đánh giá tác dụng giảm ho, long đờm chống viêm cấp và độc tính của bài thuốc ha trên thực nghiệm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ THANH MỪNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM HO, LONG ĐỜM CHỐNG VIÊM CẤP VÀ ĐỘC TÍNH CỦA BÀI THUỐC HA TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN DƯỢC SĨ CHUYÊN KHOA CẤP I HÀ NỘI 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ THANH MỪNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG GIẢM HO, LONG ĐỜM, CHỐNG VIÊM CẤP VÀ ĐỘC TÍNH CỦA BÀI THUỐC HA TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN DƯỢC SĨ CHUYÊN KHOA CẤP CHUYÊN NGÀNH: Dược Lý - Dược Lâm Sàng MÃ SỐ: 60720405 Người hướng dẫn khoa học: Ts Đỗ Thị Nguyệt Quế Bộ môn Dược Lực, Đại Học Dược Hà Nội Thời gian thực đề tài: Từ tháng 12/2018- 12/2019 Nơi thực hiện: Trường Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI 2019 LỜI CẢM ƠN Với tất lịng kính trọng biết ơn tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Nguyệt Quế, môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo, động viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể thầy cô, anh chị kỹ thuật viên, em sinh viên nghiên cứu khoa học môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội bên tơi, giúp đỡ tơi q trình tơi thực hồn thiện luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám Hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học thầy cô giáo trường Đại Học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Tơi chân thành cảm ơn thành viên nhóm thực đề tài giúp đỡ tơi q trình thực nghiệm hồn thiện luận văn Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè đồng hành, động viên, chia sẻ với gần hai năm học tập nghiên cứu mái trường Dược thân yêu! Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2019 HỌC VIÊN Đỗ Thị Thanh Mừng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, KÍ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý bệnh viêm họng, ho 1.2 Tổng quan đờm 1.3 Thuốc có nguồn gốc hóa dược 1.4 Thuốc có nguồn gốc dược liệu 1.5 Một số mơ hình dược lý thực nghiệm nghiên cứu tác dụng giảm ho, long đờm chống viêm 1.5.1 Mơ hình nghiên cứu tác dụng giảm ho 1.5.2 Mơ hình nghiên cứu tác dụng long đờm 1.5.3 Mơ hình thực nghiệm nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 1.6.1 Tổng quan dược liệu nghiên cứu thuốc HA 10 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2.Trang thiết bị nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Đánh giá tác dụng giảm ho thuốc H.A 19 2.2.2 Đánh giá tác dụng long đờm thuốc H.A 20 2.2.3 Đánh giá tác dụng chống viêm thuốc H.A 20 2.2.4 Đánh giá đọc tính cấp tính thuốc HA 22 2.2.5 Đánh giá độc tính bán trường diễn thuốc HA 22 2.2.6 Xử lý số liệu 23 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24 3.1 Kết đánh giá tác dụng giảm ho thuốcH.A 24 3.2 Kết đánh giá tác dụng long đờm thuốc H.A 24 3.3 Kết đánh giá tác dụng chống viêm thuốc HA 25 3.4 Kết đánh giá độc tính thuốc H.A 26 3.4.1 Kết độc tính cấp tính 27 3.4.2 Kết độc tính bán trường diễn 28 3.4.2 1.