Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

57 1.8K 6
Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

MỤC LỤC CHưƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục .v

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN Lactobacillus sporogenes Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2001 – 2005 Sinh viên thực hiện: Trần Hạnh Triết Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ************ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN Lactobacillus sporogenes Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS Nguyễn Ngọc Hải Trần Hạnh Triết Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm tạ:  Ban giám hiệu trƣờng Đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn công nghệ sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho suốt trình học trƣờng  TS Nguyễn Ngọc Hải hết lòng hƣớng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực tập tốt nghiệp  Phòng vi sinh khoa Chăn nuôi – Thú y, Trƣờng đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh  Phịng phân tích hóa lý – Trung tâm phân tích thí nghiệm, Trƣờng đại học Nơng Lâm  Những anh chị lớp Thú y K26; bạn lớp Chăn ni K27 thực khóa luận tốt nghiệp thời gian với tơi phịng vi sinh khoa Chăn nuôi – Thú y, Trƣờng đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh  Các bạn bè thân yêu lớp CNSH K27 chia xẻ vui buồn thời gian học nhƣ hết lịng hỗ trợ, giúp đỡ tơi thời gian thực tập  Ba mẹ động viên, chăm lo cho suốt thời gian thực đề tài TĨM TẮT TRẦN HẠNH TRIẾT, Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 “NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN Lactobacillus sporogenes” Hội đồng hƣớng dẫn: TS NGUYỄN NGỌC HẢI Đề tài đƣợc thực đối tƣợng chủng vi khuẩn L sporogenes phân lập từ chế phẩm (Thorne Research, USA) Bƣớc đầu, chúng tơi tìm hiểu đặc điểm hình thái vi/đại thể sinh hóa vi khuẩn Sau đó, tiếp tục khảo sát đặc tính khác: khả sinh acid lactic môi trƣờng 10% sữa đặc có đƣờng; khả hình thành bào tử hai loại môi trƣờng nuôi cấy MRSA GYE, hai điều kiện nhiệt độ - thời gian 370C/6 ngày 370C/2 ngày chuyển sang 500C/2 700C/2 Những khảo sát mặt sinh trƣởng phát triển tạo sở cho nghiên cứu ứng dụng sản xuất chế phẩm từ bào tử vi khuẩn L sporogenes sau Những kết đạt đƣợc: Đã phân lập đƣợc vi khuẩn L sporogenes Vi khuẩn L sporogenes có khả sản sinh acid lactic nhƣng hàm lƣợng không cao (0,144 – 0,342 g/100 ml môi trƣờng sữa) Môi trƣờng nuôi cấy (MRSA GYE) điều kiện nhiệt độ - thời gian hóa bào tử (370C/6 ngày 370C/2 ngày → 500C/2 → 700C/2 giờ) ảnh hƣởng khơng có ý nghĩa lên hình thành bào tử chủng L sporogenes khảo sát MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách bảng ix Danh sách hình ix Danh sách sơ đồ x MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan probiotic 2.1.1 Định nghĩa probiotic 2.1.2 Các chức sinh học probiotic 2.1.2.1 Tăng khả tiêu hóa nhờ hệ thống enzyme 2.1.2.2 Tổng hợp vitamin K nhóm B 2.1.2.3 Giúp ổn định hệ vi sinh vật đƣờng ruột 2.1.2.4 Trung hòa độc tố phân hủy số độc chất 2.1.2.5 Kích thích hệ thống miễn dịch 2.1.