Nghiên cứu định tính một số thành phần dược liệu và tác dụng giảm ho, long đờm của cao lỏng vĩ ngân

DƯƠNG DẠ THẢO NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN DƯỢC LIỆU VÀ TÁC DỤNG GIẢM HO, LONG ĐỜM CỦA CAO LỎNG VĨ NGÂN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2014... DƯƠNG DẠ THẢO NGHIÊN CỨ

DƯƠNG DẠ THẢO

NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN DƯỢC LIỆU VÀ TÁC DỤNG GIẢM HO, LONG ĐỜM CỦA

CAO LỎNG VĨ NGÂN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2014

DƯƠNG DẠ THẢO

NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN DƯỢC LIỆU VÀ TÁC DỤNG GIẢM HO, LONG ĐỜM CỦA

HÀ NỘI – 2014

TS Bùi Hồng Cường, người thầy đã tận tình hướng dẫn và động viên tôi trong suốt

quá trình thực thực hiện khóa luận tốt nghiệp

Tôi xin chân thành cảm ơn DS Nguyễn Thị Thu Trang đã tạo điều kiện,

quan tâm giúp đỡ tôi thực hiện khóa luận

Tôi xin cảm ơn PGS.TS Phạm Thị Vân Anh – Trưởng Bộ môn Dược lý,

Đại học Y Hà Nội cùng các anh chị ở Bộ môn đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình làm thực nghiệm

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, thầy cô và các anh chị ở Bộ môn Dược học cổ truyền đã chỉ bảo và giúp đỡ tôi trong thời gian nghiên cứu Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đã luôn động viên, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Hà Nội, tháng 5 năm 2014

Sinh viên

Dương Dạ Thảo

1.1 Sinh lý bệnh viêm họng ……….………… 2

1.2 Phương thuốc Vĩ Ngân……… 3

1.3 Thông tin cơ bản về các vị thuốc……….…….4

1.3.1 Xạ can……… ………4

1.3.2 Kim ngân hoa……… 5

1.3.3 Húng chanh……….7

1.3.4 Bạc hà……… ………8

1.3.5 Cam thảo……….9

1.3.6 Núc nác……….……….11

1.3.7 Cát cánh………… ……… 12

1.3.8 Huyền sâm………….………13

1.3.9 Mạch môn………….………14

1.3.10 Thiên môn………… ………15

1.3.11 Bàng đại hải……….16

1.3.12 Sinh địa………16

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… ……… 18

2.1 Nguyên liệu………… ……… 18

2.2 Phương tiện……… ……… 18

2.2.1 Thiết bị……… 18

2.2.2 Hóa chất……….……19

2.2.3 Động vật thí nghiệm……….………….19

2.3 Nội dung nghiên cứu ………… ………19

2.4 Phương pháp nghiên cứu……… …… 19

2.4.1 Định tính thành phần hóa học của một số dược liệu và cao lỏng Vĩ Ngân 19

3.2 Định tính so sánh cao và vị thuốc bằng sắc ký lớp mỏng……… 27

3.2.1 Kim ngân hoa…… ……… 27

3.2.2 Cam thảo………… ……….29

3.2.3 Xạ can……… ……….30

3.2.4 Núc nác……… 32

3.2.5 Huyền sâm…….……… ……….33

3.2.6 Cát cánh, mạch môn, thiên môn………35

3.3 Nghiên cứu tác dụng sinh học ……… ……….37

3.3.1 Tác dụng giảm ho……… …37

3.3.2 Tác dụng long đờm ……… 39

3.4 Bàn luận………….……….42

3.4.1 Thành phần hóa học………….……….42

3.4.2 Tác dụng sinh học……….………44

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…… ……… 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO

Bảng 3.1 Kết quả định tính hóa học các nhóm chất trong cao lỏng và dược liệu…… 26

Bảng 3.2 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và KNH ở bước sóng 366 nm………….28

Bảng 3.3 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và CT ở bước sóng 254 nm………30

Bảng 3.4 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và XC sau khi phun thuốc thử…………31

Bảng 3.5 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và NN ở bước sóng 254 nm………33

Bảng 3.6 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và HS sau khi hiện màu……….….34

Bảng 3.7 Kết quả phân tích sắc ký đồ của cao và CC, TM, MM sau khi hiện màu…….36

Bảng 3.8 Ảnh hưởng của cao lỏng Vĩ Ngân lên thời gian tiềm tàng xuất hiện cơn ho…38

Bảng 3.9 Ảnh hưởng của cao lỏng Vĩ Ngân lên tổng số cơn ho……….….39

Bảng 3.10 Ảnh hưởng của cao lỏng Vĩ Ngân lên mật độ quang……… 40

Hình Trang

Hình 2.1 Hệ thống thiết bị sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao Linomat 5………… 18

