Nghiên cứu thu nhận, tinh sạch và ứng dụng enzyme glucoamylase từ ASP awamori và ASP niger dạng hòa tan và dạng cố định

Đại Học Quốc Gia Tp.Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGÔ MINH NHà NGHIÊN CỨU THU NHẬN, TINH SẠCH VÀ ỨNG DỤNG ENZYME GLUCOAMYLASE TỪ ASP.AWAMORI VÀ ASP.NIGER DẠNG HỊA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH Chun ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ TP.HỒ CHÍ MINH, tháng 12 năm 2008 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG CAO ĐẲNG KINH TẾ-CƠNG NGHỆ TP.HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: PGS.TS ĐỒNG THỊ THANH THU Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ tại: HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng 12 năm 2008 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHÒNG ĐÀO TẠO SĐH CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC TP HCM ,ngày tháng 12 năm 2008 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGÔ MINH NHà Phái : Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 18/04/1983 Nơi sinh: Tiền Giang Chuyên ngành: Công nghệ sinh học MSHV: 03107118 I.TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU THU NHẬN, TINH SẠCH VÀ ỨNG DỤNG ENZYME GLUCOAMYLASE TỪ Asp.awamori VÀ Asp.niger DẠNG HÒA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: ™ Nuôi thu nhận enzyme glucoamylase từ canh trường Asp.niger Asp.awamori ™ Khảo sát biến đổi hoạt độ enzyme glucoamylase so sánh khả tổng hợp enzyme glucoamylase lồi Asp.niger Asp.awamori theo thời gian ni ™ Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính khả sử dụng chế phẩm enzyme glucoamylase hoà tan ™ Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến cố định chế phẩm enzyme glucoamylase lên chất mang Kaolin, chất mang CMC khả sử dụng dạng enzyme III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: Ngày 25 tháng 02 năm 2008 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: Ngày tháng 12 năm 2008 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS ĐỒNG THỊ THANH THU CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN BỘ MÔN QL CHUYÊN NGÀNH PGS.TS ĐỒNG THỊ THANH THU PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG LỜI CẢM ƠN Tơi xin chân thành cảm ơn: ¾ Ban Giám Hiệu Trường Đại học Bách khoa TP.HCM ¾ Phịng Đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Bách khoa TP.HCM ¾ Ban Chủ nhiệm Khoa Cơng nghệ Hóa học-Dầu khí, Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM ¾ Ban Chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM tất Quý Thầy, Cô hết lịng truyền đạt kiến thức cho tơi suốt thời gian học Trường ¾ Trường Cao đẳng Kinh tế-Cơng nghệ TP.Hồ Chí Minh ¾ PGS.TS Đồng Thị Thanh Thu tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành tốt luận văn ¾ Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè hết lịng giúp đỡ, động viên suốt thời gian thực luận văn Tôi xin gởi lời chúc sức khỏe đến tất Quý Thầy Cô anh chị Tp.Hồ Chí Minh, ngày 08 tháng 12 năm 2008 Ngơ Minh Nhã TÓM TẮT Hiện enzyme glucoamylase sử dụng nhiều sản xuất nhờ vào khả thủy phân triệt để liên kết α-1,4 glycoside α -1,6 glycoside phân tử mạch amylose amylopectin tinh bột để thu sản phẩm cuối glucose Trong nghiên cứu này, thu nhận tinh sơ enzyme glucoamylase từ Asp.niger Asp.awamori nuôi cấy môi trường bán rắn Chúng tiến hành khảo sát điều kiện nhiệt độ, pH tối ưu, khả thủy phân chất động học enzyme glucoamylase Sau đó, chúng tơi khảo sát điều kiện để cố định enzyme lên kaolin CMC Những kết đạt được: ™ Hoạt độ enzyme glucoamylase hàm lượng protein theo thời gian nuôi đạt giá trị cao sau 2,5 ngày Hoạt độ enzyme glucoamylase từ canh trường Asp.niger 19318,33 UI/gCT cao so với canh trường từ Asp.awamori 19166,71 UI/gCT Hàm lượng protein Asp.niger 64,49 mg Pr/gCT sinh theo thời gian nuôi cao hàm lượng protein sinh từ Asp.awamori 51,92 mg Pr/gCT ™ Với tác nhân tủa ethanol 96% hiệu suất thu hồi CPE từ canh trường Asp.niger 7,12% hiệu suất thu hồi CPE từ Asp.awamori 5,83% ™ Sau 2,5 ngày, hoạt độ enzyme glucoamylase hàm lượng protein chế phẩm enzyme từ Asp.niger Asp.awamori cao Hoạt độ CPE glucoamylase thu từ Asp.niger 137442,13 UI/g CPE Asp Awamori 131477,62 UI/g CPE Hàm lượng protein đạt giá trị cao 44,98 mg/g CPE từ Asp.niger 35,62 mg/gCPE từ Asp.awamori ™ Hiệu suất hoạt độ so với canh trường Asp.niger 50,65% cao so với hiệu suất hoạt độ Asp.awamori 40,15% Độ tinh CPE Asp.niger tăng 10,33 lần Asp.awamori tăng 10,15 lần so với canh trường ™ Hoạt độ CPE glucoamylase Asp.niger Asp awamori cao pH 5,0 nhiệt độ 600C ™ Enzyme glucoamylase từ lồi nấm mốc có khả thủy phân loại tinh bột khác ™ Hàm lượng glucose tạo thành tăng theo thời gian thủy phân Ở loài Asp.niger sau 200 phút hàm lượng glucose sinh cao 1885,03 µg/ml có chiều hướng khơng tăng Đối với lồi Asp.awamori sau 220 phút, lượng glucose tạo thành khơng thay đổi nhiều cao sau thời gian 240 phút 1513,73 µg/ml ™ Cố định enzyme glucoamylase lên kaolin: Thời gian khuấy tối ưu để cố định enzyme glucoamylase từ Asp.niger Asp.awamori lên kaolin 50 phút (hiệu suất cố định 44,68%) 40 phút (hiệu suất cố định 41,83%) Số đơn vị hoạt độ enzyme glucoamylase từ loài Aspergillus cố định đạt giá trị cao sử dụng tỷ lệ khối lượng enzyme : kaolin = 1:10 Hiệu suất cố định Asp.niger 45,39% hiệu suất cố định Asp.awamori 41,58% Chế phẩm enzyme sau cố định thủy phân chất để tạo glucose Sau cố định kaolin, enzyme glucoamylase từ Asp.niger Asp.awamori tái sử dụng lần ™ Cố định enzyme glucoamylase lên CMC: Thời gian khuấy tối ưu để cố định enzyme glucoamylase từ Asp.niger Asp.awamori lên CMC 30 phút đạt hiệu suất cố định 49,76% 48,86% Số đơn vị hoạt độ enzyme glucoamylase từ loài Aspergillus cố định đạt giá trị cao sử dụng tỷ lệ khối lượng enzyme : kaolin = 1:10 Hiệu suất cố định Asp.niger 50,17% hiệu suất cố định Asp.awamori 47,83% Chế phẩm enzyme sau cố định thủy phân chất để tạo glucose Sau cố định CMC, enzyme glucoamylase từ Asp.niger Asp.awamori tái sử dụng lần ABSTRACT Nowadays, glucoamylase are used universally in industrials thanked to hydrolyzes polysaccharides by cleaving α-1,4 and α-1,6 glycosidic bonds consecutively of these molecular amylose and amylopectin to receive glucose from starch In this study, we recover and purify glucoamylase from Asp.niger and Asp.awamori mold that raised on semi solid We survey the temperature optimum, pH optimum, the hydrolysis and the kinetics of glucoamylase Then, we study the condition for immobilized enzyme on kaolin and CMC Results: ™ The activity of glucoamylse and the proteins content at 2,5 days is highest The activitiy of glucoamylase extract from Asp.niger (19318,33 UI/g semi solid ) is higher than glucoamylase from Asp.awamori (19166,71 UI/g semi solid) The protein content over time of Asp.niger (64,49 mg Pr/g semi solid) is higher than Asp.awamori (51,92 mg Pr/g semi solid) ™ In order to recover enzymes product, 96% ethanol was used for enzyme precipitaion The recovery’s productivity are 7,12% from Asp.niger and 5,83% from Asp.awamori ™ After 2,5 days, the activity of glucoamylase from Asp.niger (137442,13UI/g enzymee) is higher than glucoamylase from Asp.awamori (131477,62UI/g enzyme) The protein content of Asp.niger (44,98 mg Pr/g enzyme) is higher than Asp.awamori (35,62 mg Pr/g enzyme) ™ The performance of activity of Asp.niger is 50,65% and Asp.awamori is 40,06% The purification of product enzyme of Asp.niger grow up 10,33 times and Asp.awamori grow up 10,15 times than semi solid ™ The activity of glucoamylase of Asp.niger and Asp Awamori is highest at pH and 600C ™ Glucoamylase enzyme can can hydrolysic many kind of starch ™ The glucose raise by the time of hydrolysic starch After 200 minutes, the glucose is 1885,03 µg/ml and not grow up At Asp.awamori after 220 minutes, the glucose the glucose formed change not many an highest after 240 minutes 1513,73 µg/ml ™ The immobilization enzyme glucoamylase on kaolin: Examination the time of support-enzyme, activity of enzyme glucoamylase extract from Asp niger and Asp awamori is highest at 50 minutes (the immobilized performance 44,68%) and 40 minutes (the immobilized performance 41,83%) The suitable mass of kaolin is 1g/0,1g enzymes The immobilized performance of enzyme product from Asp.niger is 45,39% and the immobilized performance of enzyme product from Asp.awamori is 41,58% The immobilized enzyme can hydrolysic these subtract to create glucose The capability re-use of the immobilized enzyme glucoamylase from Asp niger and Asp awamori is over times ™ The immobilization enzyme glucoamylase on CMC: Examination the time of support-enzyme, activity of enzyme glucoamylase that extract from Asp niger and Asp awamori is highest at 30 minutes (the immobilized performance 49,76% and 48,86%) The suitable mass of CMC is 1g/0,1g enzymes The immobilized performance of glucoamylase that extract from Asp.niger is 50,17% and Asp.awamori is 47,83% The immobilized enzyme can hydrolysic these subtract to create glucose The capability re-use of the immobilized enzyme glucoamylase from Asp niger and Asp awamori is over times MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU Phần 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ ENZYME 1.1.1 Khái niệm enzyme 1.1.2 Bản chất cấu tạo enzyme .3 1.1.3 Nguồn thu enzyme 1.2 TỔNG QUAN VỀ ENZYME CỐ ĐỊNH 1.2.1.Định nghĩa enzyme cố định 1.2.2.Tình hình nghiên cứu enzyme cố định nước 1.2.3 Tính chất enzyme cố định 1.2.4.Vật liệu cố định enzyme 1.2.5 Các phương pháp cố định enzyme 11 1.2.6 Một số chất mang sử dụng nghiên cứu 14 1.3 HỆ ENZYME AMYLSE 19 1.3.1 Nhóm enzyme amylase thủy phân liên kết α-1,4 glycoside 19 1.3.2 Các enzyme thủy phân liên kết α-1,6 glycoside .20 1.3.3 Các enzyme phân cắt liên kết α-1,4 α-1,6 glycoside .20 1.4 GLUCOAMYLASE 20 1.4.1 Định nghĩa .20 1.4.2 Nguồn thu nhận yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính glucoamylase 20 1.4.3 Cấu tạo glucoamylase .22 1.4.4 Transglucosidase .23 1.4.5 Ứng dụng glucoamylase 24 Bảng 6.29.b Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 ODE ∆OD Σ UI 0,226 0,225 0,226 0,226 0,715 0,714 0,713 0,714 0,488 4031,64 0,118 0,118 0,119 0,118 0,796 0,798 0,802 0,799 0,680 3396,94 0,105 0,105 0,104 0,105 0,736 0,736 0,735 0,736 0,631 2810,20 0,146 0,145 0,146 0,146 0,789 0,785 0,786 0,787 0,641 2213,74 0,116 0,116 0,115 0,116 0,737 0,734 0,734 0,735 0,619 1638,35 0,126 0,125 0,125 0,125 0,748 0,747 0,746 0,747 0,622 1060,69 ODE1 ODE2 ODE3 Bảng 6.29.c Thí nghiệm Sử OD OD kc1 ODkc2 dụng (lần) ODkc3 ODkc ODE ∆OD Σ UI 0,241 0,242 0,245 0,243 0,736 0,737 0,738 0,737 0,494 3906,64 0,119 0,120 0,120 0,120 0,785 0,784 0,784 0,784 0,665 3287,17 0,167 0,164 0,163 0,165 0,801 0,805 0,803 0,803 0,638 2693,30 0,186 0,186 0,185 0,186 0,795 0,794 0,794 0,794 0,609 2128,28 0,139 0,137 0,138 0,138 0,745 0,744 0,746 0,745 0,607 1564,88 0,149 0,148 0,148 0,148 0,743 0,743 0,744 0,743 0,595 1013,14 6.14.KHẢO SÁT THỜI GIAN CỐ ĐỊNH ENZYME LÊN CHẤT MANG CMC - Hòa tan 0,1g enzyme glucoamylase 50 mlch đệm acetat pH=5 cố định 1g kaolin phương pháp hấp phụ với thời gian cố định khác 20 phút, 30 phút, 40 phút, 50 phút - Hệ số pha loãng = Bảng 6.28 Sự biến đổi số đơn vị hoạt độ glucoamylase cố định theo thời gian CPE từ Asp.niger Bảng 6.28.a Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 ODE ∆OD Σ UI 20 0,256 0,257 0,257 0,257 0,669 0,668 0,669 0,669 0,412 6561,34 30 0,261 0,261 0,263 0,262 0,636 0,639 0,634 0,636 0,375 7339,12 40 0,286 0,285 0,287 0,286 0,704 0,705 0,706 0,705 0,419 6415,51 50 0,279 0,277 0,279 0,278 0,717 0,713 0,712 0,714 0,436 6068,29 TG (phút) Bảng 6.28.b Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI 20 0,214 0,215 0,215 0,215 0,639 0,640 0,642 0,640 0,426 6276,62 30 0,222 0,222 0,225 0,223 0,605 0,607 0,607 0,606 0,383 7158,56 40 0,279 0,275 0,277 0,277 0,676 0,678 0,674 0,676 0,399 6832,18 50 0,266 0,267 0,268 0,267 0,698 0,698 0,697 0,698 0,431 6172,45 ODE TG (phút) Bảng 6.28.c Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 20 0,257 0,256 0,257 0,257 0,675 0,676 0,676 0,676 0,419 6415,51 30 0,237 0,238 0,238 0,238 0,617 0,616 0,616 0,616 0,379 7255,79 40 0,254 0,256 0,256 0,255 0,655 0,653 0,654 0,654 0,399 6839,12 50 0,235 0,236 0,236 0,236 0,678 0,678 0,679 0,678 0,443 5922,45 TG (phút) ∆OD Σ UI Bảng 6.29 Sự biến đổi số đơn vị hoạt độ glucoamylase cố định theo thời gian CPE từ Asp.awamori Bảng 6.29.a Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 20 0,247 0,247 0,248 0,247 0,635 0,636 0,635 0,635 0,388 6121,91 30 0,204 0,208 0,207 0,206 0,584 0,584 0,585 0,584 0,378 6330,25 40 0,219 0,221 0,223 0,221 0,626 0,623 0,625 0,625 0,404 5795,52 50 0,233 0,236 0,236 0,235 0,665 0,665 0,668 0,666 0,431 5226,08 TG (phút) ODE ∆OD Σ UI Bảng 6.29.b Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E 20 0,212 0,211 0,211 0,211 0,645 0,646 0,648 0,646 0,435 5142,75 30 0,247 0,249 0,249 0,248 0,598 0,595 0,597 0,597 0,348 6948,30 40 0,238 0,239 0,237 0,238 0,635 0,632 0,633 0,633 0,395 5969,14 50 0,265 0,267 0,269 0,267 0,684 0,685 0,687 0,685 0,418 5489,97 TG (phút) ∆OD Σ UI Bảng 6.29.c Thí nghiệm OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 20 0,222 0,223 0,223 0,223 0,645 0,645 0,643 0,644 0,422 5420,52 30 0,247 0,245 0,244 0,245 0,609 0,605 0,602 0,605 0,360 6705,25 40 0,279 0,276 0,277 0,277 0,678 0,678 0,679 0,678 0,401 5851,08 50 0,238 0,237 0,240 0,238 0,654 0,657 0,656 0,656 0,417 5510,80 TG (phút) ODE ∆OD Σ UI 6.15 KHẢO SÁT ẢNH HUỞNG CỦA KHỐI LƯỢNG CHẤT MANG CMC ĐẾN KHẢ NĂNG CỐ ĐỊNH CỦA ENZYME GLUCOAMYLASE - Hòa tan 0,1g enzyme glucoamylase 50 ml dung dịch đệm acetat có pH=5 cố định CMC với khối lượng 0,5g; 1g; 1,5g; 2g - Hệ số pha loãng = Bảng 6.30 Sự biến đổi hoạt độ enzyme glucoamylase cố định theo khối lượng kaolin CPE glucoamylase từ Asp.niger Bảng 6.30.a Khối lượng CMC 0,5g/0,1 g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,221 0,223 0,221 0,222 0,630 0,638 0,634 0,634 0,412 6555,09 0,255 0,256 0,259 0,257 0,679 0,676 0,675 0,677 0,420 6394,68 0,238 0,239 0,235 0,237 0,692 0,693 0,696 0,694 0,456 5637,73 Bảng 6.30.b Khối lượng CMC 1g/0,1g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,241 0,243 0,246 0,243 0,652 0,653 0,656 0,654 0,410 6596,06 0,257 0,256 0,252 0,255 0,633 0,634 0,634 0,634 0,379 7255,79 0,262 0,264 0,265 0,264 0,601 0,603 0,604 0,603 0,339 8082,18 Bảng 6.30.c Khối lượng CMC 1,5g /0,1g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,267 0,267 0,264 0,266 0,692 0,695 0,696 0,694 0,428 6221,06 0,235 0,234 0,238 0,236 0,728 0,722 0,726 0,725 0,490 4943,29 0,218 0,217 0,217 0,217 0,679 0,678 0,678 0,678 0,461 5540,51 Bảng 6.31 Sự biến đổi hoạt độ enzyme glucoamylase cố định theo khối lượng CMC CPE glucoamylase từ Asp.awamori Bảng 6.31.a Khối lượng CMC 0,5g/ 0,1g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,229 0,228 0,226 0,228 0,637 0,634 0,635 0,635 0,408 5712,19 0,23 0,234 0,235 0,233 0,674 0,673 0,673 0,673 0,440 5031,64 0,296 0,265 0,293 0,285 0,685 0,682 0,683 0,683 0,399 5899,69 Bảng 6.31.b Khối lượng CMC 1g/0,1g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,272 0,273 0,273 0,273 0,607 0,608 0,609 0,608 0,335 7219,14 0,251 0,254 0,254 0,253 0,624 0,624 0,626 0,625 0,372 6462,19 0,283 0,287 0,283 0,284 0,685 0,682 0,685 0,684 0,400 5878,86 Bảng 6.31.c Khối lượng CMC 1,5g/0,1 g CPE OD ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI Lần 0,205 0,206 0,204 0,205 0,685 0,685 0,683 0,684 0,479 4219,14 0,231 0,245 0,243 0,240 0,648 0,649 0,647 0,648 0,408 5698,30 0,257 0,254 0,256 0,256 0,690 0,690 0,692 0,691 0,435 5142,75 6.16 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG GLUCOSE SINH RA KHI SỬ DỤNG CPE CỐ ĐỊNH TRÊN KAOLIN ĐỂ THỦY PHÂN CÁC NGUỒN CƠ CHẤT KHÁC NHAU - Sử dụng 10 ml chất tinh bột tan, bột năng, bột mì, bột bắp nêu hồ hóa với nồng độ 0,2% Cho chất qua enzyme cố định chất mang CMC thời gian 30 phút Xác định hàm lượng glucose tạo thành theo mục 2.2.5 Bảng 6.32 Hàm lượng glucose sinh sử dụng CPE glucoamylase từ Asp.niger cố định kaolin thủy phân nguồn chất khác - Dung dịch tinh bột tan sau thủy phân pha lỗng lần Bảng 6.32.a Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,173 0,170 0,170 0,171 0,501 0,501 0,503 0,502 0,331 336,85 0,155 0,155 0,158 0,156 0,416 0,414 0,413 0,414 0,258 128,24 0,142 0,143 0,145 0,143 0,389 0,387 0,386 0,387 0,244 120,28 0,184 0,185 0,186 0,185 0,389 0,387 0,386 0,387 0,202 97,13 tan Bột Bột mì Bột bắp Bảng 6.32.b Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,185 0,186 0,186 0,186 0,542 0,541 0,541 0,541 0,356 364,63 0,142 0,142 0,141 0,142 0,423 0,422 0,421 0,422 0,280 140,46 0,134 0,133 0,136 0,134 0,358 0,358 0,359 0,358 0,224 109,17 0,155 0,153 0,153 0,154 0,331 0,332 0,332 0,332 0,178 83,61 tan Bột Bột mì Bột bắp Bảng 6.32.c Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,151 0,151 0,154 0,152 0,551 0,552 0,553 0,552 0,400 413,89 0,144 0,145 0,146 0,145 0,407 0,405 0,406 0,406 0,261 129,72 0,118 0,118 0,186 0,141 0,365 0,366 0,366 0,366 0,225 109,72 0,165 0,167 0,167 0,166 0,363 0,362 0,365 0,363 0,197 94,17 tan Bột Bột mì Bột bắp Bảng 6.33 Hàm lượng glucose sinh sử dụng CPE glucoamylase từ Asp.awamori cố định kaolin thủy phân nguồn chất khác Bảng 6.33.a.Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,179 0,178 0,179 0,179 0,514 0,516 0,516 0,515 0,337 343,52 0,141 0,142 0,142 0,142 0,382 0,384 0,386 0,384 0,242 119,35 0,156 0,156 0,157 0,156 0,357 0,357 0,354 0,356 0,200 95,65 0,169 0,169 0,170 0,169 0,322 0,323 0,323 0,323 0,153 69,91 tan Bột Bột mì Bột bắp Bảng 6.33.b.Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,161 0,164 0,163 0,163 0,504 0,504 0,504 0,504 0,341 348,70 0,12 0,122 0,122 0,121 0,355 0,356 0,356 0,356 0,234 114,91 0,144 0,147 0,147 0,146 0,347 0,348 0,348 0,348 0,202 96,76 0,177 0,176 0,176 0,176 0,154 70,46 tan Bột Bột mì Bột bắp 0,33 0,331 0,331 0,331 Bảng 6.33.c.Thí nghiệm Lượng OD Cơ ODKC1 ODKC2 ODKC3 OD KC OD1 OD2 OD3 OD ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) chất Tinh bột 0,18 0,18 0,181 0,180 0,492 0,493 0,493 0,493 0,312 316,48 0,113 0,114 0,115 0,114 0,377 0,377 0,378 0,377 0,263 131,02 0,147 0,146 0,146 0,146 0,351 0,352 0,351 0,205 98,43 0,161 0,159 0,159 0,160 0,305 0,305 0,302 0,304 0,144 64,91 tan Bột Bột mì Bột bắp 0,35 6.17.KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TÁI SỬ DỤNG CỦA ENZYME GLUCOAMYLASE CỐ ĐỊNH TRÊN CMC - Hòa tan 0,1g enzyme glucoamylase 50 ml dung dịch đệm acetat có pH=5 cố định 1g CMC Khảo sát khả tái sử dụng enzyme glucoamylase cố định CMC dựa vào hàm lượng glucose tạo thành Bảng 6.34 Khảo sát khả tái sử dụng CPE glucoamylase cố định từ Asp.niger Bảng 6.34.a Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,153 0,152 0,156 0,154 0,791 0,788 0,787 0,789 0,635 337,50 0,191 0,194 0,194 0,193 0,798 0,794 0,801 0,798 0,605 320,65 0,178 0,179 0,178 0,178 0,751 0,752 0,752 0,752 0,573 303,24 0,165 0,164 0,166 0,165 0,680 0,683 0,683 0,682 0,517 271,94 0,194 0,196 0,197 0,196 0,669 0,670 0,673 0,671 0,475 248,63 0,185 0,183 0,184 0,184 0,610 0,612 0,612 0,611 0,427 222,13 Bảng 6.34.b Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,171 0,172 0,175 0,173 0,837 0,834 0,832 0,834 0,662 352,31 0,133 0,136 0,135 0,135 0,743 0,748 0,749 0,747 0,612 324,72 0,165 0,168 0,168 0,167 0,704 0,707 0,706 0,706 0,539 283,98 0,149 0,149 0,150 0,149 0,657 0,658 0,654 0,656 0,507 266,39 0,169 0,169 0,168 0,169 0,628 0,627 0,627 0,627 0,459 239,54 0,189 0,192 0,193 0,191 0,608 0,603 0,603 0,605 0,413 214,35 Bảng 6.34.c Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,158 0,161 0,159 0,159 0,866 0,868 0,865 0,866 0,707 377,50 0,164 0,162 0,163 0,163 0,825 0,826 0,828 0,826 0,663 353,24 0,179 0,179 0,174 0,177 0,796 0,798 0,798 0,797 0,620 329,17 0,145 0,146 0,147 0,146 0,749 0,748 0,745 0,747 0,601 318,80 0,167 0,165 0,165 0,166 0,667 0,669 0,668 0,668 0,502 263,80 0,174 0,172 0,172 0,173 0,653 0,654 0,651 0,653 0,480 251,39 Bảng 6.35 Khảo sát khả tái sử dụng CPE glucoamylase cố định từ Asp.awamori Bảng 6.35.a Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,113 0,115 0,116 0,115 0,745 0,743 0,753 0,747 0,632 337,02 0,129 0,125 0,127 0,127 0,712 0,715 0,716 0,714 0,587 312,02 0,184 0,181 0,184 0,183 0,701 0,702 0,704 0,702 0,519 274,24 0,163 0,165 0,162 0,163 0,653 0,655 0,651 0,653 0,490 257,76 0,175 0,173 0,173 0,174 0,605 0,605 0,604 0,605 0,431 225,17 0,198 0,196 0,197 0,197 0,564 0,561 0,561 0,562 0,365 188,50 Bảng 6.35.b Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,120 0,123 0,121 0,121 0,768 0,769 0,769 0,769 0,647 345,35 0,153 0,154 0,154 0,154 0,754 0,755 0,756 0,755 0,601 319,80 0,166 0,168 0,164 0,166 0,652 0,655 0,656 0,654 0,488 257,02 0,179 0,177 0,176 0,177 0,632 0,634 0,633 0,633 0,456 238,87 0,162 0,167 0,166 0,165 0,593 0,593 0,594 0,593 0,428 223,69 0,185 0,187 0,283 0,218 0,575 0,572 0,573 0,573 0,355 182,94 Bảng 6.35.c Thí nghiệm Lượng OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD glucose tạo thành ( µg/ml) 0,127 0,180 0,129 0,145 0,727 0,728 0,728 0,728 0,582 309,24 0,151 0,156 0,154 0,154 0,702 0,703 0,705 0,703 0,550 291,09 0,183 0,183 0,185 0,184 0,675 0,674 0,672 0,674 0,490 257,94 0,163 0,163 0,167 0,164 0,624 0,625 0,627 0,625 0,461 241,83 0,196 0,195 0,193 0,195 0,615 0,615 0,616 0,615 0,421 219,43 0,179 0,176 0,178 0,178 0,559 0,558 0,558 0,558 0,381 197,20 - Hòa tan 0,1g enzyme glucoamylase 50 ml dung dịch đệm acetat có pH=5và cố định 1g kaolin Khảo sát khả tái sử dụng enzyme glucoamylase cố định kaolin với chất tinh bột tan 2% dựa vào biến đổi Σ UI Bảng 6.36 Khảo sát khả tái sử dụng CPE glucoamylase cố định từ Asp.niger dựa vào biến đổi Σ UI Bảng 6.36.a Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI 0,279 0,282 0,283 0,281 0,708 0,713 0,712 0,711 0,430 6193,29 0,171 0,172 0,175 0,173 0,837 0,834 0,832 0,834 0,662 5312,50 0,133 0,136 0,135 0,135 0,743 0,746 0,749 0,746 0,611 4501,62 0,165 0,168 0,168 0,167 0,704 0,707 0,706 0,706 0,539 3791,67 0,149 0,149 0,150 0,149 0,657 0,658 0,654 0,656 0,507 3125,69 0,163 0,162 0,164 0,163 0,648 0,647 0,643 0,646 0,483 2493,06 ODE1 ODE2 ODE3 Bảng 6.28.b Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE ∆OD Σ UI 0,274 0,272 0,272 0,273 0,653 0,654 0,651 0,653 0,380 7228,01 0,158 0,161 0,159 0,159 0,866 0,868 0,865 0,866 0,707 6284,26 0,164 0,162 0,163 0,163 0,825 0,826 0,828 0,826 0,663 5401,16 0,179 0,179 0,174 0,177 0,796 0,795 0,798 0,796 0,619 4579,63 0,145 0,146 0,147 0,146 0,749 0,748 0,745 0,747 0,601 3782,64 0,167 0,165 0,165 0,166 0,677 0,679 0,674 0,677 0,511 3111,11 Bảng 6.28c Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI 0,294 0,296 0,297 0,296 0,667 0,669 0,664 0,667 0,371 7415,51 0,153 0,152 0,156 0,154 0,791 0,788 0,787 0,789 0,635 6571,76 0,191 0,194 0,194 0,193 0,814 0,812 0,812 0,813 0,620 5749,31 0,178 0,179 0,178 0,178 0,761 0,762 0,762 0,762 0,583 4977,31 0,135 0,133 0,134 0,134 0,695 0,696 0,702 0,698 0,564 4232,64 0,165 0,164 0,166 0,165 0,680 0,683 0,683 0,682 0,517 3552,78 Bảng 6.29 Khảo sát khả tái sử dụng CPE glucoamylase cố định từ Asp.awamori dựa vào biến đổi Σ UI Bảng 6.29.a Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 OD kc ODE1 ODE2 ODE3 OD E ∆OD Σ UI 0,259 0,256 0,258 0,258 0,619 0,618 0,618 0,618 0,361 6653,86 0,127 0,128 0,129 0,128 0,767 0,768 0,769 0,768 0,640 5800,66 0,151 0,156 0,154 0,154 0,742 0,742 0,745 0,743 0,589 5017,84 0,183 0,183 0,185 0,184 0,755 0,754 0,742 0,750 0,567 4266,50 0,113 0,113 0,117 0,114 0,724 0,725 0,727 0,725 0,611 3453,58 0,146 0,145 0,143 0,145 0,695 0,696 0,696 0,696 0,551 2724,00 Bảng 6.29.b Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE1 ODE2 ODE3 ODE ∆OD Σ UI 0,212 0,217 0,216 0,215 0,599 0,603 0,604 0,602 0,387 6105,25 0,116 0,118 0,114 0,116 0,782 0,785 0,785 0,784 0,668 5213,16 0,139 0,137 0,136 0,137 0,792 0,794 0,793 0,793 0,656 4338,21 0,130 0,133 0,131 0,131 0,761 0,762 0,766 0,763 0,632 3496,59 0,153 0,154 0,154 0,154 0,758 0,755 0,755 0,756 0,602 2695,71 0,145 0,147 0,143 0,145 0,654 0,654 0,657 0,655 0,510 2023,07 ODE1 ODE2 ODE3 ∆OD Σ UI Bảng 6.29.c Thí nghiệm OD Sử dụng (lần) ODkc1 ODkc2 ODkc3 ODkc ODE 0,248 0,241 0,247 0,245 0,614 0,611 0,610 0,612 0,366 6535,80 0,129 0,125 0,127 0,127 0,732 0,735 0,736 0,734 0,607 5727,98 0,130 0,115 0,116 0,120 0,745 0,743 0,753 0,747 0,627 4893,30 0,174 0,171 0,174 0,173 0,701 0,702 0,704 0,702 0,529 4193,81 0,163 0,165 0,162 0,163 0,673 0,675 0,671 0,673 0,510 3521,64 0,155 0,153 0,153 0,154 0,658 0,655 0,654 0,656 0,502 2860,11 LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Ngô Minh Nhã Phái : Nữ Ngày, tháng, năm sinh : 18/04/1983 Nơi sinh: Tiền Giang Địa liên lạc: 93/1 bis, Hồ Hảo Hớn, Quận 1, TP.Hồ Chí Minh Điện thoại: 0919.676.242 QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO - Năm 2001-2005: học Ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Mở TP.Hồ Chí Minh - Năm 2006-2008: học Cao học Ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Bách Khoa TP.Hồ Chí Minh Q TRÌNH CƠNG TÁC - Từ tháng 7/2008, làm việc Trường Cao đẳng Kinh tế-Công nghệ TP.Hồ Chí Minh ... TÀI: NGHIÊN CỨU THU NHẬN, TINH SẠCH VÀ ỨNG DỤNG ENZYME GLUCOAMYLASE TỪ Asp. awamori VÀ Asp. niger DẠNG HÒA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: ™ Nuôi thu nhận enzyme glucoamylase từ canh... việc cố định enzyme trọng Nhằm phần đáp ứng nhu cầu trên, thực đề tài ? ?Nghiên cứu thu nhận, tinh ứng dụng enzyme glucoamylase từ Asp. awamori Asp. niger dạng hòa tan dạng cố định? ?? -2- Chế phẩm enzyme. .. dạng hòa tan dạng cố định Nội dung nghiên cứu đề tài nuôi Asp niger Asp awamori môi trường bán rắn Thu nhận enzyme glucoamylase, từ so sánh khả tổng hợp enzyme glucoamylase loài Asp niger Asp awamori