Nghiên cứu định lượng một số kháng sinh β lactam bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE c4d)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGÔ HỮU TUỆ NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH β-LACTAM BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC (CE-C4D) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGÔ HỮU TUỆ NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH β-LACTAM BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHƠNG TIẾP XÚC (CE-C4D) Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 8440112.03 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng Hà Nội – 2019 LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng giao đề tài, nhiệt tình hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo mơn Hóa Phân tích, Trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Đại Học Quốc Gia Hà Nội giảng dạy, bảo truyền đạt kiến thức để em hoàn thành mơn học khóa học Em cảm ơn NCS Lê Thái Bình CN Trần Thị Thanh Phƣơng khóa K59D Trƣờng Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, Đại Học Quốc Gia Hà Nội nhiệt tình hƣớng dẫn, giúp đỡ phối hợp thực nghiên cứu Nghiên cứu đƣợc tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 104.04-2018.305 hỗ trợ thiết bị CE-C D công ty 3SAnalysis (www.3sanalysis.vn) Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn gia đình, bạn bè quan tâm, động viên em suốt trình học q trình hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Học viên Ngô Hữu Tuệ MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan kháng sinh 1.2 Tổng quan kháng sinh nhóm β-lactam 1.2.1 Phân loại, cấu trúc kháng sinh nhóm β-lactam 1.2.2 Tính chất, chế, độc tính phạm vi điều trị kháng sinh β-lactam 1.3 Giới thiệu kháng sinh nghiên cứu 1.4 Các phƣơng pháp phân tích riêng rẽ, đồng thời hoạt chất kháng sinh 12 1.4.1 Các phƣơng pháp phân tích riêng rẽ hoạt chất kháng sinh 12 1.4.1.1 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis) 12 1.4.1.2 Phƣơng pháp điện hoá 13 1.4.2 Các phƣơng pháp phân tích đồng thời hoạt chất kháng sinh 14 1.4.2.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 14 1.4.2.2 Phƣơng pháp điện di mao quản (CE) 17 1.4.2.2.1 Tổng quan số nghiên cứu xác định hàm lƣợng hoạt chất số dạng mẫu dƣợc phẩm 17 1.4.2.2.2 Nguyên tắc chung phƣơng pháp điện di mao quản CE-C D .19 1.4.2.2.3 Cấu tạo hệ CE 19 1.4.2.2.4 Các kỹ thuật bơm mẫu CE 21 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 23 2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.2 Trang thiết bị, dụng cụ hoá chất 24 2.2.1 Trang thiết bị, dụng cụ 24 2.2.1.1 Thiết bị 24 2.2.1.2 Dụng cụ: 24 2.2.2 Hoá chất: 25 2.2.2.1 Chất chuẩn: 25 2.2.2.2 Hóa chất dung mơi: 25 2.2.2.3 Chuẩn bị dung dịch hóa chất 25 2.3 Thông tin mẫu phƣơng pháp xử lý mẫu thuốc 26 2.3.1 Thông tin mẫu thuốc 26 2.3.2 Phƣơng pháp xử lí mẫu 27 2.4 Các thông số đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 28 2.4.1 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp phân tích 28 2.4.2 Độ chụm (độ lặp lại) phƣơng pháp 28 2.4.3 Độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 28 CHƢƠNG 3: K T QUẢ VÀ THẢO LU N 31 3.1 Nghiên cứu khảo sát phân tích đồng thời bốn hoạt chất kháng sinh nhóm b ng phƣơng pháp điện di mao quản CE-C D 31 3.1.1 Tối ƣu hố điều kiện phân tích 31 3.1.1.1 Khảo sát loại đệm pH dung dịch đệm điện di 31 3.1.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ hệ đệm điện di .33 3.1.1.3 Khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 34 3.1.1.4 Khảo sát thời gian bơm mẫu 36 3.1.1.5 Khảo sát chiều cao bơm mẫu 37 3.1.2 Xây dựng đƣờng chuẩn đánh giá phƣơng pháp phân tích 38 3.1.2.1 Đƣờng chuẩn xác định bốn hoạt chất kháng sinh Cefalexin, Cefotaxime Natri, Sulbactam Cefixime 38 3.1.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 40 3.1.2.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) 41 3.2 Nghiên cứu khảo sát phân tích đồng thời bốn hoạt chất kháng sinh nhóm b ng phƣơng pháp điện di mao quản CE-C D 41 3.2.1 Tối ƣu hố điều kiện phân tích 41 3.2.1.1 Khảo sát loại đệm pH dung dịch đệm 41 3.2.