NGUYÊN NHÂN và PHƯƠNG PHÁP KHẮC PHỤC HIỆN TƯỢNG KHÓ bóc TÁCH tấm BIỂU mô NIÊM mạc MIỆNG NUÔI cấy

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI DIÊM THỊ YẾN NGUYÊN NHÂN VÀ PHƯƠNG PHÁP KHẮC PHỤC HIỆN TƯỢNG KHÓ BÓC TÁCH TẤM BIỂU MÔ NIÊM MẠC MIỆNG NUÔI CẤY ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN BÁC SĨ NỘI TRÚ HÀ NỘI - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI DIÊM THỊ YẾN NGUYÊN NHÂN VÀ PHƯƠNG PHÁP KHẮC PHỤC HIỆN TƯỢNG KHÓ BÓC TÁCH TẤM BIỂU MÔ NIÊM MẠC MIỆNG NUÔI CẤY Chuyên ngành: Mô - Phôi Thai Học Mã số: 62720101 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN BÁC SĨ NỘI TRÚ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Bình ThS Đào Thị Thúy Phượng HÀ NỘI - 2015 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 3T3 ABCG BSA BrdU C-GAG CGC DMEM DMSO EDTA EGF FBS FCS FGF GAG HGF HLA IL KGF KHV LSCD OCT P.A.S PBS PCR PDGF SEM SHEM TGF HIV 3-day transfer, inoculum 3x105 cells ATP-binding cassette subfamily G member Bovine serum albumin 5-Bromo-2-deoxyuridine Collagen-glycosaminoglycan Collagen-glycosaminoglycanchitosan Dulbecco's modified eagle's medium Dimethyl sulfoxide Ethylenediaminetetraacetic acid Epithelial growth factor Fetal bovine serum Fetal caft serum Fibroblast growth factor Glycosaminoglycan Hepatocyte growth factor Human leukocyte antigen Interleukin Keratinocyte growth factor Limbal stem cell deficiency Optical coherence tomography Periodic acid Shiff Phosphate buffer saline Polymerase chain reaction Plate derive growth factor Scanning electron microscope Supplemental hormonal epithelial medium Transformer growth factor Human immunodeficiency virus Albumin huyết bị Yếu tố phát triển biểu mơ Huyết bào thai bò Huyết bào thai bò Yếu tố phát triển nguyên bào sợi Yếu tố phát triển tế bào gan Kháng nguyên bạch cầu người Chất tương tác tế bào Yếu tố phát triển tế bào sừng Kính hiển vi Suy giảm tế bào gốc vùng rìa Phản ứng khuếch đại chuỗi Yếu tố phát triển có nguồn gốc tiểu cầu Kính hiển vi điện tử qt Mơi trường ni cấy biểu mơ có bổ sung hormon Yếu tố phát triển chuyển dạng Vi rút gây suy giảm miễn dịch người MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Cấu trúc niêm mạc khoang miệng .3 1.2.Ứng dụng lâm sàng biểu mô niêm mạc miệng .5 1.2.1.Ứng dụng lâm sàng lính vực nhãn khoa 1.2.2.Ứng dụng lâm sàng lĩnh vực khác 1.3.Nghiên cứu nuôi tạo biểu mô niêm mạc miệng 1.3.1.Các phương phá p nuôi cấy 1.3.1.1.Nuôi cấy dịch treo .8 1.3.2.Các loại giá thể dùng nuôi cấy 13 1.3.3.Lớp tế bào nuôi 16 1.3.4.Môi trường nuôi cấy 19 1.3.5.Định danh tế bào biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.2.Phương pháp nuôi tạo biểu mô .23 Nuôi mảnh biểu mô với lớp tế bào nuôi nguyên bào sợi tự thân Lớp tế bào nuôi nuôi theo cách khác nhau: 23 2.2.6.Quy trình trích thủ xử lý mảnh niêm mạc miệng cho nuôi cấy 25 2.2.9.Quy trình ni cấy theo dõi 26 2.2.10.Thu hoạch định danh tế bào nuôi cấy 28 2.2.10.1.Thu hoạch 28 2.2.10.2.Định danh tế bào 28 2.4.Địa điểm thời gian nghiên cứu 30 2.5.Thiết kế nghiên cứu 31 2.6.Đạo đức nghiên cứu 31 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ 32 3.1.Kết nuôi tạo biểu mô niêm mạc miệng phương pháp nuôi mảnh biểu mô 32 3.1.1.Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng 32 3.1.2.Chất lượng biểu mô niêm mạc miệng ni cấy 33 3.2.Hình thái tốc độ phát triển tế bào biểu mô niêm mạc miệng 33 3.3.Hình thái tốc độ phát triển lớp nguyên bào sợi 35 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 37 4.1 Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng phương pháp mảnh biểu mô 37 4.2 Chất lượng biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy .37 Tỷ lệ biểu mô niêm mạc miệng ni cấy dễ bóc khó bóc 37 Vị trí đặt mảnh mô liên kết 37 Thời gian đồng nuôi cấy mảnh biểu mô lớp tế bào nuôi 37 Phương pháp tạo lớp tế bào ni tỷ lệ khó bóc tách biểu mô 37 4.6 Định danh biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy 37 Hình ảnh vi thể biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy 37 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 39 1.Nguyên nhân tượng khó bóc tách biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy 39 DỰ KIẾN KHUYẾN NGHỊ .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng .32 Bảng 3.2 Đánh giá khả bóc biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy 33 Bảng 3.3 Thời điểm tế bào biểu mô niêm mạc miệng bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô .33 Bảng 3.4 Thời điểm tế bào biểu mơ niêm mạc miệng mọc kín đáy lồng nuôi cấy 34 Bảng 3.5 Thời điểm nguyên bào sợi bắt đầu mọc 35 Bảng 3.6 Thời điểm nguyên bào sợi mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy .35 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Q trình biệt hóa tế bào niêm mạc miệng [11] Hình 2.1 Mơ hình nghiên cứu 23 Hình 2.2 Mơ hình ni cấy mảnh biểu mơ mảnh mơ liên kết27 Hình 2.3 Mơ hình ni cấy mảnh biểu mô lớp dịch treo nguyên bào sợi tự thân 27 Hình 3.1 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy lô (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) .32 Hình 3.2 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy lô (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) .32 Hình 3.3 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy lô .32 (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) .32 Hình 3.4 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy lô (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) .33 Hình 3.5 Cấu trúc siêu vi biểu mơ ni cấy khó bóc khỏi đáy lồng ni cấy 33 Hình 3.6 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô .34 Hình 3.7 Tế bào biểu mô niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô .34 Hình 3.8 Tế bào biểu mô niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô .34 Hình 3.9 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô .34 Hình 3.10 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng ni cấy 34 Hình 3.11 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng nuôi cấy 35 Hình 3.12 Tế bào biểu mô niêm mạc miệng lô mọc kín đáy lồng ni cấy 35 Hình 3.13 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng ni cấy 35 Hình 3.14 Nguyên bào sợi lô 1bắt đầu mọc 35 Hình 3.15 Ngun bào sợi lơ bắt đầu mọc 35 Hình 3.16 Nguyên bào sợi lô bắt đầu mọc 35 Hình 3.17 Nguyên bào sợi lô bắt đầu mọc 35 Hình 3.18 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy 36 Hình 3.19 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy 36 Hình 3.20 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy 36 Hình 3.21 Ngun bào sợi lơ mọc thành lớp mỏng đáy giếng nuôi cấy 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Bề mặt nhãn cầu toàn vẹn ổn định điều kiện để đảm bảo cho thị lực tốt Sự toàn vẹn trì nhờ sinh sản di cư tế bào gốc vùng rìa Tuy nhiên, tế bào bị tổn thương yếu tố bên ngồi (bỏng nhiệt, bỏng hóa chất, nhiễm vi sinh vật, tia cực tím, ), hay bệnh lý thể bao gồm bệnh hệ thống (Hội chứng Stevens Johnson) bệnh lý di truyền (tật không mống mắt) Tùy thuộc vào mức độ tổn thương mà dẫn đến thiếu hụt tế bào gốc vùng rìa (LSCD-limbal stem cell deficiency) hai bên [1] Hậu chứng khô mắt, khó chịu cho bệnh nhân, kết mạc hóa bề mặt nhãn cầu, tăng sinh mạch, theo thời gian tiến triển đến mờ đục giác mạc cuối mù lòa [2] Suy giảm tế bào gốc vùng rìa điều trị nhiều phương pháp khác ghép màng ối, liệu pháp oxy, liệu pháp corticoid, ghép mảnh mơ vùng rìa trực tiếp biểu mơ ni cấy từ vùng rìa, [1] Nhưng biện pháp kể áp dụng cho trường hợp LSCD nhẹ bên mắt Đối với trường hợp LSCD toàn hai bên phải sử dụng mảnh ghép biểu mơ vùng rìa có nguồn gốc đồng loại tử thi Để tránh tượng thải bỏ mảnh ghép, bệnh nhân cần điều trị ức chế miễn dịch thời gian dài Các tác dụng phụ thuốc ức chế miễn dịch làm ảnh hưởng đến chất lượng sống bệnh nhân Ngoài ra, biện pháp địi hỏi chi phí điều trị cao, người ghép có khả nhiễm số bệnh lây truyền từ mảnh ghép đồng loại mà có nguy bị thải bỏ mảnh ghép Vì vậy, việc sử dụng mảnh ghép từ mô tự thân nghiên cứu phát triển Do biểu mô giác mạc loại biểu mơ lát tầng khơng sừng hóa, tương tự cấu trúc biểu mô vùng niêm mạc miệng, mũi, thực quản, trực tràng, âm đạo, nên mảnh mơ vị trí coi lựa chọn thay tốt cho trường hợp không sử dụng mảnh ghép từ vùng rìa đồng loại [2] Thực tế, 10 năm qua, có nhiều nghiên cứu sử dụng mơ tế bào gốc tự thân để điều trị LSCD, bao gồm tế bào gốc phôi, tế bào biểu mô kết mạc, tế bào gốc biểu bì, tế bào gốc tủy răng, tế bào gốc trung mô, tế bào gốc nang lông, tế bào gốc dây rốn Trong số đó, biểu mơ ni cấy từ tế bào gốc niêm mạc miệng sử dụng rộng rãi tồn giới, tính sẵn có niêm mạc miệng việc lấy mảnh niêm mạc miệng đơn giản mà không cần đến phẫu thuật, vết sinh thiết liền nhanh không để lại sẹo [1], [3] Để nuôi tạo biểu mô từ tế bào gốc biểu mô niêm mạc miệng nghiên cứu sử dụng lớp tế bào ni 3T3 (3-day transfer, inoculum 3x10 cells) có nguồn gốc từ chuột Tuy nhiên, vấn đề đáng lo ngại xuất yếu tố dị lồi biểu mơ ni cấy Sau nhiều năm nghiên cứu môn Mô - Phôi trường Đại học Y Hà Nội nghiên cứu thành cơng quy trình nuôi tạo biểu mô từ tế bào gốc niêm mạc miệng sử dụng lớp tế bào nuôi tự thân Trong q trình ni cấy, đơi xảy tượng khó bóc tách biểu mơ khỏi đáy lồng nuôi cấy, điều ảnh hưởng tới chất lượng biểu mô ghép lại cho bệnh nhân [4] Vấn đề chưa nhắc đến nghiên cứu trước Mong muốn khắc phục tồn đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Ngun nhân phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy” với mục tiêu: Tìm ngun nhân gây khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy Nghiên cứu phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy 28  Quy trình tạo tầng • Khoảng ngày thứ 12 ni cấy, thấy tế bào biểu mơ mọc kín đáy lồng nuôi cấy, tiến hành tạo tầng cho biểu mô • Bơm môi trường vào giếng nuôi cấy lồng ni cấy • Hút hết mơi trường lồng ni cấy bỏ đi, tế bào biểu mô tiếp xúc với khơng khí • Đặt giếng ni cấy tủ ấm 37oC, 5% CO2 • Thay mơi trường giếng nuôi cấy hàng ngày 2.2.10 Thu hoạch định danh tế bào nuôi cấy 2.2.10.1 Thu hoạch Sau ni cấy biểu mơ kích thước cm 2, tiến hành thu hoạch biểu mô nuôi cấy theo quy trình sau: • Hút hết tồn mơi trường ni cấy có bổ sung 10% FBS • Rửa hai lần biểu mô nuôi cấy môi trường khơng bổ sung FBS • Cắt biểu mơ ni cấy theo chu vi lồng ni • Bóc tách biểu mô khỏi đáy lồng nuôi cấy 2.2.10.2 Định danh tế bào Tế bào biểu mô nuôi cấy định danh kỹ thuật hiển vi điện tử, hiển vi quang học, hóa mơ, hóa mơ miễn dịch a Nhuộm giemsa Mục đích: quan sát bề mặt biểu mơ ni cấy • Tấm biểu mô vừa lấy khỏi giếng nuôi cấy trải thẳng lên lam kính • Cố định cồn tuyệt đối phút • Rửa lại nước thường • Chuẩn bị giemsa 10% pha nước cất • Nhuộm giemsa 10 phút • Rửa lam kính vịi nước chảy • Để khơ, dán lamella, sau kiểm tra kính b Nhuộm Hematoxylin-Eosin Mục đích: quan sát mặt cắt đứng biểu mơ 29 • Tấm biểu mơ vừa lấy khỏi giếng cố định dung dịch formol 10% 1-2 • Khử nước cồn 700, 800, 900, 950, 1000 • Làm miếng mơ cách ngâm qua ba lọ xylen • Đúc miếng mơ khn nến • Cắt mẫu thành lát mng 5-7àm ã Nhum mu theo phng phỏp HE ã Quan sát kính hiển vi quang học c Kỹ thuật hóa mơ (nhuộm P.A.S - Periodic acid Shiff) Mục đích: phát có mặt tế bào hình đài tiết nhày biểu mơ ni cấy • Một phần biểu mô cố định dung dch carnoy v ct thnh nhng lỏt mng 5-7àm ã Khử nến • Ngâm tiểu dung dịch acid periodic 1% 15 phút • Rửa vịi nước chảy vịng phút • Rửa lại nước cất • Ngâm tiêu vào dung dịch Shiff 30 phút, để chỗ tối • Cho vào cốc SO2, cốc phút • Nhuộm nhân Hematoxilin phút d Kỹ thuật hóa mơ miễn dịch Mục đích: xác định số loại keratin đặc hiệu thấy biểu mô niêm mạc miệng (K4, K13) P63 loại protein nhân tế bào, xuất nhiều tế bào chưa biệt hóa • Tấm biểu mô vừa lấy khỏi giếng đúc block optical • • • • coherence tomography (OCT) Sử dụng máy cắt lạnh cắt mẫu thành lát mỏng 7µm Gắn mẫu lên lam kính gelatin, để khô Rửa lại lần (5 phút/ lần) với PBS nhiệt độ phịng Để hạn chế gắn khơng đặc hiệu, mẫu ủ với dung dịch chặn BSA (bovine serum albumin) nhiệt độ phòng • Ủ với kháng thể thứ 90 phút, nhiệt độ phịng • Rửa lại PBS lần (5 phút/ lần) • Ủ với kháng thể thứ hai 30 phút, nhiệt độ phịng 30 • Rửa lại PBS lần • Phủ mơi trường chống bạc màu có chứa iode • Kiểm tra kính e Kỹ thuật hiển vi điện tử Tấm biểu mô kiểm tra kính hiển vi điện tử quét (SEMscanning electron microscope) Mục đích: quan sát cấu trúc siêu vi biểu mơ, tìm cấu trúc liên kết tế bào biểu mô với màng ối (cấu trúc mặt đáy tế bào), cấu trúc liên kết mặt màng ối • Tấm biểu mơ vừa lấy khỏi giếng nuôi cấy cố định • • • • dung dịch glutaraldehyde 2,5% pha với PBS Rửa lần 15 phút với PBS Tiếp tục cố định 30 phút dung dịch osmium tetroxide 1% Rửa lại miếng mô lần PBS Chuyển qua cồn để khử nước (500, 700, 800, 900, 950, 1000) Với SEM, miếng mô chuyển qua dung dịch hexamethyldisilazane vịng 10 phút, sau để khơ khơng khí Khi khơ, miếng mơ phủ mạ vàng, sau kiểm tra kính S-4800-Hitachi 2.3 Chỉ tiêu nghiên cứu Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô Tỷ lệ biểu mô sau nuôi cấy dễ bóc khó bóc Thời gian ni cấy Cấu trúc vi thể lớp tế bào nuôi Cấu trúc vi thể biểu mô nuôi cấy Cấu trúc siêu vi biểu mơ ni cấy Cấu trúc hóa học biểu mô nuôi cấy 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành môn Mô - Phôi trường Đại Học Y Hà Nội 31 Tháng 10/2015 – 10/ 2016 2.5 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu tiến cứu 2.6 Đạo đức nghiên cứu Đề tài thực theo quy trình xây dựng Đề tài cấp nhà nước “Nghiên cứu quy trình sử dụng tế bào gốc để điều trị số bệnh bề mặt nhãn cầu” môn Mô - Phôi, thông qua hội đồng đạo đức Y học, trường Đại Học Y Hà Nội 32 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ 3.1 Kết nuôi tạo biểu mô niêm mạc miệng phương pháp nuôi mảnh biểu mô 3.1.1 Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng Bảng 3.1 Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng Số mẫu nuôi Số mẫu mọc Tỷ lệ mọc Lô Lô Lô Lô N Hình 3.1 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy lơ (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) Hình 3.2 Tấm biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy lơ (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) Hình 3.3 Tấm biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy lô (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) p 33 Hình 3.4 Tấm biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy lô (HE, Giemsa, P.A.S, HMMD) 3.1.2 Chất lượng biểu mô niêm mạc miệng ni cấy Bảng 3.2 Đánh giá khả bóc biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy Số mẫu nuôi Số mẫu dễ bóc Số mẫu khó bóc p Lơ Lơ Lơ Lơ N Hình 3.5 Cấu trúc siêu vi biểu mơ ni cấy khó bóc khỏi đáy lồng ni cấy 3.2 Hình thái tốc độ phát triển tế bào biểu mô niêm mạc miệng Bảng 3.3 Thời điểm tế bào biểu mô niêm mạc miệng bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô Thời điểm (ngày) Lô Lô 34 Lô Lơ Hình 3.6 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mơ Hình 3.7 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mơ Hình 3.8 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mơ Hình 3.9 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lô bắt đầu mọc khỏi mảnh biểu mô Bảng 3.4 Thời điểm tế bào biểu mô niêm mạc miệng mọc kín đáy lồng ni cấy Thời điểm (ngày) Lô Lô Lô Lô Hình 3.10 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng ni cấy 35 Hình 3.11 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng ni cấy Hình 3.12 Tế bào biểu mô niêm mạc miệng lô mọc kín đáy lồng ni cấy Hình 3.13 Tế bào biểu mơ niêm mạc miệng lơ mọc kín đáy lồng ni cấy 3.3 Hình thái tốc độ phát triển lớp nguyên bào sợi Bảng 3.5 Thời điểm nguyên bào sợi bắt đầu mọc Thời điểm (ngày) Lơ Lơ Lơ Lơ Hình 3.14 Ngun bào sợi lơ 1bắt đầu mọc Hình 3.15 Ngun bào sợi lơ bắt đầu mọc Hình 3.16 Nguyên bào sợi lô bắt đầu mọc Hình 3.17 Ngun bào sợi lơ bắt đầu mọc Bảng 3.6 Thời điểm nguyên bào sợi mọc kín 1/2 đáy giếng nuôi cấy Thời điểm (ngày) 36 Lô Lơ Lơ Hình 3.18 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy Hình 3.19 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy Hình 3.20 Ngun bào sợi lơ mọc kín 1/2 đáy giếng ni cấy Hình 3.21 Ngun bào sợi lơ mọc thành lớp mỏng đáy giếng nuôi cấy 37 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 4.1 Tỷ lệ nuôi tạo thành công biểu mô niêm mạc miệng phương pháp mảnh biểu mô 4.2 Chất lượng biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy  Tỷ lệ biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy dễ bóc khó bóc  Vị trí đặt mảnh mơ liên kết  Thời gian đồng nuôi cấy mảnh biểu mô lớp tế bào nuôi  Phương pháp tạo lớp tế bào ni tỷ lệ khó bóc tách biểu mô 4.6 Định danh biểu mô niêm mạc miệng ni cấy  Hình ảnh vi thể biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy  Hình ảnh siêu vi thể biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy 38 39 DỰ KIẾN KẾT LUẬN Nguyên nhân tượng khó bóc tách biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy Phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy DỰ KIẾN KHUYẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO DỰ TỐN KINH PHÍ ĐỀ TÀI Đề tài: "Nguyên nhân phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy" Người thực đề tài: Diêm Thị Yến Đơn vị: Bác sĩ nội trú - Chuyên ngành Mô - Phôi khóa 38, Trường Đại Học Y Hà Nội Thời gian thực đề tài: 10/2015-10/2016 TT Nội dung Cơng lao động Nhuộm hóa mơ miễn dịch Nhuộm Hematoxilin -Eosin Nhuộm PAS Nhuộm Giemsa Nhập số liệu, tổng hợp, phân tích số liệu Động vật thí nghiệm Vật tư, hóa chất DMEM liquid, 1X; Đóng gói: 500ml (20 ml/mẫu) PBS, 1X, liquid; Đóng gói: 500ml (20 ml/mẫu) Đĩa Pettri nhỏ 30mm Pipette Pasteur Màng lọc 70µm Tổng kinh phí Thành Ghi tiền 3000 2000 400 200 400 ĐVT SL Đơn giá Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 20 20 500 20 50 20 Kg 20 150 3000 3000 Chai 1170 1170 Chai 1120 1120 Dây Hộp Cái 1 (Bằng chữ: chín triệu đồng chẵn) 9000 Đơn vị: nghìn đồng KẾ HOẠCH THỰC HIỆN • Thông qua đề cương: tháng 10/2015 • Bắt đầu tiến hành ni cấy: tháng 11/2015 • Từ tháng 11-1/2015: nuôi 08 biểu mô niêm mạc miệng Làm mẫu kính hiển vi điện tử • Nghỉ tết: tháng 2/2016 • Từ tháng 3-7/2016: ni 12 biểu mơ niêm mạc miệng Làm mẫu kính hiển vi điện tử • Kết thúc ni cấy: 7/2016 • Bảo vệ đề tài tốt nghiệp: 9-10/2016 ... KẾT LUẬN Nguyên nhân tượng khó bóc tách biểu mơ niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy Phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy DỰ... nhân phương pháp khắc phục tượng khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy? ?? với mục tiêu: Tìm ngun nhân gây khó bóc tách biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy khỏi đáy lồng nuôi cấy Nghiên cứu phương. .. bào ni tỷ lệ khó bóc tách biểu mô 4.6 Định danh biểu mô niêm mạc miệng ni cấy  Hình ảnh vi thể biểu mơ niêm mạc miệng ni cấy  Hình ảnh siêu vi thể biểu mô niêm mạc miệng nuôi cấy 38 39 DỰ KIẾN