Nghiên cứu tính an toàn và khả năng gây đáp ứng miễn dịch trên khỉ Macaca Mulatta của 3 chủng virut rota hệ giống gốc để sản xuất vacxin rota : Luận án TS. Sinh học: 62 42 40 01

DAI HOC QUOC GIA HA NQl TRlTOfNG DAI HQC KHOA HOC TU^ NHIEN DANG THI NGAN HA NGHIEN ClTU TINH ANTOAN VA KHA NANG GAY DAP LTNCi MIEN D I C H T R E N K H I Macaca mulatta CUA CHUNd VIRUT ROTA H E G I O N G G O C D E SAN XUAT VACXIN ROTA Chuyen nganh: Vi sinh vat hoc Ma so: 62 42 40 01 LUAN AN TIEN SI SINH H O C NGLT^I Hl/^NG DAN KHOA HOC: PGS.TS L E THI LUAN PGS.TS NGUYEN DANG HIEN DAI H O C Q U O C GtA HA NOl TRUNG TAM T H N G TIN THU VIET V^U/ 5U Ha Noi- 2010 MUC LUC • • LOICAMON LOI CAM DOAN CAC KI HIEU VA C H C VIET T A T MUCLUC DANH MUC CAC BANG DANH MUC CAC HINH MCJDAU CHUONG I: TONG QUAN 1.1 Virut Rota 1.1.1 Ljch siJ phat hien virut Rota 1.1.2 Phan loai virut Rota 1.1.3 Hinh thai va cau true 1.1.4 Cac phan hoa hoc cua virut Rota va chuc nang 1.1.5 Phan nhom va typ huyet 10 1.1.6 Tinh chat hoa ly 11 1.1.7 Nuoi cay 13 1.1.8 Su nhan len ciia virut Rota te bao 13 1.1.9 Kha nang gay benh 16 1.1.10 Cache gay benh 17 1.1.11 Cac trieu chung cua benh virut Rota 18 1.1.12 Di^u tri 18 1.1.13 Chan doan virut Rota phong thi nghiem 18 1.2 Dich te hoc 20 1.2.1 Nguon benh 20 1.2.2 Lua tuoi mac benh 20 1.2.3 Mua benh 20 1.2.4 Duong lay truyen 21 1.2.5 Milndich 21 1.3 Tinh hinh nhiem virut Rota tren Th^ gioi 22 1.4 Tinh hinh nhiem virut Rota tai Viet Nam 23 1.5 Tinh hinh nghien cuu va phat trien vacxin Rota tren Th^ gioi va nuoc 26 1.5.1 Tinh hinh nghien cuu phat trien vacxin tren Th^ gioi 26 1.5.2 Tinh hinh nghien cuu va phat triln vacxin tai Viet Nam 32 1.6 Tieu chuin ciia T6 chuc Y t^ Th^ gioi ve chiing san xuat vacxin Rota 34 1.6.1 Cac thuat ngu 34 1.6.2 Ki€m tra ngu6n nguyen lieu dau 35 1.6.3 Chiing virut 37 1.7 H6 so he thdng chiing gidng ung vien de san xuat vacxin Rota tai Viet Nam 41 1.7.1 H6 so tom tk cac buoc cay truyen chiing giong goc G1P[8] de tao chiing ung vien cho san xuat vacxin 42 1.7.2 H6 so tom tat cac buoc cay truyen chiing giong goc G1P[4] de tao chiing ung vien cho san xuat vacxin 43 1.7.3 H6 so tom tat cac buoc cay truyen chiing giong goc G4P[6] de tao chiing ung vien cho san xuat vacxin 44 CHLTONG II DOI TlJONG, VAT LIEU VA PHlTONG PHAP NGHIEN ClTU 45 2.1 Doi tugng nghien cuu 45 2.1.1 Chiing giong goc (Master seed) 45 2.1.2 Chiing san xuat vacxin (Working seed) 46 2.2 Nguyen vat lieu va phuong phap kiem tra he thong chiing 46 2.2.1 Phuang phap xet nghiem vi khuan va nam 46 2.2.2 Phuorng phap thu Mycoplasma bang phuang phap PCR 47 2.2.3 Phuang phap thu vi khuan lao 49 2.2.4 Phuong phap xac dinh virut gay hap phu hong cau 50 2.2.5 Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao than tho so sinh 51 2.2.6 Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao than tien phat 52 2.2.7 Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao Vero 53 2.2.8 Thu nghiem tac nhan ngoai lai tren te bao Hep2C 53 2.2.9 Xac dinh nhan dang virut Rota 54 2.2.10 Phuang phap xac dinh hinh the virut Rota bang kinh hien vi dien tu 62 2.2.11 Phuang phap xac dinh an toan tren dong vat thi nghiem 66 2.2.12 Phuang phap dap ung mien dich tren 68 2.2.13 Xac dinh trinh tu gen 4(VP4), 6(VP6), 9(VP7), 10(NSP4) cua virut Rota 71 2.2.14 Phuang phap thong ke xii ly so lieu 77 CHITONG III: KET QUA VA BAN LUAN 78 3.1 Ket qua kiem dinh tinh an toan he thong chiing virut Rota 78 3.1.1 Kilm tra vi khuAn va nam va vi khuan lao 78 3.1.2 Kiem tra tac nhan ngoai lai hon dich chiing virut Rota bang phuang phap PCR 79 3.1.3 Kiem tra tac nhan ngoai lai gay hiiy hoai te bao hon dich chiing virut Rota tren nuoi cay te bao va hap phu hong cau 80 3.1.4 Kiem tra an toan tren dong vat thi nghiem 82 3.1.5 Quan sat hinh anh chiing virut Rota giong goc tren kinh hien vi dien tu 93 r r r r 3.1.6 Ket qua nhan dang chiing virut Rota giong goc va chiing san xuat 94 3.1.7 Ket qua giai trinh tu gen he thong chiing virut Rota 101 3.1.8 Xac dinh 11 doan ARN ciia chiing giong goc bang SDS-Page 129 3.2 Ket qua dap ung mien dich he thong chiing tren thuc nghiem 130 3.2.1 Ket qua khang the trung hoa tren he thong chiing 130 3.2.2 Ket qua khang the trung hoa tren he thong chiing doi chung 134 KET LUAN 137 KIENNGHI 138 CAC CONG TRINH DA CONG BO CO LIEN QUAN DEN LUAN AN 139 TAI LIEU THAM KHAO