XÁC ĐỊNH đột BIẾN GEN SCN5A TRÊN một số BỆNH NHÂN mắc hội CHỨNG BRUGADA BẰNG kỹ THUẬT GIẢI TRÌNH tự GEN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** TRẦN YẾN THẢO XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN SCN5A TRÊN MỘT SỐ BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG BRUGADA BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2014 - 2018 HÀ NỘI-2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI *** TRẦN YẾN THẢO XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN SCN5A TRÊN MỘT SỐ BỆNH NHÂN MẮC HỘI CHỨNG BRUGADA BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN Ngành đào tạo: Cử nhân Xét nghiệm Y học Mã ngành: 52720332 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA KHÓA 2014 - 2018 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN VÂN KHÁNH HÀ NỘI-2018 LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp cột mốc đáng nhớ nhất, đánh dấu cho trình học tập nghiên cứu sinh viên trường đại học Việc tiến hành nghiên cứu, làm khóa luận tốt nghiệp giúp em học hỏi nhiều, khơng kiến thức mà cịn tác phong kinh nghiệm làm việc Với tất lòng trân trọng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Trần Vân Khánh, Trưởng Bộ môn Bệnh học phân tử - Khoa Kỹ Thuật Y Học, Phó Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen – Protein, Trường Đại học Y Hà Nội, người tận tình giúp đỡ, ln đưa lời khun hữu ích lời góp ý tâm huyết giúp em hồn thiện khóa luận Em xin chân thành cảm ơn GS.TS Tạ Thành Văn, Giám đốc Trung tâm Nghiên cứu Gen – Protein, Phó Hiệu trưởng Trường Đại học Y Hà Nội, người Thầy tạo điều kiện cho em thực khóa luận Trung tâm Em xin cảm ơn Ban Giám Hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Đại học, Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn CN Nguyễn Quý Hoài, người trực tiếp hướng dẫn, chia sẻ cho em kỹ thuật kinh nghiệm hữu ích q trình thực khóa luận, anh chị Trung tâm Nghiên cứu Gen – Protein, Trường Đại học Y Hà Nội, giúp em hồn chỉnh khóa luận Lời cuối em xin gửi lời cảm ơn tới người thân, bạn bè quan tâm, động viên em suốt trình học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên Trần Yến Thảo Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc **** LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: Phòng Quản lý Đào tạo Đại học – Trường Đại học Y Hà Nội Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu với giúp đỡ thầy cô anh chị Trung tâm nghiên cứu Gen – Protein, tất số liệu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2018 Người viết khóa luận Trần Yến Thảo DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DNA RNA bp BrS NST dNTP ddNTP ECG EDTA OD SNP PCR Tgm Nav1.5 Deoxyribonucleic Acid Ribonucleic Acid Base pair Brugada Syndrome (Hội chứng Brugada) Nhiễm sắc thể Deoxyribonucleotid triphosphat Dideoxyribonucleotid triphosphat Electrocardiogram (Điện tâm đồ) Ethylen diamine tetraacetic acid Optical Density (Độ hấp thụ quang) Single Nucleotide Polymorphism (Hiện tượng đa hình đơn nucleotid) Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại chuỗi polymerase) Nhiệt độ gắn mồi Voltage-gated sodium channel (Kênh natri có tính chất cổng điện thế) MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Xu hướng bệnh tật giới có thay đổi với gia tăng tỷ lệ mức độ nghiêm trọng bệnh mạn tính so với bệnh lây nhiễm Điều dẫn đến dự đoán đến năm 2030 bệnh không lây nhiễm chiếm ba phần tư số ca tử vong toàn giới [1] Một bệnh mạn tính nguy hiểm coi nguyên nhân gây tử vong hàng đầu bệnh tim mạch [2] Năm 2015, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) ước tính có khoảng 20 triệu ca tử vong bệnh tim mạch, chiếm 30% tổng số ca tử vong toàn giới [1] Bên cạnh số bệnh quen thuộc bệnh mạch vành, đột quỵ, rối loạn nhịp tim hay suy tim gần đây, nhà khoa học đặc biệt quan tâm đến Hội chứng Brugada Căn bệnh gọi “cái chết thầm lặng” với đặc điểm gây chứng đột tử đêm ngủ, vô nguy hiểm Brugada tên hội chứng bệnh tim giảm tổng hợp hay giảm chức protein vận chuyển ion natri, kali, canxi qua màng, gây rối loạn nhịp tim tăng nguy đột tử tim Hội chứng Brugada công bố y văn giới lần vào năm 1992 với mô tả đặc trưng: block nhánh phải, đoạn ST hình ảnh điện tâm đồ chêch cao tượng đột tử tim không rõ nguyên nhân Người mắc hội chứng Brugada thường khơng có triệu chứng lâm sàng điển hình mà có vài biểu khó phân biệt với bệnh tim mạch khác ngất, ngừng tim đột ngột, rung thất,… Do việc chẩn đoán sớm điều trị hiệu cho bệnh nhân mắc hội chứng Brugada gặp nhiều khó khăn Một bệnh phát thu hút nhiều đề tài nghiên cứu nhằm hiểu rõ khía cạnh bệnh với hi vọng tìm phương pháp điều trị hiệu phòng ngừa, ngăn chặn kịp thời phát triển Hội chứng Brugada chủ yếu đột biến gen gây ra, gần 20 gen phát cho có liên quan đến bệnh Gen SCN5A gen phát gen nhà nghiên cứu quan tâm Gen có chức mã hóa cho tiểu đơn vị alpha kênh natri tim Na v1.5 (Voltage-gated sodium channel) – protein màng quan trọng, tham gia vào trình dẫn truyền xung điện tim giúp tim co bóp nhịp nhàng Ở bệnh nhân mắc hội chứng Brugada, đột biến gen SCN5A gây giảm tổng hợp giảm chức kênh natri tim Nav1.5, dẫn đến rối loạn nhịp tim, nguy hiểm chứng đột tử Hơn hai thập kỷ qua có nhiều nghiên cứu khía cạnh lâm sàng chế bệnh học phân tử hội chứng Brugada giới, nhiên Việt Nam chưa có nghiên cứu thức đột biến gen liên quan đến bệnh Vì vậy, đề tài nghiên cứu: “Xác định đột biến gen SCN5A số bệnh nhân mắc hội chứng Brugada kỹ thuật giải trình tự gen” thực với mục tiêu: Sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen phát đột biến gen SCN5A hội chứng Brugada CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hội chứng Brugada 1.1.1 Lịch sử phát tình hình nghiên cứu Hội chứng Brugada Vào kỷ 20 (1953), Osher Woff phát mơ hình điện tâm đồ với block nhánh phải, kết hợp với độ cao phân đoạn ST, nhiên thời điểm lúc dấu hiệu coi bình thường, khơng liên quan đến đột tử tim Trong năm 80 kỷ 20, Trung tâm kiểm soát dịch bệnh (CDC – Center for Disease Control) Atlanta quan sát thấy tỷ lệ đột tử cao bất thường người tị nạn châu Á di cư đến Hoa Kỳ, chủ yếu đông bắc Thái Lan Cái chết đột ngột chủ yếu vào ban đêm người đàn ông trẻ trung niên biết đến nước châu Á nhiều tên khác “Pokkuri” Nhật Bản, “Lai-tai” Thái Lan, “Bangungut” Philip-pin, “Dream Disease” Hawaii [3] Năm 1992, hai anh em người Tây Ban Nha Pedro Josep Brugada phát mơ hình điện tâm đồ riêng biệt chưa mơ tả trước nhóm gồm bệnh nhân Cả bệnh nhân khơng có bất thường cấu trúc tim, lại có triệu chứng tái phát nhiều lần ngừng tim đột ngột, block nhánh phải, đoạn ST hình ảnh điện tâm đồ chênh cao gia đình có người tử vong đột ngột tim khơng rõ xác ngun nhân Những bất thường mô tả, khẳng định có liên quan đến mơ hình bệnh tật lần đưa vào y văn giới Năm 1996, thuật ngữ “Hội chứng Brugada” sử dụng để mơ tả tình trạng block nhánh phải, đoạn ST chênh lên tử vong đột ngột tim Năm 1998, số nghiên cứu liên quan đột biến gen SCN5A-gen mã hóa tiểu đơn vị alpha kênh natri tim Na v1.5 hội chứng 10 Brugada Các nghiên cứu sau phát nhiều gen liên quan đến bệnh, hầu hết mã hóa cho kênh ion natri, kali, canxi