Hình 3.1 Sắc ký đồ cao-KNH ở bước sóng 366 nm………28

Hình 3.2 Sắc ký đồ cao-CT ở bước sóng 254 nm……… ………30

Hình 3.3 Sắc ký đồ cao-XC sau khi hiện màu……….31

Hình 3.4 Sắc ký đồ cao-NN ở bước sóng 254 nm……… 33

Hình 3.5 Sắc ký đồ cao-HS sau khi hiện màu……… 34

Hình 3.6 Sắc ký đồ CC- cao- TM- MM sau khi hiện màu……… 36

Hình 3.7 Biểu đồ biểu thị thời gian tiềm tàng xuất hiện cơn ho ở chuột………….38

Hình 3.8 Biểu đồ biểu thị tổng số cơn ho ở chuột……… …………39

Hình 3.9 Biểu đồ biểu thị mật độ quang ở bước sóng 265 nm………41

ĐẶT VẤN ĐỀ

Viêm họng là một bệnh lý viêm nhiễm thường gặp trong đời sống Ở Việt Nam, khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, thời tiết thay đổi thất thường, môi trường ô nhiễm,… là điều kiện thuận lợi cho bệnh phát sinh và phát triển Bệnh gặp ở mọi giới, mọi lứa tuổi, đặc biệt ở trẻ em, có thể tái phát nhiều lần trong năm Nguyên nhân gây bệnh chủ yếu do virus và vi khuẩn Viêm họng được đặc trưng bởi các triệu chứng như phù nề niêm mạc họng, họng sưng đau, đỏ rát, kèm theo sự tăng tiết đờm, ho Các thuốc được sử dụng trong điều trị thường là thuốc kháng sinh, chống viêm, giảm đau… cùng với thuốc giảm ho, long đờm Thực tế, việc sử dụng thuốc tân dược trong điều trị viêm họng, nhất là đối với viêm họng mạn tính, có thể gây ra nhiều tác dụng bất lợi như kháng thuốc, hại gan, thận, rối loạn tiêu hóa, viêm loét dạ dày… Do vậy, việc nghiên cứu, sử dụng thuốc đông dược để điều trị viêm họng ngày càng được quan tâm nhằm hạn chế tác dụng phụ, mang lại ý nghĩa thiết thực đối với người bệnh và góp phần phát triển nền đông dược Việt Nam

Xuất phát từ điều đó, Công ty Dược phẩm Hoa Linh đã nghiên cứu bào chế cao lỏng Vĩ Ngân để điều trị viêm họng từ phương thuốc gồm các dược liệu như: kim ngân hoa, xạ can, bạc hà, húng chanh, núc nác, cam thảo, cát cánh, thiên môn… Hiện nay, cao lỏng Vĩ Ngân đang được tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện để cho ra đời chế phẩm Do đó, nhằm góp phần xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và đánh giá tác dụng

sinh học của chế phẩm, đề tài “Nghiên cứu định tính một số thành phần dược liệu

và tác dụng giảm ho, long đờm của cao lỏng Vĩ Ngân” được thực hiện với các

mục tiêu cụ thể:

- Định tính bằng phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng so sánh cao lỏng và một số thành phần dược liệu, góp phần xây dựng tiêu chuẩn bài thuốc

- Nghiên cứu một số tác dụng sinh học của cao lỏng Vĩ Ngân liên quan tới điều trị viêm họng: giảm ho, long đờm

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý bệnh viêm họng

 Theo quan điểm Y học hiện đại:

- Viêm họng là tình trạng viêm nhiễm niêm mạc họng, có nhiều nguyên nhân nhưng chủ yếu do virus hoặc vi khuẩn gây viêm ở các vùng lân cận như viêm mũi, viêm xoang mặt làm dịch tiết chảy xuống họng hay do vi khuẩn gây sâu răng lan đến họng Ngoài ra, việc tiếp xúc với khói bụi, hóa chất trong thời gian dài, hút thuốc lá, uống rượu, thay đổi thời tiết… gây tổn thương niêm mạc họng, làm họng mất chức năng bảo vệ

- Phân loại:

+ Viêm họng cấp: là viêm cấp tính niêm mạc họng, nguyên nhân do virus 80%) và vi khuẩn (thường do bội nhiễm sau khi nhiễm virus) với các triệu chứng: đau họng kèm theo cảm giác nóng rát, nuốt đau, sốt cao, mệt mỏi,… + Viêm họng mạn: là tình trạng viêm họng kéo dài, do ảnh hưởng của nghẹt, tắc mũi, phải thở bằng miệng, nhất là về mùa lạnh; viêm xoang, viêm amidan mạn; hút thuốc lá, uống rượu, tiếp xúc nhiều với hóa chất, khói bụi; cơ địa: dị ứng, đái tháo đường, suy gan…với các triệu chứng: cảm giác họng khô, nóng, rát; ngứa họng, vướng họng tăng lên khi nuốt, có ít nhầy quánh, thường bị ho vào ban đêm, khi lạnh [10], [22]

(60- Theo quan điểm YHCT:

- Hầu đảm nhiệm chức năng hít thở thuộc phế, họng là cửa đường ra của vị, cửa ngõ của các tạng Viêm họng do khí nhiệt gây đờm kết, là chứng bệnh sưng, nóng, đỏ, đau gọi là hầu tý [20]

- Nguyên nhân: Ngoại tà xâm nhập, ăn uống không điều độ, tình chí bị tổn thương, phủ tạng mất điều hòa… [17], do nhiệt độc phế vị xông lên và nhiễm khí độc dịch lệ, tổn thương phế âm [6]

- Phân loại:

+ Thể phong nhiệt xâm nhập: họng khô, sưng nóng, đỏ đau, nuốt khó, phát sốt, khát nước, ho hen, rêu lưỡi vàng Điều trị: dùng thuốc sơ phong thanh nhiệt

+ Thể phong hàn xâm nhập: họng đỏ nhạt, không sưng, đau mình mẩy, rêu lưỡi trắng mỏng… Điều trị: dùng thuốc sơ phong tán hàn [21]

Ngoài ra, cần kết hợp điều trị các triệu chứng bằng các thuốc hóa đàm, chỉ ho:

- Theo YHCT, đàm là chất dịch nhớt, dính, sản sinh trong quá trình hoạt động của lục phủ, ngũ tạng Đàm ngưng đọng ở phế thì gọi là đờm Đờm làm không khí vào phế khó khăn, gây khó thở, tạo môi trường phát triển cho các loại virus, vi khuẩn; kích thích niêm mạc gây ho, kích thích cơ trơn khí phế quản gây co thắt

Do đó, khử đàm là một khâu rất quan trọng trong điều trị bệnh ở phế Có 2 loại: thuốc hóa đàm hàn, thuốc hóa đàm nhiệt

- Thuốc chỉ ho có tác dụng ôn phế, thanh phế, nhuận phế, giáng khí phế nghịch, đồng thời có tác dụng hóa đàm, điều trị ho do nhiều nguyên nhân, có 2 loại: ôn phế chỉ khái, thanh phế chỉ khái [16]

1.2 Phương thuốc Vĩ Ngân

Cao lỏng Vĩ Ngân được bào chế từ phương thuốc Vĩ Ngân, với công thức được Công ty Dược phẩm Hoa Linh nghiên cứu và đề xuất, cụ thể như sau:

Cam thảo (Radix Glycyrrhizae) 8g

Cát cánh (Radix Platycodi grandiflori) 4g

Sinh địa (Radix Rhemanniae glutinosae) 8g

Công năng: Kháng khuẩn, tiêu viêm, thanh nhiệt, hóa đàm, chỉ ho…

Chủ trị: Các chứng hầu họng bị viêm, sưng đau, đỏ rát, nhiều đờm, khản tiếng, ho,

viêm amidan, viêm thanh quản, viêm khí quản…

1.3 Thông tin cơ bản về các vị thuốc

1.3.1 Xạ can

a, Tên khoa học vị thuốc: Rhizoma Belamcandae

b, Bộ phận dùng: Thân rễ phơi hay sấy khô của cây xạ can Belamcanda chinensis

(L.), DC Họ La dơn (Iridaceae) [11], [15], [16], [25]

c, Thành phần hóa học

- Flavonoid thuộc nhóm isoflavonoid: tectoridin (1,5%), tectorigenin, methylirisolidon, irigenin, iridin, dimethyltectorigenin, irisflorentin, muningin, các iristectorigenin A và B, belamcandin, dichotomitin [4], [14], [25], 9’-methoxy dehydrodiconiferyl alcol [3]

7-O Các thành phần khác: belamcandal, desacetylbelamcandal, belamcandol A [4]

d, Tác dụng sinh học

- Tác dụng kháng khuẩn: Cao chiết ethanol thân rễ xạ can ức chế các chủng vi

khuẩn: phế cầu, liên cầu tan máu, trực khuẩn ho gà, Bacillus subtilis, có tác dụng yếu đối với các chủng vi khuẩn: tụ cầu vàng, Shigella dysenteriae, Sh.shigae,

Enterococcus [18], [25]

- Ngoài ra, xạ can còn có tác dụng chống viêm ở chuột cống trắng, chống co thắt gây ra bởi histamine trên cơ trơn chuột lang; tác dụng lợi tiểu nhẹ, giảm đau và có độc tính thấp [1], [9], [18], [25]

- Cao chiết với nước nóng nồng độ 0,05 mg/ml có hoạt tính ức chế aldose reductase, enzym gây tích lũy sorbitol trong tế bào ở bệnh đái tháo đường [25]

- TEC-01 chiết xuất từ xạ can, thành phần chính là tectorigenin, có tác dụng ức chế PGE2 và COX2 ở đại thực bào phúc mạc chuột [35], ngăn hình thành khối u [33], ức chế bệnh sinh của xơ hóa phổi vô căn [50],chống lại sự hình thành xơ gan [48], chống đột biến và chống oxy hóa [47]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

+ Thông kinh hoạt lạc, tán huyết: dùng trong trường hợp bế kinh dẫn đến bụng sườn căng tức, đầy trướng [16]

- Liều dùng: Ngày dùng 4 – 12g [16]

- Kiêng kỵ: người tỳ vị hư hàn [7], [16], phụ nữ có thai [11], [25]

1.3.2 Kim ngân hoa

a, Tên khoa học vị thuốc: Flos Lonicerae

b, Bộ phận dùng: nụ hoa có lẫn một số hoa phơi hay sấy khô của cây kim ngân

(Lonicera japonica Thunb.) và một số loài khác cùng chi như L dasystyla Rehd.; L

confusa DC và L cambodiana Pierre Họ Kim ngân (Caprifoliaceae) [7], [16], [25]

c, Thành phần hóa học

- Flavonoid thuộc nhóm euflavonoid: luteolin, luteolin -7- rutinosid [4], [25]

- Các flavonoid khác gồm: lonicerin, loniceraflavon và một số iridoid glycoside như loganin, secoxyloganin, secologanin, secologanin dimethyl acetal, vogelosid, epivogelosid [25]

- Tinh dầu: α-pinen; hex-1-en; hex-3-en-1-ol; cis và trans (α-hydroxyisopropyl)-tetrahydrofuran; geraniol; α-terpineol; alcol benzylic; alcol β-phenyl ethylic; carvacrol; eugenol; linalool; 2,6,6-trimethyl-2-vinyl-5 hydroxy tetrahydrydropyran [25]

-2-methyl-2-vinyl-5 Acid clorogenic 6%, acid isoclorogenic gồm 3 đồng phân là acid isoclorogenic a (acid 3,5-dicafeoyl quinic), isoclorogenic b và c (là 2 đồng phân của acid 3,4-dicafeoylquinic [4], [25]

- Saponin, trong đó aglycon là acid oleanolic hoặc hederagenin [25]

- Một số chất carotenoid: ξ-caroten, β-cryptoxanthin, auroxanthin [4]

d, Tác dụng sinh học

- Kim ngân hoa có phổ kháng khuẩn rộng, ức chế nhiều loại vi khuẩn như trực khuẩn lỵ, trực khuẩn thương hàn, phó thương hàn, đại tràng, ho gà, mủ xanh, phẩy khuẩn tả, bạch hầu, lao, tụ cầu khuẩn, liên cầu khuẩn, song cầu khuẩn viêm phổi [16], [19], [25] Ngoài ra còn ức chế một số nấm ngoài da [16]

- Kim ngân hoa được dùng chủ yếu để trị viêm nhiễm đường hô hấp trên như viêm amidan, viêm họng, viêm thanh quản; viêm da, mụn nhọt, sưng vú, viêm ruột thừa; trị lỵ trực trùng, viêm màng kết do siêu vi, cúm [4]

- Ngoài ra, kim ngân hoa còn có tác dụng chống viêm [12], [13],[19], [23], có tác dụng tốt trong điều trị COPD [42], tăng cường chuyển hóa các chất béo, chống sốc phản vệ và không độc [15], [25], kháng một số vius, bảo vệ tế bào gan [44], [46], ức chế enzym α-Glucosidase, giảm đường máu sau ăn [52]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