Ảnh hưởng HA đến thể trạng chung .29 3.4.2.2 Ảnh hưởng HA đến chức gan chuột cống trắng 31 3.4.2.3 Ảnh hưởng HA đến chức thận chuột cống trắng 38 Chương BÀN LUẬN 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ, KÍ HIỆU VIẾT TẮT VIẾT TẮT TÊN ĐẦY ĐỦ ALT: Alanine aminotransferase AST: Aspartate transaminase COPD: Chronic Obstructive Pulmonary Disease HE: Hematoxylin- Eosin HGB : Hemoglobin, HTC: Hematocrit ML: Mức liều OECD: Organization for Economic Cooperation and Development PAS: Periodic Acid Schiff PLT: Số lượng tiểu cầu RBC: Số lượng hồng cầu WBC: Số lượng bạch cầu DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Tác dụng giảm ho HA 24 Bảng 3.2 Tác dụng long đờm HA 25 Bảng 3 Tác dụng chống viêm cấp HA 25 Bảng 3.4 Ảnh hưởng HA đến khối lượng thể động vật thí nghiệm 27 Bảng 3.5 Ảnh hưởng HA đến khối lượng thể động vật thí nghiệm 28 Bảng 3.6 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến số huyết học chuột cống trắng 29 Bảng 3.7 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến số huyết học chuột cống trắng giống đực 30 Bảng 3.8 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến chức gan chuột cống trắng giống 32 Bảng 3.9 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến chức gan chuột cống trắng giống đực 33 Bảng 3.10 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến chức thận chuột cống trắng giống 38 Bảng 3.11 Ảnh hưởng chế phẩm HA dùng 28 ngày đến chức thận, chuột cống trắng giống đực 39 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ Hình 3.1 Vi thể gan chuột lơ chứng 35 Hình 3.2 Vi thể gan chuột cống uống HA liều 35 Hình 3.3 Vi thể gan chuột uống HA liều 36 Hình 3.4 Vi thể gan chuột lô chứng 37 Hình 3.5 Vi thể gan chuột đực lô uống HA liều 37 Hình 3.6.Vi thể gan chuột đực uống HA liều 38 Hình 3.7 Vi thể thận chuột lơ chứng 40 Hình 3.8 Vi thể thận chuột lô uống HA liều 41 Hình 3.9 Vi thể thận chuột lô uống HA liều 41 Hình 3.10 Vi thể thận lô chuột chứng đực 42 Hình 3.11 Vi thể thận chuột đực uống HA liều 42 Hình 3.12 Vi thể thận lơ chuột đực uống HA liều 43 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm họng bệnh lý viêm nhiễm thường gặp đời sống Triệu chứng ban đầu gồm cảm giác khơ nóng rát họng, sau tăng lên thành đau họng, nói khó nuốt khó, ho khạc thường khơng có đờm mà nước nhày Trong viêm cấp tính viêm họng kèm theo viêm amidan, cúm, nhiễm virut Bệnh nhân mệt mỏi, sốt nhẹ, ớn lạnh sốt cao 38 - 39oC Triệu chứng sổ mũi ngạt mũi, hắt hơi, nhức đầu, ù tai thường kèm theo trường hợp viêm họng cúm, dị ứng thời tiết, lạnh Khám họng thấy, toàn phần niêm mạc họng đỏ rực [16] Họng hầu, trụ trước, trụ sau thành sau họng phù nề, đỏ thẫm Ngồi cịn thấy amidan viêm to, bề mặt amidan có chất nhầy trong, hạch vùng cổ hàm viêm tấy, đỏ, đau Ở Việt Nam khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, thời tiết thay đổi thất thường, mơi trường ô nhiễm, Là điều kiện thuận lợi cho bệnh phát sinh phát triển Bệnh gặp giới, lứa tuổi, đặc biệt trẻ em người già, tái phát nhiều lần năm Nguyên nhân gây bệnh chủ yếu virus vi khuẩn Viêm họng đặc trưng triệu chứng phù nề niêm mạc họng, họng sưng đau, đỏ rát, kèm theo tăng tiết đờm, ho Với xu hướng phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu phát triển đông dược Việt Nam thuốc HA thiết kế với vị dược liệu với mục đích để điều trị giảm ho, long đờm chống viêm Nhằm góp phần đánh giá tác dụng sinh học thuốc, đề tài “Đánh giá tác dụng giảm ho, long đờm, chống viêm cấp độc tính thuốc ho HA” thực