Giới thiệu kĩ thuật nuôi cấy tế bào động vật (TS Vũ Bích Ngọc)

9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn STT Ngày 10/9 Bài Giới thiệu kĩ thuật nuôi cấy tế bào động vật (TS Vũ Bích Ngọc) 17/9 Bài Sinh học tế bào ni cấy (TS Vũ Bích Ngọc) 24/9 Bài Kĩ thuật nuôi cấy sơ cấp (TS Vũ Bích Ngọc) 1/10 Bài Kĩ thuật cấy chuyền tạo dòng (ThS Trương Châu Nhật ) 8/10 Bải Kĩ thuật bảo quản tế bào (Cô Lê Thị Ngân Hà) 15/10 Bài Kỹ thuật nhận diện tế bào (ThS Phan Lữ Chính Nhân) 22/10 Bài Kĩ thuật phân tách tế bào (ThS Phan Lữ Chính Nhân) 29/10 Bài Kĩ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng (ThS Lê Thị Hạnh ) 5/11 10 12/11 9/24/18 NỘI DUNG Bài Kĩ thuật biến đổi gen tế bào (ThS Đào Thị Thanh Thuỷ) Bài 10 Ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy tế bào y học nơng nghiệp- Ơn tập (TS Vũ Bích Ngọc) TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn • thi kì (40%): trắc nghiệm • thi cuối kì (60%): Trắc nghiệm 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn Mục tiêu mơn học • Sau học xong môn học này, sinh viên: – Hiểu cấu trúc chức đặc tính tế bào – Hiểu vấn đề liên quan đến nuôi cấy tế bào động vật, công nghệ tế bào gốc kỹ thuật, quy trình, yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến tế bào trước, sau q trình phân lập, ni cấy, tăng sinh, bảo quản, định danh, phân tách tế bào – Liên hệ kiến thức công nghệ nuôi cấy tế bào phát triển lĩnh vực chăn nuôi y học 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn PTN Ứng dụng tế bào động vật 9/24/18 Sinh học tế bào động vật Một số kỹ thuật liên quan Kỹ thuật ni cấy tế bào TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn PHỊNG THÍ NGHIỆM NGUN TẮC VÀ TIÊU CHUẨN 9/24/18 MƠI TRƯỜNG NI CẤY TBĐV NHÀ XƯỞNG ĐIỀU KIỆN LÝ-HỐ TRONG KTNC THIẾT BỊ DỤNG CỤ TS Vũ Bích Ngọcvbngoc@hcmus.edu.vn Nguyên tắc • Phải phịng (clean room, sterile room), vệ sinh tốt… • Phải đảm bảo an tồn cho người làm việc, tránh lây nhiễm bệnh tật • Phải đảm bảo tinh cho mẫu vật, hóa chất hữu • Phải đảm bảo tính xác kết thí nghiệm 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn Một số tiêu chuẩn phịng thí nghiệm (1) Ap lực phịng cao bên ngồi khơng khí (2) Độ vơ trùng (có cấp bậc 1, 2, 3, 4, - tương ứng với mức độ vô khuẩn từ 99; 99,9; 99,99; 99,999; 99,9999%) (3) Độ ẩm (30-45%), hạn chế tối đa đưa nước vào phòng (4) Độ rung (5) Độ bụi (6) Nhiệt độ (điều khiển được) (7) Luồng khơng khí lưu thơng (400m3/giờ) (8) Độ sáng (9) Mật độ nhân làm việc có giới hạn (10) Khơng gian hợp lý (11) Có đủ hệ thống xử lý vệ sinh, hệ thống an tồn 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn Khu vực phòng đệm Khu vực hành lang Tách tế bào phương pháp khác Ly tâm đẳng tỷ trọng Dựa vào marker bề mặt 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn TẠO DÒNG TẾ BÀO KỸ THUẬT CHỌN DÒNG TẾ BÀO 9/24/18 CÁC PHƯƠNG PHÁP TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn XÂY DỰNG ĐƯỜNG CONG TĂNG TRƯỞNG VÀ ĐO SỰ PHÁT TRIỂN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO MÔI TRƯỜNG HUYẾT THANH MÔI TRƯỜNG KHÔNG HUYẾT THANH Cung cấp hormone GF cần thiết cho chức tế bào Bổ sung hormone, GF Cung cấp nhân tố bám dính (fibronectin, vitronectin…) Phủ đĩa với nhân tố bám dính hay polylysine Hoạt động đệm pH Sử dụng hệ đệm hữu cơ… Gắn, bất hoạt hay tách chất độc (hợp chất hữu gắn kim loại…) Sử dụng nước tinh sạch, chuẩn bị môi trường tươi, bổ sung albumine… Chứa protein bám làm ổn định và/hay giúp vận chuyển hormone, chất dinh dưỡng tế bào Bổ sung protein bám transferrin, eruloplasm… Cung cấp chất dinh dưỡng Sử dụng môi trường phức tạp Chứa chất ức chế protease Sử dụng chất ức chế trypsin cấy chuyền thêm chất ức chế protease thích hợp Chứa nhân tố biệt hố