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ đệm điện di 43 3.2.1.3 Khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 44 3.2.1.4 Khảo sát thời gian bơm mẫu chiều cao bơm mẫu 45 3.2.2 Xây dựng đƣờng chuẩn đánh giá phƣơng pháp phân tích 46 3.2.2.1 Đƣờng chuẩn xác định bốn hoạt chất kháng sinh Amoxcillin, Ampicillin, Cefoperazone Sulbactam 46 3.2.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 48 3.2.2.3 Đánh giá độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 48 3.3 Phân tích mẫu thực tế 49 3.3.1 Các mẫu dƣợc phẩm chứa hoạt chất nhóm 49 3.3.2 Các mẫu dƣợc phẩm chứa hoạt chất nhóm 51 3.4 Phân tích đối chứng phƣơng pháp CE-C D với phƣơng pháp LC-MS/MS 54 K T LU N 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 63 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Công thức cấu tạo kháng sinh penicillin Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo kháng sinh cephalosporin Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo hệ thiết bị phân tích điện di mao quản 19 Hình 1.4 Mặt cắt ngang bề mặt mao quản 20 Hình 1.5 Lớp điện tích kép bề mặt mao quản 20 Hình 1.6 Các phƣơng pháp bơm mẫu phƣơng pháp điện di mao quản .22 Hình 2.1 Ảnh chụp hệ thiết bị CE-C D 24 Hình 3.1 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ascobic pH khác 32 Hình 3.2 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ace pH khác 32 Hình 3.3 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ace pH khác .32 Hình 3.4 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Tris hệ đệm điện di .34 Hình 3.5 Kết khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 35 Hình 3.6 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 36 Hình 3.7 Kết khảo sát ảnh hƣởng chiều cao bơm mẫu 38 Hình 3.8 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ascobic pH khác 42 Hình 3.9 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Arg/Ace pH khác 42 Hình 3.10 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ascobic pH khác 43 Hình 3.11 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng đệm Tris/Ace pH khác .43 Hình 3.12 Điện di đồ khảo sát ảnh hƣởng nồng độ Tris hệ đệm điện di .44 Hình 3.13 Kết khảo sát chiều dài hiệu dụng mao quản 45 Hình 3.14 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian bơm mẫu 45 Hình 3.15 Kết khảo sát ảnh hƣởng chiều cao bơm mẫu 46 Hình 3.16 Điện di đồ phân tích mẫu CFX1 50 Hình 3.17 Điện di đồ phân tích mẫu CFL4 50 Hình 3.18 Điện di đồ phân tích mẫu CFT2 ống tiêm 50 Hình 3.19 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AM1 52 Hình 3.20 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AP1 52 Hình 3.21 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc APvSB1 ống tiêm 53 Hình 3.22 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AMvSB1 53 Hình 3.23 Điện di đồ phân tích mẫu thuốc AMvSB3 53 Hình 3.24 Đồ thị tƣơng quan kết phân tích số mẫu dƣợc phẩm b ng phƣơng pháp CE-C D LC-MS/MS 55 Hình PL.1 Đƣờng chuẩn Cefalexine theo diện tích pic 70 Hình PL.2 Đƣờng chuẩn Cefotaxime Natri theo diện tích pic 70 Hình PL.3 Đƣờng chuẩn Sulbactam theo diện tích pic 71 Hình PL.4 Đƣờng chuẩn Cefixime theo diện tích pic 71 Hình PL.5 Đƣờng chuẩn Amoxcillin theo diện tích pic 73 Hình PL.6 Đƣờng chuẩn Ampicillin theo diện tích pic 73 Hình PL.7 Đƣờng chuẩn Cefoperazone theo diện tích pic 74 Hình PL.8 Đƣờng chuẩn Sulbactam theo diện tích pic 74 Hình PL.9 Điện di đồ phân tích mẫu CFX2 75 Hình PL.10 Điện di đồ phân tích mẫu CFX3 76 Hình PL.11 Điện di đồ phân tích mẫu CFL5 76 Hình PL.12 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-CH1 76 Hình PL.13 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-QT1 77 Hình PL.14 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QT1 77 Hình PL.15 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QD1 77 Hình PL.16 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-KD1 78 Hình PL.17 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-KD1 78 Hình PL.18 Điện di đồ phân