TÀI LIỆU KỸ THUẬT KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG LAN MOKARA CẮT CÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT

SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH *** TÀI LIỆU KỸ THUẬT KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG LAN MOKARA CẮT CÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 12/2017 MỤC LỤC I Giới thiệu tổng quan 1.1 Giới thiệu đặc điểm, đặc tính hoa lan .1 1.2 Tình hình sản xuất Tp.HCM 1.3 Thị trường tiêu thụ hoa kiểng địa bàn Tp.HCM .6 1.4 Đặc điểm bật mơ hình nhân giống hoa lan .8 II Các yêu cầu - Quy trình kỹ thuật 10 2.1.Đánh giá, yêu cầu lựa chọn địa điểm thực mơ hình 10 2.2 Yêu cầu nhà xưởng, khu đất trang thiết bị 11 2.3 Yêu cầu Giống quản lý giống 13 2.4 Quy trình, kỹ thuật nhân giống hoa lan 13 a) Thiết kế xây dựng hệ thống phịng ni cấy mơ nhà ươm hậu cấy mô 13 b) Đào tạo chuyển giao công nghệ 13 c) Triển khai sản xuất 17 III Một số vấn đề phát sinh trình nhân giống .18 IV Đánh giá hiệu mơ hình 20 3.1 Hiệu kinh tế .20 3.2 Kế hoạch tiêu thụ sản phẩm 23 3.3 Khả nhân rộng 24 IV Đánh giá hiệu 24 KẾT LUẬN 25 KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG LAN MOKARA CẮT CÀNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT I GIỚI THIỆU TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu đặc điểm, đặc tính hoa lan Ngành trồng hoa cảnh nói chung hoa lan nói riêng ngành sản xuất công nghiệp đem lại hiệu kinh tế cao số nước giới Hoa lan thực trở thành sản phẩm nơng nghiệp có giá trị kinh tế cao, thúc đẩy ngành sản xuất kinh doanh phát triển mạnh mẽ nước Thái Lan, Singapore, Malaysia, Indonesia Trong Thái Lan có kim ngạch xuất hoa lan cắt cành hàng trăm triệu USD năm Ở nước ta năm gần đây, với phát triển nhanh chóng kinh tế thị trường Đời sống xã hội không ngừng tăng lên nhu cầu sử dụng hoa nói chung hoa lan nói riêng tăng nhanh Hoa không dùng dịp lễ tết trước mà sử dụng đời sống thường ngày người dân với số lượng lớn Số liệu thống kê cho thấy lồi hoa có chất lượng cao xuất thị trường chủ yếu từ nguồn nhập nội tiêu thụ nhiều đô thị, thành phố lớn Điều cho thấy việc sản xuất hoa giống hoa lan nước ta chưa đáp ứng nhu cầu thị hiếu người sản xuất tiêu dùng Ở nước ta nói chung thành phố Hồ Chí Minh nói riêng vịng 10 năm gần kinh doanh hoa lan phát triển mạnh Tham gia sản xuất, kinh doanh hoa lan gồm nhiều thành phần kinh tế (cá thể, tập thể, nhà nước, liên doanh, 100% vốn đầu tư nước ngồi), góp phần giải lao động việc làm thu hút vốn nhân dân, thành phần kinh tế đem lại hiệu kinh tế – xã hội thiết thực bối cảnh ngành nông nghiệp với giống chủ lực như: Lan Mokara, Dendrobium, Catleya trồng tập trung chủ yếu Tp Hồ Chí Minh số tỉnh khác như: Đồng Nai, Vũng Tàu, Tiền Giang, Long An, Tây Ninh, Bình Dương Hàng năm số lượng giống Mokara cung cấp cho Thành phố Hồ Chí Minh tỉnh lân cận chủ yếu nhập từ Thái Lan Chất lượng giống khơng kiểm định nên không đảm bảo chất lượng, việc đầu tư giống lan Mokara với chi phí cao gây khó khăn lớn cho việc đầu tư mở rộng diện tích người sản xuất Do đặc tính cấy mơ lan Mokara sinh trưởng chậm, năm qua có đơn vị nghiên cứu như: Trung tâm Công