Tổng hợp s allyl l cystein để sử dụng trong kiểm soát chất lượng tỏi đen

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HUỲNH PHƢƠNG THẢO TỔNG HỢP S-ALLYL-L-CYSTEIN ĐỂ SỬ DỤNG TRONG KIỂM SOÁT CHẤT LƢỢNG TỎI ĐEN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HUỲNH PHƢƠNG THẢO TỔNG HỢP S-ALLYL-L-CYSTEIN ĐỂ SỬ DỤNG TRONG KIỂM SOÁT CHẤT LƢỢNG TỎI ĐEN Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số : 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS ĐỖ CHÂU MINH VĨNH THỌ PGS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Huỳnh Phƣơng Thảo ii Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2016 – 2018 Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 TỔNG HỢP S-ALLYL-L-CYSTEIN ĐỂ SỬ DỤNG TRONG KIỂM SOÁT CHẤT LƢỢNG TỎI ĐEN Huỳnh Phƣơng Thảo Thầy hƣớng dẫn: TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn Từ khóa: S-allyl-L-cystein, Tỏi đen Mở đầu: Tỏi gia vị đƣợc sử dụng từ lâu có tác dụng chữa nhiều bệnh Tuy nhiên việc sử dụng Tỏi gặp nhiều khó khăn mùi vị khó chịu Để cải thiện điều này, Tỏi tƣơi đƣợc lên men thành Tỏi đen với vị dịu, khơng cịn mùi hăng cay Tác dụng sinh học Tỏi đen cao hẳn so với Tỏi tƣơi Ở Việt Nam xuất ngày nhiều sản phẩm Tỏi đen nhƣng chƣa có tiêu chuẩn để đánh giá chất lƣợng sản phẩm Để kiểm soát chất lƣợng Tỏi đen cần có chuẩn Sallyl-L-cystein (SAC), hoạt chất Tỏi đen Chuẩn SAC chƣa có Việt Nam, cần phải mua từ nƣớc với giá cao thời gian lâu Vì đề tài “Tổng hợp S-allyl-L-cystein để sử dụng kiểm soát chất lượng Tỏi đen” đƣợc thực Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: S-allyl-L-cystein Tỏi đen Phương pháp nghiên cứu: SAC đƣợc tổng hợp từ L-cystein allyl bromid nhiệt độ thấp môi trƣờng kiềm Sản phẩm sau tổng hợp đƣợc xác định cấu trúc kỹ thuật phổ nghiệm nhƣ UV-Vis, IR, MS NMR; xác định độ tinh khiết phƣơng pháp HPLC quy 100% diện tích pic đƣợc thiết lập chất đối chiếu Sau xây dựng quy trình định lƣợng SAC Tỏi đen phƣơng pháp LC-MS/MS ứng dụng quy trình để kiểm tra hàm lƣợng SAC số mẫu Tỏi đen thị trƣờng Việt Nam Kết quả: SAC đƣợc tổng hợp từ L-cystein với hiệu suất toàn quy trình 61,70% Sản phẩm tổng hợp đạt độ tinh khiết 99% tính nguyên trạng đƣợc thiết lập chất đối chiếu Quy trình định lƣợng SAC Tỏi đen phƣơng pháp LC-MS/MS đƣợc xây dựng thẩm định đạt yêu cầu Kết luận: SAC đƣợc tổng hợp tiêu chuẩn hóa thành cơng để làm chất đối chiếu sử dụng kiểm nghiệm SAC Tỏi đen Quy trình định lƣợng SAC đƣợc ứng dụng để kiểm tra hàm lƣợng chất chế phẩm Tỏi đen iii Master’s Thesis – Academic course: 2016 - 2018 Specialty: Drug Quality Control And Toxicology – Code: 8720210 SYNTHESIS OF S-ALLYL-L-CYSTEINE FOR QUALITY CONTROL OF BLACK GARLIC Huynh Phuong Thao Supervisor: Dr Do Chau Minh Vinh Tho, Assoc Prof Dr Nguyen Duc Tuan Keywords: S-allyl-L-cysteine, black garlic Introduction: Garlic is a spicy plant which is used from long time ago and has many therapeutic effects However, using garlic has many troubles because of it’s unpleasant taste For improvement, garlic is fermented to black garlic whish has light sweetness and no odor smell Additionally, the biological effects of black garlic are also higher than garlic’s In Viet Nam, there are more and more black garlic products but don’t have any specification to control the quality of black garlic S-allyl-L-cysteine (SAC), a main active compound, is selected as marker to control black garlic porducts However, SAC reference standard is costly with limited accessibility This was our motivation to study on synthesis of SAC to serve for establishment of reference standard Materials and methods Object of study: S-allyl-L-cystein in black garlic Methods: SAC was synthesized from L-cysteine and allyl bromide in basic medium at low temperature The synthetic products was determined chemical structures from their UV-Vis, IR, MS and NMR spectroscopic data, purified by HPLC using peak area normalization method, and established as reference substance Then, the LC-MS/MS method for assay SAC in black garlic was developed, validated, and applied for quantitative determination of SAC in some available black garlic products in Viet Nam Results: SAC was synthesized from L-cysteine with total yield approximately 61.70% The SAC purity was over 99% on the basis and established reference substance Additionally, a LC-MS/MS method for assay of SAC in several black garlic samples was successfully developed and validated Conclusion: SAC was successfully synthesized and standardized as reference substance The validated LC-MS/MS method can be applied for quantitative determination of SAC in black garlic iv MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i BẢN TĨM TẮT TỒN LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG VIỆT ii BẢN TĨM TẮT TỒN LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG ANH iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ x MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tỏi 1.2 Tỏi đen 1.3 S-allyl-L-cystein 1.4 Sắc ký lỏng siêu hiệu ghép đầu dò khối phổ ba lần tứ cực (UPLC-MS/MS) 14 1.5 Chất đối chiếu 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu - Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 19 2.1.3 Chất chuẩn, hóa chất dung mơi 19 2.1.4 Trang thiết bị 20 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Tổng hợp S-allyl-L-cystein 20 2.2.2 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết S-allyl-L-cystein HPLC 22 2.2.3 Đánh giá S-allyl-L-cystein 26 2.2.4 Thiết lập chất đối chiếu S-allyl-L-cystein 27 v 2.2.5 Xây dựng quy trình định lƣợng S-allyl-L-cystein Tỏi đen kỹ thuật LCMS/MS 31 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 36 3.1 Tổng hợp S-allyl-L-cystein 36 3.2 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết S-allyl-L-cystein HPLC 44 3.3 Xác định độ tinh khiết, nhiệt độ nóng chảy S-allyl-L-cystein DSC hàm ẩm TGA 51 3.4 Đánh giá S-allyl-L-cystein 53 3.5 Thiết lập chất đối chiếu S-allyl-L-cystein 53 3.6 Xây dựng quy trình định lƣợng S-allyl-L-cystein Tỏi đen kỹ thuật LCMS/MS 56 Chƣơng BÀN LUẬN 70 4.1 Tổng hợp S-allyl-L-cystein 70 4.2 Xác định cấu trúc S-allyl-L-cystein 77 4.3 Xác định độ tinh khiết S-allyl-L-cystein HPLC 78 4.4 Thiết lập chất đối chiếu S-allyl-L-cystein 79 4.5 Định lƣợng S-allyl-L-cystein Tỏi đen 80 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TỪ VIẾT TẮT TỪ NGUYÊN Ý NGHĨA ACN Acetonitrile AOAC Association of official analytical chemists As Asymmetry BĐM Bình định mức CĐC Chất đối chiếu DSC Differential Scanning Calorimetry Quét nhiệt vi sai EC European Communities Cộng đồng Châu Âu ESI Electrospray ionization Ion hóa phun điện tử FLD Fluorescence detector Đầu dị huỳnh quang GC Gas chromatography Sắc ký khí GLP Good laboratory practice HPLC High performance liquid hromatography ICH International Conference on Harmonisation Hiệp hội nhà hố phân tích thống Hệ số bất đối Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm Sắc ký lỏng hiệu cao Hội nghị hòa hợp quốc tế IP Identification points Số điểm xác nhận IR Infrared Hồng ngoại International Organization for Tổ chức tiêu chuẩn hóa Standardization quốc tế k' Capacity factor Hệ số dung lƣợng LC Liquid chromatography Sắc ký lỏng LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lƣợng ME Matrix effect Ảnh hƣởng mẫu ISO vii TỪ VIẾT TỪ NGUYÊN Ý NGHĨA MS Mass spectrometry Khối phổ N Theoretical Plates Số đĩa lý thuyết biểu kiến NAC N-acetylcystein NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hƣởng từ hạt nhân PDA Photodiode array Dãy diod quang ppb Pparts per billion Phần tỷ ppm Parts per million Phần triệu PTN Phịng thí nghiệm Rs Resolution Độ phân giải RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối S Peak area Diện tích đỉnh S/N Signal to noise Tín hiệu nhiễu SAC S-allyl-L-cystein SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng SPTH Sản phẩm tổng hợp TGA Thermal gravimetric analysis tR Retention time TẮT UPLC UV-Vis Phân tích nhiệt trọng lƣợng Thời gian lƣu Ultra performance liquid chromatography Sắc ký lỏng siêu hiệu Ultraviolet - Visible Tử ngoại - khả kiến viii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Độ tan SAC dung môi pH khác Bảng 2.1 Hóa chất dung mơi dùng nghiên cứu 19 Bảng 2.2 Sai lệch cho phép tối đa tỷ lệ ion theo EC-657/2002 34 Bảng 3.1 Kết khảo sát phƣơng pháp tổng hợp SAC 37 Bảng 3.2 Kết khảo sát thời gian phản ứng tổng hợp SAC 37 Bảng 3.3 Kết kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm tổng hợp HPLC 38 Bảng 3.4 Kết đo nhiệt độ nóng chảy sản phẩm tổng hợp 40 Bảng 3.5 Các đỉnh đặc trƣng phổ IR sản phẩm tổng hợp 41 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR sản phẩm tổng hợp SAC chuẩn 43 Bảng 3.7 Hiệu suất tổng hợp SAC 44 Bảng 3.8 Khảo sát điều kiện sắc ký xác định độ tinh khiết SAC 44 Bảng 3.9 Kết khảo sát tính tƣơng thích hệ thống mẫu thử (n=6) .45 Bảng 3.10 Kết khảo sát tính tuyến tính SAC .48 Bảng 3.11 Phân tích tính tuyến tính quy trình xác định độ tinh khiết SAC .49 Bảng 3.12 Kết khảo sát độ lặp lại phƣơng pháp máy Thermo (n=7) 49 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ xác trung gian phƣơng pháp máy Thermo (n=7) 50 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian phƣơng pháp máy Hitachi (n=7) .50 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ phƣơng pháp (n=9) 51 Bảng 3.16 Kết đánh giá SAC tổng hợp 53 Bảng 3.17 Kết xác định độ tinh khiết SAC q trình đóng lọ 53 Bảng 3.18 Phân tích phƣơng sai yếu tố theo ANOVA 54 Bảng 3.19 Giá trị thông số sắc ký định lƣợng SAC phịng thí nghiệm 54 Bảng 3.20 Kết định lƣợng SAC hai phịng thí nghiệm .54 Bảng 3.21 Kết phân tích ANOVA 55 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 16.2.3 Sau 16.2.4 Sau PL-50 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 16.2.5 Sau 16.2.6 Sau 24 PL-51 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 17 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG NỀN MẪU 17.1 Đƣờng tuyến tính đƣợc xây dựng mẫu trắng 17.2 Đƣờng tuyến tính đƣợc xây dựng dung mơi PL-52 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 18 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÍNH TƢƠNG THÍCH HỆ THỐNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG TỎI ĐEN 18.1 Mẫu chuẩn pha dung mơi PL-53 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 18.2 Mẫu chuẩn pha mẫu trắng PL-54 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 19 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TÍNH TUYẾN TÍNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG TỎI ĐEN PL-55 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 20 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ CHÍNH XÁC QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG TỎI ĐEN 20.1 Kết khảo sát độ xác ngày 20.2 Sắc ký đồ khảo sát độ xác ngày PL-56 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 20.3 Sắc ký đồ khảo sát độ xác ngày 20.4 Sắc ký đồ khảo sát độ xác ngày PL-57 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 21 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG TỎI ĐEN 21.1 Kết khảo sát độ mức nồng độ 21.2 Sắc ký đồ khảo sát độ mức thêm chuẩn 10 ppb PL-58 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 21.3 Sắc ký đồ khảo sát độ mức thêm chuẩn 20 ppb 21.4 Sắc ký đồ khảo sát độ mức thêm chuẩn 30 ppb PL-59 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 21.5 Sắc ký đồ khảo sát độ mức thêm chuẩn 40 ppb PL-60 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 22 DỰ THẢO QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG TỎI ĐEN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC-MS/MS I ĐỐI TƢỢNG ÁP DỤNG Quy trình đƣợc áp dụng để định lƣợng S-allyl-L-cystein (SAC) phƣơng pháp UPLC-MS/MS chế phẩm Tỏi đen II CHẤT CHUẨN, HỐ CHẤT, DUNG MƠI, MẪU PHÂN TÍCH, THIẾT BỊ 2.1 Chất chuẩn Bảng Danh mục chất chuẩn Chất chuẩn Số lô S-allyl-L-cystein 000001441 N-acetylcystein QT112091016 Hàm lƣợng 98,9% (nguyên trạng) 99,6% (nguyên trạng) Nguồn gốc Sigma Aldrich Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh 2.2 Dung mơi, hóa chất - Methanol đạt tiêu chuẩn sắc ký lỏng (Baker) - Nƣớc cất lần dùng cho sắc ký lỏng đầu dò khối phổ (Merck) 2.3 Mẫu phân tích - Chế phẩm Tỏi đen, số lơ 131117TL2, hạn dùng 21/11/2019 2.4 Trang thiết bị - Máy sắc ký lỏng UPLC ACQUITY LC H-CLASS Waters, Xevo TQD - Cột Synergi Hydro-RP C18 (250 x 4,6 mm; μm) - Cân phân tích Kern ABJ-NM/ABS-N - Bể siêu âm Elmasonic S70H - Dụng cụ thủy tinh loại A Tất thiết bị phân tích đƣợc hiệu chuẩn đạt yêu cầu sử dụng III CHUẨN BỊ MẪU 3.1 Mẫu thử - Cân khoảng 0,2 g Tỏi đen cho vào cốc có mỏ 100 ml, thêm 10 ml nƣớc, siêu âm 30 phút, lọc qua giấy lọc lấy dịch chiết PL-61 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh - Thêm 10 ml nƣớc vào bã Tỏi đen lại, siêu âm 30 phút, lọc qua giấy lọc lấy dịch chiết, thêm ml nƣớc để tráng bã Tỏi đen giấy lọc, thực lần - Các dịch chiết dịch tráng đƣợc gom lại đến cịn khoảng ml trƣớc nạp lên cột SPE - Loại tạp qua cột SPE cationic mạnh (acid benzenesulfonic, 500 mg/3 ml): + Hoạt hóa cột với ml MeOH, sau với ml H2O + Nạp mẫu + Rửa cột với 16 ml H2O 16 ml MeOH + Rửa giải SAC với ml NH4OH 7%/MeOH (Phân đoạn NH3) - Phân đoạn NH3 đƣợc cô đến cắn khơ, hịa tan cắn nƣớc, cho vào bình định mức 100 ml, thêm nƣớc đến vạch, lắc Lấy 10 ml dung dịch vừa pha, cho vào bình định mức 100 ml, thêm nội chuẩn N-acetylcystein để đạt nồng độ cuối 100 ppb, bổ sung nƣớc đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 µm 3.2 Mẫu trắng - Bã Tỏi đen lại đƣợc thêm 10 ml nƣớc đƣợc tiến hành tƣơng tự đến giai đoạn thu đƣợc phân đoạn NH3 Phân đoạn đƣợc đến cắn sau hịa tan nƣớc vừa đủ lít Dung dịch đƣợc sử dụng làm mẫu trắng 3.2 Dung dịch chuẩn - Pha hỗn hợp dung dịch chuẩn S-allyl-L-cystein (SAC) N-acetylcystein (NAC) mẫu trắng với nồng độ SAC lần lƣợt 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 ppb nồng độ NAC 100 ppb, lọc qua màng lọc 0,22 µm Lưu ý: dung dịch cần đƣợc phân tích vòng sau pha bảo quản 25 oC, độ ẩm 45% IV ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ - Cột : Synergi Hydro-RP C18 (250 x 4,6 mm; μm) - Thể tích tiêm : 10 μl - Tốc độ dòng : 0,8 mL/phút - Nhiệt độ cột : 25 oC - Pha động : methanol – nƣớc (40:60) PL-62 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh - Điều kiện khối phổ Chất phân [M+H]+ tích SAC NAC Mảnh ion Nhiệt độ khí hóa (oC) Tốc độ Thế Thế mao dịng khí cone quản hóa (V) (kV) (lít/giờ) 145,00 500 1000 16 3,5 72,91 500 1000 16 3,5 12 122,01 500 1000 20 3,5 75,97 500 1000 20 3,5 16 Năng lƣợng va đập (V) 162,08 164,19 Ion lựa chọn Định lƣợng Định tính Định lƣợng Định tính V TIẾN HÀNH VÀ TÍNH KẾT QUẢ - Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn lần xác định tính tƣơng thích hệ thống Phép thử có giá trị thời gian lƣu, diện tích đỉnh chất có RSD ≤ 15% tỉ lệ diện tích SAC/NAC có RSD ≤ 6% - Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn, xây dựng đƣờng tuyến tính biểu diễn mối quan hệ nồng độ SAC tỉ lệ diện tích SAC/NAC - Tiến hành sắc ký mẫu thử Tính hàm lƣợng SAC mẫu Tỏi đen Tính kết quả: hàm lƣợng SAC (μg/g) mẫu Tỏi đen đƣợc tính theo cơng thức: ( ) Trong đó: - X: hàm lƣợng SAC Tỏi đen (μg/g) - C: nồng độ mẫu thử (ppb – ng/ml) - m: lƣợng cân Tỏi đen (g) - 1000 (ở tử số): hệ số pha loãng - 1000 (ở mẫu số): chuyển đổi từ ng sang μg PL-63 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 23 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG SAC TRONG CÁC MẪU TỎI ĐEN 23.1 Kết định lƣợng SAC mẫu Tỏi đen 23.2 Sắc ký đồ mẫu Tỏi đen PL-64 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... trúc S- allyl- L- cystein 77 4.3 Xác định độ tinh khiết S- allyl- L- cystein HPLC 78 4.4 Thiết l? ??p chất đối chiếu S- allyl- L- cystein 79 4.5 Định l? ?ợng S- allyl- L- cystein Tỏi đen. .. khiết S- allyl- L- cystein HPLC 22 2.2.3 Đánh giá S- allyl- L- cystein 26 2.2.4 Thiết l? ??p chất đối chiếu S- allyl- L- cystein 27 v 2.2.5 Xây dựng quy trình định l? ?ợng S- allyl- L- cystein. .. thấy SAC hợp chất ổn định [42] 1.3.2 Một s? ?? cơng trình nghiên cứu S- allyl- L- cystein 1.3.2.1 Tổng hợp Năm 1990, Iberl cộng [25] tổng hợp S- allyl- L- cystein phản ứng L- cystein allylbromid L- Cystein