Nghiên cứu tác dụng của lá chè đắng ( ilex kudingcha c j tseng) trên mô hình tự kỷ thực nghiệm gây bởi muối valproat

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA LÁ CHÈ ĐẮNG (Ilex kudingcha C J Tseng) TRÊN MƠ HÌNH TỰ KỶ THỰC NGHIỆM GÂY BỞI MUỐI VALPROAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ PHƯƠNG Mã sinh viên: 1501396 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA LÁ CHÈ ĐẮNG (Ilex kudingcha C J Tseng) TRÊN MƠ HÌNH TỰ KỶ THỰC NGHIỆM GÂY BỞI MUỐI VALPROAT Người hướng dẫn: PGS TS Phạm Thị Nguyệt Hằng TS Chử Thị Thanh Huyền Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Viện Dược liệu HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, trưởng khoa Dược lý - Sinh hóa, Viện Dược liệu Cô người trực tiếp hướng dẫn em trình nghiên cứu khoa học khoa, truyền đạt cho em định hướng, tư khoa học, giúp em tháo gỡ vướng mắc trình làm nghiên cứu hồn thành tốt khóa luận Tiếp đến, em xin gửi lời cảm ơn đến TS Chử Thị Thanh Huyền Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội Em cảm ơn cô cho em hội nghiên cứu khoa học môi trường chuyên nghiệp, bên cạnh động viên cổ vũ dìu dắt em suốt q trình thực khố luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến anh chị khoa Dược lý - Sinh hóa - Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền giúp đỡ, hướng dẫn em kỹ thuật tạo điều kiện để em hồn thành nghiên cứu thực nghiệm khoa Nhân dịp này, em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu tồn thể thầy giáo Trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian em học tập trường Cuối cùng, em gửi lời yêu thương biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên em, ủng hộ động viên em, chỗ dựa tinh thần vững cho em suốt năm tháng học tập vừa qua, để em vượt qua khó khăn bước đường Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, khóa luận cịn có nhiều thiếu sót Em mong nhận góp ý thầy cơ, bạn bè để khóa luận hồn thiện Hà Nội, ngày 19 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Đỗ Thị Phương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh tự kỷ 1.1.1 Khái niệm lịch sử nghiên cứu bệnh tự kỷ 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Triệu chứng tự kỷ 1.1.4 Nguyên nhân chế bệnh sinh 1.1.5 Phân loại tự kỷ 1.1.6 Tiêu chuẩn chẩn đoán tự kỷ 1.1.7 Điều trị 1.1.8 Các nghiên cứu tự kỷ 10 1.2 Tổng quan Chè đắng 11 1.2.1 Tên gọi, vị trí phân loại 11 1.2.2 Đặc điểm thực vật phân bố 11 1.2.3 Y học cổ truyền 12 1.2.4 Thành phần hóa học 12 1.2.5 Tác dụng dược lý 13 1.3 Tổng quan mơ hình gây tự kỷ chuột muối natri valproat 15 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Động vật thí nghiệm 18 2.1.3 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Thiết kế diễn tiến nghiên cứu 19 2.2.2 Mơ hình gây tự kỷ cho chuột thực nghiệm natri valproat 20 2.2.3 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ 20 2.2.4 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi tương tác xã hội 21 2.2.5 Đánh giá tác dụng cải thiện nhận thức chuột gây mơ hình tự kỷ 22 2.3 Phương pháp phân tích số liệu 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24 3.2 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ 24 3.2.1 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ thơng qua thử nghiệm không gian mở 24 3.1.2 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mô hình tự kỷ thơng qua thử nghiệm hoạt động tự nhiên 25 3.3 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi tương tác xã hội thông qua thử nghiệm với mê lộ ba buồng 26 3.4 Đánh giá tác dụng cải thiện nhận thức chuột gây mơ hình tự kỷ thơng qua thử nghiệm nhận diện đồ vật chuyển vị trí 27 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 30 4.1 Mơ hình gây tự kỷ cho chuột thực nghiệm natri valproat 30 4.2 Bàn luận mức liều cao chuẩn hóa CĐ sử dụng 30 4.3 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ VPA 31 4.4 Tác dụng cải thiện hành vi tương tác xã hội 32 4.5 Tác dụng cải thiện nhận thức chuột gây mơ hình tự kỷ VPA 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Viết đầy đủ theo Tiếng Anh Viết đầy đủ theo Tiếng Việt ASD Autism Spectrum Disorder Rối loạn phổ tự kỷ CĐ Ilex kudingcha C J Tseng Chè đắng Ach Acetylcholin Achetylcholin OFT Open Field Test Thử nghiệm không hian mở OLT Object Location Test Thử nghiệm thay đổi vị trí CDC Centers for Disease Control and Trung tâm Kiểm sốt Prevention Phịng ngừa bệnh tật Hoa Kỳ GABA Acid gama – aminobutyric Acid gama – aminobutyric DSM-V Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders – V LD50 LD50 10 ABA Applied Behavioral Analysis Treatment and Education of 11 TEACCH Autistic and Related Communication - Handicapped Children Cẩm nang Chẩn đoán Thống kê Rối loạn Tâm thần –V Liều gây chết 50% động vật thí nghiệm Phân tích hành vi ứng dụng Điều trị giáo dục can thiệp trẻ tự kỷ khuyết tật liên quan đến giao tiếp Phân tích hành vi ngôn ngữ 12 VBA Verbal Behaviour Analysis 13 VPA Valproic acid Acid valproic 14 W/V Weight/ Volume Khối lượng/ Thể tích 15 ASAT Aspartate aminotransferase Aspartate aminotransferase nói DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ Hình 1.1 Hình ảnh Chè đắng (Ilex kudingcha C.J Tseng)Error! Bookmark not defined Hình 2.1 Sơ đồ quy trình chiết suất cao chuẩn hóa CĐError! Bookmark not defined Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu .Error! Bookmark not defined Hình 2.3 Mơ hình khơng gian mở (OFT) Error! Bookmark not defined.1 Hình 2.4 Mơ hình đếm số lần vận động theo chiều dọc chuột máy đếm hồng ngoại .Error! Bookmark not defined Hình 2.5 Mơ hình mê lộ ba buồng Error! Bookmark not defined Hình 2.6 Mơ hình thử nghiệm nhận diện đồ vật (OLT)Error! Bookmark not Bookmark not defined Hình 3.1.Thời gian chuột vùng trung tâm phútError! defined Hình 3.2 Số lần chuột vận động theo chiều dọc 11 phútError! Bookmark not defined Hình 3.3 Thời gian chuột khám phá hộp có chứa chuột lạ hộp khơng có chứa chuột lạ Error! Bookmark not defined Hình 3.4 Thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ vật thể vị trí mới, giai đoạn luyện tập Error! Bookmark not defined Hình 3.5 Thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ vật thể vị trí mới, giai đoạn kiểm tra Error! Bookmark not defined.8 ĐẶT VẤN ĐỀ Tự kỷ nằm nhóm rối loạn phát triển tâm thần lan tỏa, xuất sớm ba năm đầu đời, kéo dài sống, đặc trưng suy giảm khả hòa nhập xã hội, suy giảm khả giao tiếp, có hành vi rập khn, lặp lại quan tâm mang tính hạn hẹp [38], [11] Kể từ mô tả y văn bệnh tự kỷ Hans Asperger từ năm 1938 hay Leo Kanner từ năm 1943 [11], [34], nhiều nghiên cứu tập trung nhằm tìm yếu tố then chốt chế bệnh sinh nhận dạng, xác định yếu tố, nguy nguyên nhân dẫn tới bệnh tự kỷ Tuy nhiên nay, chứng minh bệnh xuất liên quan đến yếu tố di truyền, môi trường tương tác gen môi trường [8], [53], nguyên nhân trực tiếp chế bệnh sinh bệnh tự kỷ chưa hoàn toàn sáng tỏ Trẻ bị rối loạn tự kỷ xuất thay đổi phát triển não, giao tiếp xã hội hành vi thường ngày gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sống trẻ Hiện nay, tự kỷ coi bệnh xã hội đại với tỷ lệ mắc tăng lên nhanh chóng tất quốc gia [38] Do chưa có biện pháp điều trị triệt để, biện pháp can thiệp có tác dụng hỗ trợ điều trị triệu chứng, thuốc điều trị triệu chứng gặp phải số vấn đề liên quan đến tác dụng phụ chi phí điều trị cao Do việc nghiên cứu phát hiện, phát triển thuốc mới, đặc biệt thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên, dược liệu lành tính vấn đề cần quan tâm nghiên cứu Chè đắng có tên khoa học Ilex kudingcha C J Tseng (Ilex latifolia) loài thân gỗ sống lâu năm mọc vùng núi đá vôi Việt Nam, phân bố chủ yếu số tỉnh Lào Cai, Lạng Sơn, Cao Bằng, Hịa Bình Ninh Bình Trong y học cổ truyền Việt Nam, Chè đắng sử dụng làm vị thuốc để loại bỏ độc tố, kháng khuẩn, giảm khát ho, ngứa mắt, mắt đỏ, đặc biệt để tăng cường tập trung cải thiện trí nhớ [40] Trong nghiên cứu tác giả Kim cộng Chè đắng bảo vệ tế bào thần kinh khỏi tổn thương thần kinh điểm thiếu máu cục chuột nhắt [49] Bên cạnh chưa có nhiều nghiên cứu tác dụng Chè đắng bệnh tự kỷ Vì lí trên, đề tài thực với mục tiêu: Đánh giá tác dụng cao chiết Chè đắng (Ilex kudingcha C J Tseng) mơ hình tự kỷ thực nghiệm gây muối valproat CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh tự kỷ 1.1.1 Khái niệm lịch