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng probiotic chăn ni 2.1.3.1 Trong nƣớc 2.1.3.2 Thế giới 2.2 Tổng quan Lactobacillus sporogenes 2.2.1 Lịch sử phát 2.2.2 Đặc điểm phân loại 2.2.3 Đặc điểm phân bố 2.2.4 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa 2.2.4.1 Tế bào sinh dƣỡng 2.2.4.2 Bào tử 2.2.5 Những đặc điểm, chức sinh học tƣơng đồng L sporogenes vi khuẩn Lactobacillus khác 2.2.5.1 Những đặc điểm trao đổi chất 10 2.2.5.2 Lợi ích dinh dƣỡng trị liệu 13 2.2.6 Các đặc tính giúp L sporogenes vƣợt trội vi khuẩn Lactobacillus khác ứng dụng làm probiotic 15 2.2.7 Tình hình nghiên cứu ứng dụng L sporogenes 18 3: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 19 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN ĐỀ TÀI 19 3.1.1 Thời gian 19 3.1.2 Địa điểm 19 3.2 Vật liệu nghiên cứu 19 3.2.1 Mẫu khảo sát 19 3.2.2 Môi trƣờng 19 3.2.3 Hóa chất 19 3.2.4 Thiết bị – dụng cụ 19 3.3 Nội dung đề tài 19 3.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.4.1 Tổng quan bƣớc thực đề tài 20 3.4.2 Phân lập vi khuẩn 20 3.4.2.1 Quan sát hình thái khuẩn lạc tế bào 21 3.4.2.2 Khảo sát phản ứng sinh hóa 22 3.4.3.Khả sinh acid lactic 22 3.4.3.1 Định tính 22 3.4.3.2 Định lƣợng 23 3.4.4 Khảo sát khả hình thành bào tử 24 3.4.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 27 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 4.1 Phân lập vi khuẩn Lactobacillus sporogenes 28 4.1.1 Bố trí thí nghiệm 28 4.1.2 Đặc điểm hình thái L sporogenes 28 4.1.2.1 Quan sát khuẩn lạc 28 4.1.2.2 Quan sát hình thái tế bào 29 4.1.2.3 Quan sát hình thái bào tử 29 4.1.3 Đặc điểm sinh hóa L sporogenes 29 4.2 Khả sinh acid lactic 31 4.2.1 Định tính 31 4.2.2 Định lƣợng 32 4.3 Khảo sát khả hình thành bào tử 34 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 5.1 Kết luận 36 5.2 Đề nghị 36 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ctv Cộng tác viên CV Coefficient of variation, hệ số biến thiên FDA Food & Drug Administration, quan quản lý thực phẩm dƣợc phẩm Mỹ GRAS Generally Recognise As Safe, chứng nhận an toàn cho sức khỏe MRSA De Man-Rogosa-Sharpe agar GYE Glucose Yeast Extract SD standard deviation, độ lệch chuẩn DANH MỤC CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1 Những tƣơng đồng mặt hình thái L sporogenes Lactobacillus Bảng 2.2 Những khác biệt hình thái L sporogenes so với Bacillus Bảng 2.3 Những tƣơng đồng đặc điểm sinh trƣởng sinh hóa L sporogenes Lactobacillus Bảng 2.4 Những khác biệt đặc điểm sinh trƣởng sinh hóa L sporogenes so với Bacillus Bảng 2.5 Một vài loại bacteriocin từ vi khuẩn Lactobacillus 11 Bảng 2.6 Tác dụng vài sản phẩm trao đổi chất Lactobacillus 12 Bảng 2.7 Bảng liệt kê ƣu điểm L sporogenes so với L acidophillus 17 Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm khảo sát khả hình thành bào tử vi khuẩn L sporogenes 24 Bảng 4.1 Kết phân lập vi khuẩn L sporogenes 28 Bảng 4.2: Đặc điểm sinh hóa chủng L sporogenes phân lập đƣợc từ chế phẩm 30 Bảng 4.3 Khả sinh acid lactic chủng L sporogenes thử sinh hóa 31 Bảng 4.4: Giá trị độ Therner lƣợng acid lactic vi khuẩn L sporogenes sản xuất 33 Bảng 4.5 Số lƣợng bào tử L sporogenes thu đƣợc 12 nghiệm thức đƣợc khảo