enzyme pro

Trường Đại học Nha Trang Viện công nghệ sinh học và môi trường : Thu nhận enzyme Protease từ nấm mốc Aspergillus oryzae và ứng dụng trong chế biến nước tương Semina GVHD: TS. Vũ Ngọc Bội SVTH: 1. Lê Thị Vân 2. Nguyễn Thị Thanh Trà 3. Nguyễn Thị Ngọc Bích 4. Vũ Thị Xuân 5. Nguyễn Thị Thu Huyền 6. Lại Nhật Linh 7. Nguyễn Quyết Thắng NỘI DUNG  B. Ứng dụng trong sản xuất nước tương  A. Thu nhận enzyme Protease từ nấm mốc Aspergillus oryzae . A. Thu nhận enzyme Protease I. Tổng quan về enzyme Protease II. Quy trình thu nhận enzyme Protease từ nấm mốc Aspe r gil l u s or yz ae . I. Tổng quan enzyme Protease 1.Giới thiệu chung 2.Phân loại protease Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este (bromelin) và vận chuyển amino acid - Nhóm enzyme protease xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết peptit (-CO-NH-)n trong phân tử protein, polypeptide đến sản phẩm cuối cùng là các amino acid 1. Giới thiệu chung Mô hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein: H2N-CH-CO--NH-CH-CO--…--NH-CH-COOH R1 R2 RX H2O H2N-CH-COOH + H2N-CH-CO--…--NH-CH-COOH Protease R1 R2 RX Sản phẩm thủy phân là có thể là peptide, peptone, amino acid … tùy theo mức độ thủy phân. 2. Phân loại Potease(peptidase)(E.C.3.4) Exopeptidase(E.C.3.4.11-17) Endopeptidase(E.C.3.4.21-99) Aminopeptidase Serine proteinase Cystein proteinase Cacboxypeptidas Aspartic proteinase Metallo proteinase Cấu trúc không gian của protease  Protease có bản chất là protein, chỉ có các protein có cấu trúc bậc 4 mới thể hiện hoạt tính sinh học.  Cấu trúc không gian của protease được hình thành do các tiểu phần dưới đơn vị có cấu trúc bậc 3 liên hợp lại bằng các liên kết hydro, tương tác tĩnh điện, tương tác kị nước … Trung tâm hoạt động của protease  Trung tâm hoạt động của protease thường bao gồm một tổ chức các nhóm định chức của amino aicd không tham gia tạo thành trục chính của sợi polypeptide. Vd : nhóm – SH của Cys, -OH của Ser, Tys, ε- NH2 của Lys, -COOH của Asp,Glu, …  Trung tâm hoạt động của protease hai cấu tử bao gồm các nhóm ngoại ( vitamin, ion, kim loại) II. Quy trình thu nhận enzyme Protease từ nấm mốc 1. Sơ lược về nấm mốc A.oryzae. 2. Quy trình thu nhận enzyme. a. Phân lập nấm A.oryzae. b. Lên men tạo enzyme Protease. c. Thu nhận sản phẩm. d. Sản xuất enzyme Protease tinh khiết. [...]... Chế phẩm enzyme Protease thô gồm: - Enzyme Protease và các loại enzyme khác - Sinh khối tế bào nấm mốc, thành phần môi trường - Nước có trong môi trường  Sấy:    Sấy: để đảm bảo cho enzyme Protease không bị mất hoạt tính nhanh Độ ẩm sau khi kết thúc quá trình sấy: 10% Sấy ở nhiệt độ: 38oC – 40oC Sấy ở nhiệt độ 60oC – 70oC sẽ làm bất hoạt enzyme protease của A.oryzae Tinh sạch enzyme Protease Nghiền... phẩm enzyme thô - Tạo điều kiện cho enzyme nội bào thoát ra ngoài - Giúp các enzyme ngoại bào thoát ra khỏi thành phần tế bào dễ dàng hơn Trích ly: Chế phẩm enzyme thô Hòa tan bằng dung môi nước Khuấy nhẹ, lọc lấy dịch Dung dịch enzyme thô Với tỉ lệ: 1 phần enzyme thô + 4-5 phần nước Bã Enzyme Protease, nước, chất hòa tan trong môi trường nuôi cấy Dung dịch enzyme thô Kết tủa Protease Kết tủa enzyme. .. nhân kết tủa là ethanol hoặc sunfat amon Tỉ lệ: 1 phần dd enzyme thô + 2-2,5 ethanol nồng độ 97% Khuấy nhẹ, để yên trong điều kiện nhiệt độ lạnh 4oC-7oC Thu nhận kết tủa enzyme Sấy phun sương Enzyme Protease tinh khiết