tích mẫu AM2 78 Hình PL.19 Điện di đồ phân tích mẫu AM3 79 Hình PL.20 Điện di đồ phân tích mẫu AM4 79 Hình PL.21 Điện di đồ phân tích mẫu AP2 79 Hình PL.22 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH1 80 Hình PL.23 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH2 80 Hình PL.24 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QT1 80 Hình PL.25 Điện di đồ phân tích mẫu AM-QD1 81 Hình PL.26 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QD1 81 Hình PL.27 Điện di đồ phân tích mẫu AM-KD1 81 Hình PL.28 Điện di đồ phân tích mẫu AP-KD1 82 Hình PL.29 Điện di đồ phân tích mẫu CPvSB ống tiêm 82 Hình PL.30 Điện di đồ phân tích mẫu AMvSB2 ống tiêm 82 Hình PL.31 Điện di đồ phân tích mẫu APvSB2 ống tiêm 83 Hình PL.32 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM2 AM3 b ng pp LC-MS/MS 83 Hình PL.33 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM4 Amoxcillin (AMvSB1, AMvSB2) b ng pp LC-MS/MS 84 Hình PL.34 Sắc kí đồ phân tích mẫu AP1, AP2 Ampicillin (APvSB1) b ng pp .84 Hình PL.35 Sắc kí đồ phân tích mẫu CPvSB (Cefoperazone) b ng pp LC-MS 85 Hình PL.36 Sắc kí đồ phân tích hoạt chất Sulbactam (ABvSB1, CPvSB, 85 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại, cấu trúc số penicillin Bảng 1.2 Công thức, đặc điểm tác dụng kháng sinh nghiên cứu Bảng 1.3 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng .12 Bảng 1.4 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng 13 Bảng 1.5 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 15 Bảng 1.6 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β-lactam b ng phƣơng pháp điện di mao quản 17 Bảng 2.1 Thông tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 26 Bảng 2.2 Thông tin mẫu thuốc chứa hoạt chất nhóm 26 Bảng 3.1 Kết phụ thuộc diện tích pic (Spic) thời gian di chuyển (tdc) 33 Bảng 3.2 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc bốn chất vào chiều 35 Bảng 3.3 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc chất vào thời .36 Bảng 3.4 Kết khảo sát phụ thuộc Spic tdc chất vào chiều .37 Bảng 3.5 Điều kiện tối ƣu cho phân tích bốn chất b ng phƣơng pháp CE-C D 38 Bảng 3.6 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ chất 39 Bảng 3.7 Phƣơng trình đƣờng chuẩn, hệ số tƣơng quan chất nhóm 39 Bảng 3.8 Kết so sánh giá trị a với giá trị đƣờng chuẩn nhóm 40 Bảng 3.9 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng bốn chất .40 Bảng 3.10 Sự phụ thuộc Spic tdc bốn chất vào nồng độ đệm điện di 43 Bảng 3.11 Sự phụ thuộc Spic tdc chất vào chiều dài hiệu dụng mao quản 44 Bảng 3.12 Điều kiện tối ƣu cho phân tích nhóm (Amoxcillin, Ampicillin, Cefoperazone Sulbactam) b ng phƣơng pháp CE-C D 46 Bảng 3.13 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ chất 47 Bảng 3.14 Phƣơng trình đƣờng chuẩn, hệ số tƣơng quan chất nhóm 47 Bảng 3.15 Kết so sánh giá trị a với giá trị đƣờng chuẩn nhóm 48 Bảng 3.16 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng chất .48 Bảng 3.17 Hàm lƣợng hoạt chất Cefalexine, Cefotaxime, Sulbactam Cefixime 49 Bảng 3.18 Hàm lƣợng hoạt chất Amoxcillin, Ampicillin, Cefaperazone Sulbactam mẫu dƣợc phẩm 51 Bảng 3.19 Kết phân tích hàm lƣợng số mẫu thuốc b ng phƣơng 54 74 Đánh giá độ thu hồi phƣơng pháp CE-C D định lƣợng bốn hoạt chất thuộc nhóm Bảng PL.24 Độ thu hồi nhóm (Amoxcillin; Ampicillin; Cefoperazone Sulbactam) Chất phân tích Amoxcillin Ampicillin Cefoperazone Sulbactam Điện di đồ số mẫu nhóm (a) mV (b) 200 300 400 500 600 700 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.33 Điện di đồ phân tích mẫu CFX2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 75 (a) mV (b) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.34 Điện di đồ phân tích mẫu CFX3 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (a) (b) 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.35 Điện di đồ phân tích mẫu CFL5 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (b) 200 300 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.36 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-CH1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 76 500 (b) mV (a) 200 400 600 800 1000 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.37 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.38 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 200 300 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.39 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 77 500 mV 200 400 600 800 1000 1200 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.40 Điện di đồ phân tích mẫu CFX-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.41 Điện di đồ phân tích mẫu CFL-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn Điện di đồ số mẫu nhóm (a) mV (b) 120 140 160 180 200 220 240 260 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.42 Điện di đồ phân tích mẫu AM2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 280 78 (a) mV 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.43 Điện di đồ phân tích mẫu AM3 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (a) mV (b) 150 200 250 300 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.44 Điện di đồ phân tích mẫu AM4 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn mV (a) (b) 140 160 180 200 220 240 260 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.45 Điện di đồ phân tích mẫu AP2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 79 280 300 (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.46 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.47 Điện di đồ phân tích mẫu AM-CH2 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.48 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QT1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 80 450 (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.49 Điện di đồ phân tích mẫu AM-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.50 Điện di đồ phân tích mẫu AP-QD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (b) mV (a) 150 200 250 300 350 400 450 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.51 Điện di đồ phân tích mẫu AM-KD1 (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 81 500 (b) mV (a) 150 Hình PL mV 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.53 Điện di đồ phân tích mẫu CPvSB ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn (SBT) (AMO) mV (a) (b) 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.54 Điện di đồ phân tích mẫu AMvSB2 ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn 82 (SBT) (a) (AMP) (b) mV 200 300 400 500 600 Thời gian di chuyển (s) Hình PL.55 Điện di đồ phân tích mẫu APvSB2 ống tiêm (a) Mẫu; (b) Mẫu thêm chuẩn Sắc í đồ đƣờng chuẩn phân tích mẫu dƣợc phẩm phƣơng pháp LC-MS/MS Hình PL.56 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM2 AM3 pp LC-MS/MS 83 Hình PL.57 Sắc kí đồ phân tích mẫu AM4 Amoxcillin (AMvSB1, AMvSB2) pp LC-MS/MS Hình PL.58 Sắc kí đồ phân tích mẫu AP1, AP2 Ampicillin (APvSB1) pp LC-MS/MS 84 Hình PL.59 Sắc kí đồ phân tích mẫu CPvSB (Cefoperazone) pp LC-MS Hình PL.60 Sắc kí đồ phân tích hoạt chất Sulbactam (ABvSB1, CPvSB, AMvSB1, AMvSB2) pp LC-MS/MS 85 10 Đánh giá độ phù hợp giữ phƣơng pháp CE-C D phƣơng pháp LCMS/MS Paired T-Test and CI: PP LC-MS/MS PP CE-C4D Paired T for PP LC-MS/MS - PP CE-C4D PP LC-MS/MS 12 PP CE-C4D Difference 95% CI for mean difference: (-0,3 58,0) T-Test of mean difference = (vs ≠ 0): T-Value = 2,18 P-Value = 0,052 86 ... - NGÔ HỮU TUỆ NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ KHÁNG SINH β- LACTAM BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC (CE- C4D) Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 8440112.03 LUẬN... nghiên cứu luận văn ứng dụng phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE- C D) để định lƣợng kháng sinh nhóm ? ?lactam mẫu dƣợc phẩm, từ kết khảo sát thu đƣợc để áp dụng. .. tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β- lactam b ng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 15 Bảng 1.6 Tóm tắt số nghiên cứu xác định kháng sinh β- lactam b ng phƣơng pháp điện di mao quản