sử nghiên cứu bệnh tự kỷ Bệnh tự kỷ lần đề cập đến từ năm 1900, nguồn gốc từ tiếng Hy Lạp “Autos” - “tự thân”, mô tả bệnh nhân có biểu lập, rút lui khỏi xã hội Năm 1938, Hans Asperger sử dụng thuật ngữ học Bleuler “chứng tự kỷ” mơ hình để mô tả hành vi “hội chứng tự kỷ tâm thần học”, sau gọi hội chứng Asperger Sau đến năm 1943, bác sĩ tâm thần nhi khoa Leo Kanner mô tả tự kỷ chứng rối loạn tâm thần gặp trẻ em Mơ tả nhóm trẻ có biểu phát triển khơng bình thường như: có khiếm khuyết tương tác xã hội, khiếm khuyết trình phát triển ngơn ngữ, có hành vi kỳ lạ lặp lặp lại nhiều lần, khởi phát sớm trước tuổi khái niệm “tự kỷ” đời từ [11], [34] Cho đến cuối năm 50, đặc biệt năm 60 kỷ 20 quan niệm tự kỷ thay đổi rõ rệt Những luận thuyết chất sinh học tự kỷ quan tâm Bernard Rimland (1964) số nhà nghiên cứu khác (thời kỳ 1960-1970) cho nguyên nhân tự kỷ thay đổi cấu trúc lưới bán cầu não trái, thay đổi sinh hóa chuyển hóa đối tượng Do đó, trẻ tự kỷ có khả liên kết kích thích thành kinh nghiệm thân, khơng giao tiếp thiếu khả khái quát hóa điều cụ thể Từ đó, quan niệm nhiều chuyên gia y tế chấp nhận thời gian dài bệnh lý thần kinh kèm với tổn thương chức não [11] Quan niệm dùng tận năm 1999 Hội nghị toàn quốc tự kỷ Mỹ Sau hội nghị này, chuyên gia (đặc biệt bang New York) cho tự kỷ nên xếp vào nhóm rối loạn phát triển lan tỏa Theo đó, tự kỷ hội chứng thần kinh - hành vi sinh bất thường chức hệ thần kinh gây nên rối loạn phát triển, ảnh hưởng nhiều đến kỹ giao tiếp quan hệ xã hội [11] Như vậy, hiểu biết quan niệm chất, nguyên chứng tử kỷ chưa hẳn rõ ràng có thay đổi rõ rệt nhận thức phương pháp can thiệp Cho nên trình tìm hiểu chất dạng tàn tật phát triển trẻ em tiến hành [11] 3.4 Đánh giá tác dụng cải thiện nhận thức chuột gây mơ hình tự kỷ thơng qua thử nghiệm nhận diện đồ vật chuyển vị trí Hình 3.4 Thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ vật thể vị trí mới, giai đoạn luyện tập, * p < 0,05 so sánh nhóm 27 Hình 3.5 Thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ vật thể vị trí mới, giai đoạn kiểm tra, * p < 0,05 so sánh nhóm Kết thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ vật thể vị trí Hình 3.4 Hình 3.5 cho thấy:  Ở pha luyện tập: - Khơng có khác biệt thời gian khám phá đồ vật đồ vật nhóm chuột sinh lý nhóm chuột VPA (p < 0,05) - Nhóm chuột VPA (500mg/kg) điều trị cao chuẩn hóa CĐ liều 270 mg/kg 540 mg/kg không thấy có khác biệt thời gian khám phá đồ vật đồ vật (p < 0,05)  Ở pha kiểm tra: - Với nhóm chuột sinh lý, thời gian khám phá vật vị trí tăng lên đáng kể so với thời gian khám phá vật vị trí cũ, tăng đạt ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 28 - Với nhóm chuột VPA, thời gian khám phá đồ vật vị trí đồ vật vị trí cũ khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê - Nhóm chuột VPA điều trị cao chuẩn hóa CĐ liều 270 mg/kg 540 mg/kg thời gian chuột khám phá vật vị trí tăng lên đáng kể so với thời gian chuột khám phá vật vị trí cũ Tuy nhiên có liều 540 mg/kg tăng đạt ý nghĩa thống kê 29 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Mơ hình gây tự kỷ cho chuột thực nghiệm natri valproat VPA sử dụng phổ biến giới để gây mơ hình bệnh tự kỷ động vật [52], [55] Đối tượng nghiên cứu chủ yếu sử dụng chuột cống chuột nhắt, bao gồm nhiều chủng khác chủng Wistar, Sprague Dawley, Lewis chuột cống; chủng Balb/c, CD1 chuột chuyển gen chuột nhắt [55] Thời điểm để gây mơ hình bệnh VPA chuột khác nhau, thường chia làm loại chính: chuột mang thai chuột sau sinh Ở giai đoạn chuột mang thai, thời điểm chuột mang thai từ 9-13 ngày tuổi nhiều nhà khoa học sử dụng để tiêm VPA với liều dao động khoảng từ 200-800 mg/kg Tuy nhiên, số nghiên cứu tuổi thai khác bị phơi nhiễm VPA ảnh hưởng đến kết nghiên cứu hành vi chuột [30] Sau thăm dò liều VPA khác (400 mg/kg 500 mg/kg) nhà nghiên cứu lựa chọn liều VPA tối ưu 500 mg/kg Tiếp theo, VPA (500 mg/kg) tiêm phúc mạc chuột mang thai ngày tuổi khác (12, 13, 14 16 ngày tuổi) Kết cho thấy tiêm VPA liều 500 mg/kg chuột nhắt trắng chủng Swiss albino mang thai 12-13 ngày tuổi cho kết thay đổi hành vi tốt phần kết Việc đánh giá thay đổi hành vi mơ hình chuột tự kỷ chúng tơi áp dụng mơ hình giống rối loạn hành vi thường gặp trẻ tự kỷ hành vi giao tiếp xã hội, lo lắng suy giảm trí nhớ Kết thu hồn tồn phù hợp với cơng trình nghiên cứu cơng bố trước phù hợp với biểu hội chứng tự kỷ trẻ em [52] 4.2 Bàn luận mức liều cao chuẩn hóa CĐ sử dụng Dựa vào liều dùng CĐ dân gian 12g với hiệu suất chiết 9% hệ số chuyển đổi liều từ người sang chuột nhắt 12,3 tính mức liều gần 270 mg/kg cao chuẩn hóa CĐ Sau thăm dò mức liều thấp 270 mg/kg 130 mg/kg nhóm nghiên cứu thấy khơng có tác dụng, để đảm bảo đạo đức động vật nghiên cứu đề tài khơng thực mức liều 130 mg/kg Bên cạnh đó, có số nghiên cứu CĐ có tác dụng bảo vệ tế bào thần kinh mức liều 540 mg/kg [2] Do nhóm nghiên cứu định lựa chọn hai mức liều 270 540 mg/kg để đưa vào nghiên cứu 30 4.3 Đánh giá tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ VPA Thử nghiệm khơng gian mở (The open field test) mơ hình phổ biến để đánh giá vận động chung chuột thực nghiệm Phương pháp dựa theo đặc tính vận động chuột nhắt thí nghiệm, giúp đưa mối liên hệ hành vi vận động tự nhiên với trạng thái hoảng sợ lo âu Vận động hoạt động bản, có ảnh hưởng đến nhiều hành vi khác động vật tương tác xã hội, khám phá, học tập, ghi nhớ Do đánh giá hành vi vận động tự nhiên chuột cần thiết để đánh giá hành vi khác cho kết xác tin cậy [31] Trong thử nghiệm không gian mở, chuột đặt vào trung tâm thiết bị để tự khám phá môi trường vận động tự nhiên Thông thường, chuột có xu hướng dành phần lớn thời gian hoạt động gần thành thiết bị, hành vi gọi hành vi hướng thành Trong khoảng thời gian đầu, lo lắng đóng vai trị quan trọng ảnh hưởng đến hoạt động chung hành vi hướng thành Sau đó, lo lắng ảnh hưởng đến hành vi hướng thành Khi thời gian đủ dài, chuột có xu hướng khám phá vào phần trung tâm thiết bị nhiều Có hai tiêu chí để đánh giá hành vi vận động chuột quãng đường di chuyển thời gian đánh giá thời gian chuột khám phá vùng trung tâm vùng bên [31] Kết nghiên cứu cho thấy hoạt động vận động tự nhiên môi trường mở chuột thể thời gian vào vùng trung tâm khơng có khác biệt nhóm chuột sinh lý so với nhóm chuột VPA, VPA không ảnh hưởng đến hoạt động vận động nói chung Tác giả Đào Thu Hồng nghiên cứu chuột nhắt phơi nhiễm với VPA mức liều 500 mg/kg ngày 12 thai kỳ nhận thấy nhóm chuột sinh khơng thể khác biệt hoạt động vận động môi trường mở so với nhóm chứng [12] Tuy nhiên sử dụng cao chuẩn hóa CĐ liều 540 mg/kg nhóm chuột VPA thấy thời gian chuột vùng trung tâm có tăng lên so với nhóm sinh lý nhóm bệnh lý, thể cải thiện khả quan tâm, khả khám phá giảm mức độ lo lắng hoảng sợ chuột Bên cạnh đó, thơng số để đánh giá khả tìm hiểu, khám phá chuột cịn thể hoạt động cách đứng chân sau để kiểm tra môi trường xung quanh [31] Thông số thường tiến hành ghi lại mơ hình OFT, nghiên cứu trước giảm số lần đứng hai chân sau chuột dấu hiệu tăng lo âu chuột [25] Thông số đứng hai chân sau 31 chuột áp dụng để làm rõ ràng hành vi hoảng sợ thể hành vi vận động bình thường Kết thử nghiệm cho thấy số lần chuột vận động theo chiều dọc nhóm chuột VPA thấp 2,2 lần so với nhóm chuột sinh lý Chứng tỏ mơ hình thành công việc gây lo lắng, hoảng sợ nhóm chuột VPA Trong nghiên cứu Marcos Campolongo cộng sự, tiến hành nghiên cứu hạn chế tương tác cộng đồng chuột bị ảnh hưởng natri valproat từ chuột mẹ, cho thấy kết gây lo lắng chuột môi trường khác nhau, thể qua thông số đứng hai chân sau để tìm kiếm quan sát mơi trường xung quanh [21] Cịn với nhóm chuột VPA điều trị cao chuẩn hóa CĐ liều 270 mg/kg 540 mg/kg cân nặng số lần chuột vận động theo chiều dọc có tăng đạt ý nghĩa thống kê so với nhóm chuột VPA Như cho thấy cao chiết chuẩn hóa CĐ với liều 270 mg/kg 540 mg/kg thể tác dụng giải lo âu chuột gây mơ hình tự kỷ VPA Lo lắng triệu chứng thường gặp trẻ tự kỷ, trẻ có hành vi định hình, mối quan tâm bị thu hẹp, khả tìm hiểu khám phá bị hạn chế [11], [4] Điều ảnh hưởng lớn đến phát triển trẻ Từ kết luận cao chuẩn hóa CĐ với mức liều 270 mg/kg 540 mg/kg có tác dụng cải thiện triệu chứng tự kỷ 4.4 Tác dụng cải thiện hành vi tương tác xã hội Tính cộng đồng yếu tố thiết yếu động vật có tập tính sống bầy đàn, đa phần động vật có vú, bao gồm người Nhiều loài động vật gặm nhấm có chuột nhắt chứng minh có tương tác xã hội mạnh mẽ tự nhiên đo lường hành vi xã hội phịng thí nghiệm Có thể sử dụng mê lộ ba buồng để nghiên cứu hành vi xã hội chuột Xu hướng chuột dành thời gian buồng có chuột lạ nhiều tiếp xúc với hộp lưới chứa chuột lạ nhiều Chuột dành nhiều thời gian buồng trung tâm buồng không chứa chuột lạ phản ánh suy giảm tương tác xã hội Bài tập thường dùng để đánh giá xu hướng xã hội trí nhớ xã hội chuột [26] Kết nghiên cứu cho thấy, phiên kiểm tra thời gian tiếp xúc với hộp lưới chứa chuột giới nhóm chuột sinh lý cao đạt ý nghĩa thống kê so 32 sánh với thời gian tương tác với hộp lưới khơng có chuột Ngược lại, nhóm chuột VPA thời gian tương tác hai hộp có chuột khơng có chuột khơng có khác Những kết cho thấy tác động làm suy giảm tương tác nhận thức xã hội phơi nhiễm VPA trước sinh so với nhóm chứng Kết có tương đồng với kết nghiên cứu trước ảnh hưởng phơi nhiễm VPA trước sinh [12] Tiếp đó, nhóm chuột VPA điều trị cao chuẩn hóa CĐ liều 270 mg/kg 540 mg/kg thấy với liều 540 mg/kg thời gian tương tác với hộp có chứa chuột tăng cao có ý nghĩa so với hộp khơng chứa chuột Như vậy, kết luận cao chuẩn hóa CĐ liều 540 mg/kg có tác dụng cải thiện hành vi tương tác xã hội Sự suy giảm tương tác xã hội giao tiếp tiêu chí cốt lõi bệnh nhân tự kỷ Trẻ bị tự kỷ có khó khăn lớn việc kết bạn, trì tình bạn tiếp thu luật lệ xã hội Trẻ khởi xướng, bắt đầu làm quen, khó tiếp nhận người bạn Trẻ quan tâm khơng có nhu cầu chia xẻ hứng thú, nhu cầu hoạt động với bạn bè người xung quanh Ngược lại, chia sẻ, trẻ đáp ứng, thể tình cảm quan tâm với đối tác [11], [4] Từ kết thử nghiệm kết luận cao chuẩn hóa CĐ liều 540 mg/kg có tác dụng cải thiện triệu chứng tự kỷ 4.5 Tác dụng cải thiện nhận thức chuột gây mơ hình tự kỷ VPA Mơ hình nhận diện đồ vật thay đổi vị trí (OLT) mơ hình sử dụng phổ biến để nghiên cứu chế thần kinh nằm hình thành trí nhớ ngắn dài hạn Trong nghiên cứu này, mơ hình OLT thiết kế để đánh giá trí nhớ ngắn hạn Những chuột bình thường dành nhiều thời gian để khám phá vật thể di chuyển (vị trí mới) so với vật thể khơng di chuyển (vị trí cũ), chuột suy giảm trí nhớ khơng có khác biệt thời gian khám phá đồ vật vị trí cũ Kết chứng minh nghiên cứu trước [56] Trong thử nghiệm OLT, tiến hành qua hai giai đoạn Giai đoạn tập luyện nhằm mục đích cho chuột làm quen với vật thể vật thể tạo trí nhớ vị trí đồ vật ngắn hạn Ở giai đoạn kiểm tra hai vật thay đổi sang vị trí Kết thử nghiệm cho thấy giai đoạn luyện tập, hai vị trí vật thể vật thể so với chuột, thời gian khám phá hai vật thể tất 33 nhóm chuột Đến giai đoạn kiểm tra, kết cho thấy nhóm chuột sinh lý có thời gian khám phá vật thể vị trí so với vị trí cũ cao đạt ý nghĩa thống kê Trong đó, nhóm chuột VPA có thời gian khám phá hai vật thể khơng khác biệt Sau điều trị cao chuẩn hóa CĐ liều 540 mg/kg cho nhóm chuột VPA thấy thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cao đạt ý nghĩa thống kê so với thời gian chuột khám phá vật thể vị trí cũ Do cao chuẩn hóa CĐ liều 540 mg/kg có tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn chuột tự kỷ gây bệnh VPA Những nghiên cứu trước liên quan Acetylcholin (ACh) tới nhiều trình hoạt động thần kinh nhận thức, ghi nhớ, giải phóng chất dẫn truyền thần kinh [19], [47], [51], bên cạnh nhiều trường hợp ASD người ta thấy điều hồ ACh q trình dẫn truyền thần kinh phát triển não bộ, hình thành hành vi bệnh lý tự kỷ [47], [51], [43] Donepezil chất đối kháng cholinesterase gắn thuận nghịch vào cholinesterase acetylcholinesterase làm bất hoạt chất ức chế thủy phân acetylcholin Trong nghiên cứu tác giả Kim cộng chứng minh tác dụng Donepezil giúp cải thiện hành vi ghi nhớ vị trí đồ vật chuột mơ hình tự kỷ gây VPA [35] Kết hợp với kết đề tài đưa giả thuyết cao chuẩn hóa CĐ giúp cải thiện trí nhớ chuột gây mơ hình VPA thơng qua tăng cường hệ cholinergic Hiện chưa có nghiên cứu giới đánh giá tác dụng Chè đắng việc cải thiện hành vi tự kỷ mơ hình chuột thực nghiệm Do đề tài hướng nghiên cứu mới, bước đầu kết luận rằng: cao chiết chuẩn hóa CĐ có tác dụng cải