đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trƣờng diễn và tác dụng điều trị thoái hóa khớp trên chuột thực nghiệm của bột proteoglycan f từ sụn cá hồi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG LÀI ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP, ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM CỦA BỘT PROTEOGLYCAN F TỪ SỤN CÁ HỒI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG LÀI ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP, ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM CỦA BỘT PROTEOGLYCAN F TỪ SỤN CÁ HỒI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 8720208 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Lập PGS.TS Vũ Thị Thu Hiền HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Lập – Giảng viên cao cấp mơn Hóa Sinh - trường Đại học Dược Hà Nội, PGS.TS Vũ Thị Thu Hiền- Trưởng khoa hóa sinh chuyển hóa dinh dưỡng- Viện dinh dưỡng Quốc gia tận tình hướng dẫn, bảo động viên tơi suốt q trình học tập thực luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Tôi xin chân thành cảm ơn hỗ trợ nhiệt tình thầy mơn Hóa Sinh – trường Đại học Dược Hà Nội– người Thầy, người Cô chia sẻ, đưa lời khuyên quý báu hỗ trợ tinh thần cho suốt trình học tập thực luận văn Tôi xin cảm ơn đến anh chị khoa hóa sinh chuyển hóa dinh dưỡngViện dinh dưỡng Quốc Gia, thầy cô môn Dược lý- Trường Đại học Y Hà Nội tận tình giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, Phòng Sau đại học – Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành q trình học tập luận văn tốt nghiệp Sau xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên cạnh, cổ vũ, động viên giúp đỡ suốt thời gian qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 04 năm 2020 Học viên Nguyễn Thị Hồng Lài MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN BỆNH THỐI HĨA KHỚP 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Các yếu tố nguy 1.1.4 Cơ chế q trình thối hóa khớp 1.1.5 Triệu chứng lâm sàng cận lâm sàng bệnh Thối hóa khớp gối 13 1.1.6 Điều trị thối hóa khớp gối 14 1.2 MÔ HÌNH VÀ CÁC CHỈ SỐ ĐÁNH GIÁ TRONG THỐI HĨA KHỚP THỰC NGHIỆM 17 1.2.1 Mơ hình thối hóa khớp thực nghiệm 17 1.2.2 Các số đánh giá nghiên cứu thối hóa khớp thực nghiệm 18 1.3 BỘT PROTEOGLYCAN F 20 1.3.1 Đặc điểm Proteoglycan F 20 1.3.2 Cơ sở nghiên cứu tác dụng chống thối hóa khớp Proteoglycan F 23 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ KỸ THUẬT ÁP DỤNG 28 2.2.1 Độc tính cấp xác định liều chết 50% (LD50) 28 2.2.2 Độc tính bán trường diễn 29 2.2.3 Tác dụng điều trị thối hóa khớp gối 30 2.3 XỬ LÝ VÀ PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 33 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP 34 3.2 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN 35 3.2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột cống trắng 35 3.2.2 Đánh giá chức tạo máu 36 3.2.3 Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan 38 3.2.4 Đánh giá chức gan 39 3.2.5 Đánh giá chức thận 39 3.2.6 Thay đổi mô bệnh học 40 3.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP GỐI CỦA PROTEOGLYCAN F TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG 41 3.3.1 Đánh giá mức độ thay đổi số đường kính khớp gối 41 3.3.2 Đánh giá tác dụng giảm đau Proteoglycan F dựa mơ hình sử dụng máy đo ngưỡng đau 44 3.3.3 Tác dụng giảm đau Proteoglycan F mơ hình sử dụng máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto 50 3.3.4 Đánh giá mức độ thay đổi số cytokin 53 3.3.5 Ảnh hưởng Proteoglycan F lên mô bệnh học khớp gối 55 CHƢƠNG BÀN LUẬN 62 4.1 VỀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP 62 4.2 VỀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN 62 4.2.1 Ảnh hưởng bột Proteoglycan F lên tình trạng chung thay đổi trọng lượng chuột 62 4.2.2 Ảnh hưởng bột Proteoglycan F lên hệ thống tạo máu 63 4.2.3 Ảnh hưởng bột Proteoglycan F lên chức gan chuột cống thực nghiệm 64 4.2.4 Ảnh hưởng bột Proteoglycan F lên chức thận chuột cống thực nghiệm 65 4.2.5 Ảnh hưởng bột Proteoglycan F lên đến cấu trúc đại thể vi thể gan thận chuột cống thực nghiệm 66 4.3 VỀ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP GỐI 67 KẾT LUẬN 69 Đánh giá độc tính cấp 69 Đánh giá độc tính bán tƣờng diễn 69 Đánh giá tác dụng điều trị thối hóa khớp gối 69 KIẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt WHO World Health Organization Tổ chức y tế Thế giới TGF Transforming growth factor Yếu tố tăng trưởng TNF Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tửu khối u ACR American College of Rheumatology Hội thấp khớp học Hoa Kỳ LD50 Lethal dose, 50% Liều lượng gây chết 50% NSAID non-steroidal anti-inflammatory drug Chống viêm không Steroids PG Proteoglycan Proteoglycan HA Acid hyaluronic Acid hyaluronic IL Interleukin Interleukin PGE2 Prostaglandin E2 Prostaglandin E2 NO Nitric oxide Nitric oxide CRP C – reactive protein C – reactive protein TENS Transcutaneous electrical nerve Kích ứng thần kinh da stimulation xung điện GAG Glycosaminoglycan Glycosaminoglycan Ser Serine Serine AST Aspartate Transaminase Aspartate Transaminase MIA Monosodium-iodoacetate Monosodium-iodoacetate ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay SGOT SGPT Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase Serum Glutamic Oxaloacetic Serum Glutamic Pyruvic Transaminase Serum Glutamic Pyruvic Transaminase Transaminase MMP Matrix Metalloproteinase Matrix Metalloproteinase THK Thoái hóa khớp TT Degenerative joint disease (osteoarthritis) Reagent HE x 400 Hematoxylin – Eosin Nhuộm Hematoxylin - Eosin, độ phóng đại 400 lần Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp bột Proteoglycan F 34 Bảng 3.2 Ảnh hưởng Proteoglycan F đến thể trọng chuột cống trắng 35 Bảng 3.3 Ảnh hưởng Proteoglycan F đến số lượng hồng cầu máu chuột cống trắng 36 Bảng 3.4 Ảnh hưởng Proteoglycan F đến hàm lượng huyết sắc tố máu chuột cống trắng 37 Bảng 3.7 Ảnh hưởng Proteoglycan F lên thời gian phản ứng với đau 47 Bảng 3.9 Nồng độ Interleukin-1β 53 Bảng 3.10 Nồng độ TNF-α 54 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Các vị trí thối hóa khớp thường gặp Hình 1.2 Cơ chế bệnh sinh bệnh THK gối (Howell 1988) Hình 1.3 Sinh bệnh học phân tử thối hóa khớp Hình 1.4 Tín hiệu FGF-2 tế bào sụn khớp 12 Hình 1.5 PKCδ nút tín hiệu nhiều đường gây THK 13 Hình 1.6 Phác đồ điều trị thối hóa khớp gối theo Hội thối hóa khớp lỗng xương 2018 16 Hình 1.7 Cấu trúc Aggrecan Proteoglycan 22 Hình 2.1 Thiết kế nghiên cứu 28 Hình 3.1 Lơ chứng sinh học (chuột số 6) (HE x 40) 57 Hình 3.2 Lơ mơ hình (chuột số 14) (HE x 400) 58 Hình 3.3 Lơ mơ hình (chuột số 23) (HE x 100) 58 Hình 3.4 Lơ uống diclofenac 3mg/kg (chuột số 25) (HE x 100) 59 Hình 3.5 Lơ uống diclofenac 3mg/kg (chuột số 26) (HE x 100) 59 Hình 3.6 Lơ uống Proteoglycan F 40mg/kg (chuột số 41) (HE x 100) 60 Hình 3.7 Lơ uống Proteoglycan F 40mg/kg (chuột số 50) (HE x 100) 60 Hình 3.8 Lơ uống Proteoglycan F 120mg/kg (chuột số 35) (HE x 100) 61 Hình 3.9 Lơ uống Proteoglycan F 120mg/kg (chuột số 37) (HE x 100) 61 Lô chứng Lô trị Lô trị Lympho Trung Lympho Trung Lympho Trung (%) tính(%) (%) tính(%) (%) tính(%) Trước 66,45 ± 28,26 ± 69,54 ± 26,43 ± 69,66 ± 26,36 ± uống thuốc 10,98 6,65 9,18 6,41 14,35 6,48 Sau 30 ngày 67,90 ± 28,45 ± 67,69 ± 28,46 ± 67,54 ± 29,43 ± uống thuốc 12,40 9,44 9,33 8,93 6,01 6,44 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 60 ngày 60,12 ± 33,08 ± 62,42 ± 30,95 ± 63,68 ± 30,98 ± uống thuốc 8,88 7,93 9,37 10,28 6,02 7,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngày 58,95 ± 26,93 ± 62,88 ± 32,14 ± 59,48 ± 30,68 ± uống thuốc 9,90 8,45 10,05 10,67 7,36 10,10 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước – sau) p (trước – sau) p (trước – sau) Nhận xét: Kết bảng cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá công thức bạch cầu lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lần lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) PL-14 Bảng Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến số lƣợng tiểu cầu máu chuột cống trắng P Số lƣợng tiểu cầu (G/l) Thời gian (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị Trước 352,70 ± 320,00 ± 318,10 ± uống thuốc 69,65 97,44 133,75 Sau 30 ngày 329,60 ± 286,80 ± 310,50 ± uống thuốc 41,64 57,05 37,15 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 60 ngày 366,60 ± 401,40 ± 299,10 ± uống thuốc 73,66 132,71 104,69 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngày 363,70 ± 412,30 ± 361,10 ± uống thuốc 77,62 120,24 82,43 p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Student) > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá số lượng tiểu cầu lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p > 0,05) 2.2 Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan Transaminase hay aminotransferase enzym nội bào, chuyển nhóm gamin (-NH2) aspartat alanin đến nhóm g-keto ketoglutarat để tạo thành acid oxaloacetic pyruvic Sự tăng enzym phản ánh tình trạng tổn thương tế bào gan [7],[10] Do nhóm nghiên cứu tiến hành xét nghiệm PL-15 hoạt độ AST, ALT chuột cống trắng Chuột cống trắng chia làm lô, lô 10 con, chuột uống nước cất (1ml/kg/ngày) thuốc thử (40 mg/kg/ngày, 120 mg/kg/ngày) 90 ngày liên tục, ngày lần vào buổi sáng Kết trình bày bảng Bảng Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến hoạt độ AST (GOT) máu chuột cống trắng Hoạt độ AST (UI/l) p Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị 92,00 ± 17,97 91,60 ± 16,80 90,50 ± 13,30 > 0,05 93,80 ± 16,62 > 0,05 78,30 ± 23,00 109,50 ± 41,80 p (trước – sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 60 ngày 101,60 ± 104,30 ± 104,20 ± uống thuốc 32,00 20,59 25,07 p (trước – sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 87,30 ± 21,28 86,50 ± 18,40 88,50 ± 11,69 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngày uống thuốc p (trước – sau) Student) > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan, hoạt độ AST máu chuột cống trắng lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khác biệt PL-16 có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) Bảng Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến hoạt độ ALT (GPT) máu chuột cống trắng Hoạt độ ALT (UI/l) P Thời gian Lô chứng Lô trị Lô trị Trước 51,30 ± 60,40 ± 50,50 ± uống thuốc 8,93 13,88 7,81 Sau 30 ngày 47,70 ± 53,70 ± 50,30 ± uống thuốc 11,61 9,29 7,65 p (trước – sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 60 ngày 59,80 ± 52,10 ± 53,10 ± uống thuốc 13,10 5,92 12,91 p (trước – sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngày 58,70 ± 48,40 ± 50,30 ± uống thuốc 12,52 12,79 14,11 p (trước – sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 (t- test Student) > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan, hoạt độ ALT máu chuột cống trắng lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p> 0,05) PL-17 2.3 Đánh giá chức gan Chức gan đánh giá thông qua định lượng số enzym chất chuyển hố máu: ALT, AST, bilirubin tồn phần, albumin cholesterol tồn phần [7],[10] Nhóm nghiên cứu tiến hành xét nghiệm nồng độ bilirubin toàn phần, albumin cholesterol toàn phần chuột cống trắng Kết theo dõi thông số trước lúc uống thuốc, sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống thuốc trình bày bảng 10 đến 12 Bảng 10 Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến nồng độ bilirubin toàn phần máu chuột cống trắng Bilirubin toàn phần(mmol/l) Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) p (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị 13,62 ± 0,57 13,24 ± 0,52 13,32 ± 0,37 > 0,05 13,39 ± 0,40 13,39 ± 0,32 13,43 ± 0,36 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,50 ± 0,77 13,45 ± 0,44 13,51 ± 0,38 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,62 ± 0,69 13,18 ± 0,53 13,49 ± 0,66 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Student) > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 10 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ bilirubin toàn phần, máu chuột cống trắng lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý PL-18 nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) Bảng 11 Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến nồng độ albumin máu chuột cống trắng Albumin (g/dl) Thời gian p (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị 3,28 ± 0,61 3,49 ± 0,64 3,27 ± 0,55 > 0,05 3,30 ± 0,36 3,02 ± 0,30 3,13 ± 0,31 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 2,64 ± 0,70 2,95 ± 0,69 2,76 ± 0,38 > 0,05 > 0,05 > 0,05 3,11 ± 0,44 3,30 ± 0,23 3,06 ± 0,51 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Student) Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 11 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ albumin máu chuột cống trắng lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) Bảng 12 Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột cống trắng PL-19 Cholesterol (mmol/l) Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) p (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị Student) 1,54 ± 0,23 1,72 ± 0,39 1,73 ± 0,38 > 0,05 1,75 ± 0,26 1,88 ± 0,40 2,00 ± 0,36 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,42 ± 0,29 1,79 ± 0,52 1,89 ± 0,68 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,68 ± 0,30 1,89 ± 0,45 1,91 ± 0,28 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 12 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F , xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột cống trắng lô trị (uống