với hai mục tiêu cụ thể sau: Đánh giá tác dụng giảm ho, long đờm, chống viêm cấp cao chiết thuốc HA Đánh giá độc tính cấp tính độc tính bán trường diễn cao chiết thuốc HA Chương TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý bệnh viêm họng, ho Theo quan điểm y học đại, viêm họng tình trạng viêm nhiễm niêm mạc họng, có nhiều ngun nhân chủ yếu virus vi khuẩn gây viêm vùng lân cận viêm mũi, viêm xoang mặt làm dịch tiết chảy xuống họng hay vi khuẩn gây sâu lan đến họng Ngoài việc tiếp xúc với khói bụi, hóa chất thời gian dài, hút thuốc lá, uống rượu, thay đổi thời tiết Gây tổn thương niêm mạc họng làm chức bảo vệ Viêm họng cấp: Là viêm cấp tính niêm mạc họng, nguyên nhân virus(60-80%) vi khuẩn (thường bội nhiễm sau nhiễm virus) với triệu chứng đau họng kèm theo cảm giác nóng rát, nuốt đau, sốt cao, mệt mỏi Viêm họng mạn: Là tình trạng viêm họng kéo dài, ảnh hưởng nghẹt mũi, tắc mũi, phải thở miệng, mùa lạnh: Viêm xoang, viêm amidan mạn; Hút thuốc lá, uống rượu, tiếp xúc với hóa chất, khói bụi; địa: dị ứng, đái tháo đường, suy gan, Với triệu chứng: Cảm giác họng khơ, nóng, rát; Ngứa họng, vướng họng tăng lên nuốt, có nhầy quánh, thường bị ho vào ban đêm, lạnh [14] Ho loạt hành động phản xạ bảo vệ xảy đường hơ hấp bị kích thích tắc nghẽn, động tác thở thành tiếng lớn tạo chế nhằm loại trừ chất nhầy, chất kích thích khỏi đường hơ hấp Nếu phản xạ ho khơng hiệu gây tích tụ dịch tiết vật thể lạ khí phế quản dẫn đến nhiễm trùng, xẹp phổi suy hô hấp Ho dấu hiệu khởi phát bệnh đường hô hấp [14] Nguyên nhân gây ho: Tùy theo nguyên nhân gây ho dẫn đến ho cấp tính hay ho mạn tính [14] Ho cấp tính xảy đột ngột thường kéo dài không 2-3 tuần Nguyên nhân thường nhiễm trùng đường ho hấp trên, gặp trường hợp cảm lạnh, viêm xoang nhiễm khuẩn cấp tính giới hạn bình thường, khơng có xơ hóa hoại tử Một số bị viêm sung huyết nhẹ Thận bình thường HE Thận bình thường PAS Hình 3.7.Vi thể thận chuột lơ chứng bình thường 40 Thận viêm có xung huyết nhẹ chuột lô chứng Thận viêm, sung huyết HE Thận viêm, sung huyết PAS Hình 3.8 Vi thể thận chuột lô uống HA liều Kết mô bệnh học gan, thận lô uống mẫu thử HA liều thực nghiệm Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái cấu trúc giới hạn bình thường, khơng có xơ hóa hoại tử Một số bị viêm sung huyết nhẹ Thận viêm, sung huyết HE Thận viêm, sung huyết PAS Hình 3.9.Vi thể thận chuột lơ uống HA liều Kết mô bệnh học, thận thực nghiệm chuột giống đực Kết mô bệnh học, thận lô chứng thực nghiệm 41 Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái cấu trúc giới hạn bình thường, khơng có xơ hóa hoại tử Một số bị viêm sung huyết nhẹ Thận viêm sung huyết.HE Thận viêm sung huyết.PAS Hình 3.10 Vi thể thận lô chuột chứng đực Kết mô bệnh học, thận lô uống mẫu thử HA liều thực nghiệm Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái cấu trúc giới hạn bình thường, khơng có xơ hóa hoại tử Một số bị viêm sung huyết nhẹ Thận sung huyết HE Thận sung huyết PAS Hình 3.11 Vi thể thận chuột đực uống HA liều Kết mô bệnh học gan, thận lô uống mẫu thử HA liều thực nghiệm Thận: Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái cấu 42 trúc giới hạn bình thường, khơng có xơ hóa hoại tử Một số bị viêm sung huyết nhẹ Thận sung huyết, viêm HE Thận sung huyết, viêm PAS Hình 3.12 Vi thể thận lô chuột đực uống HA liều Kết luận chung: Khơng có khác biệt Kết mơ bệnh học gan, thận lô dùng thuốc với lô chứng 43 Chương BÀN LUẬN 4.1.Về số tác dụng sinh học Bài thuốc HA bao gồm vị: Cam thảo: 6g Cỏ mực: 16g Cát cánh: 4g Thường xuân: 6g Xạ can: 16g Bối mẫu: 7g Mạch môn: 4g Sâm đại hành: 5g Các dược liệu thuốc có cơng nhiệt hóa đàm, dưỡng âm phế, nhuận phế, ho, cầm máu, thông phế khí, khử đàm Tác dụng chữa viêm họng, chữa ho phế nhiệt, ho lâu ngày, ho gió, ho khan, ho có đờm [17] Liều dùng theo dân gian 64g dược liệu /người/ngày tương đương 3,125 gam cao đặc/ ngày Quy đổi liều tương đương người động vật thí nghiệm [11] Tương đương 1,28g cao dược liệu/kg người/ngày) Hệ số quy đổi chuột nhắt trắng 12, chuột cống quy đổi sang liều dùng chuột thí nghiệm cao đặc HA ( Liều chuột nhắt = liều người x 12, liều chuột cống = liều người x liều chuột cống = liều người x 7) Trong đề tài thí nghiệm thử mức liều chuột nhắt 750mg/kg 1500mg/kg liều cho chuột cống 438mg/kg 876mg/kg 4.2 Tác dụng giảm ho, long đờm, chống viêm Ho phản xạ giúp loại bỏ chất tiết, chất gây kích thích mơi trường vật cản trở đường hô hấp Phản xạ ho điều khiển trung tâm ho thần kinh trung ương, tác nhân gây ho kích thích receptor nhận cảm với phản xạ ho, hoạt hóa trung tâm ho gây ho Trên thực nghiệm có nhiều mơ hình tác nhân gây ho, mơ hình gây ho cho chuột nhắt trắng acid citriclà mơ hình đơn giản, sử dụng rộng rãi để đánh giá tác dụng giảm ho [32], [33] Tiến hành thử tác dụng giảm ho cao đặc thuốc HA với mức liều: 750mg/kg 1500mg/kg chuột nhắt Sử dụng Codein phosphat với liều 100mg/kg chuột làm đối chứng dương codein phosphat alcaloid thuốc phiện, có tác dụng giảm ho ức chế trung tâm ho, làm khô tăng độ quánh dịch tiết 44 phế quản Do dùng Codein trường hợp ho khan, ho nhiều gây khó chịu, ngủ Quan sát số ho chuột phút từ chuột tiếp xúc với thuốc Kết cho thấy tác dụng giảm ho codein phosphat 100mg/kg thể rõ rệt thời điểm nghiên cứu Như việc lựa chọn mơ hình gây ho acid citric để thử tác dụng giảm ho cho cao đặc HA hợp lý Cao đặc HA thể tác dụng giảm ho rõ rệt với p< 0,05 liều thử nghiệm, nhiên mức liều 750mg/kg chuột, 1500mg/kg chuột tác dụng giảm ho tương tương Hơn dùng liều cao 1500mg/kg chuột, thể chất cao đặc làm cản trở việc hấp thu thuốc chuột Kết sở lựa chọn mức liều thấp có hiệu điều trị tốt Thành phần mẫu thử HA có vị có tác dụng giảm ho mạch mơn, cát cánh, cam thảo, bối mẫu, xạ can, thường xuân, cỏ mực, sâm đại hành Theo y học cổ truyền: Mạch mơn có cơng nhuận phế ho, dùng trường hợp phế táo ho khan, có tác dụng giảm ho, long đờm, bổ phổi Cam thảo dùng thuốc để điều vị, cam thảo có chứa saponin có tác dụng chống viêm, giảm ho, chữa viêm họng, ho khản tiếng, tiếng, giảm ho, long đờm, giảm tác dụng phụ vị thuốc khác [24] Cát cánh khử đàm, khái, tuyên phế, nùng, điều phế khí tun thơng phế khí, tán tà, trừ đờm, tiêu nùng, dẫn thuốc lên: Trị tắc tiếng, khàn tiếng họng sưng đau, ho nhiều đàm ngoại cảm, phế ung Cát cánh thường phối hợp với vị thuốc khác để chữa ho lâu ngày [7], [8], [20] Xuyên bối: Xuyên bối mẫu vị đắng, lạnh quy kinh Phế tâm Sách Bản thảo kinh giải: Nhập thủ thái âm phế kinh, thủ dương minh đại trường kinh Có tác dụng nhuận phế trừ đàm, khái, nhiệt tán kết: Trị viêm họng, ho gió, ho