thiện hành vi tự kỷ mơ hình chuột tự kỷ thực nghiệm gây muối natri valproat 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau trình nghiên cứu, đề tài thu kết luận Chè đắng (Ilex kudingcha C J Tseng) có tác dụng cải thiện triệu chứng tự kỷ mơ hình tự kỷ thực nghiệm gây muối natri valproat Bao gồm tác dụng: - Giải lo âu liều 270 mg/kg 540 mg/kg - Cải thiện hành vi tương tác xã hội liều 540 mg/kg - Cải thiện trí nhớ - nhận thức liều 540 mg/kg Kiến nghị Vì thời gian thực đề tài có hạn nên kết bước đầu, đóng góp phần nhỏ cơng trình nghiên cứu tác dụng Chè đắng điều trị tự kỷ Do chúng tơi đưa số kiến nghị sau: - Đánh giá riêng tác dụng thành phần cao chuẩn hóa CĐ để xác định thành phần thể tác dụng hội chứng tự kỷ - Tiến hành nghiên cứu tìm hiểu chế làm rõ đích tác dụng cụ thể thành phần cao chuẩn hóa Chè đắng 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Nữ Tâm An (2007), Sử dụng phương pháp TEACCH giáo dục trẻ Tự kỷ Hà Nội, Luận văn Thạc sỹ, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Trần Thị Diệu Anh (2009), "Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng saponin chè đắng (Ilex kaushue S.Y Hu) thu hái Cao Bằng", Luận văn thạc sĩ dược học, Trường đại học Dược Hà Nội Nguyễn Tiến Bân , Khôi Nguyễn Khắc (1999), "Tên khoa học chè đắng Việt Nam", Tạp chí Sinh học, 21, tr 1-3 Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị số bệnh thường gặp trẻ em, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 731-738 Bộ Y Tế (2018), Dược thư quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 140-143 Ngô Xuân Điệp (2007), "Tổng hợp phương pháp trị liệu trẻ tự kỷ", Hội thảo Can thiệp phòng ngừa vấn đề sức khỏe tinh thần trẻ em Việt Nam Ngô Xuân Điệp (2008), "Nhận thức trẻ tự kỷ"", Tạp chí Tâm lý học, 10(115), tr 48-55 Phan Thiệu Xuân Giang (2010), "Trẻ tự kỷ", www.tamlyhocthankinh.com, truy cập ngày 06 tháng 02, 2020 Nơng Đình Hải, cộng (2001), "Nghiên cứu định tính, định lượng số nhóm chất chè đắng (Ilex kaushue S Y Hu)", Tạp chí Dược liệu, 6, tr 3-6 10 Phạm Thị Nguyệt Hằng, cộng (2015), "Tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ cao chiết rau đắng biển mơ hình chuột nhắt tự kỷ thực nghiệm gây muối valproat", Tạp chí Dược liệu, 4, tr 241-247 11 Vũ Thị Bích Hạnh (2007), Tự kỷ, phát sớm can thiệp sớm, Nhà xuất Y học, Hà Nội 12 Đào Thu Hồng (2003), Nghiên cứu xây dựng mô hình thực nghiệm bệnh tự kỷ Natri Valproat tác dụng cải thiện thành vi môi trường phong phú chuột nhắt trắng, Luận án Tiến sỹ Y học, Trường Học Viện Quân Y 13 Nguyễn Thị Mai Hương (2015), "Nghiên cứu thành phần hóa học khả cải thiện hội chứng tự kỷ thực nghiệm phân đoạn n-Butanol từ cao chiết Ethanol Rau Đắng Biển Bacopa monnieri (L.) Wettst", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học, Trường đại học Dược Hà Nội 14 Đặng Thị Mai Huy (2003), "Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học chè đắng (Ilex kaushue S Y Hu) ", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học, Trường đại học Dược Hà Nội 15 Phạm Thị Bích Phượng, cộng (2019), "Nghiên cứu tác dụng điều trị tự kỷ cao chiết saponin Chè Đắng (Ilex kudingcha C.J.Tseng) mô hình ruồi giấm chuyển gen", Hội nghị KHCN tuổi trẻ trường Đại học Dược Hà Nội – Lần thứ XX 16 Sở Khoa học công nghệ môi trường tỉnh Cao Bằng (2002), "Cây Chè đắng giá trị kinh tế kỹ thuật trồng", Tài liệu phổ biến KHKT, 1, tr 8-12 17 Nguyễn Hữu Sơn (2019), "Nghiên cứu tác dụng bước đầu nghiên cứu chế hóa sinh cao chiết saponin Chè Đắng (Ilex kudingcha C.J.Tseng) mô hình ruồi giấm chuyển gen gây bệnh Alzheimer", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học, Trường đại học Dược Hà Nội 18 Nông Thanh Sơn, cộng (2001), "Nghiên cứu tác dụng dịch chiết chè đắng nhiễm độc 2,4 D động vật thực nghiệm", Nội san Khoa học Công nghệ Y Dược miền núi, 2, tr 18-36 Tiếng anh 19 Barnes Carol A, Meltzer J, et al (2000), "Chronic treatment of old rats with donepezil or galantamine: effects on memory, hippocampal plasticity and nicotinic receptors", Neuroscience, 99(1), pp 17-23 20 Belzung Catherine, Leman Samuel, et al (2005), "Rodent models for autism: a critical review", Drug discovery today: Disease models, 2(2), pp 93-101 21 Campolongo Marcos, Kazlauskas Nadia, et al (2018), "Sociability deficits after prenatal exposure to valproic acid are rescued by early social enrichment", Molecular autism, 9(1), pp 36 22 Casas Kari A, Mononen Tarja K, et al (2004), "Chromosome 2q terminal deletion: report of new patients and review of phenotype‐breakpoint correlations in 66 individuals", American Journal of Medical Genetics Part A, 130(4), pp 331-339 23 Chomiak Taylor, Turner Nathanael, et al (2013), "What we have learned about autism spectrum disorder from valproic acid", Pathology research international 24 Christensen Jakob, Grønborg Therese Koops, et al (2013), "Prenatal valproate exposure and risk of autism spectrum disorders and childhood autism", Jama, 309(16), pp 1696-1703 25 Costall B, Jones BJ, et al (1989), "Exploration of mice in a black and white test box: validation as a model of anxiety", Pharmacology Biochemistry and Behavior, 32(3), pp 777-785 26 Crawley Jacqueline N (2007), "Mouse behavioral assays relevant to the symptoms of autism", Brain pathology, 17(4), pp 448-459 27 day United Nations World autism awareness, Retrieved http://www.un.org/en/events/autismday/background.shtml, February 01 2020 28 Dykens Elisabeth M, Sutcliffe James S, et al (2004), "Autism and 15q11‐q13 disorders: Behavioral, genetic, and pathophysiological issues", Mental retardation and developmental disabilities research reviews, 10(4), pp 284291 29 Gharani N, Benayed R, et al (2004), "Association of the homeobox transcription factor, ENGRAILED 2, 3, with autism spectrum disorder", Molecular psychiatry, 9(5), pp 474-484 30 Gottfried Carmem, Bambini-Junior Victorio, et al (2013), "Valproic acid in autism spectrum disorder: from an environmental risk factor to a reliable animal model", Recent Advances in Autism Spectrum Disorders-Volume I, IntechOpen 31 Gould TD, Dao DT, et al (2009), "The open field test Mood and anxiety related phenotypes in mice", Neuromethods, 42, pp 1-20 32 Hao Dacheng, Gu Xiaojie, et al (2013), "Research progress in the phytochemistry and biology of Ilex pharmaceutical resources", Acta Pharmaceutica Sinica B, 3(1), pp 8-19 33 Ingram Jennifer L, Peckham Stacey M, et al (2000), "Prenatal exposure of rats to valproic acid reproduces the cerebellar anomalies associated with autism", Neurotoxicology and teratology, 22(3), pp 319-324 34 Kanner Leo (1943), "Autistic disturbances of affective contact", Nervous child, 2(3), pp 217-250 35 Kim Ji-Woon, Seung Hana, et al (2014), "Subchronic treatment of donepezil rescues impaired social, hyperactive, and stereotypic behavior in valproic acidinduced animal model of autism", PloS one, 9(8), pp 36 Kim Joo Youn, Jeong Ha Yeon, et al (2011), "Protective effect of Ilex latifolia, a major component of “kudingcha”, against transient focal ischemia-induced neuronal damage in rats", Journal of ethnopharmacology, 133(2), pp 558-564 37 Kolozsi E, Mackenzie RN, et al (2009), "Prenatal exposure to valproic acid leads to reduced expression of synaptic adhesion molecule neuroligin in mice", Neuroscience, 163(4), pp 1201-1210 38 Kopetz Patricia B, Endowed E Desmond Lee (2012), "Autism worldwide: Prevalence, perceptions, acceptance, action", Journal of social Sciences, 8(2), pp 196 39 Li Li, Peng Yong, et al (2012), "Quantitative Analysis of Five Kudinosides in the Large‐leaved Kudingcha and Related Species from the Genus Ilex by UPLC–ELSD", Phytochemical analysis, 23(6), pp 677-683 40 Li Li, Xu Li J, et al (2013), "The large-leaved Kudingcha (Ilex latifolia Thunb and Ilex kudingcha CJ Tseng): a traditional Chinese tea with plentiful secondary metabolites and potential biological activities", Journal of natural medicines, 67(3), pp 425-437 41 Li Li, Xu Lijia, et al (2011), "Comparison of green tea and four other kind of teas", Zhongguo Zhong yao za zhi= Zhongguo zhongyao zazhi= China journal of Chinese materia medica, 36(1), pp 5-10 42 Markram Kamila, Rinaldi Tania, et al (2008), "Abnormal fear conditioning and amygdala processing in an animal model of autism", Neuropsychopharmacology, 