Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
PHÁT TRIỂN VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP UPLC-MS/MS ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI FOTAGLIPTIN VÀ CHẤT CHUYỂN HÓA TRONG HUYẾT TƯƠNG VÀ NƯỚC TIỂU Tác giả: Zhenlei Wang, Ji Jiang, Pei Hu & Qian Zhao HÌNH DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A UPLC-MS/MS METHOD OF SIMULTANEOUS DETERMINATION OF FOTAGLIPTIN AND ITS TWO MAJOR METABOLITES IN HUMAN PLASMA AND URINE Đặt vấn đề Phương pháp nghiên cứu Kết - Bàn luận Kết luận Đặt vấn đề Tỉ lệ bệnh đái tháo đường tăng 360 triệu người (2030) Đái tháo đường tuýp II chiếm 90-95% Kiểm sốt đường huyết tối ưu gặp khó khăn Fotagliptin benzoate (ức chế DPP-4) Đặt vấn đề Đặt vấn đề Nghiên cứu dược lý tiền lâm sàng an toàn, hiệu FDA Trung Quốc chấp nhận để thử nghiệm lâm sàng (2013) Fotagliptin có chất chuyển hóa M1 M2-1 Xây dựng thẩm định phương pháp UPLC-MS/ MS để xác định đồng thời fotagliptin hai chất chuyển hóa huyết tương nước tiểu người Kỹ thuật khối phổ liên tục (MS/MS) ứng dụng rộng hoá sinh lâm sàng Phương pháp nghiên cứu a/ Vật liệu hóa chất b/ Trang thiết bị c/ Thơng số điều kiện tiến hành sắc ký d/ Thông số điều kiện tiến hành phổ khối e/ Quy trình chuẩn bị mẫu hiệu chỉnh mẫu kiểm định f/ Quy trình chuẩn bị mẫu thử g/ Thẩm định phương pháp Phương pháp nghiên cứu a/ Vật liệu hóa chất Vật liệu Hóa chất Chất chuẩn Fotagliptin độ tinh khiết 99,70% Chất chuyển hóa của fotagliptin M1: độ tinh khiết 99,90% Chất chuyển hóa của fotagliptin M2-1: độ tinh khiết 99,50% Chất chuẩn nội của fotagliptin- IS: độ tinh khiết 99,22% Dung môi Acetonitrile metanol HPLC-grade Acid formic acid triflouroacetic Dung dịch amoniac amonium acetat Nước khử ion Dịch sinh học Huyết tương người khơng nhiễm thuốc, có dùng tác nhân chống đơng Heparin lithium Nước tiểu Fotagliptin M1 M2-1 Phương pháp nghiên cứu b/ Trang thiết bị Bộ phận ion hóa ESI Hệ thống Acquity UPLC bao gờm: + lấy mẫu tự động + buồng cột + kiểm soát bơm nhị phân Hệ thống khối phổ API 5500 triple quadrupole Phương pháp nghiên cứu c/ Thông số điều kiện tiến hành sắc ký Thông số hệ thống Cột sắc kí BEH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 µm Nhiệt độ cột Nhiệt độ phận tiêm mẫu 40 oC Dung môi pha động Chương trình chạy pha động Tốc độ dịng Quy trình rửa giải 15 oC A: mM amonium acetate hỗn hợp acid formic-acetonitrile-nước (1:50:1000) B: acetonitrile 100% Gradient nồng độ 0.25 ml/phút Bước 1: bắt đầu với 89,5% dung môi A phút thứ Bước 2: tiếp tục với 73,7% dung môi A phút thứ Bước 3: chuyển sang 10,5% dung môi A giữ phút thứ 3,50 Phương pháp nghiên cứu d/ Thông số điều kiện tiến hành phổ khối Thơng số hệ thống Màng chắn khí 35 psi Khí va chạm psi Điện áp phun ion 5000 V Nhiệt độ 600 oC Khí nguồn ion (khí nebulizer) 40 psi Khí nguồn ion (khí turbo) 60 psi 10 Kết - Bàn luận A.b Phát triển phương pháp - UPLC 20 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ tuyến tính, độ nhạy, độ đặc hiệu + Tất đường cong hiệu chuẩn đánh giá phương trình bậc hai với hệ số gia trọng (weighting factor) 1/x + Hệ số tương quan của tất đường cong hiệu chuẩn tìm thấy 0,99 nồng độ quan sát của mẫu đường cong hiệu chuẩn dao động khoảng 85-115% giá trị lý thuyết. + Khơng có nhiễm chéo đáng kể quan sát tất phân tích. + Khơng có chập đỉnh đáng kể tại thời gian lưu của chất phân tích 21 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ tuyến tính, độ nhạy, độ đặc hiệu Trong mẫu huyết tương 22 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ tuyến tính, độ nhạy, độ đặc hiệu Trong mẫu huyết tương 23 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ tuyến tính, độ nhạy, độ đặc hiệu Trong mẫu nước tiểu 24 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ tuyến tính, độ nhạy, độ đặc hiệu Trong mẫu nước tiểu 25 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp b) Độ đúng, độ xác Độ độ xác của Fotagliptin/M1/M2-1 mẫu huyết tương Độ độ xác của Fotagliptin/M1/M2-1 mẫu nước tiểu 26 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp c) Độ phục hồi, hiệu ứng nội Tỷ lệ phục hồi hiệu ứng nội tại (matrix effect) của Fotagliptin/M1/M2-1 mẫu huyết tương nước tiểu 27 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp d) Độ ổn định Độ ổn định của Fotagliptin/M1/M2-1 buồng lấy mẫu tự động nhiệt độ phòng mẫu huyết tương Độ ổn định của Fotagliptin/M1/M2-1 buống lấy mẫu tự động nhiệt độ phòng mẫu nước tiểu 28 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp d) Độ ổn định Độ ổn định của Fotagliptin/M1/M2-1 điều kiện lạnh, điều kiện đông dài hạn mẫu huyết tuơng Độ ổn định của Fotagliptin/M1/M2-1 điều kiện lạnh, điều kiện đông dài hạn nước tiểu 29 Kết - Bàn luận C/ Ứng dụng phương pháp 30 Kết - Bàn luận C/ Ứng dụng phương pháp 31 Kết luận Nhờ vào tính đặc hiệu, tính chọn lọc hay khả trì của quy trình phân tích UPLC-MS/MS trước những biến đổi nhỏ, mà phép định lượng fotagliptin hai chất chuyển hóa huyết tương nước tiểu người lần đầu tiên phát triển thẩm định Phương pháp áp dụng thành công Kết của nghiên cứu hỗ trợ cho nghiên cứu lâm sàng fotagliptin benzoate 32 Triển vọng đề tài 33 CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE 34 ... nhận để thử nghiệm lâm sàng (20 13) Fotagliptin có chất chuyển hóa M1 M2-1 Xây dựng thẩm định phương pháp UPLC- MS/ MS để xác định đồng thời fotagliptin hai chất chuyển hóa huyết tương nước tiểu. .. Bàn luận A.a Phát triển phương pháp - MS 18 Kết - Bàn luận A.b Phát triển phương pháp - UPLC 19 Kết - Bàn luận A.b Phát triển phương pháp - UPLC 20 Kết - Bàn luận B/ Thẩm định phương pháp a) Độ... tương ứng với hệ số pha loãng 50 lần huyết tương nước tiểu người Trong nước tiểu Trong huyết tương Mẫu CS QC Nồng độ CS Từ 0 .20 0/0 .20 0/0 .20 0 đến 1000/160/1000 ng/ml Từ 20 .0 /20 .0 /20 .0 đến 20 000/10000/10000