Đánh giá chất lượng tế bào gốc máu ngoại vi đủ tiêu chuẩn để ghép tại bệnh viện truyền máu huyết học thành phố hồ chí minh

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - NGUYỄN PHƢƠNG THẢO ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG TẾ BÀO GỐC MÁU NGOẠI VI ĐỦ TIÊU CHUẨN ĐỂ GHÉP TẠI BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 60 42 80 L UẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 01 năm 2016 Cơng trình đƣợc hoàn thành tại: Đại học Bách khoa Thành phố Hồ Chí Minh Cán hƣớng dẫn khoa học: PGS TS HUỲNH NGHĨA Cán chấm nhận xét 1: TS NGUYỄN TÚ ANH Cán chấm nhận xét 2: TS HOÀNG MỸ DUNG Luận văn Thạc sĩ đƣợc bảo vệ Trƣờng Đại học Bách khoa, ĐHQG TP HCM ngày 08 tháng 01 năm 2016 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: PGS TS NGUYỄN ĐỨC LƢỢNG PGS TS NGUYỄN THÚY HƢƠNG TS NGUYỄN TÚ ANH TS HOÀNG MỸ DUNG PGS TS LÊ PHI NGA Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá luận văn Trƣởng khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn đƣợc chỉnh sửa CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Nguyễn Phƣơng Thảo MSHV: 12310752 Ngày, tháng, năm sinh: 25/ 12/ 1988 Nơi sinh: Kiên Giang Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số : 604280 I TÊN ĐỀ TÀI: Đánh giá chất lượng tế bào gốc máu ngoại vi đủ tiêu chuẩn để ghép Bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: Xác định thể tích túi tế bào gốc máu ngoại vi Xác định tỷ lệ thông số túi tế bào gốc máu ngoại vi sau thu thập xử lý theo tiêu chuẩn để ghép: số lƣợng tế bào CD34+, tỷ lệ tế bào cấy cụm CFU, số lƣợng tế bào nhân, tỷ lệ nhiễm vi trùng, vi nấm Xác định thời gian mọc mảnh ghép Đánh giá tỷ ,lệ mọc mảnh ghép sau ghép III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 06/07/2015 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 04/12/2015 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : PGS TS Huỳnh Nghĩa Tp HCM, ngày tháng năm 20 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA….……… (Họ tên chữ ký) Ghi chú: Học viên phải đóng tờ nhiệm vụ vào trang tập thuyết minh LV LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn tốt nghiệp, cố gắng, nỗ lực thân xin chân thành gởi lời cảm ơn đến: Ban Giám hiệu Quý thầy cô trƣờng Đại học Bách khoa Thành phố Hồ Chí Minh tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức bổ ích cho Quý thầy cô Bộ môn Công nghệ Sinh học trƣờng Đại học Bách khoa theo sát, nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa học Ban Giám đốc Ban phụ trách khoa/phòng thuộc Bệnh viện Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho tơi làm việc hồn thành luận văn PGS TS Huỳnh Nghĩa nhắc nhở tận tình hƣớng dẫn, góp ý, hỗ trợ tơi thời gian thực luận văn Các anh, chị em, bạn bè động viên, giúp đỡ trình học tập Cuối tơi xin gửi lịng biết ơn chân thành đến gia đình ln ủng hộ, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa học TP Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 01 năm 2015 Nguyễn Phƣơng Thảo i TÓM TẮT Ngày nay, nguồn tế bào gốc máu ngoại vi đƣợc sử dụng rộng rãi ghép Công tác đánh giá chất lƣợng TBGMNV cần thiết nhằm cung cấp nguồn sản phẩm chất lƣợng cho thành công ca ghép Mục tiêu đề tài đánh giá chất lƣợng TBGMNV sử dụng để ghép BV TMHH Chúng tiến hành nghiên cứu 124 túi TBGMNV đƣợc thu thập từ 62 ngƣời cho (tự ghép dị ghép) 50 trƣờng hợp đƣợc ghép BV TMHH Với phƣơng pháp nghiên cứu mô tả hàng loạt ca, kết cho thấy thể tích trung bình túi TBGMNV sau thu thập 184.29 ± 23.41 ml, trọng lƣợng trung bình đơn vị TBGMNV đƣợc lƣu trữ đơng lạnh 24.54 ± 0.96 g, tỷ lệ tế bào sống sau trình xử lý đạt 91.02%, 100% mẫu cấy cụm tế bào CFU cho kết mọc dày khơng có trƣờng hợp nhiễm vi trùng, vi nấm trình thu thập, xử lý lƣu trữ Thời gian mọc mảnh ghép bạch cầu hạt trung tính trung bình 12.19 ngày, phục hồi tiểu cầu trung bình 22.5 1.64 2.6 ngày Khối TBG sau xử lý bảo quản đảm bảo chất lƣợng với tỷ lệ mọc mảnh ghép 98% Qua kết nghiên cứu cho thấy nguồn TBGMNV đƣợc thu thập, xử lý, lƣu trữ đảm bảo chất lƣợng ii ABSTRACT Nowadays, Peripheral blood stem cells (PBSC) have been the most common source of stem cells for transplantation