Proteoglycan F liều tương đương lâm sàng 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều gấp lâm sàng 120 mg/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 2.4 Đánh giá chức thận Chức thận chuột đánh giá thông qua nồng độ creatinin máu [7], [10] Kết theo dõi nồng độ creatinin máu trước lúc uống thuốc, sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống thuốc trình bày bảng 13 Bảng 13 Ảnh hƣởng Proteoglycan F đến nồng độ creatinin PL-20 máu chuột cống trắng Creatinin (mg/dl) Thời gian Trước uống thuốc P (t- test Lô chứng Lô trị Lô trị Student) 1,07 ± 0,07 1,05 ± 0,10 1,03 ± 0,09 > 0,05 1,06 ± 0,05 1,05 ± 0,05 1,08 ± 0,04 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,06 ± 0,10 1,06 ± 0,08 1,09 ± 0,04 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,04 ± 0,11 1,02 ± 0,11 1,02 ± 0,09 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 Nhận xét: Kết bảng 13 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống Proteoglycan F, lô trị (uống Proteoglycan F liều 40 mg/kg/ngày) lô trị (uống Proteoglycan F liều 120 mg/kg/ngày), nồng độ creatinin máu chuột cống trắng khơng có thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 2.5 Thay đổi mô bệnh học 2.5.1 Đại thể Sau 90 ngày uống thuốc, chuột mổ để quan sát đại thể toàn quan (màu sắc, trạng thái bề mặt mô, tình trạng sung huyết) Kêta cho thấy: Trên tất chuột cống trắng thực nghiệm (cả lô chứng lơ trị), khơng quan sát PL-21 thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan tim, phổi, gan, lách, tuỵ, thận hệ thống tiêu hoá chuột cống trắng 2.5.2 Vi thể Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan (tổn thương tế bào gan, tĩnh mạch cửa, mạch máu), thận (ống thận, tế bào thận) 30% số chuột lơ (mã hóa mẫu nghiên cứu để người đánh giá khách quan) cho kết sau: - Hình thái vi thể gan: + Lơ chứng: 1/3 mẫu bệnh phẩm gan có cấu trúc bình thường 2/3 mẫu bệnh phẩm gan thối hóa nhẹ + Lơ trị 1: (uống Proteoglycan F 40 mg/kg/ngày): 1/3 mẫu bệnh phẩm gan có cấu trúc bình thường 2/3 mẫu bệnh phẩm gan thối hóa nhẹ + Lơ trị 2: (uống Proteoglycan F 120 mg/kg/ngày): 1/3 mẫu bệnh phẩm gan có cấu trúc bình thường 2/3 mẫu bệnh phẩm gan thối hóa nhẹ Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 6) (HE x 400) Tế bào gan bình thường (HE x 400: Nhuộm Hematoxylin - Eosin, độ phóng đại 400 lần) PL-22 Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lơ chứng (chuột cống trắng số 54) (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 105) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường PL-23 Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 99) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 87) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường PL-24 Hình Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 80) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ - Hình thái vi thể thận: + Lô chứng: 3/3 mẫu bệnh phẩm thận có cấu trúc bình thường + Lơ trị (uống Proteoglycan F liều 40 mg/kg/ngày): 3/3 mẫu bệnh phẩm thận có cấu trúc bình thường + Lơ trị (uống Proteoglycan F liều 120 mg/kg/ngày): 3/3 mẫu bệnh phẩm thận có cấu trúc bình thường Hình Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 54) (HE x 400) Thận bình thường PL-25 Hình Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lơ chứng (chuột cống trắng số 57) (HE x 400) Thận bình thường Hình Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 95) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường PL-26 Hình 10 Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 99) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường Hình 11 Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 79) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường PL-27 Hình 12 Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 80) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường PL-28 ... nghiệm bột Proteoglycan F từ sụn cá hồi? ?? nhằm mục tiêu: Đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường diễn bột Proteoglycan F chuột thực nghiệm Đánh giá tác dụng điều trị thối hóa khớp gối bột Proteoglycan. .. trị thối hóa khớp proteoglycan an tồn điều trị sản phẩm Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trƣờng diễn tác dụng điều trị thối hóa khớp chuột thực nghiệm bột. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG LÀI ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CẤP, ĐỘC TÍNH BÁN TRƢỜNG DIỄN VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM CỦA BỘT PROTEOGLYCAN