nghệ Sinh học, Trung tâm Nghiên cứu phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao nhân giống cung cấp giống lan Mokara cấy mơ số lượng cịn khiêm tốn chưa đáp ứng đủ cho nhu cầu thị trường Vì việc đầu tư xây dựng phịng ni cấy mơ tế bào thực vật để phục vụ cho nhân giống invitro hướng đến lai tạo giống lan Mokara giống lan khác có chất lượng cao, đáp ứng thị trường nước nhằm chủ động nguồn giống ổn định phục vụ cho mở rộng sản xuất thành viên Hợp tác xã nói riêng đồng thời cung cấp giống cho bà nông dân địa bàn thành phố Hồ Chí Minh tỉnh thành phía Nam cần thiết giai đoạn tương lai 1.2 Tình hình sản xuất Tp.HCM Diện tích sản xuất hoa, kiểng địa bàn Thành phố khoảng 2.250 ha, tăng 17,8% so năm 2010 (1.910 ha); Trong đó, diện tích sản xuất tăng nhiều hoa lan, tăng 57,9%, diện tích sản xuất bon sai, kiểng tăng 32,5%, diện tích sản xuất hoa mai tăng 4,8%, diện tích trồng hoa tăng 9,0% Tổng giá trị sản xuất hoa kiểng tăng dần từ 1.257,4 tỷ đồng (năm 2010) lên 1.833,8 tỷ đồng (năm 2015) Giá trị sản xuất bình quân hoa, kiểng đạt 800 - 900 triệu đồng/năm Hoa lan trồng hầu hết quận, huyện địa bàn Thành phố, tập trung chủ yếu huyện Củ Chi (188,1 ha), Bình Chánh (31,1 ha) Sản lượng hoa lan cung ứng hàng năm khoảng 6,7 triệu chậu 68,9 triệu cành đạt giá trị khoảng 613,9 tỷ đồng Chủng loại lan trồng phong phú với 61 giống hoa lan phổ biến gồm Mokara, Dendrobium, Catlleya, Vanda, Oncidium,… số giống lan rừng Ngọc điểm, Hạc đỉnh, Bạch vĩ hồ, Hồng ngọc, Long tu,… hai giống lan trồng nhiều Mokara Dendrobium Một số mơ hình sản xuất hoa lan với qui mơ lớn, có hiệu cao như: HTX hoa lan Huyền Thoại, qui mô xã An Nhơn Tây, huyện Củ Chi, lợi nhuận ước khoảng tỷ đồng/năm mở rộng diện tích 20 ha; nhà vườn Trần Ngọc Tuyết, qui mơ xã Hịa Phú, huyện Củ Chi, lợi nhuận ước khoảng 1,8 tỷ đồng/năm; nhà vườn Nguyễn Văn Chánh, xã Xuân Thới Thượng, huyện Hóc Mơn, qui mơ 1,1 ha, lợi nhuận ước khoảng 0,8 tỷ đồng/năm Tình hình hoạt động ni cấy mơ thực vật địa bàn Tp HCM Trên địa bàn Tp HCM có khoảng 24 tổ chức, cá nhân hoạt động lĩnh vực nuôi cấy mô thực vật, chủ yếu viện, trường nghiên cứu có kết hợp sản xuất (15 sở) công ty, sở sản xuất (9 sở) với tổng sản lượng hàng năm khoảng 15,9 triệu giống cấy mô loại Hoa lan chủng loại sản xuất chủ yếu lĩnh vực nuôi cấy mô thực vật Trên địa bàn Tp HCM có khoảng 13 tổ chức, cá nhân sản xuất giống hoa lan nuôi cấy mô với sản lượng sản xuất hàng năm đạt khoảng 12,6 triệu giống nuôi cấy mô, chiếm 79,1% tổng sản lượng giống nuôi cấy mô sản xuất hàng năm Thành phố Trong đó: - Lan Dendrobium sản xuất nhiều nhất, với sản lượng hàng năm đạt khoảng 10,5 triệu giống nuôi cấy mô, chiếm 83,9% sản lượng giống hoa lan nuôi cấy mô Thành phố - Lan Hồ điệp: sản lượng hàng năm đạt 520.000 giống nuôi cấy mô, chiếm 6,5 % sản lượng giống hoa lan nuôi cấy mô Thành phố - Các loại lan khác Mokara, Ngọc điểm,… hàng năm đạt 1,5 triệu giống Hình 1: Lan Dendrobium Hình 2: Lan Mokara Hình 3: Lan Hồ điệp Hình4: Lan Ngọc Điểm 1.3 Thị trường tiêu thụ hoa kiểng địa bàn Tp.HCM Thành phố Hồ Chí Minh vừa đầu mối cung cấp hoa kiểng cho nước xuất khẩu, vừa thị trường tiêu