sát 34 DANH MỤC CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Giản đồ cấu tạo bào tử Hình 2.2 Hai loại đồng phân acid lactic 11 Hình 2.3 Cơ chế ngăn chặn hình thành hấp thụ cholesterol 14 Hình 4.1: Khuẩn lạc vi khuẩn L sporogenes môi trƣờng GYE 38 Hình 4.2: Tế bào vi khuẩn L sporogenes đƣợc phóng đại 1000 lần dƣới kính hiển vi 29 Hình 4.3: Phản ứng lên men số loại đƣờng vi khuẩn L sporogenes 31 Hình 4.4: Thí nghiệm tạo acid lactic vi khuẩn L sporogenes 32 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ 10 SƠ ĐỒ TRANG Sơ đồ 2.1 Ích lợi Lactobacillus mặt dinh dƣỡng trị liệu 13 Sơ đồ 3.1: Sơ đồ nghiên cứu đặc điểm sinh trƣởng, phát triển L sporogenes 20 Sơ đồ 3.2: Quy trình phân lập định danh L sporogenes 20 Sơ đồ 3.3: Quy trình phân lập quan sát hình thái khuẩn lạc đĩa 21 Sơ đồ 3.4: Quy trình tiến hành thủ nghiệm sinh hóa 22 Sơ đồ 3.5: Quy trình xác định độ chua Therner 23 Sơ đồ 3.6: Quy trình khảo sát hình thành vào nảy chồi bào tử L sporogenes 25 43 Hình 4.4: Thí nghiệm tạo acid lactic vi khuẩn L sporogenes Ghi chú: ĐC (-): 2,5ml nƣớc cất + 2,5 ml thuốc thử Uffelman ĐC (+): 2,5ml acid lactic 96% + 2,5 ml thuốc thử Uffelman Mẫu: 2,5ml dịch lên men (đã qua chiết tách) + 2,5 ml thuốc thử Uffelman 4.5.2 Định lƣợng Sau thực nuôi cấy chủng L sporogenes phânlập đƣợc môi trƣờng sữa đặc có đƣờng, chúng tơi nhận thấy: tất 20 chủng có khả làm đơng vón sữa Từ giá trị độ chua thu nhận đƣợc, chúng tơi tính đƣợc lƣợng acid lactic chủng L sporogenes sản xuất Kết đƣợc trình bày Bảng 4.4 Bảng 4.4: Giá trị độ Therner lƣợng acid lactic vi khuẩn L sporogenes sản xuất Chủng Thể tích NaOH 0.1N cần dùng (ml) Độ Therner (T) Số gam acid lactic 100ml dịch lên men (g/100ml) 44 2,4 24 0,216 2 20 0,18 2,9 29 0,261 20 0,18 1,9 19 0,171 20 0,18 20 0,18 2,2 22 0,198 1,9 19 0,171 10 2,5 25 0,225 11 20 0,18 12 1,9 19 0,171 13 2,1 21 0,189 14 20 0,18 15 1,6 16 0,144 16 30 0,27 17 1,7 17 0,153 18 1,8 18 0,162 19 3,8 38 0,342 20 3,2 32 0,288 Qua bảng 4.4, nhận thấy độ Therner biến động từ 1,6 - 3,8 tƣơng ứng với lƣợng acid lactic vi khuẩn L sporogenes sinh 0,144 - 0,342 g/100ml Loài Lactobacillus khác nhƣ L bulgaricus sản xuất đƣợc 0,684 g acid lactic/100 ml dịch sữa 10% đƣợc lên men 370C/5 [1] Nhƣ vậy, 20 chủng vi khuẩn L sporogenes khảo sát có khả sinh acid lactic nhƣng yếu lồi Lactobacillus khác Ngun nhân điều điều kiện ni cấy hay lên men chƣa phù hợp hay đặc tính di truyền chủng L sporogenes khảo sát Ngồi ra, chúng tơi khơng tìm thấy tài liệu ghi nhận rõ ràng lƣợng acid lactic mà vi khuẩn L sporogenes sinh 45 Trong 20 chủng khảo sát, nhận thấy chủng 16, 19, 20 có khả sản xuất acid lactic mạnh Khả tạo acid lactic có ý nghĩa định việc ứng dụng vi khuẩn L sporogenes làm chế phẩm Acid lactic giúp vi khuẩn L sporogenes ức chế vi khuẩn gây bệnh đƣờng ruột vật chủ mang lợi ích mặt sinh lý cho vật chủ (xem mục 2.2.5.1 phần 2) Vì vậy, chúng tơi chọn chủng 16, 19, 20 để tiếp tục khảo sát khả tạo bào tử, từ khảo sát tiếp tồn bào tử trộn vào chế phẩm Khảo sát khả hình thành bào tử 4.6 Sau khảo sát loại môi trƣờng, điều kiện nhiệt độ - thời gian hình thành bào tử với chủng khác nhau, thu