Evaluating quality of PBSC is necessary to supply quality products for transplantation The objective of this study isevaluating quality of PBSC be used to transplanted at HCM Hematology and Transfusion Hospital We studied on 124 apheresis PBSCunits were collected from 62 donor (autologous and allogeneic) and 50 patients transplanted With methods case series study, the results: volume mean of apheresis PBSC unit was 184.29 ± 23.41 ml,the weight mean of freezing bag was 24.54 ± 0.96 g, the viable cell rate after the processing was 91.02%, 100% of the stem cell bags grow heavily after the processing, no case of infection Time to neutrophil engraftment was 12.19 1.64 days, platelet engraftment was 22.5 2.6 days Engraftment rate was 98% After apheresis, processing and frozen storage, PBSC unit was quality assurance for transplanting iii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu đƣợc trình bày luận văn trung thực Nếu có sai sót tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm TP Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 01 năm 2015 Nguyễn Phƣơng Thảo iv MỤC LỤC CHƢƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tế bào gốc tạo máu 2.1.1 Khái niệm .3 2.1.2 Đặc tính dịng tế bào gốc tạo máu 2.1.3 Các nguồn cung cấp tế bào gốc tạo máu 2.1.4 Các phƣơng pháp xác định tế bào gốc tạo máu: 2.2 Ghép tế bào gốc tạo máu 2.2.1 Các sản phẩm tế bào gốc tạo máu sử dụng để ghép .9 2.2.2 Các phƣơng pháp ghép tế bào gốc tạo máu 10 2.3 Ghép tế bào gốc máu ngoại 11 2.3.1 Huy động tế bào gốc 11 2.3.2 Thu thập tế bào gốc máu ngoại vi 13 2.3.3 Xử lý tế bào gốc máu ngoại vi 15 2.3.4 Lƣu trữ tế bào gốc 18 2.3.5 Xét nghiệm đánh giá kiểm tra chất lƣợng tế bào gốc 22 2.4 Tình hình ghép TBG Việt Nam giới 27 2.4.1 Thế giới 27 2.4.2 Tại Việt Nam 27 CHƢƠNG 3: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 3.1 Thiết kế nghiên cứu 30 3.2 Đối tƣợng nghiên cứu 30 3.2.1 Dân số mục tiêu 30 3.2.2 Dân số chọn mẫu 30 3.2.3 Cỡ mẫu nghiên cứu 30 v 3.2.4 Tiêu chuẩn chọn mẫu 30 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 31 3.3.1 Các biến số nghiên cứu: 31 3.3.2 Phƣơng pháp tiến hành thu thập liệu 31 3.3.3 Các phƣơng tiện đánh giá chất lƣợng TBG máu ngoại vi 36 3.4 Phân tích xử lý số liệu .43 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ 44 4.1 Kết thu thập TBGMNV 44 4.1.1 Đặc điểm ngƣời cho Tế bào gốc 44 4.1.2 Đặc điểm túi TBGMNV thu thập 46 4.2 Kết xử lý TBGMNV 48 4.2.1 Số lƣợng đơn vị TBGMNV đƣợc lƣu trữ sau xử lý 48 4.2.2 Kết trình giảm thể tích khối TBGMNV 49 4.2.3 Kết giảm thể tích loại bỏ hồng cầu sau xử lý 50 4.2.4 Số lƣợng bạch cầu trƣớc sau xử lý 50 4.2.5 Số lƣợng TBN tế bào đơn nhân túi TBGMNV trƣớc sau xử lý 51 4.2.6 Số lƣợng tế bào CD34+ sau xử lý tỷ lệ tế bào sống 51 4.2.7 Kết cấy cụm tế bào gốc máu ngoại vi 52 4.2.8 Kết cấy vi khuẩn, vi nấm 52 4.3 Thời gian lƣu trữ đông lạnh sau xử lý 53 4.4 Thời gian mọc mảnh ghép .53 Chƣơng 5: BÀN LUẬN 54 5.1 Kết thu thập tế bào gốc .54 5.1.1 Đặc điểm ngƣời cho tế bào gốc 54 5.1.2 Đặc điểm túi TBGMNV thu thập 54 5.1.3 Kết xử lý TBGMNV 55 5.1.4 Kết trình giảm thể tích khối TBGMNV 56 5.1.5 Kết giảm thể tích loại bỏ hồng cầu sau xử lý 56 vi 5.1.6 Số lƣợng bạch cầu trƣớc sau xử lý 56 5.1.7 Số lƣợng tế bào CD34+ sau xử lý tỷ lệ tế bào sống 57 5.1.8 Kết cấy cụm tế bào gốc máu ngoại vi 57 5.1.9 Kết cấy vi khuẩn, vi nấm 58 5.1.10 Thời gian mọc mảnh ghép 59 CHƢƠNG 6: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 vii ... tiêu nghiên cứu nhằm ? ?Đánh giá chất lƣợng tế bào gốc máu ngoại vi đủ tiêu chuẩn để ghép Bệnh vi? ??n Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh? ?? 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Mục tiêu tổng quát Đánh giá chất. .. lƣợng tế bào gốc máu ngoại vi đủ tiêu chuẩn để ghép Bệnh vi? ??n Truyền máu Huyết học Tp Hồ Chí Minh Mục tiêu cụ thể Xác định thể tích túi tế bào gốc máu ngoại vi Xác định tỷ lệ thông số túi tế bào gốc. .. ngành: Công nghệ sinh học Mã số : 604280 I TÊN ĐỀ TÀI: Đánh giá chất lượng tế bào gốc máu ngoại vi đủ tiêu chuẩn để ghép Bệnh vi? ??n Truyền máu Huyết học Thành phố Hồ Chí Minh II NHIỆM VỤ VÀ NỘI