Độ ẩm lớn hơn 70%W, dễ bị biến tính to: 40oC Độ ẩm 40%W 3 Xác định hoạt đô của enzyme Protease a Nguyên tắc chung: → Hoạt động của enzyme được xác định thông qua lượng cơ chất bị mất đi... sinh enzyme Trong quá trình nuôi cấy cần giữ cho nhiệt độ môi trường trong khoảng 27 - 36 độ C Nuôi cấy nấm mốc Thu nhận sản phẩm Kết thúc quá trình nuôi cấy ta tiến hành thu nhận chế phẩm enzyme protease, chế phẩm này được gọi là chế phẩm thô Có thể thu nhận chế phẩm enzyme vào cuối giai đoạn 2 vì ở giai đoạn này protease được tổng hợp mạnh Sang đến giai đoạn 3 thì lượng bào tử tạo ra nhiều, lượng enzyme. .. nhiều tế bào, sợi mảnh chiều ngang sợi khoảng 5 – 7µm Sinh sản bằng bào tử   Giàu enzyme thủy phân nội bào và ngoại bào: amylase, protease Có khả năng thủy phân liên kết β-glucoside, endo-β1,4-glucanase Nấm mốc A.oryzae 2 Quy trình thu nhận Protease Phân lập nấm mốc Lên men tạo Protease Tinh sạch enzyme Thu nhận enzyme 2.1 Phân lập chủng nấm A.oryzae đất  Nguồn phân lập thức ăn trung tâm cung cấp... hợp protease acid cao  Môi trường bổ sung cả hai nguồn nito trên thì hoạt lực sinh enzyme tăng cao Vd : môi trường có cám mì , bột đậu tương đã tách chất béo, có cả hai nguồn nito khả năng sinh protease của A oryzae tăng 22-74%  b Nguồn nito  Các amino acid có ảnh hưởng rõ rệt tới sự sinh tổng hợp enzyme của vi sinh vật, có thể cảm ứng hoặc ức chế Vd: Gly, Ala, Met có tác dụng làm tăng hoạt lực protease... nuôi cấy:  - Hầu hết các chủng A oryzae có cực đại sinh enzyme protease ở giờ thứ 36 – 42 của quá trình nuôi cấy.Thời gian nuôi cấy để thu được lượng protease cực đại thường được xác định bằng thục nghiệm - Thời gian nuôi cấy phải phù hợp tránh hiện tượng nấm sinh bào tử vì nó thường làm giảm hoạt lực của enzyme, với A oryzae hoạt lực sinh enzyme thường kết thúc khi nấm bắt đầu sinh bào tử  Ảnh của... Fe…và các chất vi lượng khác - Để tăng sự tổng hợp enzyme người ta thường bổ sung các chất cảm ứng, các chất này thường là cơ chất tương ứng của enzyme cần tổng hợp a Nguồn cacbon Thường là các hợp chất hữu cơ trong đó chủ yếu pà glucid, có nhiều hợp chất là nguồn cacbon cho A oryzae sinh enzyme protease có hoạt lực cao Vd: đối với A oryzae sinh tổng hợp proteinase tác dụng của nguồn cơ chất có thể theo... trường còn rời rạc Enzyme mới bắt đầu hình thành - Gđ 2: Kéo dài 14-18 giờ, toàn bộ bào tử đã phát triển thành hệ sợi Môi trường kết chặt lại, độ ẩm giảm dần, nhiệt độ môi trường tăng nhanh, quá trình đồng hóa diễn ra mạnh, lượng cơ chất giảm nhiều Enzyme protease được tổng hợp mạnh - Gđ 3: Kéo dài 10 – 20 giờ Quá trình trao đổi chất yếu dần Bào tử được hình thành nhiều lượng enzyme tao ra ít Các... ngay hoặc đem đi bảo quản và dự trữ 2.2 Lên men tạo Protease ( sử dụng phương pháp nuôi cấy trên môi trường bán rắn)  Môi trường nuôi cấy - Môi trường có ảnh hưởng trực tiếp đến sự sinh trưởng và tổng hợp enzyme của vi sinh vật, thành phần môi trường phải đảm bảo đủ chất dinh dưỡng cho sự phát triển bình thường của vi sinh vật và sự sinh tổng hợp enzyme - Thành phần chính của môi trường : C, N, H,O; . Thu nhận enzyme Protease từ nấm mốc Aspergillus oryzae . A. Thu nhận enzyme Protease I. Tổng quan về enzyme Protease II. Quy trình thu nhận enzyme Protease. Serine proteinase Cystein proteinase Cacboxypeptidas Aspartic proteinase Metallo proteinase Cấu trúc không gian của protease  Protease có bản chất là protein,