33(4), pp 901-912 43 Mikhail Fady M, Lose Edward J, et al (2011), "Clinically relevant single gene or intragenic deletions encompassing critical neurodevelopmental genes in patients with developmental delay, mental retardation, and/or autism spectrum disorders", American journal of medical genetics Part A, 155(10), pp 23862396 44 Miles Judith H (2011), "Autism spectrum disorders—a genetics review", Genetics in Medicine, 13(4), pp 278-294 45 Ospina Maria B, Seida Jennifer Krebs, et al (2008), "Behavioural and developmental interventions for autism spectrum disorder: a clinical systematic review", PloS one, 3(11) 46 Park Hye Ran, Lee Jae Meen, et al (2016), "A short review on the current understanding of autism spectrum disorders", Experimental neurobiology, 25(1), pp 1-13 47 Picciotto Marina R, Higley Michael J, et al (2012), "Acetylcholine as a neuromodulator: cholinergic signaling shapes nervous system function and behavior", Neuron, 76(1), pp 116-129 48 Rice Catherine (2009), "Prevalence of autism spectrum disorders Autism and developmental disabilities monitoring network, United States, 2006" 49 Rosenberg Rebecca E, Law J Kiely, et al (2009), "Characteristics and concordance of autism spectrum disorders among 277 twin pairs", Archives of pediatrics & adolescent medicine, 163(10), pp 907-914 50 Rossignol Daniel A (2009), "Novel and emerging treatments for autism spectrum disorders: a systematic review", Ann Clin Psychiatry, 21(4), pp 213236 51 Sarter Martin, Bruno John P (2004), "Developmental origins of the age-related decline in cortical cholinergic function and associated cognitive abilities", Neurobiology of aging, 25(9), pp 1127-1139 52 Schneider Tomasz, Roman Adam, et al (2008), "Gender-specific behavioral and immunological alterations in an animal model of autism induced by prenatal exposure to valproic acid", Psychoneuroendocrinology, 33(6), pp 728740 53 Shaw CA, Sheth S, et al (2014), "Etiology of autism spectrum disorders: genes, environment, or both", OA Autism, 2(2), pp 11 54 Szatmari Peter, Jones Marshall B, et al (1998), "Genetics of autism: overview and new directions", Journal of autism and developmental disorders, 28(5), pp 351-368 55 Takumi Toru (2010), "A humanoid mouse model of autism", Brain and Development, 32(9), pp 753-758 56 Volkmar Fred R, Lord Catherine, et al (2004), "Autism and pervasive developmental disorders", Journal of child psychology and psychiatry, 45(1), pp 135-170 57 Wassink Thomas H, Brzustowicz Linda M, et al (2004), "The search for autism disease genes", Mental retardation and developmental disabilities research reviews, 10(4), pp 272-283 58 Weiss Lauren A, Shen Yiping, et al (2008), "Association between microdeletion and microduplication at 16p11 and autism", New England Journal of Medicine, 358(7), pp 667-675 59 Williams Gail, King John, et al (2001), "Fetal valproate syndrome and autism: additional evidence of an association", Developmental medicine and child neurology, 43(3), pp 202-206 60 Zhang CK (1994), "Survey of Kudingcha original plant and commodity", Chin Herbal Med, 17, pp 13-14 61 Zhou Jie, Yi Huan, et al (2018), "Simultaneous qualitative and quantitative evaluation of Ilex kudingcha CJ tseng by using UPLC and UHPLC-qTOFMS/MS", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 155, pp 15-26 62 Zhu LF, Li MZ, et al (1994), "The cardiovascular pharmacological research on Kudingcha", J Chin Med Mater, 17, pp 37-40 ... c? ??nh chưa c? ? nhiều nghiên c? ??u t? ?c dụng Chè đắng bệnh tự kỷ Vì lí trên, đề tài th? ?c với m? ?c tiêu: Đánh giá t? ?c dụng cao chiết Chè đắng (Ilex kudingcha C J Tseng) mơ hình tự kỷ th? ?c nghiệm gây muối. .. Sau trình nghiên c? ??u, đề tài thu kết luận Chè đắng (Ilex kudingcha C J Tseng) c? ? t? ?c dụng c? ??i thiện triệu chứng tự kỷ mơ hình tự kỷ th? ?c nghiệm gây muối natri valproat Bao gồm t? ?c dụng: - Giải... [14]  T? ?c dụng chống đ? ?c C? ?c t? ?c giả trường Đại h? ?c Y Thái Nguyên thử t? ?c dụng dịch chiết C? ? mô hình chuột bị gây đ? ?c dioxin (2 ,4D) Kết cho thấy dịch chiết C? ? c? ? t? ?c dụng giảm 20-40% t? ?c động