thụ hoa kiểng lớn nước với nhiều chủng loại phong phú, hình thành địa điểm tiêu thụ, cung ứng tập trung chợ hoa Hồ Thị Kỷ, chợ Bà Chiểu, Đầm Sen,… đồng thời, hình thành khu vực tiêu thụ hoa kiểng địa phương, đáp ứng nhu cầu thị trường quận: 12, Gò Vấp, Thủ Đức huyện: Bình Chánh, Củ Chi hệ thống cửa hàng kinh doanh hoa ôn đới Sản lượng hoa, kiểng sản xuất Thành phố lớn, sản lượng hoa, kiểng sản xuất Thành phố chủ yếu tiêu thụ chỗ thông qua thương lái đến thu mua bán lẻ vườn, số thơng qua thương lái xuất bán tỉnh phía Bắc xuất Thành phố Hồ Chí Minh cịn đầu mối xuất, nhập chủng loại hoa kiểng, cụ thể: - Hoa lan cắt cành nhập Thành phố từ nước tỉnh Lâm Đồng; - Lan chậu nhập từ Đài Loan Trung Quốc Lượng hoa lan nhập vừa tiêu thụ Thành phố xuất bán tỉnh, chủ yếu tỉnh phía Nam Tình hình tiêu thụ giống hoa lan nuôi cấy mô Trên địa bàn Thành phố có 24 tổ chức, cá nhân hoạt động lĩnh vực ni cấy mơ thực vật Trong đó, chủ yếu viện, trường hoạt động nghiên cứu có kết hợp sản xuất (15 đơn vị) công ty, sở sản xuất (9 đơn vị) Năng lực sản xuất giống nuôi cấy mô loại đạt khoảng 24,6 triệu cây/năm, sản lượng vào khoảng 15,9 triệu cây/năm Riêng giống lan nuôi cấy mô, chiếm 79,1% tổng sản lượng giống nuôi cấy mô hàng năm TP, tập trung vào giống Dendrobium (10,5 triệu giống/năm, chiếm 83,9% sản lượng giống lan nuôi cấy mô), Hồ điệp (520.000 giống/năm, chiếm 6,5%) Hiện tại, có 16 sở nuôi cấy mô thực vật địa bàn Thành phố có hoạt động kinh doanh, cung cấp giống nuôi cấy mô cho thị trường Thành phố tỉnh lân cận, đơn vị lại Viện, trường hoạt động nuôi cấy mô chủ yếu phục vụ cho công tác nghiên cứu khoa học Hình thức tiêu thụ sản phẩm chủ yếu thơng qua hợp đồng cung cấp giống Tuy nhiên sở nuôi cấy mô thực vật thường gặp khó khăn thiếu loại giống trồng có suất, chất lượng cao, giá loại giống cao Những sản phẩm tiêu thụ mạnh giống nuôi cấy mô loại hoa lan Dendrobium, Catlleya, Oncidium, Hồ điệp, Vanda, Mokara giống lan rừng Đến nay, nhiều sở hồn thiện quy trình sản xuất nhiều giống lan có giá trị kinh tế cao, từ ni cấy mơ tới hoa Trung tâm Nghiên cứu Phát triển nơng nghiệp cơng nghệ cao hồn thiện quy trình nhân giống in vitro số giống hoa lan có giá trị kinh tế cao (5 giống Hồ điệp, 10 giống Mokara, 30 giống Dendrobium) Mỗi năm Trung tâm cung cấp thị trường triệu giống lan ni cấy mơ Chính vậy, thị trường cho giống hoa lan nuôi cấy mô rộng mở, nhiều giống sở đưa chinh phục nhà vườn, cạnh tranh với giống cấy mô nhập Những năm gần đây, lượng giống lan nuôi cấy mô nhập giảm hẳn nguồn cung nước tăng mạnh với nhiều giống chất lượng tốt Dẫu vậy, giống lan nuôi cấy mô nước ta nhiều hạn chế cần khắc phục Như giống lan Dendrobium, hoa giống sản xuất nước thua giống nhập từ Thái Lan chiều dài bông, nên nhà vườn ưu tiên mua giống Dendrobium nhập giống nước Nhiều giống lan nuôi cấy mô nước giá thành cao Đặc biệt theo phản ánh nhiều nhà vườn, nhược điểm lớn nghề trồng lan nước vào thời điểm cận Tết Nguyên đán, nhu cầu hoa lan lớn, lan lại hoa Cịn sau tết, nhu cầu giảm mạnh, lan lại hoa nhiều Do đó, trước tết giá lan thường cao, sau tết giá lại thấp (hiện khoảng 2.000 đ/cành) 10 + Máy cất nước