nhận đƣợc số liệu lƣợng bào tử nghiệm thức (xem Bảng 4.5) Bảng 4.5 Số lƣợng bào tử L sporogenes thu đƣợc 12 nghiệm thức đƣợc khảo sát Điều kiện nhiệt độ - 370C/6 ngày thời gian Môi trƣờng MRSA Bào tử /ml Chủng (N) X 16 1,43.1011 500C/2  700C/2 GYE LogN Bào tử /ml 11,14 (N) 1,48.1011 MRSA LogN 11,16 Bào tử /ml (N) 1,6.1011 GYE LogN 11,20 Bào tử /ml (N) 1,82.1011 LogN 11,23 SD 0,09 0,09 0,05 0,18 CV% 0,83 0,84 0,51 1,64 X 19 2,43.1011 11,34 1,95.1011 11,25 2,35.1011 11,34 2,32.1011 11,35 SD 0,23 0,21 0,18 0,10 CV% 0,28 1,89 1,58 0,92 X 20 1,74.1011 11,22 1,99.1011 11,28 1,93.1011 11,27 2,13.1011 11,31 SD 0,13 0,10 0,12 0,12 CV% 1,16 0,95 1,09 1,09 Chú ý: nghiệm thức lập lại lần Chúng xử lý thống kê số liệu logarit (LogN) đƣợc chuyển đổi từ số bào tử thu đƣợc dạng số liệu nguyên (Bào tử/ml) Dựa vào bảng ANOVA (xem phụ lục 7.1), nhận thấy: mức độ ý nghĩa khác biệt chủng 0,07; môi trƣờng nuôi cấy 0,81; điều kiện nhiệt độ - thời gian 0,32 Vậy, khơng có khác biệt ảnh hƣởng chủng, môi trƣờng nuôi cấy điều kiện thời 46 gian – nhiệt độ khác lên khả hình thành bào tử vi khuẩn L sporogenes (P>0,05) Tuy nhiên, bảng ghi nhận khác biệt chủng (xem phụ lục 7.2), nhận thấy chủng 19 có khả tạo bào tử nhiều chủng 16 Sự khác biệt không đáng kể nên quy cho sai số lƣợng sinh khối thu đƣợc lúc đầu Ngoài ra, mức độ ý nghĩa tƣơng tác yếu tố khảo sát lớn 0,05 (xem phụ lục 7.1) nên kết luận khơng có tƣơng tác yếu tố lên khả hình thành bào tử Từ kết trên, chúng nhận thấy để sản xuất bào tử vi khuẩn L sporogenes nhằm trộn vào chế phẩm, sử dụng mơi trƣờng GYE hay MRSA đƣợc Tuy nhiên, môi trƣờng GYE có thành phần đơn giản tốn chi phí mơi trƣờng MRSA Ngồi ra, để tiết kiệm thời gian, ta nên sử dụng điều kiện nhiệt độ - thời gian hóa bào tử 500C/2 chuyển qua 700C/2 sau nuôi sinh khối 370C/2 ngày thay ni cấy tạo bào tử 370C/6 ngày 47 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Chúng phân lập đƣợc 20 chủng với đặc điểm hình thái vi/đại thể sinh hóa đặc trƣng vi khuẩn Lactobacillus sporogenes Khả sinh acid lactic 20 chủng thấp lồi Lactobacillus khác Mơi trƣờng ni cấy (MRSA GYE) điều kiện nhiệt độ - thời gian hóa bào tử (370C/6 ngày 370C/2 ngày → 500C/2 → 700C/2 giờ) ảnh hƣởng khơng có ý nghĩa lên hình thành bào tử chủng L sporogenes khảo sát 5.2 Đề nghị Khảo sát thêm loại môi trƣờng nuôi cấy, mức nhiệt độ, pH, thời gian thích hợp cho L sporogenes sinh acid lactic tạo sinh khối tối ƣu Khảo sát thêm môi trƣờng thời gian bảo quản bào tử chế phẩm 48 PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Lý Thành Kiệt, 2002 Bước đầu nghiên cứu phân lập nhân giống chủng vi khuẩn Lactic Streptococcus thermophilus Lactobacillus bulgaricus để cung cấp giống cho chế biến yogurt quy mơ nhỏ Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ thực phẩm, Đại học Nông Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Lã Văn Kính, 1998 Những tiến khoa học kỹ thuật công nghệ sản xuất thức ăn gia súc vai trò probiotic động vật Báo cáo khoa học, Trung tâm Thông tin khoa học công nghệ, Sở khoa học công nghệ môi trƣờng TPHCM, trang – Lê Thị Tài, 1996 Kết thử nghiệm Biosubtyl điều trị loạn khuẩn