Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết thanh học HIV

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HÀ NỘI Hoàng Thị Thanh Hà XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG PHÒNG THÍ NGHIỆM HUYẾT THANH HỌC HIV Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. PHẠM HỒNG THẮNG TS. HOÀNG THỊ MỸ NHUNG Hà nội - Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS. Phạm Hồng Thắng và TS. Hoàng Thị Mỹ Nhung, những người đã luôn tận tình hướng dẫn, nâng đỡ và truyền đạt kiến thức cũng như kinh nghiệm và luôn đồng hành cùng tôi suốt quá trình học tập. Thầy và Cô đã luôn tận tâ ý, sửa chữa, và động viên tôi hoàn thành tốt luận văn này. Xin gửi lời cảm ơn đến Ths. Bùi Thị Vân Khánh, người bạn đã luôn nhiệt tình giúp đỡ, động viên tôi trong những lúc khó khăn để tôi có thể vững tâm hoàn thành khóa luận này. Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến các Thầy, Cô và cán bộ trong khoa Sinh học, đặc biệt các Thầy, Cô bộ môn Sinh học tế bào đã luôn tận tình dạy dỗ, truyền đạt cho tôi những kiến thức chuyên ngành và những kinh nghiệm quý giá. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc và lãnh đạo Khoa HIV/AIDS,Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương đã giúp đã và luôn tạo điều kiện thuận lợi cho tôi tham gia khóa học và triển khai thực hiện nghiên cứu tại Viện. Xin cảm ơn các bạn đồng nghiệp trong khoa, đặc biệt các bạn đồng nghiệp tại Phòng thí nghiệm huyết thanh học HIV đã đồng hành cùng tôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu không kể ngày đêm. Cuối cùng tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, đến Bố Mẹ hai bên cùng chồng và các con, những người thân yêu trong gia đình. Gia đình luôn là điểm tựa và là nguồn động viên không thể thiếu đối với tôi trong suốt cuộc đời này. Để hoàn thành luận văn này, tôi đã nhận được sự ủng hộ về tài chính từ dự án “Nâng cao năng lực giám sát và xét nghiệm HIV tại Việt Nam, giai đoạn 2010- 2015” do Trung tâm kiểm soát và phòng ngừa bệnh tật Hoa Kỳ tài trợ. Hà nội, ngày 4 tháng 12 năm 2014 Hoàng Thị Thanh Hà i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v BẢNG DANH MỤC VIẾT TẮT vi MỞ ĐẦU 1 Chương 1- TỔNG QUAN 3 1.1 THÔNG TIN CƠ BẢN VỀ HIV/AIDS 3 1.1.1 Cấu trúc của Virut HIV 3 1.1.2 Vòng đời của vi rút HIV 4 1.1.3 Dịch tễ học nhiễm HIV trên thế giới và tại Việt Nam 6 1.1.3.1 Dịch tễ học nhiễm HIV trên thế giới 6 1.1.3.2 Dịch tễ học nhiễm HIV tại Việt Nam 6 1.2 XÉT NGHIỆM HIV TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM 7 1.2.1 Các phương pháp xét nghiệm HIV 8 1.2.2 Chiến lược và phương cách xét nghiệm HIV 9 1.3 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM 10 1.3.1 Một số khái niệm về chất lượng 10 1.3.2 Giới thiệu về hệ thống đảm bảo chất lượng 11 1.3.3 Sơ đồ hoạt động của phòng thí nghiệm 13 1.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng xét nghiệm: 13 1.3.4.1 Giai đoạn trước xét nghiệm 14 1.3.4.2 Giai đoạn xét nghiệm 15 1.3.4.3 Giai đoạn sau xét nghiệm 15 1.3.4.4 Các sai số trong phòng thí nghiệm: 15 1.4 CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM 16 1.4.1 Khái quát chung về chương trình ngoại kiểm 16 1.4.2 Các hình thức ngoại kiểm tra 18 1.4.3 Mô hình chương trình ngoại kiểm 19 ii 1.4.4 Mục đích và ý nghĩa của chương trình 19 1.4.5 Các chương trình ngoại kiểm HIV trên thế giới và tại Việt Nam. 20 1.4.6 Mẫu ngoại kiểm và yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng mẫu chuẩn 21 1.4.6.1 Định nghĩa chung về các loại mẫu chuẩn 21 1.4.6.2 Phân loại mẫu chuẩn 22 1.4.6.3 Yêu cầu về chất lượng đối với mẫu ngoại kiểm HIV 23 1.4.6.4 Các phương pháp sản xuất mẫu ngoại kiểm HIV 24 1.4.6.5 Phương pháp đánh giá chất lượng mẫu ngoại kiểm 24 1.5 HỆ THỐNG CÁC PHÒNG THÍ NGHIỆM HIV TẠI VIỆT NAM 25 Chương 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 27 2.1 ĐỐI TƯỢNG 27 2.2 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 27 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.3.1 Xây dựng bộ mẫu chuẩn EQAS 30 2.3.2 Xác định đặc tính của mẫu chuẩn 30 2.3.3 Kỹ thuật chuyển đổi huyết tương thành huyết thanh 33 2.3.4. Đánh giá chất lượng mẫu sản xuất 35 2.3.4.1 Đánh giá độ đồng nhất 35 2.3.4.2 Đánh giá độ ổn định 36 2.3.4.3 Kiểm tra vô khuẩn 37 2.4. Áp dụng bộ mẫu với các phòng thí nghiệm tại Việt Nam. 38 Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT BỘ MẪU NGOẠI KIỂM . 39 3.1.1. Kết quả phân tích đặc điểm bộ mẫu chuẩn 39 3.1.2 Kết quả chuyển đổi huyết tương thành huyết thanh 42 3.2. KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG BỘ MẪU 48 3.2.1. Đánh giá độ đồng nhất 48 3.2.2. Đánh giá độ ổn định mẫu 50 3.2.3. Đánh giá tính vô khuẩn của bộ mẫu 53 iii 3.2.4. Đánh giá chất lượng mẫu thông qua phiếu khảo sát 54 3.3. QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM 54 3.4. KẾT QUẢ SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ÁP DỤNG TRONG ĐIỀU KIỆN VIỆT NAM 56 3.4.1. Các đơn vị tham gia chương trình ngoại kiểm 56 3.4.2. Thời gian trả kết quả của các đơn vị 57 3.4.3. Độ ổn định của bộ mẫu ngoại kiểm 57 3.4.4. Sinh phẩm các đơn vị thực hiện 58 3.4.5. Kết quả thực hiện của đơn vị tham gia 59 3.5. BÀN LUẬN 60 KẾT LUẬN 65 KIẾN NGHỊ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Máy móc và thiết bị sử dụng 28 Bảng 2: Dụng cụ và vật tư tiêu hao 28 Bảng 3: Hóa chất sử dụng 29 Bảng 4: Kết quả xác định đặc tính mẫu bằng kỹ thuật Elisa 39 Bảng 5: Kết quả xác định đặc tính mẫu bằng kỹ thuật nhanh/đơn giản 40 Bảng 6: Kết quả pha loãng mẫu SB-HIV 15 41 Bảng 7: Kết quả mẫu sau pha loãng tại nồng độ lựa chọn 42 Bảng 8: Kết quả xác định đặc tính mẫu sau khi Thrombin hóa 45 Bảng 9: Kết quả xác định đặc tính mẫu sau khi phục hồi bằng Canxi 46 Bảng 10: Kết quả xét nghiệm sau khi cho Proclin 300 46 Bảng 11: Kết quả đánh giá độ đồng nhất của mẫu sản xuất 49 Bảng 12: Kết quả đánh giá độ ổn định của mẫu chuẩn 52 Bảng 13: Kết quả độ vô trùng của mẫu chuẩn 53 Bảng 14: Độ ổn định của bộ mẫu gửi đến 398 đơn vị 58 Bảng 15: Kết luận của các phòng thí nghiệm về kết quả của bộ mẫu chuẩn 59 v DANH MỤC HÌNH Hình 1. Cấu trúc vi rút HIV [15] 4 Hình 2: Vòng đời của vi rút HIV[15] 5 Hình 3: Biến đổi các thông số sinh học trên bệnh nhân HIV chưa điều trị 7 Hình 4: Mô hình quản lý chất lượng[70] 12 Hình 5: Sơ đồ hoạt động của phòng thí nghiệm [70] 13 Hình 6: Vai trò của các đơn vị tham gia ngoại kiểm 18 Hình 7: Cách tính T test thông qua phần mềm Exel 37 Hình 8: Thử nghiệm phục hồi Caxi với các nồng độ khác nhau 43 Hình 9: Hình ảnh mẫu chuyển từ huyết tương thành huyết thanh qua 43 2 phương pháp Thrombin và phục hồi Canxi 43 Hình 10: Chai mẫu khuấy từ qua đêm tại nhiệt độ 2-8 o C 45 Hình 11: Kết quả xét nghiệm mẫu dương tính với kỹ thuật Western Blot 47 Hình 12: Hình ảnh bộ mẫu sau khi đã được chia ra ống và đóng gói. 49 Hình 13: Kết quả xét nghiệm mẫu bảo quản tại 4 o C và nhiệt độ phòng sau 50 ngày. 50 Hình 14: Thời gian bộ mẫu vận chuyển tại nhiệt độ thường đến các đơn vị và quay trở lại Viện VSDTTƯ. 