lần + Nồi hấp vơ trùng - Phịng ni cây: + Kệ nuôi tầng đèn chiếu sáng + Máy đo nhiệt độ, ẩm độ + Máy đo cường độ ánh sáng - Phòng huấn luyện + Máy đo nhiệt độ, ẩm độ + Máy đo cường độ ánh sáng - Vườn ươm hậu cấy mô + Máy đo nhiệt độ, ẩm độ + Máy đo cường độ ánh sáng + Máy xịt thuốc + Hệ thống tưới phun sương  Nhân lực thực hiện: - Số cán KHCN chuyên môn: người + Phụ trách máy móc, thiết bị:1 người + Phụ trách quy trình sản xuất ni cấy mơ: người + Phụ trách vườn ươm hậu cấy mô: người - Số lượng kỹ thuật viên công nhân lành nghề: 11 người + Công nhân cấy chuyền: người + Công nhân rửa dụng cụ, phụ pha môi trường: người + Cơng nhân chăm sóc hậu cấy mơ: người 15 2.3 Yêu cầu Giống quản lý giống Một số giống chủ lực cần nhân giống như: - Mokara Full Moon (Vàng chanh) - Mokara Kenyku (Tím đậm mới) - Mokara Chao Praya Gold (vàng mai) - Mokara Chao Praya Sunset Gold (Vàng Chao Sunset) - Mokara Bangkhuntien (Vàng nến)… 2.4 Quy trình, kỹ thuật nhân giống hoa lan Ứng dụng công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật để sản xuất giống lan Mokara cấy mơ có chất lượng cao theo cơng nghệ tiến tiến, cụ thể: - Xây dựng quy trình nhân giống lan Mokara phương pháp nuôi cấy tế bào thực vật với suất chất lượng giống đảm bảo yêu cầu thị trường Công suất tối thiểu 300 ngàn cây/năm tăng theo quy mô mở rộng sản xuất hàng năm - Xác định từ - giống Mokara nhập nội thích hợp với điều kiện Tp Hồ Chí Minh có suất cao phẩm chất tốt đáp ứng nhu cầu tiêu thụ nước xuất Chọn đầu dòng đưa vào nhân giống invitro - Xây dựng quy trình kỹ thuật chăm sóc lan Mokara hậu ni cấy mơ có tỉ lệ sống cao, sinh trưởng tốt, chủ động nguồn giống cho sản xuất hợp tác xã cung cấp cho thị trường a) Thiết kế xây dựng hệ thống phòng nuôi cấy mô nhà ươm hậu cấy mô  Phịng ni cấy mơ thiết kế xây dựng kỹ thuật, đảm bảo công tác vô trùng, đáp ứng đủ yêu cầu sản xuất, bao gồm: - Phòng cấy vơ trùng: diện tích 50m2 - Phịng ni cây: diện tích 200 m2 16 - Phịng pha, hấp mơi trường: diện tích 20 m2 - Khu rửa dụng cụ, cây: diện tích 20 m2 - Nhà huấn luyện cây: diện tích 100 m2 - Vườn ươm con: diện tích 1.000 m2  Thiết kế nhà ươm hậu cấu mô Cây lan Mokara cấy mô ni phịng thí nghiệm điều kiện mơi trường lý tưởng Khi chuyển từ môi trường nuôi cấy điều kiện bên ngồi khả chống chịu thích nghi lan mokara hậu nuôi cấy mô Vì vậy, việc thiết kế vườn ươm yếu tố quan trọng có ảnh hưởng đến sinh trưởng, phát triển giai đoạn - Tùy điều kiện kinh tế mà qui mô vườn ươm Mokara khác nhau, nhiên cần đảm bảo tối thiểu yêu cầu sau: - Vườn ươm phải có mái che mưa, lưới cắt nắng hai lớp lớp phía di chuyển để điều chỉnh ánh sáng - Vườn ươm phải thoáng mát, nhiệt độ bên vườn ươm không cao nhiệt độ bình thường bên ngồi - Giàn ươm nên thiết kế cách mặt đất từ 70 – 80 cm chiều cao; chiều rộng từ 1,0 – 1,4 m; chiều dài tùy thuộc chiều dài vườn ươm (tốt từ 15 – 20 m) Vật liệu làm giàn tre, gỗ, sắt tùy điều kiện kinh tế phải đảm bảo chắn b) Đào tạo chuyển giao công nghệ Đào tạo chuyển giao công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật quy trình chăm sóc lan giai đoạn hậu ni cấy mô: đào tạo cho công nhân, kỹ sư nắm vững kỹ thuật nuôi cấy mô hoa lan  Áp dụng quy trình nhân giống lan Mokara phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 Cây mẹ Phát hoa khoảng 10 ngày tuổi (4-5cm) Khử trùng Môi trường nuôi cấy để tạo protocom chồi 10- 12 tháng Tạo chồi tháng Nhân nhanh chồi 3– tháng Cây phát triển - tháng Cây in vitro hoàn chỉnh: cao 4-5 cm, 3-4 lá, 3-4 rễ Thuyết minh quy trình cụ thể: Bước 1: Chọn mẹ Cây mẹ chọn cho hoa có màu sắc đẹp, siêng bơng (cho nhiều phát hoa năm), số hoa phát hoa nhiều, phát hoa dài, chia nhánh, phát triển mạnh chiều cao, dài khơng bó chặt vào thân, rễ nhiều nhanh, không bị rụng chân Bước 2: Khử trùng mẫu Nguyên liệu: phát hoa non 18 - Lấy mẫu: Phát hoa 10 ngày tuổi có kích thước từ 4-5 cm, thu từ mẹ tuyển chọn - Rửa mẫu vòi nước chảy để loại hết bụi bẩn bám bề mặt, dùng thấm cồn 70 độ lau đến lần, sau phát hoa lắc nước xà phịng bột lỗng 15 đến 30 phút, tiếp tục rửa phát hoa rửa lại nước cất vô trùng chuyển vào tủ cấy vô trùng - Trong tủ cấy, phát hoa rửa nước cất vơ trùng -3 lần - Dùng nhíp gắp phát hoa sang bình vơ trùng mới, sau lắc phát hoa với cồn 70 độ t, rửa lại nước cất vô trùng 3-4 lần - Dùng nhíp gắp phát hoa sang bình vơ trùng mới, sau lắc dung dịch khử trùng javel Mỹ Hảo rửa lại nước vô trùng - Tiến hành tách lớp bao vị trí đốt phát hoa, sau cắt thành lát mỏng có độ dày khoảng 3-5 mm, lát có mang đốt Tỷ lệ mẫu sống vô trùng đạt 70 % Bước 3: Tạo chồi Sau tạo nguồn mẫu sạch, tiến hành nuôi cấy đốt phát hoa môi trường tạo chồi với thành phần cụ thể theo quy trình Sau -3 tháng, đốt phát hoa xuất chồi protocorm like bodies (PLBs) Nhân nhanh PLBs, chồi: Tách chồi PLBs hình thành từ phát hoa Thành phần môi trường nhân chồi, PLBs: Tăng trưởng cây: Sau tạo lượng chồi cần thiết cấy chuyền sang môi trường để chồi phát triển thành con, sử dụng mơi trường ni cấy có thành phần cụ thể theo quy trình * Tiếp tục cấy chuyền định kỳ tháng lần vào môi trường tăng trưởng để đạt tiêu chuẩn vườn ươm (chiều cao khoảng 4-5 cm, 3-4 lá, 3-4 rễ, rễ dài 1-3 cm) 19 * Giai đoạn huấn luyện cây: Cây đạt tiêu chuẩn chiều cao, số lá, số rễ đưa khỏi phịng ni bắt đầu giai đoạn huấn luyện thích nghi Mục đích: giúp làm quen từ từ với điều kiện bên ngồi khơng cịn ni điều kiện phịng thí nghiệm tránh cho bị sốc Khi phát triển hồn chỉnh bình ni chuyển tới phịng huấn luyện thích nghi thiết kế đón ánh sáng tự nhiên thống gió Thời gian giai đoạn khoảng 30 - 45 ngày c) Triển khai sản xuất Cây cao - cm có từ - chuyển sang cấy vào bầu đất mùn vơ trùng có bổ sung chất dinh dưỡng Sau thời gian phát triển ổn định ta đem chuyển vào chậu Sau chuyển chậu khoảng tuần bón phân, lúc có đủ sức chống chọi với bệnh tật Như vậy, từ mô hoa Lan chọn nuôi cấy có chuyển vườn trồng thời gian khoảng từ đến 11 tháng Với phương pháp nhân giống đảm bảo tạo mang đặc tính giống hồn tồn với cha mẹ (cây ổn định mặt di truyền), không nhiễm bệnh tạo số lượng lớn thời gian ngắn Tuy nhiên, việc cấy mô phải thực thật nghiêm túc tỉ mỉ theo quy trình, phải có điều kiện trang thiết bị đầy đủ, môi trường nhân tạo thích hợp, đặc biệt điều kiện vơ trùng phải đảm bảo nghiêm ngặt Cần ý thêm, lồi khơng phải địa, phải hoá vùng chọn mẫu đem ni cấy, có đảm bảo hiệu từ khâu ni cấy phịng thí nghiệm đến trồng ngồi vườn ươm Xây dựng quy trình nhân giống lan Mokara phương pháp nuôi cấy tế bào thực vật với suất chất lượng giống đảm bảo yêu cầu thị trường Công suất tối thiểu 300 ngàn 20 III Một số vấn đề phát sinh trình nhân giống: Virus: tác nhân gây hại nguy hiễm nông nghiệp Một mẫu cấy nhiễm virus tạo vơ số nhiễm Vì để tạo giống khơng nhiễm virus mẫu cấy ban đầu phải đảm bảo không bị nhiễm virus Vi khuẩn: nhiễm vi khuẩn thường gặp nuôi cấy mơ Vi khhuẩn sống tự khơng khí Sự diện chúng mơi trường ni cấy gây nhiều bất lợi, gây chết làm chậm sinh trưởng mẫu nuôi cấy Trong thực tế, việc quản lý mẫu cấy môi trường ni cấy vơ trùng khó khăn Đơi triệu chứng nhiễm xuất chậm môi trường nuôi cấy sau vài lần cấy chuyền Các vi khuẩn gây nhiễm thường gặp q trình ni cấy Agrobacterium, Bacillus, Pseudomonas, Lactobacillus, Staphylococus Biện pháp khắc phục phổ biến cấy đỉnh sinh trưởng dùng kháng sinh Nấm: dễ nhiễm q trình ni cấy làm hạn chế phát triển mẫu cấy, làm chết mẫu cấy Nhiều loại nấm thường gặp nuôi cấy mô Aspergillus, Candida, Microsprium, Phialopora Sự nhiễm nấm thường dễ phát sau đến tuần cấy mẫu, nguyên nhân gây nhiễm khử trùng bề mặt mẫu cấy chưa hoá chất khử trùng chưa thích hợp, nhiễm thao tác cấy chuyền côn trùng nhỏ Hiện tượng thừa nước: Hiện tượng thừa nước biểu lóng ngắn bình thường, mộng nước, giịn, dễ gẫy, màu sắc bất thường, chủ yếu do: - Mẫu cấy: tuỳ loài giống, độ dài thời gian cấy chuyền, số lần cấy chuyền, cách đặt mẫu cấy môi trường - Môi ttrường: loại nồng độ agar, nồng độ khoáng, loại nồng độ auxin - Bình chứa định thành phần nồng độ khí 21  Hiện tượng thừa nước lan Dendrobium: Môi trường bên (vi khí hậu): nhiệt độ, cường độ phẩm chất ánh sáng, ẩm độ tương đối, di chuyển không khí * Cách khắc phục: + Tăng nồng độ agar, sử dụng cytokinin nồng độ thấp, giảm nồng độ ion amonium vi lượng mơi trường + Bình chứa có màng thơng khí plactic thấm khí để gia tăng trao đỗi khí + Tăng cường độ ánh sáng mơi trường xung quanh  Sự hố nâu Mẫu cấy môi trường thường trở nên nâu đen sau cấy, sau thời gian mô thường chết Sự sinh trưởng bị ảnh hưởng nặng lồi có nồng độ tanin cao hợp chất phenol lan Hồ điệp * Cách khắc phục hoá nâu: + Để mẫu cấy vào tối nơi ánh sáng + Cấy chuyền nhiều lần, có thêm chất oxy hố vào môi trường nuôi cấy + Ngâm nước máy chất oxy hoá Acid ascorbic (Vitamin C); acid citric Sau khử trùng mẫu cấy ngâm nước cất khử trùng - tuỳ đặc tính mơ cấy  Sự dưỡng: Cây ni phịng đến hồn chỉnh cho ngồi dưỡng thành thành thục ngồi mơi trường tự nhiên thích hợp - Điều kiện keo - Điều kiện bên nhà lưới - Nhiệt độ: 26 ± 20C - Ẩm độ: Tương đương 100% 22 - Cường độ ánh sáng: 1000 lux - Nhiệt độ: 29 - 340C - Ẩm độ: Tương đương 67-75% - Cường độ ánh sáng: 3000-4000 lux IV Đánh giá hiệu mơ hình 3.1 Hiệu kinh tế - Đáp ứng nhu cầu giống lan Mokara cho người sản xuất hoa lan cắt cành địa bàn thành phố Hồ Chí Minh tỉnh phía Nam - Chủ động nguồn giống phục vụ cho sản xuất hoa lan nước, giảm thiểu nhập giống từ nước ngồi - Góp phần tạo việc làm cho người dân địa phương Số lao động có việc làm trực tiếp từ nhiệm vụ 05 lao động với mức lương trung bình 5.000.000 đồng/tháng/người x 12 tháng = 60.000.000 VNĐ/năm/người lao động - Tạo điều kiện cho người dân tiếp cận với công nghệ tiên tiến lĩnh vực nhân giống kỹ thuật nuôi cấy invitro - Thúc đẩy phát triển kinh tế xã hội, chương trình chuyển đổi cấu kinh tế nông nghiệp, phát triển nông nghiệp đô thị thành phố Dự kiến số lượng sản phẩm theo năm nhiệm vụ sau (dự kiến hiệu kinh tế sau năm thực hiện): TT Tên sản phẩm ĐVT Số lượng (cây) Năm Năm Năm Cây Mokara in Bình Bình 300.000 vitro chồi Cơ sở tiêu thụ Các nhà vườn trồng lan Mokara 23 khu vực Hóc Cây lan Mokara hậu cấy mơ 12 tháng tuổi Bình Bình Bình (cây) chồi Môn, Củ chi, Tây Ninh, Long An, ngồi nước Cây lan Mokara 200.000 hậu cấy mơ 24 tháng tuổi Bình Bình Bình (cây) cây (Campuchia, 130.000 Lào) Giá thành sản phẩm theo chủng loại sản phẩm (dự kiến) TT Tên sản phẩm Cây Mokara Số Đơn giá lượng (đ) Cây 300.000 3.200 960.000.000 Cây 200.000 7.500 1.500.000.000 Cây 130.000 14.000 1.820.000.000 1.000 140.000 140.000.000 500 200.000 100.000.000 ĐVT in vitro Thành tiền (đ) Cây Mokara hậu cấy mô 12 tháng tuổi Cây Mokara hậu cấy mô 24 tháng tuổi Bình Bình in (50-60 vitro cây) Bình chồi in vitro Bình Cộng 4.520.000.000 Tổng doanh thu trung bình/năm: 1.506.667.000 đ Chi phí hoạt động hàng năm: 24 Diễn giải ĐVT Số lượng Thành tiền Đơn giá (đ) Nguyên vật liệu lượng Hóa chất, vật tư nhân giống 150.000.000 Vật tư trồng, chăm sóc hậu ni 100.000.000 cấy mô Điện, nước 100.000.000 Công lao động Công lao động phổ thông ngườ (người/năm) i ngườ Công kỹ thuật (người/năm) Khấu hao sở vật chất, máy móc, thiết bị i Năm Tổng cộng 11 48.000.000 528.000.000 60.000.000 180.000.000 200.000.00 200.000.000 1.258.000.000 Tính tốn hiệu kinh tế trung bình/năm TT Nội dung Thành tiền (đ) Tổng chi phí thực tế trung bình/năm 1.258.000.000 Tổng doanh thu trung bình/năm 1.506.667.000 25 Lãi gộp (2) – (1) 248.667.000 Lãi ròng (3) – (Thuế 10%) 223.800.000 3.2 Kế hoạch tiêu thụ sản phẩm Giá sản phẩm dự kiến Đơn giá TT Tên sản phẩm ĐVT dự kiến (đ) Cây Mokara in vitro Đơn giá dự kiến năm sau (đ) Giá tham khảo nhập nội, đơn vị kinh doanh (đ) Cây 3.200 3.000 4.000 Cây 7.500 7.000 8.000 Cây 15.000 14.000 Cây Mokara hậu cấy mô 12 tháng tuổi Cây Mokara hậu cấy mô 24 tháng tuổi 15.000 20.000 Chương trình phát triển hoa lan cảnh thành phố tập trung chủ yếu vào nhóm hoa lan cắt cành Mokara Dendrobium Diện tích trồng lan Mokara gia tăng nhanh giống lan cho hiệu kinh tế cao, phù hợp với nông nghiệp đô thị, nhiên nguồn giống nước đáp ứng 10-15% nhu cầu, 85-90% phải nhập từ Thái Lan với giá thành tương đối cao phải vận chuyển đường hàng không Các sở ni cấy mơ nước cịn nhỏ lẻ, chưa đầu tư nhiều Ngồi phịng ni cấy mô phạm vi viện trường, trung tâm nghiên cứu, sở nuôi cấy mô tư nhân tập trung vào sản xuất giống, nhiên nguồn giống 26 không đảm bảo độ tin cậy không rõ nguồn gốc, xuất xứ, màu sắc hoa, Với mức thị hóa nay, diện tích đất nông nghiệp đô thị bị thu hẹp nhanh chóng, mơ hình trồng hoa cảnh nói chung Mokara nói riêng tập trung phát triển dự báo thời gian tới thị trường giống lan Mokara thị trường tiềm 3.3 Khả nhân rộng - Từ việc có nguồn giống ổn định, chất lượng cao, nhiệm vụ tiếp tục hỗ trợ phát triển nâng quy mơ tính liên kết hợp tác xã trồng lan Mokara Xây dựng thương hiệu đầu tư phát triển vùng trồng hoa Mokara cắt cành, đáp ứng yêu cầu thị trường - Có thể chuyển giao quy trình nhân giống hoa lan Mokara phương pháp nuôi cấy mô - Hỗ trợ chuyển giao giống, quy trình kỹ thuật trồng chăm sóc hoa lan hậu nuôi cấy mô cho bà nông dân V Địa chuyển giao, tư vấn - HTX hoa lan Huyền Thoại: Ấp Ba Sòng – xã An Nhơn Tây- H Củ chiTp HCM - Vườn lan ông Phạm Xuân Hiệp xã Nhuận Đức, Củ Chi, Tp Hồ Chí Minh - Vườn lan ông Trần Công Điện xã Lộc Vĩnh, Lộc Hưng, Tây Ninh - Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao Tp HCM - Cung cấp giống cho Ban Quản lý Khu Đơ Thị Thủ Thiêm, Ơng Trần Cơng Điện, Ơng Phạm Xuân Hiệp nhiều cá nhân, đơn vị Tp Hồ Chí Minh tỉnh thành KẾT LUẬN 27 Sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để nhân giống lan Mokara tạo số lượng lớn giống đồng mặt di truyền, bệnh, chất lượng giống tốt, tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm cao, đáp ứng nhu cầu giống thị trường Từ việc có nguồn giống ổn định, chất lượng cao, nhiệm vụ tiếp tục hỗ trợ phát triển nâng quy mơ tính liên kết hợp tác xã trồng lan Mokara Xây dựng thương hiệu đầu tư phát triển vùng trồng hoa Mokara cắt cành, đáp ứng yêu cầu thị trường chuyển giao quy trình nhân giống hoa lan Mokara phương pháp ni cấy mơ, hỗ trợ chuyển giao giống, quy trình kỹ thuật trồng chăm sóc hoa lan hậu ni cấy mô cho bà nông dân Tại HTX hoa lan Huyền Thoại có kế hoạch mở rộng diện tích sản xuất hàng năm từ - để đáp ứng nhu cầu tiêu thụ nước nước khác Lào, Campuchia Tuy nhiên qua thực tế sản xuất kinh doanh cho thấy HTX cịn gặp khó khăn vấn đề nhập giống từ Thái Lan: Phụ thuộc nhà cung cấp thời gian, giá thành cao dẫn đến vốn đầu tư ban đầu cao, chất lượng giống đơi khơng kiểm sốt nên thường gặp rủi ro Chương trình phát triển hoa lan cảnh thành phố tập trung chủ yếu vào nhóm hoa lan cắt cành Mokara Dendrobium Diện tích trồng lan Mokara gia tăng nhanh giống lan cho hiệu kinh tế cao, phù hợp với nông nghiệp đô thị, nhiên nguồn giống nước đáp ứng 10 - 15% nhu cầu, 85 - 90% phải nhập từ Thái Lan với giá thành tương đối cao phải vận chuyển đường hàng không Các sở ni cấy mơ nước cịn nhỏ lẻ, chưa đầu tư nhiều Ngồi phịng ni cấy mơ phạm vi viện trường, trung tâm nghiên cứu, sở nuôi cấy mô tư nhân tập trung vào sản xuất giống, nhiên nguồn giống không đảm bảo độ tin cậy không rõ nguồn gốc, xuất xứ, màu sắc hoa, Với mức đô thị hóa nay, diện tích đất nơng nghiệp thị bị thu hẹp nhanh chóng, mơ hình trồng hoa cảnh nói chung 28 Mokara nói riêng tập trung phát triển dự báo thời gian tới thị trường giống lan Mokara thị trường tiềm Chú dẫn: Tài liệu biên soạn tóm tắt sở đề tài nghiên cứu “Nhân giống hoa lan Mokara cắt cành phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật” ThS Phạm Đình Dũng - Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao Tp HCM làm chủ nhiệm Sở Khoa học Công nghệ TP HCM quản lý Sở Khoa học Công nghệ TP HCM mạn phép sử dụng để cung cấp cho nông dân 29