đường ruột gia sức non Tạp chí Nơng nghiệp, Cơng nghệ thực phẩm Trang 263 – 264 Trần Thị Thu Thủy, 2003 Khảo sát tác dụng thay kháng sinh Probiotics phòng ngừa tiêu chảy E coli heo Luận văn thạc sĩ, khoa Chăn nuôi – Thú y, trƣờng Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, 85 trang TIẾNG NƢỚC NGOÀI Amer, M.A and Lammending, A.M., 1983 Health Maintenance benefits of cultured dairy products Cultured Dairy Products J 18 : 6-19 Barefoot and Klaehammer, 1984 Purification and characterisation of Lactobacillus acidophillus bacteriocin lactacin B Antimicrobiological agents chemotheraphy, 26 (3): 324 – 328 Bernet et al., 1994 Lactobacillus acidophillus LA binds to cultured human intestinal cells and inhibits cell attachment and cell invasion by enterovirulent bacteria, 35: 483 – 489 Buchnan, R.E & Gibbons, N.E ed., 1974 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 577 B P Dey and C P Lattuada, 1998 USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 3rd Edition Volume Pages 33 – and 33 – 10 Friend, B.A and Shahani, K.M., 1984 Nutritional and therapeutic aspects of lactobacilli J Appl Nutr 36: 125-33 49 11 Gandhi, A.B and Nagarathnam, T., 1990 Probiotics for veterinary use Poultry Guide, 27(3) : 43-47 12 Gandhi, A.B., 1995 Personal communication 13 Gandhi, A.B., 1998 Lactobacillus sporogenes, an advancement in Lactobacillus therapy The Eastern Pharmacist, 41-43 14 Gilliland, S.E and Speck, M.L., 1977 Deconjugation of bile acids by intestinal lactobacilli Appl Environ Microbiol 33 :15 15 Gould, G.W and Hurst, A., 1969 The bacterial spore Academic Press 16 Gorbach, S.L., l990 Lactic acid bacteria and human health Annals of Medicine 22:37-41 17 Hepner et al., 1979 Hypercholesterolemic effect of yogurt and milk Am.J Clin Nutr 32:19-24 18 Hosono et al., 1987 Antimutagenic activity of cellular component of Streptococcus faecalis IFO 12965 Netherlands Milk and Dairy Journal, 41: 239-45 19 Johansson et al., 1993 Administration of different Lactobacillus strains in fermented oatmeal soup: in vivo colonisation of human intestinal mucosa and effect on the indigenous flora Applied and Environmental Microbiology, 59: 15 – 20 20 Kim Tae Han et al, 1989 development of L sporogenes resistent to Rifampicin, an antituberculosis agent Kor Jour Microbiol, p 155 – 161 21 Kim Y.M et al., 1985 Studies on the production of beta - galactosidase by Lactobacillus sporogenes Properties and applications of beta - galactosidase Korean J Applied Microbiol Bioeng 13(4) 355-360 22 Kishida, T Interferon and immune function New Editions Health World 23 Klaenhammer, T.R., 1988 Bacteriocins of lactic acid bacteria Biochimie 70 : 337-349 24 Macbeth,W.A.A.G et al., 1965 Treatment of hepatic encephalopathy by alteration of intestinal flora with L acidophilus, Lancet, i : 399-403 25 Mohan, J.C et al., 1990 Preliminary observations on effect of L sporogenes on serum lipid levels in hypercholesterolemic patients Indian J Med Res [B] 92, 431-432 50 26 Mohan, J.C et al., 1990 Short term hypolipedemic effects of oral L sporogenes therapy in patients with primary dyslipidemias Indian