khan, ho có đờm, viêm khí quản, viêm phế quản kéo dài thể âm hư phế táo [20] Xạ can nhiệt giải độc, hố đàm bình suyễn, gián phế khí, hóa đờm Trị viêm họng sưng đau, ho đờm, suyễn tức, viêm họng cấp tính, viêm họng mãn tính, viêm họng hạt, ung độc, mụn nhọt, dùng trường hợp ho nhiệt, đờm nhiều đặc 45 khó thở co thắt khí quản [7], [15], [16], [24] Sâm đại hành vị nhạt, có tác dụng sinh tân khát, tiêu độc, an thần, bổ huyết, thông huyết,…Được sử dụng để làm thuốc bổ huyết, giúp tiêu hóa kém, ho viêm họng [15], [16] Thường xuân dùng để điều trị bệnh đường hơ hấp có tiết nhiều chất nhầy, nhiễm trùng đường hô hấp loại ho lạnh, điều trị hen phế quản [12] Cỏ mực vị chua, tính hàn, quy kinh can thận, bổ máu, cầm máu, ho máu, lỵ máu, rong kinh, băng huyết, chảy máu cam, trĩ máu, nôn máu, đái máu, bị thương chảy máu [15], [16] Tác dụng bổ thận âm, can nhiệt, làm đen râu tóc, huyết lỵ, [16] dùng chữa can thận âm kém, xuất huyết nội tạng (chảy máu dày, thổ huyết lao, rong kinh ), kiết lỵ, viêm gan mạn, chấn thương sưng tấy lở loét, mẩn ngứa, lỵ Còn dùng chữa ho hen, ho lao, viêm cổ họng [20] Thuốc trị ho thuốc có tác dụng lưu thơng khí đường hơ hấp Khi đường hơ hấp bị cản trở, thể phản ứng cách ho để lưu thơng khí Thử nghiệm cho thấy thuốc HA đạt mục tiêu giảm ho: Tác dụng giảm ho rõ ràng ức chế trung tâm ho qua thử nghiệm chuột nhắt trắng, liều thử làm giảm số lần ho mức liều 750mg/kg chuột, 1500mg/kg chuột tương đương Do sử dụng cần lựa chọn liều phù hợp để có hiệu điều trị tốt 4.3.Tác đụng long đờm Đờm dịch tiết khí phế quản, phế nang, họng, gây cản trở đường hơ hấp Thuốc long dờm có tác dụng phân cắt phân tử đờm, làm loãng đờm để tống đờm Đánh giá ảnh hưởng thuốc lượng đờm thu giúp đánh giá tác dụng long đờm Nghiên cứu tác dụng long đờm mô hình theo mơ tả Engler Szelenyi Dịch phế quản tiết làm tăng khả trừ đờm đường hơ hấp, dùng chất có màu đỏ phenol 0,5%, tiêm màng bụng chuột, sau thời gian phenol đỏ dịch phế quản để tính lượng dịch tiết khí phế quản Định lượng phenol đỏ dịch phế quản để tính lượng dịch tiết khí phế quản Xác định nồng độ đỏ phenol nhóm chất thử phương pháp đo mật độ quang Thuốc có tác dụng long đờm làm tăng thể tích đờm, tăng tiết dung 46 dịch đỏ phenol vào dịch tiết làm tăng nồng độ hấp thụ đo quang [24], [33] Dùng Bromhexin có tác dụng long đờm làm chất đối chứng dương Tiến hành thử tác dụng giảm ho, long đờm thuốc HA với mức liều 750mg/kg chuột 1500mg/kg chuột Kết cho thấy Bromhexin thể tác dụng long đờm rõ rệt thông qua việc làm tăng lượng đỏ phenol tiết khí quản so với lơ chứng Như lựa chọn mơ hình theo miêu tả Engler Szelenyi để đánh giá tác dụng long đờm thuốc HA hợp lý Trong thành phần thuốc HA có Cam thảo, Mạch mơn, Thường xn, Cỏ mực, Cát cánh Các dược liệu có cơng sinh tân dịch, nhuận táo, giúp tăng tiết dịch, loãng đờm, long đờm, giảm ho Tuy nhiên thực nghiệm lại tác dụng long đờm, chúng tơi đưa số bàn luận sau: Có thể kết hợp liều thành phần thuốc chưa hợp lý, vị cỏ mực xạ can hàm lượng 16g, cao so với vị thuốc khác, theo y học cổ truyền cỏ mực có vị ngọt, tính hàn tác dụng hạ nhiệt, cầm máu Xạ can có vị đắng, tính hàn, vào hai kinh can phế Có tác dụng hỏa, giải độc, tán huyết, tiêu đờm Dùng chữa yết hầu sưng đau, đờm nghẽn cổ họng Tỳ vị hư hàn khơng dùng Có thể tính hàn mạnh xạ can, hàm lượng cao hai vị thuốc làm hạn chế tác dụng long đờm vị thuốc 4.4.Tác dụng chống viêm Ở Việt Nam, mơ hình nghiên cứu tác dụng chống viêm gồm có mơ hình gây phù bàn chân chuột, mơ hình gây phù tai chuột xylen gần mơ hình viêm màng bụng, mơ hình gây phù bàn chân chuột carrageenin sử dụng phổ biến Chúng lựa chọn mô hình gây phù chân chuột carrageenin để đánh giá tác dụng chống viêm cấp So với mơ hình chống viêm cấp bán cấp khác mơ hình gây phù chân chuột nhất, đơn giản, dễ dàng thực phù hợp cho mục đích sàng lọc mục đích nghiên cứu sâu Đây mơ hình sử dụng rộng rãi nhiều nghiên cứu giới Việt Nam để đánh giá tác dụng chống viêm Tuy nhiên, việc áp dụng mơ hình khác nhau, có tác giả dùng chất gây phù carrageenin serotonin hay histamin, có tác giả sử 47 dụng chất Trong đó, chất gây phù nhiều tác giả sử dụng carrageenin Mơ hình gây phù bàn chân chuột mơ hình áp dụng phổ biến nước với chất gây phù carrageenin [36] Carrageenin (carrageenan) polysaccharid, chiết xuất từ tảo biển, dị nguyên tiêm vào bàn chân chuột gây viêm cấp Bản chất trình phản ứng miễn dịch không đặc hiệu Các dấu hiệu viêm sau tiêm carrageenan phù, đau, đỏ trình viêm diễn qua giai đoạn liên quan đến giải phóng chất trung gian gây viêm Giai đoạn (khoảng 1,5 h sau tiêm) có giải phóng histamin serotonin Giai đoạn (khoảng 1,5 h đến 2,5 h sau tiêm) có giải phóng bradykynin giai đoạn (khoảng 2,5 h đến h sau tiêm) - giai đoạn có đáp ứng mạnh với chất trung gian gây viêm có giải phóng prostaglandin Ở giai đoạn cuối dấu hiệu điển hình viêm xuất phù diễn rõ [34], [36] Vì vậy, đo mức độ phù bàn chân chuột cần tiến hành thời điểm từ 1h đến 6h sau tiêm carragenin Diclofenac thuốc chống viêm không steroid, dẫn xuất từ acid phenylacetic Thuốc có tác dụng chống viêm, giảm đau giảm sốt nhanh Diclofenac chất ức chế mạnh hoạt tính enzym cyclooxygenase -2 (COX-2), giảm tạo thành prostaglandin, prostacyclin, thromboxan chất trung gian viêm [4], [6] Chúng tiến hành đánh giá tác dụng chống viêm cấp HA dùng cho chuột cống trắng cam thảo, cát cánh, xạ can, mạch môn, cỏ mực, thường xuân, bối mẫu sâm đại hành, dược liệu thuốc có cơng nhiệt hóa đàm, dưỡng âm phế, nhuận phế, ho, cầm máu, thơng phế khí, khử đàm Tác dụng chữa viêm họng, uống mức liều 85mg/kg 200 mg/kg, sử dụng chứng dương diclofenac Kết nghiên cứu cho thấy: Chuột cống trắng uống diclofenac với liều 85mg/kg: thời điểm sau gây viêm bắt đầu thể tác dụng giảm thể tich bàn chân chuột chưa rõ rệt, mức độ sưng phù bàn chân chuột giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng trắng uống dung môi pha thuốc NaCMC 0,1 % thời điểm giờ, sau gây viêm (p< 0,01) Tỷ lệ ức chế phù bàn chân chuột thời điểm 1, 3, 5, so với chứng là: 50.9 %; 72.1% , 95.7% , 48 82 9% Chuột cống trắng uống HA với liều 438 mg/kg 876 mg/kg thể tích bàn chân chuột khơng giảm so với lô chứng trắng uống dung môi pha thuốc NaCMC 0,1 % thời điểm sau gây viêm (p 0.05) Mẫu thử HA tác dụng chống viêm đưa số bàn luận sau: Các vị thuốc mẫu thử HA như: Cam thảo, có tác dụng chống viêm, chống loét Tác dụng chứng minh động vật gây viêm loét dày histamin Vị thuốc xạ can có tác dụng kháng viêm khử đờm, hóa đờm bình suyễn, trị họng sưng đau, viêm amidan có mủ, suyễn tức [1] Vị sâm đại hành có tác dụng