Bổ sung hay khơng, để điều hồ phát triển tế bào biệt hoá Chứa nhân tố gây lão hố tế Khơng có tác dụng lên già yếu tế bào, tế 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn bào chuột bình thường bào phát triển liên tục MỘT SỐ KỸ THUẬT LIÊN QUAN 9/24/18 KỸ THUẬT VÔ TRÙNG QUAN SÁT TẾ BÀO KIỂM SỐT NHIỄM ĐƠNG LẠNH TẾ BÀO TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Kỹ thuật vơ trùng • • • • • • • • • • • – Khử trùng nhiệt ẩm (nồi autoclave) Áp suất autoclave nhiệt độ psi 1070C psi 1100C 10 psi 1150C 15 psi 1210C 20 psi 1260C – Khử trùng nhiệt khô Nhiệt độ thời gian khử trùng 1200C 1400C 1600C 1800C 20 phút 9/24/18 TS V Bớch Ngc- vbngoc@hcmus.edu.vn Ô Kh trựng bng hoỏ cht: ethanol 70%; formaldehyde Ô Mt s phng phỏp vô trùng thường dùng khác Ø Chiếu tia UV: sử dụng cho tủ thao tác phòng thao tác Ø Chiếu tia Gamma: dùng để vô trùng dụng cụ nhựa Lọc vô trùng: sử dụng phin lọc với đường kính lỗ lớn nm, thường dùng cho mơi trường chất lỏng dễ bị biến tính nhiệt độ cao Ø Quan sát tế bào Kính hiên vi Sự đổi màu môi trường nuôi tế bào - Đánh giá sức khoẻ tế bào Hình thái tế bào Định danh tế bào … 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Kiểm soát nhiễm Phát nhiễm Ngăn ngừa nhiễm Nguồn: nấm, vi khuẩn, mycoplasma, virus, tế bào Nhận biết: độ acid bất thường, môi trường đục, xuất cầu, dây, quan sát KHV, nhuộm huỳnh quang, kháng thể, phân tích PCR Vệ sinh dụng cụ, khu vực thao tác Thao tác độc lập dòng tế bào Loại bỏ nhiễm: - bỏ vật dụng/mẫu bị nhiễm - Dùng kháng sinh/nấm - Tái thiết lập PP pha loãng tới hạn - Ly tâm percoll (nấm mốc/men) 9/24/18 Mycoplasma TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Nấm Vi khuẩn Đông lạnh – giải đông tế bào Đông lạnh Giải đông Giữ tế bào trạng thái ngủ (Lưu trữ tế bào sống thời gian dài) Đưa tế bào trạng thái sinh lý bình thường (hoạt hố tế bào) Cần có chất bảo quản đơng lạnh (DMSO, glycerol, PEG, trehalo, dextro…) Cần có mơi trường dinh dưỡng Nên đông lạnh chậm: T0 mát (2-80C) âm (15- -800C)à âm sâu (-1960C) Nên giải đông nhanh (370C) 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn ỨNG DỤNG CỦA KỸ THUẬT NCTB ĐV 9/24/18 MƠ HÌNH THỬ NGHIỆM VÀ CHẨN ĐOÁN BỆNH SẢN XUẤT CÁC HỢP CHẤT SINH HỌC CÁC TẾ BÀO ĐỘNG VẬT LÀM NGUYÊN LIỆU CẤY GHÉP TẠO CƠ QUAN TỪ TBĐV SẢN XUẤT CÁC VIRUS TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn DIỆT CƠN TRÙNG Mơ hình thử nghiệm – chẩn đoán bệnh Thử nghiệm chất kháng ung thư 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Mơ hình thử nghiệm – chẩn đốn bệnh Cơng nghiệp thẩm mỹ 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Mơ hình thử nghiệm – chẩn đoán bệnh Sinh học tế bào 9/24/18 Chẩn đoán tiền sinh TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Sản xuất hợp chất sinh học - Vaccin virus Interferone Kháng thể đơn dịng Hoạt chất sinh học (nhân tố chống đơng máu, hoạt hố plasminogen…) 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Cấy ghép tế bào – quan Tế bào làm vật liệu cấy ghép Tạo quan từ tế bào động vật ni cấy 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn ... 10/9 Bài Giới thiệu kĩ thuật ni cấy tế bào động vật (TS Vũ Bích Ngọc) 17/9 Bài Sinh học tế bào nuôi cấy (TS Vũ Bích Ngọc) 24/9 Bài Kĩ thuật ni cấy sơ cấp (TS Vũ Bích Ngọc) 1/10 Bài Kĩ thuật cấy chuyền... tính dính tế bào 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc- vbngoc@hcmus.edu.vn Đặc điểm tế bào động vật Các cấp độ nuôi cấy mô tế bào động vật 9/24/18 SINH HỌC CỦA TBĐV Một số khái niệm dịng tế bào TS Vũ Bích Ngọc-... cấy tế bào phát triển lĩnh vực chăn ni y học 9/24/18 TS Vũ Bích Ngọc-vbngoc@hcmus.edu.vn PTN Ứng dụng tế bào động vật 9/24/18 Sinh học tế bào động vật Một số kỹ thuật liên quan Kỹ thuật nuôi cấy