+ Giải độc sát khuẩn: dùng trong bệnh sưng đau của hầu họng, viêm amidan, viêm thanh quản, đau mắt đỏ, phòng bệnh viêm não [16]; chữa cảm cúm, viêm phổi, áp xe phổi, viêm gan virus, viêm gan mạn tính, viêm cầu thận cấp tính, nhiễm khuẩn huyết, viêm phổi trẻ em, co giật trẻ em [25]

+ Thanh giải biểu nhiệt: dùng trong các trường hợp ngoại cảm phong nhiệt, ôn nhiệt sơ khởi (sốt nóng ở thời kỳ đầu) [16]

- Liều dùng: 12-20g/ngày [16] Ngày dùng 4 – 6g hoa dưới dạng thuốc sắc, hãm,

cao, rượu thuốc hoặc hoàn tán [25]

- Kiêng kỵ: Những người ở thể hư hàn, không thực nhiệt, mồ hôi ra nhiều, mụn

nhọt đã có mủ vỡ loét [7], [11], [16], [25]

1.3.3 Húng chanh

a, Tên khoa học vị thuốc: Folium Coleus

b, Bộ phận dùng: lá dùng tươi của cây húng chanh Coleus aromaticus Benth Họ

- Tác dụng kháng khuẩn: Tinh dầu húng chanh có tác dụng ức chế mạnh đối với

các vi khuẩn: trực khuẩn mycoides, trực khuẩn subtilis, trực khuẩn lao (giảm độc), trực khuẩn lỵ Flexner, trực khuẩn bạch hầu, trực khuẩn ho gà, trực khuẩn

lỵ Shiga, E coli, tụ cầu vàng, liên cầu khuẩn tan máu, trực khuẩn thương hàn; nấm Candida albicans, diệt amip Entamoeba moshkowskii [15], [24]

- Cao nước húng chanh có tác dụng ức chế sự phát triển của phế cầu khuẩn, tụ cầu khuẩn vàng Như vậy, tác dụng kháng khuẩn của húng chanh không chỉ do tinh dầu, mà còn có thể do những thành phần khác như flavon, acid nhân thơm [24]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Tính vị: Vị the cay, hơi chua, mùi thơm, tính ấm [24]

- Quy kinh: Can, phế [24]

- Công năng, chủ trị: Lợi phế, trừ đờm, giải cảm, phát hãn, thoái nhiệt, tiêu độc:

Dùng chữa cảm cúm, nhức đầu ngạt mũi, ho, hen, viêm họng, khản tiếng, ho ra máu, ho gà, sốt cao, sốt không ra mồ hôi, nôn ra máu, chảy máu cam [16], [24]

- Liều dùng: Ngày dùng 10 – 16g lá tươi, hoặc 4 – 8g lá khô [24]

1.3.4 Bạc hà

a, Tên khoa học vị thuốc: Herba Menthae

b, Bộ phận dùng: Phần trên mặt đất của cây bạc hà Việt Nam Mentha arvensis L

Họ Hoa môi (Lamiaceae) [7], [8], [16], [24]

β Tinh dầu Mentha arvensis di thực vào Việt Nam (NV.74) chứa sabinen, myrcen,

α-pinen, limonen, cineol, methyheptenon, menthon, isomenthol, menthyl acetat, neomenthol, menthol, isomenthon, pulegon [24]

- Tác dụng kháng khuẩn: phổ kháng khuẩn rộng, ức chế nhiều vi khuẩn như:

Staphilo.aureus, Sal.typhy, Sh Flexneri, Sh Sonnei Sh Shiga, B subtilis, Strepto D pneumonie, H perrtussis [16], ức chế các chủng vi khuẩn tả Vibrio

cholera Eltor, Vibrio cholera Inaba, Vibrio cholera Ogawa [24]

- Menthol có tác dụng chống co thắt, giảm đau, kích thích tiêu hóa, chữa hôi miệng [5], [8]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Tính vị: Vị cay thơm, tính mát [7], [8], [16]

- Qui kinh: Phế và can [7], [11], [16]

- Công năng, chủ trị:

+ Phát tán phong nhiệt: Trị ngoại cảm phong nhiệt, sốt không ra mồ hôi, nhức

đầu, ngạt mũi, giảm ho viêm họng, mắt đỏ, ngứa nổi mề đay, bụng đau, đầy chướng, tiêu hóa kém, nôn mửa [5], [7], [11], [16], [24]

+ Trừ phong giảm đau: trị đau đầu, đau mắt đỏ do phong nhiệt, họng đỏ, sưng

đau [7], [16], [24]

+ Kiện vị, chỉ tả, giải độc, tăng tiết mật, kích thích tiêu hóa: dùng trong các trường hợp ăn uống không tiêu, nôn lợm, ợ chua, đau bụng, đi tả [8], [16] + Hóa đàm, hạ tích, tiêu sưng, chỉ ngứa [24]

- Liều dùng: Lá và toàn cây, ngày uống 4 – 8g dưới dạng thuốc hãm [24], 2 –

12g [16] Tinh dầu và menthol: 0,02 – 0,2ml/lần, 0,06 – 0,6ml/ngày [24]

- Kiêng kỵ: Người khí hư huyết táo, can dương thịnh biểu hư, mồ hôi nhiều,

người gầy yếu, suy nhược toàn thân, táo bón, huyết áp cao, trẻ em dưới 1 tuổi

không nên dùng [7], [11], [16], [24]

1.3.5 Cam thảo

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Glycyrrhizae

b, Bộ phận dùng: rễ phơi hay sấy khô của cây cam thảo bắc Glycyrrhiza glabra L hoặc Glycyrrhiza uralensis Fisch ex DC Họ Đậu (Fabaceae) [4], [8], [16], [24]

c, Thành phần hóa học

- Glycyrrhizin là một saponin nhóm olean (10 – 14% trong dược liệu khô)

- Các dẫn chất triterpenoid khác như acid liquiritic, acid glycyrrhetic, acid 24-hydroxyglycyrrhetic, glabrolid, desoxyglabrolid, isoglabrolid, acid liquiridiolic…

18-α-hydroxy Các flavonoid (3 – 4%): có 27 chất đã được biết, quan trọng nhất là liquiritin (hay liquiritirosid) và isoliquiritin (hay isoliquiritirosid)

- Ngoài ra còn có nhiều flavonoid thuộc các nhóm khác: isoflavan (gla-bridin), isoflavon (glabron), isoflaven (glabren)

- Các hoạt chất estrogen steroid, dẫn chất coumarin (umbelliferon, herniarin, liqcoumarin), tinh bột, glucose, saccharose [4], [8], [15], [24]

d, Tác dụng sinh học

- Dịch chiết cam thảo có tác dụng chống loét dạ dày, ức chế tác dụng gây tăng tiết dịch vị của histamin, chống co thắt cơ trơn ruột (đối kháng với histamin, acetycholin), do thành phần flavonoid [4], [8], [15],[16], [24]

- Tác dụng long đờm do các saponin, tác dụng trấn ho của acid-18-glycyrrhitic tương tự codein [4], [8]

- Tác dụng ức chế enzym monoaminoxydase (MAO) của liquiritigenin và isoliquiritigenin [4], chống trầm cảm [31], bảo vệ tế bào thần kinh [49]

- Gây trấn tĩnh, ức chế thần kinh trung ương, hạ thân nhiệt, giảm hô hấp, bảo vệ gan trong viêm gan mạn tính, tăng bài tiết mật, chống viêm gan, chống dị ứng [8], [24]

- Cam thảo chứa chất glycyrrhizin có tác dụng giải độc nhất định với ngộ độc thức

ăn hoặc trúng độc một số thuốc khác: morphin, cocain, strychnin, atropin; độc tố bạch hầu, uốn ván (cơ chế: glycyrrhizin thủy phân thành acid glucuronic kết hợp với chất độc) [4], [16]

- Tác dụng oestrogen, tác dụng tương tự cortison của glycyrrhizin trên chuyển hóa chất điện giải, giữ natri và clorid, bài tiết kali, chống viêm, chữa táo bón [4], [24]

- Nghiên cứu gần đây còn cho thấy cam thảo có tác dụng nâng cao khả năng miễn dịch của cơ thể [4], giảm cholesterol máu [16]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

+ Tả hỏa giải độc: trị mụn nhọt đinh độc sưng đau [11], [16]

+ Hoãn cấp chỉ thống: trị đau dạ dày, đau bụng, gân mạch co rút [8], [16]

- Liều dùng: Ngày dùng 4 – 20g, dưới dạng bột, thuốc hãm, nước sắc, cao mềm

[11], [24]

- Kiêng kị: Tỳ vị thấp trệ, sôi bụng, đầy bụng; dùng lâu dễ bị phù nề [16]

1.3.6 Núc nác

a, Tên khoa học vị thuốc: Cortex Oroxyli

b, Bộ phận dùng: vỏ thân cây núc nác Oroxylum indicum Vent., họ Núc nác

(Bignoniaceae) [4], [11], [8]

c, Thành phần hóa học

Flavonoid thuộc nhóm euflavonoid: chrysin, baicalein, oroxylin A [4], [15], [24],baicalein -7 -O- glucoside, baicalein -7 -O- diglucoside, chrysin - diglucoside [29], acid p-coumaric [24], các hợp chất phenolic [30]

d, Tác dụng sinh học

- Vỏ núc nác nghiên cứu thực nghiệm thấy có tác dụng chống dị ứng rõ rệt và làm tăng sức đề kháng của cơ thể đối với một số tác nhân độc hại; ức chế giai đoạn cấp tính của phản ứng viêm [24]

- Flavonoid toàn phần chiết từ vỏ núc nác dùng điều trị cho bệnh nhân mắc bệnh vảy nến, hen phế quản, tổ đỉa, mày đay cho kết quả tốt (Chế phẩm “Nunaxin”) [24]

- Ngoài ra, các nghiên cứu còn chứng minh núc nác có tác dụng chống đột biến (baicalein), ức chế tế bào ung thư, kích thích miễn dịch [24], [30], chống oxy hóa,

ức chế α- glucosidase trong điều trị tiểu đường [45], chống loét dạ dày [27]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Tính vị: Vị đắng, tính mát [24]

- Quy kinh: bàng quang, tỳ [11]

- Công năng, chủ trị: Thanh can giải nhiệt, tiêu độc, sát trùng, lợi thấp, nhuận

phế, chỉ khái, chỉ thống: dùng chữa các bệnh vàng da, dị ứng mẩn ngứa, viêm họng, ho khản tiếng, đau dạ dày, lỵ, viêm đường tiết niệu, trẻ con ban sởi [8], [11], [16], [24]

- Liều dùng: Ngày dùng 8 – 16g dưới dạng thuốc sắc hoặc cao lỏng [11], [24]

- Kiêng kỵ: Người hư hàn đau bụng, đầy bụng, tiêu chảy [11], [24]

1.3.7 Cát cánh

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Platycodi grandiflori

b, Bộ phận dùng: rễ phơi hay sấy khô của cây cát cánh Platycodon grandiflorum

(Jacd) A.DC Họ Hoa chuông (Campanulaceae) [4], [7], [8], [16], [24]

c, Thành phần hóa học

Hoạt chất chính là saponin triterpenoid nhóm olean (platycodin A,C,D, D2, E;

các polygalacin D, D2, 16-oxo-platycodin D) [8], [24], [40]; các sapogenin là platycodigenin, acid polygalacic [4], [24]

Ngoài ra còn có polysaccharid, phytosterol, tanin [24], inulin [4]

d, Tác dụng sinh học

- Trên lâm sàng, saponin của cát cánh có tác dụng tiêu đờm rõ rệt Khi uống, saponin gây kích thích niêm mạc họng và dạ dày, đưa đến phản ứng tăng tiết dịch ở đường hô hấp làm cho đờm loãng và dễ bị tống ra ngoài [4], [15], [16], [24]

- Saponin của cát cánh có tác dụng phá huyết mạnh Ngoài ra, có tác dụng giảm đau, làm trấn tĩnh, hạ nhiệt, giảm ho, chống loét, chống viêm [16]

- Tác dụng kháng khuẩn: ức chế Staphylococcus aureus, B mycoides, D

pneumonia [16]

- Tác dụng chống oxy hóa, chống ung thư [39], [43], bảo vệ tế bào gan [37]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Tính vị: Vị hơi ngọt, sau đắng, hơi cay, tính bình [2], [7], [8], [24], tính ấm [16]

- Kiêng kỵ: người âm hư hỏa vượng, ho lâu ngày, ho ra máu; dùng lượng lớn quá

dẫn đến đau tim, buồn nôn [16] Thận trọng với phụ nữ có thai [24]

1.3.8 Huyền sâm

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Scrophulariae

b, Bộ phận dùng: rễ phơi hay sấy khô của cây huyền sâm Scrophularia

buergeriana Miq Họ Hoa mõm sói (Scrophulariaceae) [11], [16], [24]

c, Thành phần hóa học

- Các iridoid: Scrophularin, harpagid, harpagosid, ningpogenin [15], [24]; O-Me catalpol, angorosid C [24], buergerinin F1 và G2 [41]

- Ngoài ra có alcaloid, đường, steroid, acid amin, acid béo, carotene, 17 nguyên tố

vi lượng [24], các ester phenylpropanoid của rhamnose [36]

d, Tác dụng sinh học

+ Tác dụng kháng khuẩn, an thần [24]

+ Tác dụng điều trị tốt đối với viêm họng mạn tính [24]

+ Tác dụng tăng huyết áp và cường tim nhẹ trên thỏ, liều cao có tác dụng ngược lại,

ho khan, táo bón, mẩn ngứa, mụn nhọt, đau mắt đỏ

+ Tán kết, nhuyễn kiên, làm mềm u, khối rắn: dùng trong bệnh đởm kết hạch như loa lịch (tràng nhạc, lao hạch)

+ Bổ thận, tư thận âm: dùng để tráng thủy, chế hỏa

+ Chỉ khát: trị tiêu khát, dùng trong bệnh đái đường[7], [11], [15], [16], [24]

- Liều dùng: Ngày dùng 4 – 12g, dạng thuốc sắc hoặc cồn ngậm [24]

- Kiêng kỵ: Người có thấp ở tỳ vị, tỳ vị hư hàn, đại tiện lỏng [11], [16], huyết áp

thấp [24]

1.3.9 Mạch môn

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Ophiopogonis

b, Bộ phận dùng: rễ củ phơi hay sấy khô của cây mạch môn Ophiopogon

japonicus (L.f.) Ker Gawl., họ Hoàng tinh (Convallariaceae) [4], [11], [25]

c, Thành phần hóa học

- Saponin steroid: Ophiopogonin A, B, C, D [4], nhóm furostan và spirostan [51]

- Carbohydrat: glucofructan và một số monosaccharide (glucose, fructose,…)

- β-sitosterol, stigmasterol, β-sitosterol β-D-glucosid, tinh dầu [4], [25]

d, Tác dụng sinh học

Tác dụng chống viêm rõ rệt đối với cả 2 giai đoạn cấp tính và mạn tính của phản ứng viêm thực nghiệm Tác dụng ức chế tương đối khá trên phế cầu, yếu hơn trên

các chủng: tụ cầu vàng, Shigella dysenteriae, Bacillus subtilis [25]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Liều dùng: Ngày dùng 6 – 20, dạng thuốc sắc [11], [15], [25]

- Kiêng kỵ: Tỳ vị hư hàn, tiêu chảy, ăn uống chậm tiêu [11]

1.3.10 Thiên môn

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Asparagi

b, Bộ phận dùng: củ của cây thiên môn đông Asparagus cochinchinensis (Lour)

Merr Họ Thiên môn đông (Asparagaceae) [4], [7], [8], [16], [25]

c, Thành phần hóa học

- Hoạt chất chính là saponin steroid nhóm furostan [4], [25], [53]

- Ngoài ra có carbohydrat, các amino acid tự do: aspargin, citrulin, serin, threonin, prolin, glycin, alanin, valin, methionin, leucin, phenylalanine, thyroxin, acid aspartic, acid glutamic, arginin, histidin, lysin [4]

d, Tác dụng sinh học

- Tác dụng kháng khuẩn: ức chế sự phát triển của các chủng vi khuẩn Bacillus

anthracis, Streptococus hemolyticus A và B, B diphtheria, Diplococcus pneumonia, Staphylococcus aureus, Staphylococcus citreus, B subtilis [25]

- Tác dụng lợi tiểu, lợi đờm, giảm ho, hạ nhiệt [25]

- Tác dụng chống viêm, điều trị viêm da [38], kháng viêm trong hệ thần kinh trung ương [34]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

+ Dưỡng vị sinh tân: dùng sau khi ốm dậy, tân dịch hao tổn, miệng khát

+ Dưỡng tâm âm: trị bệnh tâm huyết không đủ, hồi hộp, loạn nhịp tim, ngắn hơi,

vô lực; miệng lưỡi mụn nhọt, mồ hôi nhiều; an thần

+ Nhuận tràng: chữa đại tiện bí táo do háo khát [7], [8], [11], [15], [16], [25]

- Liều dùng: Ngày dùng 4 – 12 g [11], [16], [25]

- Kiêng kỵ: Người tỳ vị hư hàn, ỉa chảy không nên dùng [7], [25]

1.3.11 Bàng đại hải (Lười ươi)

a, Tên khoa học vị thuốc: Semen Scaphii

b, Bộ phận dùng: hạt phơi hay sấy khô của cây lười ươi Scaphium lychnophorum

(Hance) Kost Họ Trôm (Sterculiaceae) [25]

c, Thành phần hóa học

Hạt có 2 phần: phần nhân chứa chất béo, tinh bột, sterculin; phần vỏ chứa chất béo, bassorin, chất nhày, tanin Phần đường trong hạt chủ yếu là galactose, pentose và arabinose [25]

d, Tác dụng và công dụng theo YHCT

- Tính vị: Vị ngọt, nhạt, tính hàn [25]

- Công năng, chủ trị:

Thanh phế nhiệt, lợi yết hầu, nhuận tràng, thông tiện, giải độc: Dùng trong trường hợp cơ thể nhiệt, táo, sốt âm ỉ, ho khan, đau họng, nhức răng, đại tiện ra máu, mụn lở Hạt lười ươi là loại thuốc bổ mát, sinh tân dịch, trị các chứng đau ruột, bệnh về đường tiêu hóa Dùng nhiều và liên tục không gây độc hại [25]

1.3.12 Sinh địa

a, Tên khoa học vị thuốc: Radix Rehmanniae glutinosae

b, Bộ phận dùng: rễ củ dùng tươi hoặc phơi, sấy khô của cây sinh địa hoàng

Rehmannia glutinosa Gaertin Họ Hoa mõm sói (Scrophulariaceae) [16], [24]

- Tác dụng an thần, lợi tiểu, chống oxy hóa [24]

- Tác dụng kháng khuẩn, ức chế nấm ngoài da [16]

- Tác dụng cầm máu, cường tim, hạ đường huyết (do chất Catapol) [16]

- Tác dụng chữa lành tổn thương do đái tháo đường [28]

e, Tác dụng và công dụng theo YHCT

Bổ âm, thanh nhiệt lương huyết, sinh tân dịch, chỉ khát: Chữa âm hư, phát nóng

về chiều, khát nước nhiều, đái tháo đường, thiếu máu, suy nhược cơ thể, tạng chảy máu, thổ huyết, chảy máu cam, viêm họng đau, tân dịch khô [11], [16], [24]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu: Dược liệu và cao lỏng (cao 5/1) được bào chế từ phương thuốc

Vĩ Ngân, do Công ty Dược phẩm Hoa Linh cung cấp (Phụ lục 2.1)

2.2 Phương tiện

2.2.1 Thiết bị

- Tủ sấy: Memmert, Shellab

- Cân phân tích Sartorius BP 221S (Germany)

- Cân kỹ thuật Precisa (Switzeland)

- Máy ly tâm Hetich

- Máy đo quang phổ UV-VIS U-1800 Hitachi

- Máy siêu âm

Hình 2.1 Hệ thống thiết bị sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao Linomat 5

(a) Thiết bị phun mẫu Linomat 5 (b) Thiết bị chụp ảnh Camag

2.2.3 Động vật thí nghiệm

Chuột nhắt trắng khỏe mạnh cả 2 giống, trọng lượng 18-22 g do Viện vệ sinh dịch

tễ trung ương cung cấp

2.3 Nội dung nghiên cứu

- Định tính thành phần hóa học của một số dược liệu và cao lỏng Vĩ Ngân

+ Định tính các nhóm chất trong cao lỏng và dược liệu bằng phản ứng hóa học + Định tính bằng sắc ký lớp mỏng so sánh giữa cao lỏng và dược liệu

- Thử tác dụng giảm ho, long đờm của cao lỏng Vĩ Ngân

2.4 Phương pháp nghiên cứu:

2.4.1 Định tính thành phần hóa học của một số dược liệu và cao lỏng Vĩ Ngân

Mẫu nghiên cứu: Cao lỏng Vĩ Ngân, các dược liệu: xạ can, kim ngân hoa, cam thảo, núc nác, cát cánh, thiên môn, mạch môn, huyền sâm, sinh địa

- Chiết xuất: Xay thô các dược liệu, chiết cao lỏng và dược liệu bằng dung môi thích hợp để định tính các nhóm chất hữu cơ bằng thuốc thử chung của từng nhóm chất

- Định tính so sánh cao lỏng và một số dược liệu bằng sắc ký lớp mỏng

2.4.2 Nghiên cứu tác dụng giảm ho, long đờm của cao lỏng Vĩ Ngân

2.4.2.1 Tác dụng giảm ho

Nguyên tắc

Gây ho cho chuột nhắt trắng bằng khí amoniac trong bình thủy tinh chuyên dụng Xác định thời gian tiềm tàng (t) là thời gian tính từ khi thả chuột vào bình đến khi chuột xuất hiện cơn ho đầu tiên và đếm số cơn ho trong mỗi một phút cho đến hết

phút thứ 10 So sánh thời gian xuất hiện cơn ho đầu tiên và số lượng cơn ho trung bình trong 10 phút của lô thử với lô chứng và lô đối chiếu

2.4.2.2 Tác dụng long đờm

Nguyên tắc

Dịch phế quản tiết ra làm tăng khả năng trừ đờm ở đường hô hấp Khả năng bài tiết dịch phế quản được đánh giá thông qua nồng độ phenol đỏ thu được khi rửa khí quản bằng NaHCO3 5 %

Định lượng phenol đỏ được tiết ra theo dịch tiết đường hô hấp của họng chuột có trong dịch rửa bằng phương pháp đo quang Đo độ hấp thụ quang (ABS) của dịch rửa ở bước sóng 265 nm Độ hấp thụ quang càng lớn thì khả năng long đờm càng tốt So sánh độ hấp thụ quang trung bình của các lô thử so với lô chứng và lô đối chiếu [26]

Xử lý số liệu

Các số liệu nghiên cứu được xử lý thống kê theo phương pháp t-test Student bằng phần mềm Microsoft Excel 2010

Kết quả thí nghiệm được biểu thị bằng trị số trung bình cộng/trừ sai số chuẩn

(µ=X  SE) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi P ≤ 0,05

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học

3.1.1 Định tính Flavonoid

* Chiết xuất: (Làm phản ứng định tính Flavonoid và Saponin)

+ Lấy 0,5g cao lỏng, thêm 10 ml ethanol 90% Đun cách thủy và lắc kĩ cho tan, lọc nóng qua giấy lọc, dịch lọc thu được dùng để tiến hành các phản ứng định tính + Lấy 5g bột dược liệu, thêm 20 ml ethanol 90% Đun cách thủy, lọc nóng qua giấy lọc, dịch lọc thu được dùng để tiến hành các phản ứng định tính

- Phản ứng Cyanidin

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dung dịch thử Thêm một ít bột magnesi kim loại

(khoảng 10 mg) Nhỏ từng giọt HCl đặc (3 – 5 giọt) Để yên một vài phút

dịch có màu đỏ thẫm (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với kiềm loãng

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml dung dịch thử Thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%

Kết quả: Mẫu cao và các dược liệu kim ngân hoa, xạ can, núc nác, cam thảo: xuất

hiện tủa vàng (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với hơi amoniac

Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc Hơ khô rồi để lên miệng lọ ammoniac đặc đã được mở nút Nhỏ một giọt khác làm chứng

Kết quả: vết dịch chiết của cao và các dược liệu kim ngân hoa, xạ can, núc nác, cam

thảo: chuyển màu vàng đậm hơn (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với FeCl 3

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dung dịch thử Thêm vài giọt dung dịch FeCl3 5%

Kết quả: Mẫu cao và các dược liệu kim ngân hoa, xạ can, núc nác, cam thảo: xuất

hiện tủa màu xanh đen (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng diazo hóa

Cho 1 ml dung dịch thử vào ống nghiệm, kiềm hóa bằng dung dịch NaOH 10%, thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha, lắc đều, đun nóng nhẹ

Kết quả: Mẫu cao và dược liệu kim ngân hoa, xạ can, núc nác, cam thảo: có kết tủa

màu đỏ cam (Phản ứng dương tính)

Nhận xét: Cao lỏng và các dược liệu: kim ngân hoa, xạ can, núc nác, cam thảo có

flavonoid

3.1.2 Định tính coumarin

- Phản ứng mở đóng vòng lacton

Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1-2ml dịch chiết:

+ Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%

+ Ống 2: Để yên

Đun cả 2 ống nghiêm đến sôi, để nguội, quan sát Thêm vào cả 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml nước cất, lắc đều, quan sát.Thêm vào ống 1 vài giọt HCl, quan sát

Kết quả: Tất cả các mẫu: ống 1: tủa đục, ống 2: trong suốt; sau khi thêm nước cất

và HCl: không có hiện tượng gì (Phản ứng âm tính)

- Phản ứng diazo hóa

Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, 2ml dung dịch NaOH 10% Đun cách thủy 10 phút, để nguội Thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha

Kết quả: Không có kết tủa (Phản ứng âm tính)

- Quan sát huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại khi tác dụng với dung dịch kiềm

Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, nhỏ tiếp 1 giọt dung dịch NaOH 10%, sấy nhẹ cho đến khô Che 1 nửa diện tích bằng một mẩu kim loại, soi đèn tử ngoại trong vài phút, bỏ miếng kim loại ra, tiếp tục chiếu sáng bị phần che sáng

Kết quả: Không thấy sự khác biệt về màu sắc giữa 2 phần (Phản ứng âm tính)

Nhận xét: Cao lỏng và các dược liệu không có coumarin

3.1.3 Định tính Saponin

- Quan sát hiện tượng tạo bọt: Lấy 0,1g cao lỏng hoặc 1g bột dược liệu vào ống

nghiệm to, thêm 10 ml nước, đun nóng nhẹ, lắc mạnh trong 2 – 3 phút, để yên

Kết quả: Mẫu cao lỏng và các dược liệu cát cánh, kim ngân hoa, mạch môn, thiên

môn, cam thảo: cột bọt cao 2-3 cm, bền vững hơn 15 phút (Phản ứng dương tính)

Chiết xuất: Lấy 2g bột dược liệu, thêm 10 ml nước, đun sôi 10 phút, lọc nóng, dịch

lọc thu được để tiến hành các phản ứng

- Phản ứng Salkowski

+ Lấy 0,5 g cao lỏng, cô tạo cắn, thêm từ từ 2 ml dung dịch H2SO4 đặc

+ Lấy 2 g bột dược liệu, thêm 10 ml nước, đun sôi 10 phút, lọc nóng, cô dịch lọc đến cắn, thêm 2 ml dung dịch H2SO4 đặc

Kết quả: Mẫu cao lỏng và các dược liệu cát cánh, kim ngân hoa, mạch môn, thiên

môn, cam thảo: xuất hiện màu đỏ đậm (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng Liebermann – Burchard

Lấy 1-2 ml cao lỏng hoặc 2 ml dịch lọc, cô tạo cắn, thêm vào 1 ml anhydrid acetic, lắc đều cho tan hết, nghiêng ống nghiệm 450 , thêm từ từ từng giọt H2SO4 đặc

Kết quả: Mẫu cao lỏng và các dược liệu cam thảo, cát cánh, mạch môn, thiên môn,

kim ngân hoa: có vòng màu đỏ tía ở mặt phân cách (Phản ứng dương tính)

Nhận xét: Cao lỏng và các dược liệu: cam thảo, kim ngân hoa, cát cánh, mạch môn,

thiên môn có saponin

3.1.4 Định tính Alcaloid

Chiết xuất: Lấy 0,5 g cao lỏng hoặc 5g dược liệu, cho vào bình nón dung tích 100

ml Thêm 15ml dung dịch acid sulfuric 1N Đun đến sôi Để nguội Kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch ammoniac 6N đến pH=9-10 Chiết Alcaloid base bằng chloroform (3 lần x 5ml) Gộp các dịch chiết chloroform, loại nước bằng natrisulfat khan

Tiến hành : Lấy một phần dịch chiết chloroform, lắc với acid sulfuric 1N 2 lần, mỗi

lần 5ml Gộp các dịch chiết Chia đều vào các ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml Nhỏ

vào từng ống nghiệm 2 – 3 giọt các thuốc thử sau:

+ Ống 1: Thuốc thử Mayer

+ Ống 2: Thuốc thử Bouchardat

+ Ống 3: Thuốc thử Dragendorff

Kết quả: Cả 3 ống của tất cả các mẫu: không xuất hiện tủa (Phản ứng âm tính)

Nhận xét: Cao lỏng và các dược liệu không có alcaloid