instability following transport or storage on dry ice" Nat Methods, 10 (4), 278-9 39 Orta Mira N., Del Remedio Guna Serrano M., Latorre Martinez J C., Medina Gonzalez R., Rosario Ovies M., Poveda M., Ruiz de Gopegui E., Gimeno Cardona C (2015), "[Analysis of the results of the HIV-1, HCV and HBV viral load of SEIMC External Quality Control Program Year 2013]" Enferm Infecc Microbiol Clin, Analisis de resultados del Programa de Control de Calidad Externo de carga viral del VIH-1, del VHC y del VHB Ano 2013., 33 Suppl 2, 9-14 40 Pisani G., Cristiano K., Marino F., Luciani F., Bisso G M., Gaggioli A., Mele C., Pupella S., Grazzini G., Wirz M (2010), "External quality assessment programmes for detection of HCV RNA, HIV RNA and HBV DNA in plasma: improved proficiency of the participants observed over a 2-year period" Vox Sang, 99 (4), 319-24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 41 Pisani G., Marino F., Cristiano K., Bisso G M., Mele C., Luciani F., Wirz M., Gentili G., External Quality Assessment Participants (2008), "External quality assessment for the detection of HCV RNA, HIV RNA and HBV DNA in plasma by nucleic acid amplification technology: a novel approach" Vox Sang, 95 (1), 8-12 42 Plentz A., Koller G., Weinberger K M., Jilg W (2004), "Precision and stability of hepatitis B virus DNA levels in chronic surface antigen carriers" J Med Virol, 73 (4), 522-8 43 Rakha E A., Bennett R L., Coleman D., Pinder S E., Ellis I O., Pathology U K National Coordinating Committee for Breast (2017), "Review of the national external quality assessment (EQA) scheme for breast pathology in the UK" J Clin Pathol, 70 (1), 51-57 44 Reed S E., Gardner P S., Stanton J (1985), "United Kingdom scheme for external quality assessment in virology Part II Specimen distribution, performance assessment, and analyses of participants' methods in detection of rubella antibody, hepatitis B markers, general virus serology, virus identification, and electron microscopy" J Clin Pathol, 38 (5), 542-53 45 Sanlidag T., Akcali S., Ozbakkaloglu B (2005), "Serum hepatitis B DNA: stability in relation to multiple freeze-thaw procedures" J Virol Methods, 123 (1), 49-52 46 Sayan M., Willke A., Meric M., Etiler N (2009), "[Analysis of the results of NEQAS international external quality assessment programme for hepatitis B and C virus nucleic acid tests]" Mikrobiyol Bul, Hepatit B ve C virus nukleik asit testlerinde NEQAS uluslararasi dis kalite kontrol degerlendirme programi sonuclarinin analizi., 43 (1), 103-14 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 47 Schweitzer A., Horn J., Mikolajczyk R T., Krause G., Ott J J (2015), "Estimations of worldwide prevalence of chronic hepatitis B virus infection: a systematic review of data published between 1965 and 2013" Lancet, 386 (10003), 1546-55 48 Snell J J (1994), "Problems in susceptibility testings findings of UK NEQAS for microbiology United Kingdom National External Quality Assessment Scheme" J Antimicrob Chemother, 33 (1), 1-4 49 Svec D., Tichopad A., Novosadova V., Pfaffl M W., Kubista M (2015), "How good is a PCR efficiency estimate: Recommendations for precise and robust qPCR efficiency assessments" Biomol Detect Quantif, 3, 9-16 50 Nguyen V T (2012), "Hepatitis B infection in Vietnam: current issues and future challenges" Asia Pac J Public Health, 24 (2), 361-73 51 Valentine-Thon E., van Loon A M., Schirm J., Reid J., Klapper P E., Cleator G M (2001), "European proficiency testing program for molecular detection and quantitation of hepatitis B virus DNA" J Clin Microbiol, 39 (12), 4407-12 52 WHO "Overview of External Quality Assessment (EQA) ", 1-8 53 WHO (2015), Guidelines for the Prevention, Care and Treatment of Persons with Chronic Hepatitis B Infection Geneva, 13-44 54 Wang L N., Li J M., Deng W., Zheng H J (2004), "[External quality assessment for detection of hepatitis B virus DNA in clinical laboratories of China]" Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, 12 (8), 501-2 55 Wang L., Pan Y., Zhang K., Zhang R., Sun Y., Xie J., Li J (2013), "A 10year human hepatitis B virus nucleic test external quality assessment in China: continual improvement" Clin Chim Acta, 425, 139-47 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 56 Weiss J., Wu H., Farrenkopf B., Schultz T., Song G., Shah S., Siegel J (2004), "Real time TaqMan PCR detection and quantitation of HBV genotypes A-G with the use of an internal quantitation standard" J Clin Virol, 30 (1), 86-93 57 Welzel T M., Miley W J., Parks T L., Goedert J J., Whitby D., OrtizConde B A (2006), "Real-time PCR assay for detection and quantification of hepatitis B virus genotypes A to G" J Clin Microbiol, 44 (9), 3325-33 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PHỤ LỤC Phụ lục 01: Bảng thống kê tính đồng mẫu định lƣợng HBV-DNA sản xuất thử nghiệm từ huyết tƣơng huyết (Oneway ANOVA) Between Groups HuyettuongTB Within Groups Total Between Groups HuyetTuongCao Within Groups Total Between Groups HuyetThanhTB Within Groups Total Between Groups HuyetThanhCao Within Groups Total Sum of Squares ,024 ,300 ,325 ,054 ,414 ,468 ,030 ,651 ,682 ,065 ,444 ,509 df 18 19 18 19 18 19 18 19 Mean Square ,024 ,017 F Sig, 1,468 ,241 ,054 ,023 2,352 ,142 ,030 ,036 ,841 ,371 ,065 ,025 2,633 ,122 Phụ lục 02: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản 02 tuần mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Levene's t-test for Test for Equality of Equality of Means Variances F Sig, t df ,280 ,608 -2,033 10 -2,033 9,829 ,794 ,394 ,362 10 ,362 9,365 ,456 ,515 -,970 10 -,970 9,148 ,294 ,599 -1,543 10 -1,543 9,948 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 03: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản 04 tuần mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB ,107 ,427 ,635 ,545 t-test for Equality of Means t ,751 ,048 ,048 ,528 -,443 -,443 ,444 -,703 -,703 ,477 -1,851 -1,851 df 10 9,995 10 9,642 10 9,696 10 9,623 Phụ lục 04: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản 08 tuần mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ,081 ,699 ,127 ,389 t-test for Equality of Means t ,781 -1,292 -1,292 ,423 ,891 ,891 ,729 -,994 -,994 ,547 1,587 1,587 df 10 9,585 10 9,076 10 9,375 10 9,405 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 05: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản 16 tuần mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB ,180 ,681 ,904 ,364 ,595 ,458 1,471 ,253 t-test for Equality of Means t df -,030 -,030 -,520 -,520 -,471 -,471 -,760 -,760 10 9,701 10 9,600 10 9,518 10 8,502 Phụ lục 06: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản ngày mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ,179 ,681 t-test for Equality of Means t -,699 -,699 1,638 ,230 -,772 -,772 ,339 ,573 -,310 -,310 1,127 ,313 -1,547 -1,547 df 10 9,911 10 8,838 10 9,553 10 9,300 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 07: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản ngày mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB ,603 ,455 ,459 ,514 ,262 ,620 ,006 ,942 t-test for Equality of Means t df -,479 -,479 -,286 -,286 -,521 -,521 3,153 3,153 10 8,756 10 9,756 10 9,971 10 9,685 Phụ lục 08: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản ngày mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhTB Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ,335 t-test for Equality of Means t ,575 -1,200 -1,200 ,344 ,571 -,826 -,826 ,199 ,665 -,530 -,530 1,807 ,209 -,978 -,978 df 10 9,289 10 9,188 10 9,807 10 7,751 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 09: Bảng thống kê độ ổn định HBV-DNA thời gian bảo quản ngày mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết (T-test) Levene's Test for Equality of Variances F Sig, Equal variances assumed Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetTuongCao Equal variances not assumed Equal variances assumed ` Equal variances not assumed Equal variances assumed HuyetThanhCao Equal variances not assumed HuyetTuongTB Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ,463 ,512 ,263 ,619 ,506 ,493 ,526 ,485 t-test for Equality of Means t df -,786 -,786 -,916 -,916 ,340 ,340 -,580 -,580 10 9,703 10 9,893 10 9,965 10 8,908 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 10: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA đánh giá nguyên liệu ban đầu Phụ lục 11: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA đánh giá ban đầu mẫu sản xuất từ huyết tƣơng huyết Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 12: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA đánh giá độ đồng Phụ lục 13: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng thời điểm tuần Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 14: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng thời điểm tuần Phụ lục 15: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng thời điểm tuần Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 16: Kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng huyết thời điểm 16 tuần Phụ lục 17: kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng huyết thời điểm ngày Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 18: kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng huyết thời điểm ngày Phụ lục 19: kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng huyết thời điểm ngày Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Phụ lục 20: kết real-time PCR định lƣợng HBV-DNA mẫu huyết tƣơng huyết thời điểm ngày Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... nghiệm tiến hành thực đề tài “XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV- DNA? ?? với mục tiêu sau: Nghiên cứu thử nghiệm sản xuất mẫu ngoại kiểm định lƣợng HBV- DNA từ chất pha loãng huyết... MẪU TRONG CHƢƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM ĐỊNH LƢỢNG HBV- DNA TRÊN THẾ GIỚI Sau 10 năm triển khai chƣơng trình ngoại kiểm HBV- DNA, Lunan Wang cộng thiết kế mẫu mẫu bao gồm mẫu dƣơng tính với HBV- DNA mẫu. .. Thử nghiệm quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm định lƣợng HBV- DNA từ huyết tƣơng huyết thanh, đánh giá độ đồng tính ổn định mẫu sản xuất 2.2 CỠ MẪU Để đảm bảo mẫu sử dụng nhƣ mẫu chuẩn mẫu phải đảm