kháng khuẩn chống viêm, chữa họng sưng đau nuốt khó, nhiệt tiêu độc, bổ huyết Tuy nhiên mẫu thử chưa thể tác dụng chống viêm hàm lượng vị thuốc phối hợp chưa hợp lý 4.3 Về kết độc tính cấp Tiến hành thử nghiệm độc tính cáp tính chuột nhắt trắng theo quy định OECD thử nghiệm độc tính cấp tính thuốc Kết thử nghiệm cho thấy cao đặc mẫu thử HA khơng thể độc tính cấp liều tối đa chuột uống 17,6g/kg cân nặng Như nói sử dụng cao đặc mẫu thử HA thời gian ngắn tương đối an tồn 4.4 Về kết độc tính bán trường diễn thuốc Từ kết đánh giá độc tính cấp tác dụng dược lý kết luận thuốc HA tương đối an toàn sử dụng thời gian ngắn Ở liều cao dùng 1314mg/kg chuột khơng thấy thể độc tính, khơng xác định LD50 mẫu thử HA Như kết luận thuốc HA tương đối an toàn sử dụng thời gian ngắn có tác dụng giảm ho Tuy nhiên kết đánh giá tác dụng long đờm chống viêm chưa tốt thực nghiệm 49 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu tác dụng giảm ho, long đờm, chống viêm, độc tính thuốc HA cho thấy: Tác dụng giảm ho, tác dụng long đờm, chống viêm, Cao chiết thuốc HA thể tác dụng giảm ho, mức liều 750mg/kg chuột, 1500mg/kg chuột nhắt mơ hình gây ho acid citric Tác dụng mức liều 750mg/kg tương đương với tác dụng mức liều 1500mg/kg chuột nhắt Cao chiết thuốc liều 750mg/kg chuột liều 1500mg/kg không làm tăng tiết đờm mơ hình đánh giá tác dụng long đờm phenol đỏ Cao chiết thuốc liều 750mg/kg chuột liều 1500mg/kg khơng có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm caragenin Độc tính cấp tính: Khơng thể độc tính cấp tính mức 17,6g /kg chuột nhắt trắng (mức liều cao cho chuột uống mẫu thử) Độc tính bán trường diễn: Mẫu thử HA hai mức liều 438mg/kg chuột liều 1324 mg/kg uống liên tục 28 ngày: - Chuột lô ăn uống bình thường, mắt sáng, lơng mượt, phân khơ, nước tiểu bình thường Khơng có khác biệt khối lượng chuột lô uống mẫu thử mức liều lô chứng thời điểm nghiên cứu Ảnh hưởng số huyết học: Trên chuột nhắt cái, khơng có khác biệt số huyết học bạch cầu, hồng cầu, hemoglobin, hematocrit, tiểu cầu mức liều so với lô chứng khơng có nghĩa thống kê (p> 0,05) Trên chuột cống trắng giống đực: Số lượng bạch cầu số lượng tiểu cầu lô chuột thử khác biệt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (p>0,05).HA với liều không gây giảm số lượng hồng cầu, hematocrit, hemoglobin (HGB) chuột đực so với lô chứng rõ rệt (p>0,05) HA với liều làm giảm nhẹ số lượng hồng cầu (RBC), hematocrit (HCT), hemoglobin (HGB) chuột đực so với lô chứng rõ rệt (p0,05) Ở thời điểm sau uống mẫu thử 28 ngày, HA liều làm giảm nhẹ protein toàn phần huyết (p0,05) Hoạt độ AST hoạt độ ALT lơ thử có khác biệt so với lô chứng mức độ khác biệt nhỏ Trên chuột đực: HA liều liều không ảnh hưởng đến protein toàn phần huyết (p>0,05) Cholesterol toàn phần: Ở chuột cống đực uống HA liều liều thời điểm sau uống mẫu thử 14 ngày cholesterol tồn phần huyết khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng (p>0,05) Ở thời điểm sau uống mẫu thử 28 ngày cholesterol tồn phần huyết lơ chuột uống HA liều giảm nhẹ so với lô (p0,05) Ảnh hưởng số đánh giá chức thận: Trên chuột cái: HA liều không ảnh hưởng đáng kể đến creatinin huyết so với lô chứng (p>0,05) Chuột uống liều HA liều creatinin huyết có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng (p