Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Designed by ๖D14๖Snow® ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI TRONG KIỂM NGHIỆM DƯỢC PHẨM Designed by ๖D14๖Snow® Giới thiệu báo khoa học Định tính định lượng đồng thời polymethoxyflavone, coumarin acid phenolic cỏ hôi phương pháp UPLC-ESI- QToF-MS UPLC-PDA Designed by ๖D14๖Snow® Các nội dung Giới thiệu chung Vật liệu phương pháp Kết bàn luận Kết luận Designed by ๖D14๖Snow® Giới thiệu chung Tên khoa học: Ageratum conyzoides L., họ cúc Asteraceae Tên dân gian VN: Hoa cứt lợn, Cỏ cứt lợn, Cỏ hôi, Phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt Tác dụng dược lý: kháng viêm, giảm đau, lành vết thương, chống ung thư, chống viêm khớp, chống sốt rét-ký sinh trùng… Thành phần hóa học: chromene, chromones ( sắc tố), coumarin, monoterpen, pyrrolizidine alkaloids flavonoid (polymethoxyflavone) Designed by ๖D14๖Snow® Giới thiệu chung Hướng NC chính: xác định pyrrolizidine alkaloids (lycosamine & dẫn xuất TP thuốc từ thân) - Loại bỏ pyrrolizidine alkaloid (độc gan) - Làm giàu phenolic đặc biệt polymethoxyflavone Mục đích NC: phát triển phương pháp định tính định lượng chất hóa học A conyzoides Kết quả: polymethoxyflavone acid phenolic tìm thấy loài lần (cấu trúc báo cáo từ trước) Designed by ๖D14๖Snow® Vật liệu phương pháp 2.1 Hóa chất vật liệu, chuẩn bị mẫu Dung môi: ACN, MeOH dành cho HPLC, H2O RO mili-Q, acid formic 30g tươi A.conyzoides Chất chuẩn: 5,6,7,3',4',5'-hexamethoxyflvavone; nobiletin; 5'- 500 ml nước sôi methoxynobiletin; eupalestin ; acid clorogenic hemihydrate; coumarin (1,2benzopyrone); p-coumaric acid; Lycopsamin 15 phút Dịch chiết Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc: 1.0 mg/g (trong MeOH); bảo quản C, Lọc Cô áp suất giảm trước pha lỗng tiêm mẫu để nhiệt độ phịng lọc qua màng 0,22 µm 670 mg dịch chiết đậm đặc Dung môi MeOH:H2O (1:1) 200 μg/g Lọc milipore 0,22 μm Dung dịch thử gốc (Stock) Phân lập từ Dịch chiết n-hexan từ A conyzoides; HPLC-UV (LC-10ADVP, shimazu) Cột HR C18 (300 x 7,8 mm id; μm), MeOH:H 2O=70:30 (v/v); 2ml/phút/ 30 phút xđ NMR Designed by ๖D14๖Snow® Vật liệu phương pháp 2.2 Phân tích định tính Hệ thống SKL Acquity H-Class UPLC-MS/MS Cột Acquity UPLC BEH C18 ; Nhiệt độ 40 C; Phần mềm Mass Lynx 4.1 Pha động : dd a formic 0.1% nước (A), ACN(B) Tốc độ dịng: 0,35 ml/ph; thể tích tiêm 10 μl Chương trình dung mơi T(ph) 0-1 1-2 2-8 8-9 9-9.5 9.5-9.6 PĐ A (%tt/tt) 90-78 78-65 65-15 15-2 2-90 phút Ổn định lại cột PĐ B (%tt/tt) Zpray TM R ESI/Waters Xevo G2-S Qtof 150 mm x 2.1 mm i.d, 1.7 μm 10-22 22-35 35-85 85-98 98 98-10 Designed by ๖D14๖Snow® Vật liệu phương pháp Đầu dị Bộ phận ion hóa mẫu ESI: Khối lượng 100-1500 Da, Thời gian quét giây Chế độ ion hóa âm dương Bảng thơng số ESI Thông số ESI Dương Âm Điện buồng bay kV 2,5 kV Điện mẫu 40 V 40 V Điện nguồn 80 V 80 V Nhiệt độ bay 150 độ 150 độ Nhiệt độ nguồn 80 độ 80 độ Tốc độ dịng khí vào 100 l/h l/h Tốc độ dịng khí bay 1000 l/h 600 l/h Phân tích MS/MS- tứ cực thời gian bay (QTof) - MS/MS Eva chạm ~15-25 eV - Dữ liệu MS MS thu thập chế độ centroid - Tính phổ: nguồn tham chiếu (LockSprayTM); số truyền dung dịch leucine-enkephalin (1 ng/mL) với tốc độ dòng 20 μL/phút - Tham chiếu mLeucine-enkephalin m/z 556.2771 cho chế độ dương m/z 554.2615 cho chế độ âm Designed by ๖D14๖Snow® Vật liệu phương pháp 2.3 Phân tích định lượng Hệ thống SKL Acquity H-Class UPLC-PDA Cột Acquity UPLC BEH C18 (150 mm x 2.1 mm i.d, 1.7 μm) 25 C Phần mềm Water Empower Chromatography Data Pha động : dd a formic 0.1% nước (A), ACN(B) Tốc độ dịng: 0,25 ml/ph Chương trình dung mơi T(ph) 0-4 4-13 13-15 15-17 17-24 24-24.1 24.1-25 25-25.1 PĐ A (%tt/tt) 90 90-70 70 70-50 50-44 44-10 10 10-90 phút Ổn định lại cột PĐ B (%tt/tt) 10 10-30 30 30-50 50-56 56-90 90 90-10 Phổ UV: 190-550nm Định lượng: coumarin 275nm; chất khác 330nm Designed by ๖D14๖Snow® Kết bàn luận 3.1 Phân tích định tính - Phương pháp: UPLC-ESI-QTof MS - Đầu dị: hai chế độ ion hóa dương âm - Cách xác định pic: so sánh liệu HRMS/MS với khối lượng lý thuyết CT đề xuất - Thông số: Thời gian lưu, công thức phân tử, khối lượng m/z thực nghiệm mảnh MS Sắc ký đồ dịch chiết nước A conyzoides theo phương pháp UPLC-ESI-QTof BPI chế độ ion hóa dương (trên) âm (dưới) 10 Designed by ๖D14๖Snow® 3.1 Phân tích định tính Chế độ ion hóa dương - XĐ alcaloid pyrrolizidine (RT 2,24-2,57 ph) gồm: afore lycopsamine (1) dx N-oxide (3), dihydro N-oxide (2) ĐP (4-5) - Coumarin (1,2-benzopyrone) (18) (RT: 4,44 phút, m/z 147.0460) độc gan (quy định EFSA max 5- Pic 21 (RT: 5,50 phút) m/z 403.1019 ~ C20H18O9 50mg/kg TP) Peak n Proposed identification MS fragments - Polymethoxyflavone: 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 388.0783 27 xđ từ loài 373.0555 7-Hydroxy-5,6,8,5’21 tetramethoxy-3’,4’methylendioxyflavone 355.0465 345.0610 Phân mảnh Me (15) 2Me (30) 2Me+H2O (30+18) 2Me+CO (30+28) 342.0742 H2CO+MeO (30+31) 330.0375 3Me+CO (45+28) 197.0093 RDA mở vòng C MeO 177.0541 OCH2O 11 Designed by ๖D14๖Snow® 3.1 Phân tích định tính Chế độ ion hóa dương: Pic 21 có cấu trúc đề nghị: A C B Vì chất chuyển hóa trước thu từ Ageratum tomentosum 12 Designed by ๖D14๖Snow® 3.1 Phân tích định tính Chế độ ion hóa âm Đã xác định acid phenolic - Coumaric acid dẫn chất: (17), (9), (11), (13), (16) - đồng phân chlorogenic acid (7) (8) - Các phenolic acid khác: (6), (10), (12) Peak nº Proposed identification 3-(2-O-β-D Glucopyranosyl6 4-hydroxyphenyl) propanoic acid MS Phân mảnh Fragments 343.1031 Hexose (162) 181.0520; Nước (18) 163.0432; 121.0299; 119.0513 C2H2O (42) M-hexose (162)-H2O (18)- CO2 (44) 13 Designed by ๖D14๖Snow® 3.1 Phân tích định tính Chế độ ion hóa âm Lần đầu xác định polyphenol A conyzoides (14) rutin (15) kaempferol-3-rutinoside Peak nº Proposed identification MS fragments Phân mảnh 609.1456; 14 Rutin 463.0830; Deoxyhexose (146) 301.0383; Hexose (162) 151,0047 RDA mở vòng C 593.1536; 15 Kaempferol -3-rutinoside 285.0387; Rutinose (308) 151.0022 RDA mở vịng C 14 Designed by ๖D14๖Snow® Kết bàn luận 3.2 Phân tích định lượng 17 coumaric acid coumarin chlorogenic acid 24 nobiletin 18 7/8 5,6,7,3’,4’,5’-hexomethoxyflavon 26 5’-methoxynobiletin 27 eupalestin coumarin - Sắc kí đồ dịch chiết đậm đặc A conyzoides 330 nm (A) 275 nm (B) 23 18 15 Designed by ๖D14๖Snow® 3.2 Phân tích định lượng Thẩm định độ tuyến tính, LOQ, LOD, độ xác (lặp lại trung gian) Intra-day (n=6) Inter-day (n=12) Chất Khoảng tuyến tính R2 LOQ (μg/g) LOD (μg/g) C (mg/g) RSD (%) C (mg/g) RSD (%) 7/8 11.21 11.69 0.1-5.0 0.9994 0.0500 0.0150 17 1.29 1.3 0.05-5.0 0.9983 0.0100 0.0040 18 18.19 17.86 0.05-5.0 0.9995 0.0100 0.0040 23 2.75 2.78 0.15-4.0 0.9997 0.0025 0.0010 24 1.27 1.28 0.15-4.0 0.9998 0.0050 0.0015 26 5.91 5.95 0.15-4.0 0.9987 0.0050 0.0015 27 2.05 2.11 0.15-4.0 0.9977 0.0060 0.0020 16 Designed by ๖D14๖Snow® 3.2 Phân tích định lượng Thẩm định độ 17 Designed by ๖D14๖Snow® 3.2 Phân tích định lượng Kết định lượng a C (mg/g) Dịch chiết 7/8 17 18 23 24 26 27 Hãm 27.25±5.74 b ND 5.92±1.94 4.21±1.26 2.24±0.60 9.47±2.58 2.90±0.75 Sắc 19.13±3.86 b ND 20.12±1.44 2.43±0.12 1.35±0.21 6.25±0.28 2.25±0.03 Lị vi sóng 30.40±5.37 b ND 4.93±0.59 2.52±0.20 1.39±0.21 6.21±0.55 2.27±0.20 a Mean ± SD of independent samples (n=3) b Not detected 18 Designed by ๖D14๖Snow® Kết luận Phương pháp UPLC-ESI-QToF phân tách 27 hợp chất dịch chiết A conyzoides 10 phút Tác động kháng viêm chống nhiễm trùng Xây dựng phương pháp tin cậy cho phép định lượng đồng thời chất điểm dịch chiết A conyzoides PP đánh giá chế phẩm từ A conyzoides 19 ... đới cận nhiệt Tác dụng dược lý: kháng viêm, giảm đau, lành vết thương, chống ung thư, chống viêm khớp, chống sốt rét -ký sinh trùng… Thành phần hóa học: chromene, chromones ( sắc tố), coumarin,... lý thuyết CT đề xuất - Thông số: Thời gian lưu, công thức phân tử, khối lượng m/z thực nghiệm mảnh MS Sắc ký đồ dịch chiết nước A conyzoides theo phương pháp UPLC-ESI-QTof BPI chế độ ion hóa dương... (1,2benzopyrone); p-coumaric acid; Lycopsamin 15 phút Dịch chiết Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc: 1.0 mg/g (trong MeOH); bảo quản C, Lọc Cô áp suất giảm trước pha loãng tiêm mẫu để nhiệt độ phịng lọc qua