protein liên quan đến kênh Theo thống kê, tỷ lệ mắc hội chứng Brugada giới 5/10.000, tỷ lệ có dao động nhiều vùng giới, ước tính khoảng 0,15% nước châu Á, từ 0,1% đến 0,02% nước Trung Đông 0,02% nước phương Tây [4], [5] Hội chứng thường phát người đàn ông trẻ tuổi (độ tuổi T (xuất bệnh nhân), c.7013-7014 TC>AT (xuất bệnh nhân), c.7505insA (xuất bệnh nhân) Các đột biến nằm vùng 3’UTR – vùng khơng mã hóa acid amin gen Ngồi ra, nghiên cứu cịn phát SNP c.87 A>G (xuất bệnh nhân), c.5457 T>C (xuất bệnh nhân), không làm thay đổi acid amin (p.Ala29Ala, p.Asp1819Asp) Cả hai SNP liên quan đến số bệnh tim mạch như: hội chứng Brugada, hội chứng QT kéo dài, hội chứng Romano-Ward, rung thất tính chất gia đình, bệnh tim, [23] Theo thống kê: Ở châu Á, 100 người mắc hội chứng Brugada có 10-15 người phát đột biến gen SCN5A, tức khoảng 10-15% [4] Tỷ lệ thấp khoảng 10% so với tỷ lệ nghiên cứu cộng đồng người Da trắng [4] Năm 2011, Nakajima Tadashi Cs phát đột biến gen SCN5A (p.A735E, p.E1784K, p.A586T, p.R689H, p.S1553R, p.Q1706H) nghiên cứu 30 bệnh nhân mắc hội chứng Brugada Nhật Bản Những đột biến chưa phát trước cộng đồng người Da trắng, cho thấy yếu tố chủng tộc ảnh hưởng đến đột biến gen SCN5A hội chứng Brugada [24] Năm 2015, Jyh-Ming J.J Cs thực nghiên cứu 14 bệnh nhân mắc hội chứng Brugada Đài Loan phát đột biến c.1651 G>A (p.Arg551Thr), c.1776 C>G (p.Asn592Lys), 3578 G>A (p.Arg1193Gln) xuất bệnh nhân; SNP c.1673 A>G (p.His558Arg) xuất bệnh nhân; SNP c.3269 C>T (p.Pro1090Leu) xuất bệnh nhân Điều đặc biệt bệnh nhân có đột biến gen SCN5A khơng có tiền sử gia đình liên quan đến hội chứng [18] 53 Một nghiên cứu khác Tan Boon Yew Cs vào năm 2016 tiến hành gia đình người Singapore gốc Trung Quốc phát đột biến p.A226V (c.677 C>T) p.R1629X (c.4885 C>T) Đột biến p.A226V (c.677 C>T) nằm exon làm thay đổi cấu trúc kênh Na v1.5 phân đoạn S4 miền D1 đột biến p.R1629X (c.4885C>T) nằm exon 29 tạo mã kết thúc sớm, cắt ngắn gần 400 acid amin thay đổi cấu trúc kênh Nav1.5 phân đoạn S4 miền D4 [25] Mặc dù hai đột biến phát cộng đồng người Da trắng, Tan Boon Yew Cs người phát hai đột biến cộng đồng người châu Á Từ nghiên cứu trên, thấy đột biến gen SCN5A đa dạng Sự xuất tỷ lệ đột biến phụ thuộc vào nhiều yếu tố có yếu tố chủng tộc Cho đến nay, gần 300 đột biến tìm thấy nhiều nước giới Tuy nhiên, khn khổ khóa luận tốt nghiệp, nghiên cứu tiến hành cỡ mẫu nhỏ (4 bệnh nhân) nên chưa thể khẳng định tỷ lệ phát đột biến gen SCN5A Do vậy, nghiên cứu cần mở rộng cỡ mẫu lớn hơn, có so sánh với mẫu người bình thường để có nhìn sâu sắc mối liên quan đột biến gen SCN5A hội chứng Brugada 54 KẾT LUẬN Căn vào kết phân tích đưa kết luận sau: Nghiên cứu xác định số biến đổi gen SNC5A số bệnh nhân mắc hội chứng Brugada: • Phát đột biến mới, đột biến c.6804 C>T (xuất bệnh nhân), c.7013-7014 TC>AT (xuất bệnh nhân), c.7505insA (xuất bệnh nhân) • Ngồi nghiên cứu phát đa hình đơn nucleotid c.87 A>G (xuất bệnh nhân) c.5457 T>C (xuất bệnh nhân) TÀI LIỆU THAM KHẢO Institute of Medicine (2010) Promoting Cardiovascular Health in the Developing World: A Critical Challenge to Achieve Global Health, DC: The National Academies Press, Washington Shi A, Tao Z, Wei P et al (2016) Epidemiological aspects of heart diseases Exp Ther Med, 12(3), 1645-1650 Riera P.R.A, Schapachnik E, Ferreira C (2003) Brugada disease: Chronology of discovery and paternity Preliminary observations and historical aspects Indian pacing electrophysiol J, 3(4), 253-260 Jyh-Ming J.J, Minoru H (2016) Genetics of Brugada syndrome J Arrhythm, 32(5), 418–425 Kamakura S (2013) Epidemiology of Brugada syndrome in Japan and rest of the world Journal of Arrhythmia, 29(2), 52-55 Kusano K.F (2013) Brugada syndrome: Recent understanding of pathophysiological mechanism and treatment Journal of Arrhythmia, 29(2), 77-82 Antzelevitch C, Brugada P, Brugada J et al (2005) Brugada Syndrome: From Cell to Bedside Curr Probl Cardiol, 30(1), 9-54 Wilde A.A, Antzelevitch C, Borggrefe M et al (2002) Proposed diagnostic criteria for the Brugada syndrome: consensus report Circulation, 106(19), 2514-9 Antzelevitch C, Fish J.M (2006) Therapy for the Brugada Syndrome Handb Exp Pharmacol, (171), 305-330 10 National Center for Biotechnology Information, United States National Library of Medicine (2008) SCN5A sodium voltage-gated channel alpha subunit [Homo sapiens (human)] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/6331 11 Namadurai S, Yereddi N.R, Cusdin F.S at el (2015) A new look at sodium channel beta subunits Open Biol, 5(1), 140-192 12 Detta N, Frisso G, Salvatore F (2015) The multi-faceted aspects of the complex cardiac Nav1.5 protein in membrane function and pathophysiology Elsevier Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Proteins and Proteomics, 1854(10), 1502-1509 13 O'Malley H.A, Isom L.L (2015) Sodium channel beta subunits: emerging targets in channelopathies Annu Rev Physiol, 77, 481-504 14 DeMarco K.R, Clancy C.E (2017) Cardiac Na Channels: Structure to Function Curr Top Membr, 78, 287-311 15 Trịnh Bình Dy (2006) Sinh lý học Tập I, Nhà xuất Y học Hà Nội 16 Zaklyazminskaya E, Dzemeshkevich S (2016) The role of mutations in the SCN5A gene in cardiomyopathies Biochim Biophys Acta, 1863(7 Pt B), 1799-1805 17 Makarawate P, Chaosuwannakit N (2017) SCN5A Genetic Polymorphisms Associated With Increased Defibrillator Shocks in Brugada Syndrome J Am Heart Assoc, 6(6), e005009 18 Juang J.M, Tsai C.T, Lin L.Y et al (2015) Unique clinical characteristics and SCN5A mutations in patients with Brugada syndrome in Taiwan J Formos Med Assoc, 114(7), 620-626 19 Kapplinger J.D, Tester D.J, Alders M et al (2010) An international compendium of mutations in the SCN5A-encoded cardiac sodium channel in patients referred for Brugada syndrome genetic testing Heart Rhythm, 7(1), 33–46 20 Tạ Thành Văn (2010) PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử, Nhà xuất Y học Hà Nội 21 Chidgeavadze Z.G, Beabealashvilli R.S, Atrazhev A.M et al (1984) 2',3'-Dideoxy-3' aminonucleoside 5'-triphosphates are the terminators of DNA synthesis catalyzed by DNA polymerases Nucleic Acids Res, 12(3), 1671–1686 22 Heather J.M, Chain B (2016) The sequence of sequencers: The history of sequencing DNA Genomics, 107(1), 1-8 23 National Center for Biotechnology Information, United States National Library of Medicine (2016) Sodium voltage-gated channel alpha subunit (SCN5A) [Gene -OMIM-VariationViewer].https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/variation/48318/; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/25775443/ 24 Nakajima T, Kaneko Y, Saito A et al (2011) Identification of Six Novel SCN5A Mutations in Japanese Patients With Brugada Syndrome Clinical Studies, 52(1), 27-31 25 Tan B.Y, Yong R.Y.Y, Barajas-Martinez H (2016) A Brugada syndrome proband with compound heterozygote SCN5A mutations identified from a Chinese family in Singapore EP Europace, 18(6), 879-904 PHỤ LỤC Năm 2010, Kapplinger J.D Cs nghiên cứu hồi cứu 2111 bệnh nhân mắc hội chứng Brugada xác định 293 đột biến gen SCN5A (274 đột biến xuất exon, 19 đột biến intron) Bảng ghi lại số đột biến exon gen SCN5A liên quan đến hội chứng Brugada [19] STT Exon Tên đột biến Exon Exon Exon 10 11 12 13 14 15 16 Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon 17 Exon 18 19 20 21 22 23 Exon Exon Exon Exon Exon Exon c.3 G>A (p.M1I) c.53 G>A (p.R18Q) c.191-193delTGC (p.L64del) c.210 T>G (p.N70K) c.217 C>T (p.Q73X) c.250 G>A (p.D84N) c.278 T>C (p.F93S) c.281 T>G (p.I94S) c.310 C>T (p.R104W) c.311G>A (p.R104Q) c.327 C>A (p.N109K) c.361 C>T (p.R121W) c.362 G>A (p.R121Q) c.376 A>G (p.K126E) c.381insT (p.L128SfsX44) c.407 T>C (p.L136P) c.410-418insTCATGTGCA (p.I137-C139dup) c.436 G>A (p.V146M) c.468 G>A (p.W156X) c.477 T>A (p.Y159X) c.481 G>C (p.E161Q) c.481 G>A (p.E161K) c.486delC (p.Y162XfsX1) Dạng đột biến Missense Missense Số người có đột biến N-terminal N-terminal Vị trí đột biên In-frame del N-terminal Missense Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Frame shift Missense N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal N-terminal DI-S1 DI-S1 1 1 1 1 In-frame ins DI-S1 Missense Nonsense Nonsense Missense Missense Frame shift DI-S1 DI-S1 DI-S1 DI-S1 DI-S1 DI-S1 1 1 24 25 26 27 28 29 30 31 Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon 32 Exon 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon Exon c.525 G>C (p.K175N) c.533 C>G (p.A178G) c.535 C>T (p.R179X) c.544 T>C (p.C182R) c.554 C>T (p.A185V) c.579 G>A (p.W193X) c.611 C>T (p.A204V) c.635 T>A (p.L212Q) c.656-657insATTCA (p.T220FfsX10) c.659 C>T (p.T220I) c.664 C>T (p.R222X) c.665 G>A (p.R222Q) c.667 G>C (p.V223L) c.673 C>T (p.R225W) c.677 G>C (p.A226V) c.694 G>A (p.V232I) c.718 G>A (p.V240M) c.745 A>T (p.K249X) c.808 C>A (p.Q270K) c.827 T>A (p.L276Q) c.832 C>G (p.H278D) c.844 C>T (p.R282C) c.898 G>A (p.V300I) c.944 T>C (p.L315P) c.959 C>A (p.T320N) c.974 T>G (p.L325R) c.1007 C>T (p.P336L) c.1036 G>T (p.E346X) c.1052 G>T (p.G351V) c.1052 G>A (p.G351D) c.1066 G>A (p.D356N) c.1099 C>T (p.R367C) c.1100 G>A (p.R367L) c.1100 G>T (p.R367H) c.1106 T>A (p.M369K) c.1120 T>G (p.W374G) c.1127 G>A (p.R376H) Missense Missense Nonsense Missense Missense Nonsense Missense Missense DI-S1 DI-S1 DI-S2/S3 DI-S2/S3 DI-S2/S3 DI-S3 DI-S3 DI-S3/S4 1 1 1 1 Frame shift DI-S4 Missense Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense DI-S4 DI-S4 DI-S4 DI-S4 DI-S4 DI-S4 DI-S4 DI-S4/S5 DI-S4/S5 DI-S5 DI-S5 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S5/S6 2 1 1 1 1 1 1 1 61 62 63 64 65 66 Exon 10 Exon 10 Exon 10 Exon 10 Exon 10 Exon 10 67 Exon 11 68 69 Exon 11 Exon 12 70 Exon 12 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 Exon 12 c.1156 G>A (p.G386R) c.1157 G>A (p.G386E) c.1186 G>C (p.V396L) c.1187 T>C (p.V396A) c.1255 C>T (p.Q419X) c.1315 G>A (p.E439K) c.1428-1431delCAAG (p.S476RfsX30) c.1502 A>G (p.D501G) c.1537delC (p.R513VfsX8) c.1562delA (p.K521SfsX102) c.1577 G>A (p.R526H) c.1595 T>G (p.F532C) c.1603 C>T (p.R535X) c.1629 T>A (p.F543L) c.1654 G>A (p.G552R) c.1717 C>T (p.Q573X) c.1721delG (p.G574DfsX49) c.1844 G>A (p.G615E) c.1855 C>T (p.L619F) c.1858 C>T (p.R620C) 81 Exon 12 c.1890 G>A (p.T630T) 82 83 84 85 86 Exon 13 Exon 13 Exon 13 Exon 13 Exon 13 87 Exon 13 88 Exon 13 89 Exon 13 90 Exon 14 91 92 Exon 14 Exon 14 c.1895 C>T (p.T632M) c.1918 C>G (p.P640A) c.1936del C (p.Q646RfsX5) c.1940 C>A (p.A647D) c.1943 C>T (p.P648L) c.1950-1953delAGAT (p.D651AfsX25) c.1981 C>T (p.R661W) c.19831993insGGCCCTCAGCG (p.A665GfsX16) c.2024-2025delAG (p.E675VfsX45) c.2047 T>G (p.C683G) c.2092 G>T (p.E698X) Missense Missense Missense Missense Nonsense Missense DI-S5/S6 DI-S5/S6 DI-S6 DI-S6 DI/DII DI/DII 1 1 Frame shift DI/DII Missense Frame shift DI/DII DI/DII 1 Frame shift DI/DII Missense Missense Nonsense Missense Missense Nonsense Frame shift Missense Missense Missense Silent/splice site Missense Missense Frame shift Missense Missense DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII 1 1 1 DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII 1 Frame shift DI/DII Missense DI/DII Frame shift DI/DII DI/DII DI/DII DI/DII 1 Frame shift/splice Missense Nonsense 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 Exon 14 c.2102 C>T (p.P701L) Missense Exon 14 c.2150 C>T (p.P717L) Missense Exon 14 c.2201dupT (p.M734IfsX11) Frame shift Exon 14 c.2204 C>T (p.A735V) Missense Exon 14 c.2236 G>A (p.E746K) Missense Exon 14 c.2254 G>A (p.G752R) Missense Exon 15 c.2273 G>A (p.G758E) Missense Exon 15 c.2274delG (p.I759FfsX6) Frame shift Exon 15 c.2291 T>G (p.M764R) Missense Exon 15 c.2314 G>A (p.D772N) Missense Exon 15 c.2317 C>T (p.P773S) Missense Exon 15 c.2320delT (p.Y774TfsX28) Frame shift c.2326-2328delTAC Exon 15 In-frame del (p.Y776del) Exon 15 c.2365 G>A (p.V789I) Missense Exon 15 c.2423 G>C (p.R808P) Missense Exon 16 c.2465 G>A (p.W822X) Nonsense Exon 16 c.2516 T>C (p.L839P) Missense Exon 16 c.2533delG (p.V845CfsX2) Frame shift c.2549-2550insTG Exon 16 Frame shift (p.F851GfsX19) c.2550-2551dupGT Exon 16 Frame shift (p.F851CfsX19) Exon 16 c.2553 C>A (p.F851L) Missense c.2582-2583delTT Exon 16 Frame shift (p.F861WfsX90) Exon 16 c.2599 G>C (p.E867Q) Missense Exon 16 c.2602delC (p.L868X) Frame shift Exon 16 c.2632 C>T (p.R878C) Missense Exon 16 c.2633 G>A (p.R878H) Missense Exon 16 c.2657 A>C (p.H886P) Missense Exon 16 c.2677 C>T (p.R893C) Missense Exon 16 c.2678 G>A (p.R893H) Missense Exon 16 c.2701 G>A (p.E901K) Missense Exon 16 c.2729 C>T (p.S910L) Missense Exon 16 c.2743 T>C (p.C915R) Missense Exon 16 c.2750 T>G (p.L917R) Missense Exon 16 c.2780 A>G (p.N927S) Missense Exon 16 c.2783 T>C (p.L928P) Missense DI/DII DII-S1 DII-S1 DII-S1 DII-S1/S2 DII-S2 DII-S2 DII-S2 DII-S2 DII-S2/S3 DII-S2/S3 DII-S2/S3 1 1 DII-S2/S3 DII-S3 DII-S4 DII-S4 DII-S4/S5 DII-S5 1 1 DII-S5 DII-S5 DII-S5 DII-S5 11 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S5/S6 DII-S6 DII-S6 DII-S6 DII-S6 3 1 128 129 130 131 Exon 17 Exon 17 Exon 17 Exon 17 132 Exon 17 133 Exon 17 134 Exon 17 135 Exon 17 136 Exon 17 137 Exon 17 138 Exon 17 139 140 141 142 Exon 18 Exon 18 Exon 18 Exon 19 143 Exon 20 144 145 Exon 20 Exon 20 146 Exon 20 147 Exon 20 148 Exon 20 149 150 151 152 153 154 155 156 Exon 21 Exon 21 Exon 21 Exon 21 Exon 21 Exon 21 Exon 21 Exon 21 c.2804 T>C (p.L935P) Missense c.2850delT (p.D951MfsX6) Frame shift c.2893 C>T (p.R965C) Missense c.2894 G>A (p.R965H) Missense c.29142923delTTTGTCAAGC Frame shift (p.F972GfsX170) c.2989 G>A (p.A997T) Missense c.3005-3012delCCAGCTGC Frame shift (p.P1002HfsX25) c.3157 G>A (p.E1053K) Missense c.3140-3141insTG Frame shift (p.P1048CfsX98) c.3164 A>G (p.D1055G) Missense c.3171-3172delTGinsA Insertion/de (p.D1057EfsX88) letion c.3236 C>A (p.S1079Y) Missense c.3338 C>T (p.A1113V) Missense c.3345 G>A (p.W1115X) Missense c.3419 G>C (p.S1140T) Missense c.3553-3554delCA Frame shift (p.Q1185GfsX55) c.3576 G>A (p.W1192X) Nonsense c.3622 G>T (p.E1208X) Nonsense c.3634-3636delATC In-frame del (p.I1212del) c.3656 G>A (p.S1219N) Missense Frame c.3666delG (p.A1223PfsX7) shift/splice c.3673 G>A (p.E1225K) Missense c.3682 T>C (p.Y1228H) Missense c.3694 C>T (p.R1232W) Missense c.3695 G>A (p.R1232Q) Missense c.3716 T>C (p.L1239P) Missense c.3727 G>A (p.D1243N) Missense c.3746 T>A (p.V1249D) Missense c.3758 A>G (p.E1253G) Missense DII-S6 DII/DIII DII/DIII DII/DIII 1 DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII DII/DIII 1 1 DII/DIII DII/DIII DIII-S1 1 DIII-S1 DIII-S1 DIII-S1 DIII-S1/S2 DIII-S1/S2 DIII-S1/S2 DIII-S1/S2 DIII-S2 DIII-S2 DIII-S2 DIII-S2 1 1 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 Exon 21 c.3784 G>A (p.G1262S) Exon 21 c.3813 G>C (p.W1271C) Exon 21 c.3823 G>A (p.D1275N) Exon 22 c.3863 C>G (p.A1288G) Exon 22 c.3894delC (p.I1299SfsX13) Exon 22 c.3932 T>C (p.L1311P) Exon 22 c.3956 G>T (p.G1319V) Exon 23 c.3968 T>G (p.V1323G) Exon 23 c.3995 C>T (p.P1332L) Exon 23 c.4018 G>A (p.V1340I) Exon 23 c.4030 T>C (p.F1344L) Exon 23 c.4036 C>A (p.L1346I) Exon 23 c.4037 T>C (p.L1346P) Exon 23 c.4052 T>G (p.M1351R) Exon 23 c.4057 G>A (p.V1353M) Exon 23 c.4072 G>T (p.G1358W) Exon 23 c.4077 G>T (p.K1359N) Exon 23 c.4079 T>G (p.F1360C) Exon 23 c.4088 G>A (p.C1363Y) Exon 23 c.4118 T>A (p.L1373X) Exon 23 c.4145 G>T (p.S1382I) Exon 23 c.4147 C>T (p.Q1383X) Exon 23 c.4178 T>A (p.L1393X) Exon 23 c.4182 C>G (p.Y1394X) Exon 23 c.4190delA (p.K1397RfsX2) Exon 23 c.4213 G>A (p.V1405M) Exon 23 c.4213 G>C (p.V1405L) Exon 23 c.4216 G>C (p.G1406R) Exon 23 c.4217 G>A (p.G1406E) Exon 23 c.4222 G>A (p.G1408R) Exon 23 c.4226 A>G (p.Y1409C) Exon 23 c.4227 C>G (p.Y1409X) Exon 23 c.4234 C>T (p.L1412F) Exon 24 c.4255 A>G (p.K1419E) Missense Missense Missense Missense Frame shift Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Nonsense Missense Nonsense Nonsense Nonsense Frame shift Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense DIII-S2 DIII-S3 DIII-S3 DIII-S3 DIII-S4 DIII-S4 DIII-S4/S5 DIII-S4/S5 DIII-S4/S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 191 192 193 194 195 196 Exon 24 Exon 24 Exon 24 Exon 24 Exon 24 Exon 24 c.4258 G>C (p.G1420R) c.4279 G>T (p.A1427S) c.4283 C>T (p.A1428V) c.4294 A>G (p.R1432G) c.4296 G>C (p.R1432S) c.4298 G>T (p.G1433V) 197 Exon 24 c.4299 G>A (p.G1433G) 198 199 200 201 202 203 204 205 Exon 25 Exon 25 Exon 25 Exon 25 Exon 25 Exon 25 Exon 25 Exon 25 206 Exon 25 207 Exon 25 208 Exon 25 209 210 Exon 25 Exon 25 211 Exon 26 212 213 214 215 216 217 Exon 26 Exon 26 Exon 27 Exon 27 Exon 27 Exon 27 218 Exon 27 219 220 Exon 27 Exon 27 c.4302 T>G (p.Y1434X) c.4313 C>T (p.P1438L) c.4320 G>A (p.W1440X) c.4321 G>C (p.E1441Q) c.4342 A>C (p.I1448L) c.4343 T>C (p.I1448T) c.4346 A>G (p.Y1449C) c.4352 T>A (p.V1451D) c.4376-4379delTCTT (p.F1459SfsX3) c.4387 A>T (p.N1463Y) c.4389-4396delCCTCTTTA (p.L1464WfsX5) c.4402 G>T (p.V1468F) c.4426 C>T (p.Q1476X) c.4477-4479delAAG (p.K1493del) c.4477 A>T (p.K1493X) c.4501 G>C (p.L1501V) c.4562 T>A (p.I1521K) c.4573 G>A (p.V1525M) c.4642 G>A (p.E1548K) c.4712 T>G (p.F1571C) c.4708-4710insATC (p.I1570dup) c.4720 G>A (p.E1574K) c.4745 T>C (p.L1582P) Missense Missense Missense Missense Missense Missense Silent/splice site Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense Missense Missense DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 1 1 1 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S5/S6 DIII-S6 DIII-S6 DIII-S6 DIII-S6 1 1 1 1 Frame shift DIII-S6 Missense DIII-S6 Frame shift DIII-S6 Missense Nonsense DIII-S6 DIII/DIV 1 In-frame del DIII/DIV Nonsense Missense Missense Missense Missense Missense DIII/DIV DIII/DIV DIII/DIV DIV-S1 DIV-S1/S2 DIV-S2 1 1 Missense DIV-S2 Missense Missense DIV-S2 DIV-S2 221 222 223 224 225 226 Exon 27 Exon 27 Exon 27 Exon 27 Exon 28 Exon 28 227 Exon 28 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 241 Exon 28 242 243 Exon 28 Exon 28 244 Exon 28 245 246 247 248 249 250 251 252 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 c.4747 C>T (p.R1583C) Missense c.4748 G>A (p.R1583H) Missense c.4773 G>A (p.W1591X) Nonsense c.4810 G>A (p.V1604M) Missense c.4838 A>T (p.Q1613L) Missense c.4845 C>A (p.Y1615X) Nonsense c.4856delC Frame shift (p.P1619RfsX12) c.4859 C>T (p.T1620M) Missense c.4867 C>T (p.R1623X) Nonsense c.4868 G>A (p.R1623Q) Missense c.4885 C>T (p.R1629X) Missense c.4886 G>A (p.R1629Q) Missense c.4912 C>T (p.R1638X) Nonsense c.4925 A>G (p.G1642E) Missense c.4978 A>G (p.I1660V) Missense c.4981 G>A (p.G1661R) Missense c.4981 G>C (p.G1661R) Missense c.4999 G>A (p.V1667I) Missense c.5015 C>A (p.S1672Y) Missense c.5038 G>A (p.A1680T) Missense c.5068-5070delGA Frame shift (p.D1690HfsX98) c.5083 C>T (p.Q1695X) Nonsense c.5092 G>A (p.A1698T) Missense c.5124-5126delCAC In-frame del (p.T1709del) c.5126 C>T (p.T1709M) Missense c.5126 C>G (p.T1709R) Missense c.5134 G>A (p.G1712S) Missense c.5141 A>G (p.D1714G) Missense c.5157delC (p.I1720SfsX67) Frame shift c.5164 A>G (p.N1722D) Missense c.5182 T>C (p.C1728R) Missense c.5184 C>G (p.C1728W) Missense DIV-S2/S3 DIV-S2/S3 DIV-S3 DIV-S3 DIV-S3/S4 DIV-S3/S4 1 1 DIV-S3/S4 DIV-S3/S4 DIV-S4 DIV-S4 DIV-S4 DIV-S4 DIV-S4 DIV-S4 DIV-S5 DIV-S5 DIV-S5 DIV-S5 DIV-S5 DIV-S5 2 1 1 2 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 DIV-S5/S6 1 1 1 253 254 255 Exon 28 Exon 28 Exon 28 256 Exon 28 257 258 259 Exon 28 Exon 28 Exon 28 260 Exon 28 261 Exon 28 262 263 Exon 28 Exon 28 264 Exon 28 265 Exon 28 266 Exon 28 267 268 269 270 271 272 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 Exon 28 273 Exon 28 274 Exon 28 c.5218 G>A (p.G1740R) Missense DIV-S5/S6 c.5227 G>A (p.G1743R) Missense DIV-S5/S6 c.5228 G>A (p.G1743E) Missense DIV-S5/S6 c.5290delG Frame shift DIV-S6 (p.V1764SfsX23) c.5290 G>T (p.V1764F) Missense DIV-S6 c.5336 C>T (p.T1779M) Missense C-terminal c.5350 G>A (E1784K) Missense C-terminal c.5356-5357delCT Frame shift C-terminal (p.L1786EfsX2) c.5387-5388insTGA In-frame ins C-terminal (p.1795-1796insD) c.5420dupA (p.F1808IfsX3) Frame shift C-terminal c.5435 C>A (p.S1812X) Nonsense C-terminal c.5464-5467delTCTG Frame shift C-terminal (p.E1823HfsX10) c.5494 C>G (p.Q1832E) Missense C-terminal c.5577-5578insAA Frame shift C-terminal (p.R1860KfsX13) c.5581 G>A (p.V1861I) Missense C-terminal c.5616 G>C (p.K1872N) Missense C-terminal c.5707 G>C (p.S1904L) Missense C-terminal c.5770 G>A (p.A1924T) Missense C-terminal c.5803 G>A (p.G1935S) Missense C-terminal c.5812 G>A (p.E1938K) Missense C-terminal c.6010-6012dupTTC In-frame ins C-terminal (p.F2004dup) c.6010 T>G (p.F2004V) Missense C-terminal 1 14 1 1 1 1 1 1 1 ... cứu: ? ?Xác định đột biến gen SCN5A số bệnh nhân mắc hội chứng Brugada kỹ thuật giải trình tự gen? ?? thực với mục tiêu: Sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen phát đột biến gen SCN5A hội chứng Brugada. .. cứu này, sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen để xác định đột biến gen SCN5A số bệnh nhân mắc hội chứng Brugada Muốn giải trình tự gen SCN5A, trước hết cần có DNA bệnh nhân DNA bệnh nhân tách chiết... cho kỹ thuật giải trình tự gen để xác định đột biến gen SCN5A 3.3 Kết giải trình tự 29 exon gen SCN5A Sản phẩm PCR sau điện di kiểm tra tiếp tục sử dụng cho kỹ thuật giải trình tự máy giải trình