51 Hình 15: Kết quả xét nghiệm với sinh phẩm Determine HIV1/2 52 Hình 16: Kết quả xét nghiệm với sinh phẩm SD bioline HIV 1/2 53 Hình 17: Đánh giá sơ bộ của người sử dụng về bộ mẫu 54 Hình 18: Tỷ lệ phần trăm các đơn vị tham gia chạy mẫu 56 Hình 19: Tỷ lệ phần trăm các đơn vị theo vùng địa lý 57 Hình 20: Thời gian các đơn vị gửi kết quả bộ mẫu chuẩn 57 Hình 21 : Tỷ lệ sử dụng sinh phẩm để thực hiện bộ mẫu 58 Hình 22: Độ chính xác trên mẫu lặp lại 59 vi BẢNG DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt AIDS Acquired Immune Deficiency Syndrome Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải ADN Acid Desoxyribonucleic ARN Acid Ribonucleic CDC Centers for Disease Control and Prevention Trung tâm Kiểm soát và Phòng chống bệnh tật Hoa Kỳ CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute Viện tiêu chuẩn phòng thí nghiệm và lâm sàng CRM Certified Reference Materials Vật liệu so sánh chuẩn EIA Enzym immuno Assay Kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch men ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch enzym EQA External Quality Assessment Đánh giá chất lượng từ bên ngoài hay Ngoại kiểm EQAS External Quality Assessment Scheme Chương trình đánh giá chất lượng từ bên ngoài hay Chương trình ngoại kiểm FDA Food and Drug Administration Cơ quan Quản lý thuốc và Thực phẩm Hoa Kỳ FHI Family Health International Tổ chức Sức khoẻ gia đình quốc tế GAP Global AIDS Program Chương trình AIDS toàn cầu HIV Human Immunodeficiency Virus gây suy giảm miễn dịch ở người vii Virus HTQLCL Quality Management System Hệ thống quản lý chất lượng ISO International Organization for Standardization Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế IQC Internal Quality Control Nội kiểm chứng IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry Quy dịnh quốc tế hài hòa dối với thử nghiệm thành thạo trong linh vực hóa phân tích OD Optical Density Mật độ quang học OIML International Organization of Legal Metrology Cơ quan đo lường hợp pháp quốc tế PA Particle Agglutination Sinh phẩm ngưng kết hạt PEPFAR The President's Emergency Plan For AIDS Relief Quỹ khẩn cấp phòng chống AIDS của Tổng thống PT Proficiency testing Thử nghiệm thành thạo PTN Phòng thí nghiệm QA Quality Assurance Đảm bảo chất lượng QC Quality Control Kiểm soát chất lượng QM Quality management Quản lý chất lượng SOP Standard Operating Procedure Quy trình thực hành chuẩn SSG Between-group sums of squares Tổng biến thiên giữa các nhóm SST Total sum of squares Tổng biến thiên trong nhóm và giữa các nhóm SSW Within-group sums of squares Tổng biến thiên trong nội bộ nhóm viii TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TTYTDP Center for preventive medicine Trung tâm Y tế dự phòng TTAIDS Provincial AIDS Center Trung tâm Phòng chống AIDS UNAIDS USAID The United States Agency for International Development Cơ quan phát triển quốc tế của Hoa Kỳ USG The U.S Government Chính phủ Hoa Kỳ VCT Voluntary Counseling and Testing Tư vấn và xét nghiệm tự nguyện VSDTTƯ National Institute of Hygiene and Epidemiology Vệ sinh Dịch Tễ Trung ương WB Western Blot Western Blot WHO World Health Organization Tổ chức Y tế thế giới [...]... được thực hiện nhằm đáp ứng yêu cầu nâng cao chất lượng xét nghiệm HIV ở Việt Nam Mục tiêu chính của đề tài là: - Xây dựng quy trình sản xuất bộ mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết thanh học HIV - Đánh giá chất lượng mẫu sau khi sản xuất - Sản xuất mẫu ngoại kiểm trong điều kiện ở Việt Nam 2 Chương 1- TỔNG QUAN 1.1 THÔNG TIN CƠ BẢN VỀ HIV/ AIDS Tháng 6 năm 1981, lần đầu tiên loài... chương trình cũng giúp Bộ y tế xác định được mức độ tin cậy trong công tác xét nghiệm của các phòng thí nghiệm từ đó có các chính sách phát triển phù hợp Hiện nay các bộ mẫu chuẩn để đánh giá chất lượng các phòng thí nghiệm được mua từ nước ngoài về phân phối với giá thành cao Chính vì vậy, đề tài “ Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết thanh học HIV được... thử nghiệm của phòng thí nghiệm bằng so sánh liên phòng Đơn vị tổ chức gửi các mẫu thử nghiệm giống nhau đến các phòng thí nghiệm tham gia Thử nghiệm thành thạo đánh giá việc thực hiện xét nghiệm của các phòng thí nghiệm thông qua so sánh liên phòng thí nghiệm, nghĩa là đánh giá các phòng thí nghiệm trên cùng một mẫu thử nghiệm hay những mẫu thử nghiệm tương tự được phân tích bởi hai hay nhiều phòng thí. .. những mẫu đông khô sẽ gặp khó khăn do lượng mẫu lớn Chính vì vậy một số phòng thí nghiệm trên thế giới vẫn sản xuất theo cách thông thường là huyết thanh hoặc huyết tương như Phòng thí nghiệm chuẩn thức Quốc gia Úc, phòng thí nghiệm chuẩn thức Thái Lan, Hàn Quốc, Anh, Pháp [37, 45, 51, 66] 1.4.6.5 Phương pháp đánh giá chất lượng mẫu ngoại kiểm Có rất nhiều phương pháp đánh giá chất lượng mẫu ngoại kiểm. .. dẫn và khuyến cáo cụ thể để xây dựng chương trình ngoại kiểm cho các nước trên thế giới [61] Hiện nay các chương trình ngoại kiểm tra cho xét nghiệm huyết thanh học HIV được nhiều nước trên thế giới cung cấp như: Phòng thí nghiệm chuẩn thức Quốc Gia Úc, chương trình đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm vương quốc Anh, chương trình đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm từ bên ngoài của Pháp, Trung Quốc,... nghiệm của một phòng thí nghiệm đối với các phòng thí nghiệm khác, đánh giá chất lượng từ bên ngoài thuộc phạm trù ngoại kiểm tra nhưng trọng tâm chủ yếu là đánh giá về kết quả xét nghiệm của phòng thí nghiệm này so với các phòng thí nghiệm khác, xét nghiệm cùng một mẫu xét nghiệm với cùng kỹ thuật xét nghiệm Chương trình ngoại kiểm tra thông thường được tổ chức bởi một phòng thí nghiệm chuẩn thức, đơn... định kỳ hoặc đột xuất Việc đánh giá theo các tiêu chí đã được phê duyệt [20] 1.4.3 Mô hình chương trình ngoại kiểm Chương trình đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm từ bên ngoài (External qualiy assessment schemes –EQAS) hay còn gọi là chương trình ngoại kiểm là chương trình đánh giá chất lượng các phòng thí nghiệm một các định kỳ và thường xuyên Tổ chức bên ngoài thường là phòng thí nghiệm chuẩn thức... chương trình ngoại kiểm, việc tham gia này nhằm mục đích giúp phòng thí nghiệm so sánh năng lực của mình với phòng thí nghiệm khác và kiểm soát để đảm bảo chất lượng quá trình thử nghiệm Nếu những xét nghiệm nào không có sẵn trong chương trình ngoại kiểm trong nước, phòng thí nghiệm có thể tham gia vào các chương trình của Quốc tế hoặc thực hiện so sánh liên phòng thí nghiệm với các phòng thí nghiệm. .. hướng và kiểm soát một tổ chức về chất lượng Việc định 10 hướng và kiểm soát về chất lượng một tổ chức nói chung bao gồm: chính sách chất lượng; mục tiêu chất lượng; hoạch định chất lượng; kiểm soát chất lượng; đảm bảo chất lượng và cải tiến chất lượng - Kiểm soát chất lượng (Quality Control-QC): Các hoạt động và kỹ thuật được sử dụng nhằm đáp ứng đầy đủ các yêu cầu chất lượng - Đảm bảo chất lượng (Quality... chắn rằng sản phẩm hoặc dịch vụ thỏa mãn các yêu cầu chất lượng - Đánh giá chất lượng bên ngoài (External Quality Assessment-EQA), còn được gọi ngoại kiểm hay thử nghiệm thành thạo phòng thí nghiệm: Việc xác định hoạt động thử nghiệm của phòng thí nghiệm bằng so sánh liên phòng - So sánh liên phòng: Việc tổ chức, thực hiện và đánh giá các thử nghiệm trên cùng một mẫu thử nghiệm hoặc mẫu thử nghiệm tương . ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HÀ NỘI Hoàng Thị Thanh Hà XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG PHÒNG THÍ NGHIỆM HUYẾT THANH. chất lượng các phòng thí nghiệm được mua từ nước ngoài về phân phối với giá thành cao. Chính vì vậy, đề tài “ Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết. 3.2.3. Đánh giá tính vô khuẩn của bộ mẫu 53 iii 3.2.4. Đánh giá chất lượng mẫu thông qua phiếu khảo sát 54 3.3. QUY TRÌNH SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM 54 3.4. KẾT QUẢ SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM