Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG PHƯƠNG PHÁP UPLC – MS/MS ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI IMATINIB, VORICONAZOLE VÀ CHẤT CHUYỂN HÓA TRONG MẪU HUYẾT TƯƠNG CHUỘT KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN GIỚI THIỆU VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT LUẬN Giới thiệu Bệnh bạch cầu mạn dòng tủy Rối loạn tăng sinh tủy xương mãn tính 15 % tổng số bệnh bạch cầu Imatinib Giới thiệu Suy giảm miễn dịch Voriconazole Nhiễm nấm Vật liệu phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu CYP3A4 Imatinib N-desmethyl Imatinib CYP2C19 Voriconazole N-oxide Voriconazole Vật liệu phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Imatinib Voriconazole N-Desmethyl Imatinib N-Oxide Voriconazole Vật liệu phương pháp nghiên cứu Vật liệu: Tên nguyên liệu Số lô Imatinib 20140213 N-Desmethyl Imatinib A8029 Độ tinh khiết Nơi mua Viện kiểm soát thực phẩm dược phẩm quốc gia(BeiVoriconazole 100862-200701 N-Oxide Voriconale 100596-200809 Diazepam 171225-200902 Acetonitril Methanol ≥ 98 % jing, China) Sigma (St Louis, MO, USA) Merck Company (Darmstadt, Germany) Vật liệu phương pháp nghiên cứu Khảo sát điều kiện sắc ký: • • • Hệ pha động: UPLC BEH C18 UPLC CSH C18 UPLC HSS C18 • • Acetonitril + nước Acetonitril + acid fomic 0.1% Vật liệu phương pháp nghiên cứu 10 Khảo sát điều kiện sắc ký: Ion phun ion ESI Đầu dò khối phổ tứ cực MRM Vật liệu phương pháp nghiên cứu 11 Dung dịch chuẩn, mẫu QC: 10 µl mẫu chuẩn, mẫu QC Imatinib, N-desmethyl Imatinib, 90 µl huyết tương Voriconazole, N-oxide Voriconazole, trắng Diazepam (IS) MeOH Đường chuẩn mg/ml chuẩn gốc ACN DD chuẩn nội MeOH DD chuẩn Imatinib, N-desmethyl Imatinib, Voriconazole, N-oxide Voriconazole Mẫu QC huyết tương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 12 Chuẩn bị mẫu thử 100 µl huyết tương 200 µl chuẩn nội Vortex phút Ly tâm 15000 x g x 15 phút Mẫu thử UPLC – MS/MS Vật liệu phương pháp nghiên cứu 13 Thẩm định quy trình HƯỚNG DẪN CỦA FDA CHO CÁC PHƯƠNG PHÁP SINH HĨA CƠNG NGHIỆP • Độ chọn lọc • Tính tuyến tính • Độ xác • Độ đúng, độ phục hồi • Độ nhiễu Vật liệu phương pháp nghiên cứu 14 Độ ổn định: Ứng dụng nghiên cứu Dược động học: 2,0 1,0 0,5 1,5 4,0 3,0 8,0 6,0 24,0 12,0 36,0 Kết bàn luận 15 Điều kiện sắc ký: UPLC – MS/MS Cột sắc ký: Cột Acquity BEH C18 (2,1 x 50 mm; 1,7 µm) Hệ pha động: Gradient Detector: MS/MS Thời gian (phút) ACN (%) Acid formic 0,1 % (%) 20 80 1,0 90 10 2,0 90 10 2,1 20 80 4,0 20 80 Kết bàn luận 16 Thẩm định quy trình: Tính chọn lọc Mẫu trắng Kết bàn luận 17 Thẩm định quy trình: Tính chọn lọc Mẫu chuân thêm dịch sinh học Imatinib N-desmethyl Imatinib N-oxide Voriconazole Voriconazole IS Kết bàn luận 18 Thẩm định quy trình: Tính chọn lọc Mẫu thử thu sau dùng thuốc Imatinib N-desmethyl Imatinib N-oxide Voriconazole Voriconazole IS Kết bàn luận 19 Tính tuyến tính Tên chất Phương trình hồi quy Y = 2,70755X + 166,088 Imatinib r = 0.99818 Y = 248,161X + 178,966 N-desmethyl imatinib r = 0.99957 Y = 5,20704X + 3,45498 Voriconazole r = 0.99939 Y = 0,380534X + 0,084044 N-Oxide voriconazole r = 0.99933 Kết bàn luận 20 Độ xác, Độ Analytes Concentration added Intra-day Inter-day (ng/mL) Imatinib N-desmethyl imatinib Voriconazole N-Oxide voriconazole RSD (%) RE (%) RSD (%) RE (%) 10 5.9 1.2 2.1 0.2 800 4.4 10.2 9.8 1.8 4000 6.1 0.4 3.2 -3.0 10 5.8 4.7 1.6 6.5 80 10.7 9.7 1.4 8.1 400 6.7 -4.8 2.5 -4.9 10 2.6 2.4 13.1 -11.1 800 5.1 5.1 0.5 5.5 4000 2.4 -7.9 0.3 -8.0 10 14.8 -6.1 6.3 -12.5 800 9.1 4.5 14.8 -10.0 4000 12.1 -3.4 5.1 -7.9 Kết bàn luận 21 Độ phục hồi, Độ nhiễu Recovery Analytes Imatinib N-desmethyl imatinib Matrix effect (%) Concentration added (ng/mL) Mean ±SD RSD (%) Mean ±SD RSD (%) 10 83.8 ± 7.2 8.6 97.2 ± 5.6 5.8 800 90.3 ± 5.4 6.0 107.9 ± 6.0 5.5 4000 88.5 ± 5.9 6.6 102.3 ± 7.6 7.5 10 91.1 ± 6.7 7.3 93.4 ± 10.4 11.1 80 87.3 ± 5.3 6.0 99.9 ± 7.0 7.0 400 94.6 ± 9.1 9.6 93.6 ± 13.0 13.9 10 85.1 ± 8.1 9.6 99.0 ± 12.3 12.4 800 88.9 ± 2.0 2.2 103.0 ± 5.3 5.2 4000 91.5 ± 3.8 4.1 108.7 ± 6.2 5.7 10 88.4 ± 12.0 13.6 100.0 ± 8.2 8.2 800 91.6 ± 11.8 12.9 97.0 ± 11.7 12.0 4000 91.0 ± 6.0 6.6 111.1 ± 4.0 3.6 Voriconazole N-oxide voriconazole Kết bàn luận 22 Độ ổn định o Autosampler C, 12h Room temperature, 6h Analytes Imatinib Three freeze -thaw o -80 C, 28 days Added (ng/mL) RSD (%) RE (%) RSD (%) RE (%) RSD (%) RE (%) RSD (%) RE (%) 10 4.4 -9.8 12.3 -0.1 12.1 -1.3 12.0 4.3 800 5.3 -0.1 8.7 4.8 4.3 3.2 12.7 7.1 4000 3.8 2.8 14.3 2.5 4.4 -6.9 8.7 -4.2 10 6.9 3.5 10.3 5.0 5.6 -2.3 14.7 6.1 80 5.9 6.9 8.8 9.5 4.5 9.2 14.0 0.6 400 4.9 -8.8 6.6 11.8 4.5 1.2 8.5 -5.3 10 5.0 -7.1 11.9 1.6 5.1 -4.5 14.6 7.0 800 5.5 4.4 4.8 8.0 4.9 6.7 12.1 -3.1 4000 3.4 -11.3 9.5 14.8 3.0 -1.2 12.8 -11.1 10 7.4 7.1 9.8 9.0 6.5 -3.5 9.0 -3.4 800 4.3 -2.6 9.8 4.9 3.4 6.7 10.4 3.9 4000 4.7 -9.6 8.4 8.4 4.2 0.6 7.9 -4.7 N-desmethyl imatinib Voriconazole N-oxide voriconazole Kết bàn luận 23 Ứng dụng nghiên cứu Dược động học: Imatinib T1/2 = 4.9 h Voriconazole T1/2 = 3.76 h N-desmethyl Imatinib T1/2 = 6.77 h N-oxide Voriconazole T1/2 = 7.46 h Kết luận 24 • Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời chất Imatinib, N-desmethyl Imatinib, Voriconazole, N-oxide Voriconazle • Hiệu suất chiết cao khơng có độ nhiễu • Ứng dụng thành công phương pháp để xác định đồng thời chất mẫu huyết chuột thời gian ngắn (4 phút) Cảm ơn Thầy bạn lắng nghe ! ... định phương pháp định lượng đồng thời chất Imatinib, N-desmethyl Imatinib, Voriconazole, N-oxide Voriconazle • Hiệu suất chiết cao khơng có độ nhiễu • Ứng dụng thành công phương pháp để xác định. .. chuẩn nội MeOH DD chuẩn Imatinib, N-desmethyl Imatinib, Voriconazole, N-oxide Voriconazole Mẫu QC huyết tương Vật liệu phương pháp nghiên cứu 12 Chuẩn bị mẫu thử 100 µl huyết tương 200 µl chuẩn nội... phổ tứ cực MRM Vật liệu phương pháp nghiên cứu 11 Dung dịch chuẩn, mẫu QC: 10 µl mẫu chuẩn, mẫu QC Imatinib, N-desmethyl Imatinib, 90 µl huyết tương Voriconazole, N-oxide Voriconazole, trắng Diazepam