Heart J 42(5) : 361-4 27 Rani and Khetarpaul, 1998 Probiotic fermented food mixture: possible applications in clinial anti – diarrhoea usage Nutrition Health, 12: 97 – 105 28 Saarela et al, 2000 Probiotic bacteria: safety, functional and technology properties Journal of Biotechnology, 84: 197 – 215 29 Saxelim, 1997 Lactobacillus GG – a human probiotic strain with thorough clinical documentation Food Review International 13 (2): 293 – 313 30 Scott et al., 1990 Lactobacillus The Pharmaceutical Journal Nov 24 608-610 31 Shahani, K.M and Ayebo, A.D., 1980 Role of dietary lactobacilli in gastrointestinal microecology Am J Clin Nutr 33,2448-2457 32 Tannock, 1997 Probiotic properties of lactic acid bacteria: plenty of scope for fundamental R&D Trends in Biotechnology 15 (7): 270 – 274 33 Wood, B.J.B, 1992 The Lactic Acid Bacteria in Health and Disease, Vol 1, p 394., Elsevier Applied Science 34 Zamfir et al, 1999 Purification and charaterization of a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophillus IBB Journal of Applied Microbiology, 87 (6): 923 – 931 35 www.lactospore.com/back2.htm 36 www.microbax.com/lactobacillus.htm 37 www.natura.org.uk/naturaflora.htm 38 www.pharmedmedicare.com/lactopure.html 39 static.highbeam.com/a/alternativemedicinereview/august012002/lactobacillussporo genesmonograph/index.html 40 Analysis of Lactospore®: Report from Sami Chemicals and Extracts, Bangalore, India, (1995) 51 PHỤ LỤC Thành phần môi trƣờng 1.1 Môi trƣờng GYE agar (Glucose Yeast Extract) Cao nấm men 5.0g Peptone 5.0g D-glucose 5.0g K2HPO4 0.5g KH2PO4 0.5g MgSO4 0.3g Bromocresol purple 1ml Khoáng vi lƣợng 1.0ml Nƣớc vô trùng 1000ml Agar 15g pH 6.3 0,2 Thành phần khoáng vi lƣợng NaCl 500mg FeSO4.7H2O 900mg MnSO4.5H2O 800mg ZnSO4.7H2O 80mg CuSO4.5H2O 80mg CoSO4.7H2O 80mg Nƣớc vô trùng 50ml Đun sơi mơi trƣờng cho hịa tan Hấp khử trùng 1150C/30 phút 1.2 Môi trƣờng MRSA Cao thịt 8g Peptone 10g Cao nấm men 4g Glucose 10g Acetate Na 5g 52 K2HPO4 2g Triamonium citrate 2g MgSO4 0,2g MnSO4 0,2g Tween 80 1ml Bromocresol purple 1ml CaCO3 2g Agar 16g Nƣớc cất 1000ml Đun sôi môi trƣờng cho hịa tan Hấp khử trùng 1150C/30 phút 1.3 Mơi trƣờng Nutrient broth (NB) Cao thịt 5g Peptone 10g NaCl 5g Nƣớc cất 1000ml pH 7,0 0,2 Hấp khử trùng 1210C/20 phút 1.4 Môi trƣờng lên men đƣờng Cao thịt 5g Peptone 10g NaCl 5g Đƣờng 10g Phenol red 0,01g Nƣớc cất 1000ml 1.5 Môi trƣờng thạch bán lỏng Nutrient broth 13g Agar 5g Nƣớc cất 1000ml pH 7,2 0,2 53 Đun sơi mơi trƣờng cho hịa tan Hấp khử trùng 1210C/20 phút Hóa chất 2.1 Nƣớc muối sinh lý NaCl 9%0 NaCl 9g Nƣớc cất 1000ml 2.2 NaOH 0,1N NaOH 40g Nƣớc cất 1000ml Cân 40g NaOH tinh thể hòa vào 50ml nƣớc cất lắc đều, để yên 24h, gạn lấy nƣớc bổ sung thêm nƣớc cất cho đủ 1000ml Thuốc nhuộm 3.1 Crystal violet (a) Crystal violet 0.4g cồn 960 10ml (b) phenol 1g nƣớc cất 100ml Trộn dung dịch a b lại với nhau, khuấy cho hòa tan đem lọc Thuốc nhuộm đƣợc bảo quản chai màu tối 3.2 Fuchsine kiềm (a) Fuchsine kiềm 0,3g Ethanol 960 10ml (b) Phenol Nƣớc cất 5g 35ml Trộn dung dịch a b lại với nhau, khuấy cho hòa tan đem lọc Thuốc nhuộm phải đƣợc bảo quản chai màu tối Trƣớc dùng, pha lỗng lần (dịch pha lỗng khơng giữ đƣợc lâu cịn dịch đậm đặc giữ nhiều tháng) 3.3 Lugol KI 2g 54 Iod tinh thể 1g Nƣớc cất 300ml Hòa tan 2g KI vào 5ml nƣớc cất Sau thêm 1g iod chờ cho iod tan hết thêm nƣớc cho đủ 300ml 3.4 Methylene blue (a) Methylene blue 1,5g Ethanol 960 10ml (b) Acid phenic Nƣớc cất 1g 100ml Trộn dung dịch a b lại với nhau, khuấy cho hòa tan Bảo quản chai màu tối Thuốc thử thị màu 4.1 Thuốc thử Ufellman Phenol 1% 10ml FeCl3 1N giọt 4.2 Thuốc thị Bromocresol purple (BCP) (a) Bromocresol purple Ethanol 960 (b) Nƣớc cất 16g 500ml 500ml Pha dung dịch a trƣớc, sau trộn với b Giữ hỗn hợp chai màu tối Phƣơng pháp nhuộm 5.1 Phƣơng pháp nhuộm Gram Cố định tiêu Đặt giấy lọc lên vết bôi Nhuộm crystal violet 1-2 phút Rửa nƣớc Cố định lugol phút Rửa nƣớc Tẩy ethanol 900 15 giây Rửa nƣớc 55 Nhuộm fuchsine kiềm lỗng 1phút rửa nƣớc Để khơ Xem kính hiển vi vật kính 100X 5.2 Phƣơng pháp nhuộm bào tử Cố định tiêu Nhuộm HCl 1% Rửa nƣớc Đặt giấy lọc lên vết bôi Nhuộm fuchsine đậm đặc, hơ nhẹ đèn cồn 2-4 phút Rửa nƣớc Rửa cồn 900 15 giây Rửa nƣớc Nhuộm Methylene blue phút Rửa nƣớc Để khơ Xem kính hiển vi vật kính 100X Phƣơng pháp thực phản ứng sinh hóa 6.1 Khả lên men đƣờng  Nguyên tắc Một số vi sinh vật sử dụng lên men số lọai đƣờng làm pH mơi trƣờng giảm Khi đó, thị màu phenol red từ màu đỏ chuyển sang màu vàng, có sinh hay không sinh tùy vào lọai vi khuẩn  Chuẩn bị Môi trƣờng đƣờng: glucose, sucrose, fructose, maltose, mannitol, lactose, sorbitol, dextrin Giống vi khuẩn: L sporogenes Ống nghiệm, ống durham  Tiến hành 56 Phân môi trƣờng vào ống nghiệm có ống durham, đem hấp vô trùng 1150C/20 phút để nguội, cấy vi khuẩn từ môi trƣờng tăng sinh vào, ủ 370C/24h, đọc kết  Kết Phản ứng (-): môi trƣờng đục có màu đỏ cam Phản ứng (+): mơi trƣờng đục có màu vàng 6.2 Khả di động  Nguyên tắc Một số vi khuẩn có tiêm mao nên có khả di động mơi trƣờng bán lỏng  Chuẩn bị Môi trƣờng bán lỏng Que cấy thẳng Giống vi khuẩn L sporogenes  Tiến hành Cấy vi khuẩn từ môi trƣờng tăng sinh sang môi trƣờng bán lỏng (cấy chích thẳng từ xuống dƣới), ủ 370C/24h Đọc kết  Kết Phản ứng (-): vi khuẩn mọc theo đƣờng cấy Phản ứng (+): vi khuẩn mọc lan xung quanh 6.3 Phản ứng catalase  Nguyên tắc Một số vi khuẩn có khả sản xuất enzyme catalase phân giải H2O2 thành H2O2 O2  Chuẩn bị Môi trƣờng GYE thạch nghiêng Giống vi khuẩn L sporogenes  Tiến hành Cấy ria vi khuẩn từ môi trƣờng tăng sinh lên môi trƣờng GYE thạch nghiêng, ủ 370C/24h, nhỏ H2O2 lên sinh khối 57  Kết Phản ứng (-): khơng có tƣợng xảy Phản ứng (+): có tƣợng sủi bọt H2O2 tiếp xúc sinh khối ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN Lactobacillus sporogenes Giáo vi? ?n hƣớng dẫn: Sinh. .. vi? ?n, chăm lo cho suốt thời gian thực đề tài TÓM TẮT TRẦN HẠNH TRIẾT, Đại học Nơng Lâm, TP Hồ Chí Minh Tháng 9/2005 “NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN Lactobacillus sporogenes? ??... trƣởng phát triển tạo sở cho nghiên cứu ứng dụng sản xuất chế phẩm từ bào tử vi khuẩn L sporogenes sau Những kết đạt đƣợc: Đã phân lập đƣợc vi khuẩn L sporogenes Vi khuẩn L sporogenes có khả sản sinh

Ngày đăng: 29/10/2012, 14:14

Hình ảnh liên quan

Hình 2.1 Giản đồ cấu tạo bào tử. Gồm: lớp ngoại bào tử (exosporium), màng - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

Hình 2.1.

Giản đồ cấu tạo bào tử. Gồm: lớp ngoại bào tử (exosporium), màng Xem tại trang 18 của tài liệu.
Bảng 2.6 Tác dụng của một vài sản phẩm trao đổi chất của Lactobacillus [33] - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

Bảng 2.6.

Tác dụng của một vài sản phẩm trao đổi chất của Lactobacillus [33] Xem tại trang 22 của tài liệu.
âm đạo không điển hình, cải thiện tình trạng không sử dụng đƣợc lactose (lactose intolerance) - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

m.

đạo không điển hình, cải thiện tình trạng không sử dụng đƣợc lactose (lactose intolerance) Xem tại trang 24 của tài liệu.
Đặc điểm hình thái tế bào vi khuẩn   Đặc điểm sinh hóa  - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

c.

điểm hình thái tế bào vi khuẩn Đặc điểm sinh hóa Xem tại trang 30 của tài liệu.
3.4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

3.4..

PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Xem tại trang 30 của tài liệu.
3.4.2.1 Quan sát hình thái khuẩn lạc và tế bào [9,40] - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

3.4.2.1.

Quan sát hình thái khuẩn lạc và tế bào [9,40] Xem tại trang 31 của tài liệu.
Để định danh L. sporogenes, ngoài hình thái khuẩn lạc và tế bào, còn cần đến những phản ứng sinh hóa đặc trƣng (xem phụ lục 6.1 – 6.3) - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

nh.

danh L. sporogenes, ngoài hình thái khuẩn lạc và tế bào, còn cần đến những phản ứng sinh hóa đặc trƣng (xem phụ lục 6.1 – 6.3) Xem tại trang 32 của tài liệu.
3.4.4 Khảo sát khả năng hình thành bào tử - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

3.4.4.

Khảo sát khả năng hình thành bào tử Xem tại trang 35 của tài liệu.
Sơ đồ 3.6: Quy trình khảo sát sự hình thành vào nảy chồi của bào tử - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

Sơ đồ 3.6.

Quy trình khảo sát sự hình thành vào nảy chồi của bào tử Xem tại trang 36 của tài liệu.
Chúng tôi tiến hành nhuộm Gram khuẩn lạc điển hình phânlập đƣợc trên môi trƣờng thạch GYE sau 48 giờ ủ ở 370 C - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

h.

úng tôi tiến hành nhuộm Gram khuẩn lạc điển hình phânlập đƣợc trên môi trƣờng thạch GYE sau 48 giờ ủ ở 370 C Xem tại trang 40 của tài liệu.
Bảng 4.2: - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

Bảng 4.2.

Xem tại trang 41 của tài liệu.
Qua Bảng 4.2, chúng tôi nhận thấy đặc điểm sinh hóa của các chủng phânlập phù hợp với tính chất sinh hóa của vi khuẩn L - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

ua.

Bảng 4.2, chúng tôi nhận thấy đặc điểm sinh hóa của các chủng phânlập phù hợp với tính chất sinh hóa của vi khuẩn L Xem tại trang 42 của tài liệu.
L. sporogenes sản xuất. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.4. - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

sporogenes.

sản xuất. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.4 Xem tại trang 43 của tài liệu.
Qua bảng 4.4, chúng tôi nhận thấy độ Therner biến động từ 1, 6- 3,8 tƣơng ứng với lƣợng  acid  lactic  do  vi  khuẩn  L - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

ua.

bảng 4.4, chúng tôi nhận thấy độ Therner biến động từ 1, 6- 3,8 tƣơng ứng với lƣợng acid lactic do vi khuẩn L Xem tại trang 44 của tài liệu.
4.6. Khảo sát khả năng hình thành bào tử - Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Lactobacillus sporogenes

4.6..

Khảo sát khả năng hình thành bào tử Xem tại trang 45 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan