RUTIN NHÓM hợp CHẤT NHÓM PHENOL

BÁO CÁO RUTIN - NHÓM HỢP CHẤT NHÓM PHENOL ĐÀ NẴNG/2016 MỤC LỤC I Giới thiệu Phenol thiên nhiên : Định nghĩa hợp chất phenol thiên nhiên: .2 Phân loại hợp chất phenol thiên nhiên: II Hợp chất nhóm flavonoid .3 Định nghĩa: .3 Đặc điểm cấu tạo Flavonoid III Rutin Định nghĩa: .5 Phân bố thực vật: .5 Cấu trúc hóa học: Tính chất vật lý, tính chất hóa học, hoạt chất sinh học Rutin: 4.1 Tính chất vật lý: .7 4.2 Tính chất hóa học: 4.3 Hoạt tính sinh học: Phân tích 5.1 Định tính rutin: 5.2 Định lượng: .9 5.3 Chiết xuất rutin 11 5.4 Phương pháp xử lí số liệu: .12 I Giới thiệu Phenol thiên nhiên : Định nghĩa hợp chất phenol thiên nhiên: - Phenol thiên nhiên hợp chất có mặt nhân benzen liên kết với nhóm OH dạng tự liên kết nhóm chức khác: este, ete… Chất đơn giản phenol thiên nhiên phenol Các flavonoid nhóm lớp chất phenol thiên nhiên - Chúng phân bố rộng rãi giới thực vật sản phẩm trao đổi chất phong phú thực vật - Chúng có khắp phận vậy, chúng phần thiếu chế độ ăn uống người Phân loại hợp chất phenol thiên nhiên: II Hợp chất nhóm flavonoid Định nghĩa: - Flavonoid nhóm hợp chất tự nhiên lớn thường gặp thực vật, phần lớn có màu vàng Ngồi ra, cịn có chất màu xanh, tím, đỏ, khơng màu - Trong cây, flavonoid giữ vai trò chất bảo vệ, chống oxy hoá, bảo tồn acid ascorbic tế bào, ngăn cản số tác nhân gây hại cho (vi khuẩn, virus, trùng,…), số cịn có tác dụng điều hoà sinh trưởng cối - Các flavonoid cịn có khả tạo phức với ion kim loại nên có tác dụng chất xúc tác ngăn cản phản ứng oxy hố Do đó, chất flavonoid có tác dụng bảo vệ thể, ngăn ngừa xơ vữa động mạch, tai biến mạch, lão hoá, thoái hoá gan, tổn thương xạ Đặc điểm cấu tạo Flavonoid - Các flavonoid gọi dẫn xuất 2- phenyl chroman (flanvan) Đó hợp chất có cấu tạo khung cacbon C6-C3-C6 Gồm hai vòng benzen A,B dị vòng C - Vòng A C kết hợp tạo khung chromon Nếu vịng B dính với dị vịng C vị trí C3 ta có iso flavonit - Dị vịng C là: III Rutin Định nghĩa: - Rutin hợp chất phenolic có nhiều hoa hịe, ngồi cịn có nhiều lồi thực vật như: Mạch ba góc, sen, thuốc nhiều loài cỏ khác - Tên xuất phát từ tên Ruta graveolens ( cửu lý hương) Lần rutin phân lập từ lồi - Rutin cịn gọi Rutoside, Quercein-3-O-rutinoside sophorin, glycoside flavonol quercetin disaccharide rutinose ( (α- L -rhamnopyranosyl- (1 → 6) -β- D -glucopyranose) - CTPT: C27H30O16 TLPT: 610,51 Phân bố thực vật: - Các hợp chất rutin phân bố rộng rãi thực vật Người ta tìm thấy chúng phận như: hoa , lá, rễ… (Sando Bartlett, 1920) - Có 50 lồi thực vật chứa rutin, hoa hịe chứa nhiều rutin cả, hàm lượng rutin hoa hòe gấp đến lần nguyên liệu mà giới sử dụng để ly trích rutin Rutin có nhóm –OH nên chất phân cực mạnh, trích cồn, nước …(Paniwnyk cộng sự, 2001; Trần Phi Hoàng cộng 2009) * Cây Hoa Hòe (Stypnolobium japonicum (L.)) - Cây gỗ, to, cao đến 15m, thân thẳng có chỏm trịn Cành cong queo Lá kép long chim lẻ, có 9-13 chét hình trứng, đỉnh nhọn, nguyên dài 3cm rộng 1,53,5cm Cụm hoa hình chùy đầu cành Tràng hoa hình bướm màu trắng nhỏ lại hạt - Ở nước ta hòe trồng số tỉnh, nhiều Thái Bình Chúng ta xuất hịe rutin - Thành phần hóa học:  Hoa hịe có thành phần chủ yếu rutin  Lá chứa 6,6 % flavonoid toàn phần, có 4,7 % rutin  Vỏ chứa 10,5 % flavonoid tồn phần, có 4,3 % rutin, sophoricosid, sophorabiosid số flavonoid khác Cấu trúc hóa học: Đem thủy phân rutin acid thu quercetin ( gốc phenol cấu trúc dạng C6C3C6) phần đường glucose rhamnose (gọi chung đường rutinose) Tính chất vật lý, tính chất hóa học, hoạt chất sinh học Rutin: 4.1 Tính chất vật lý:  Bột kết tinh màu vàng hay màu vàng lục  Khơng mùi, khơng vị.Khi để ngồi ánh sáng chuyển màu vàng sẫm  Tinh thể kết tinh ngậm phân tử H2O : oLàm khô 95-97oC oLàm khan 125oC có màu nâu oHóa dẻo 196 oC oBị phân hủy 215 oC  Nhiệt độ nóng chảy 183- 194 oC  Độ hịa tan: 1g Rutin hòa tan o8L nước nhiệt độ thường o200ml nước sôi o7L methanol sôi o650ml cồn lạnh 65ml cồn nóng  Tính tan oTan pyridin, formamid, dung dịch kiềm oKhông tan benzen,cloroform, cacbon sunfit,ether dầu hỏa 4.2 Tính chất hóa học: - Khi thủy phân rutin tạo thành quercetin, glucose, rhamnose - Các phản ứng đặc trưng: + Phản ứng cyaniding: dung dịch rutin cồn thêm bột Mg acid HCl đặc cho màu tím đỏ +Phản ứng với kiềm có nhóm OH có nhóm axit nên dễ phản ứng với hydroxit kiềm: Rutin tác dụng với dung dịch NaOH cho màu vàng từ nhạt đến đậm tùy thuộc vào độ kiềm thời gian, đặc biệt phản ứng với dd NaOH 1% cho màu vàng chanh + Phản ứng với FeCl3 cho màu xanh lục +Phản ứng ghép đơi với muối diazoni 4.3 Hoạt tính sinh học: - Là hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học dược lý cao - Tác dụng tăng bền vững, sức chịu đựng thành mao mạch, , giảm trương lực trơn chống co thắt, tăng cường lực tĩnh mạch, củng cố sức bền thành mạch, giúp hạn chế bệnh suy tĩnh mạch người cao tuổi – tác dụng dự phòng tai biến bệnh xơ vữa động mạch điều trị bệnh tăng huyết áp - Là chất kháng oxy (antioxydan) bảo vệ adrenalin tuần hoàn, chống viêm nhiễm , chống ung thư khối u - Hiện sản phẩm dược phẩm mỹ phẩm sử dụng nhiều hoạt chất Quan trọng hết, sản phẩm nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết, phân lập hồn chỉnh Phân tích 5.1 Định tính rutin: - Phản ứng cyaniding: dung dịch rutin cồn thêm bột Mg acid HCl đặc cho màu tím đỏ - Phản ứng với dung dịch NaOH cho màu vàng từ nhạt đến đậm tùy thuộc vào độ kiềm thời gian, đặc biệt phản ứng với dd NaOH 1% cho màu vàng chanh - Phản ứng với dd FeCl 35% cho màu xanh lục - Sắc ký : thường dùng loại sắc ký lớp mỏng sắc ký giấy * Sắc ký lớp mỏng - Bản mỏng : chất hấp thụ sillicagel G - Dung môi thường dùng:  Benzen-AtOAc (3:1)  CHCl3- MeOH (15:1)  Benzen – Aceton (9:1)  Toluen – Aceton (19:1)  CHCl3-CH3COOH (9:1)  MeOH 80 * Sắc ký giấy: - Giấy sắc ký: What man số 1, số - Dung môi thường dùng :  TB A: n-BuOH- CH3COOH- H2O (3:1:1)  BAW : n-BuOH-CH3COOH-H2O (4:1:5)  Forestal : CH3COOH- HCl- H2O (30:3:10)  Benzen –CH3COOH- H2O (25:72:3) CH3Cl3-CH3COOH-H2O (13:6:1)  Phenol-H2O (3:1) Hiện màu đèn tử ngoại (UV) bước sóng 360nm ammoniac soi đèn tử ngoại (UV) 5.2 Định lượng: - Để xác định hàm lượng chế phẩm dược liệu người ta dùng phương pháp sau : * Phương pháp cân: - Nguyên tắc: Chiết xuất rutin cồn sau thủy phân rutin dung dịch acid loãng quercetin Lọc lấy kết tủa, sấy cân tính hàm lượng rutin - Tiến hành: Cân xác gam bột dược liệu ngâm với 20ml acid clohidric 0.5 phần trăm chậu kết tinh, khuấy mạnh Sau gạn dịch chiết qua phễu lọc Rửa bột chậu nhiều lần vói nước, nước rửa lần lại lọc qua phễu,cho đến DL trung tính với giấy quỳ Chuyển hết bột dược liệu lên phễu, dùng nước rửa chậu lọc qua phễu lọc Giấy lọc bột dược liệu chiết với 20ml cồn 95 độ nồi cách thủy cổ sinh hàn ngược Sau cồn sơi 15 phút làm nguội bình gạn qua phễu lọc vào cốc Bột lại chiết với 20ml cồn 95 độ, làm Tiếp tục chiết với lượng 10ml 95 độ dịch chiết không màu không cho vàng với dung dịch NaOH 0,1N Rửa bình phễu với 10ml cồn 95 độ nóng Tập trung dịch chiết rửa lại cho vào bình cầu 200ml làm bốc nồi cách thủy đến gần khơ Thêm vào bình 100ml dung dịch acid sulfuric 2% đun sôi với ống thủy sinh hàn ngược Sau để nguội, để bình tủ lạnh độ Thu toàn tủa quercetin vào phễu thủy tinh xốp ( số 4) Rửa tủa lần, lần với 5ml nước để tủ lạnh, kiểm tra xem DL trung tính hóa có khử thuốc khử Fehling khơng Sấy khơ tủa quercertin 125 độ cân Khối lượng tủa thu nhân với 2.019 cho hàm lượng rutin gam dược liệu * Phương pháp đo quang: - Nguyên tắc : rutin tạo màu với kiềm số thuốc thử khác : Amoni molipdat, tiến hành phản ứng cyanidin đo quang * Phương pháp quang phổ: - Nguyên tắc: rutin hịa tan ethanol có đỉnh hấp phụ cực đại max = 362,5 nm A,2max = 258nm Với 325,2 x = 362.5 Người ta dựa vào tính chất để định lượng rutin - Ngồi người ta dùng số phương pháp khác để định lượng rutin : * Phương pháp đo iod * Phương pháp sắc ký lỏng cao áp 5.3 Chiết xuất rutin - Các phương pháp chiết xuất rutin dựa tính chất có khả hịa tan khác dụng mơi rutin - Có nhiều phương pháp chiết rutin xếp thành loại sau : + Phương pháp chiết nước + Phương pháp chiết cồn * Phương pháp chiết cồn: - Phương pháp dựa vào độ tan khác rutin cồn sôi cồn lạnh Người ta dùng cồn sôi để chiết rutin, dịch chiết đem đặc sau để nguội rutin kết tủa, lọc lấy tủa thu rutin - Thường người ta dùng cồn etylic chủ yếu Có số tác giả dùng cồn metylie ( Schinller Kugler, Kohlmay Hauye; Couch) Mỹ dùng isopropanol - Cồn hòa tan clorophyl sắc tố khác, nhựa chất béo mà cần loại bỏ Có thể loại bỏ chúng trình tinh chế cách sau: - Kết tinh lại nước - Dùng dung môi để loại :ete, tetracloruacarbon, ete dầu hỏa Đến nay, giới có nhiều cơng trình nghiên cứu phương pháp chiết xuất rutin đưa vào ứng dụng sản xuất nhiều vấn đề chưa thống Để đánh giá phương pháp, phải xét hiệu kinh tế phương pháp, chất lượng sản phẩm thu được, khả áp dụng vào thực tiễn độ an toàn sản xuất - Cách tiến hành  Xử lí nguyên liệu : lấy nguyên liệu, xoay thô  Chiết xuất cân 100g ngun liệu qua xử lí, cho vào bình chiết thêm 600ml cồn 60 độ Đun sơi cách thủy có sinh hàn hồi lưu 20 phút lấy dịch chiết, làm lần ( lần thứ lấy 50ml dịch chiết, pha lỗng vói 50ml nước, acid hóa đến pH = thấy tủa cịn ít) Gộp dịch chiết lại, đem cất thu hồi phần cồn Sau để nguội dịch cơ, cho rutin kết tinh tự nhiên 14 nhiệt độ phòng Lọc lấy kết tủa phễu Buchner Tủa thu đem sấy 60 độ khô thu rutin khô  Tinh chế  Nghiền rutin khô thành bột mịn hịa tan nước sơi, lọc nóng qua phễu Buchner, DL thu để nguội cho rutin kết tinh tự nhiên 12 nhiệt độ phòng Lọc lấy tủa phễu Buchner loại bỏ nước lọc Tủa thu đem sấy 60 độ khô rutin tinh khiết 5.4 Phương pháp xử lí số liệu: - Số liệu xử lí theo phương pháp thống kê ứng dụng y dược - Xác định giá trị trung bình, độ lệch chuẩn,khoảng tin cậy  ... Lần rutin phân lập từ loài - Rutin gọi Rutoside, Quercein-3-O-rutinoside sophorin, glycoside flavonol quercetin disaccharide rutinose ( (? ?- L -rhamnopyranosyl- (1 → 6) -? ?- D -glucopyranose) - CTPT:... thiệu Phenol thiên nhiên : Định nghĩa hợp chất phenol thiên nhiên: - Phenol thiên nhiên hợp chất có mặt nhân benzen liên kết với nhóm OH dạng tự liên kết nhóm chức khác: este, ete… Chất đơn giản phenol. .. người Phân loại hợp chất phenol thiên nhiên: II Hợp chất nhóm flavonoid Định nghĩa: - Flavonoid nhóm hợp chất tự nhiên lớn thường gặp thực vật, phần lớn có màu vàng Ngồi ra, cịn có chất màu xanh,