Khảo sát sự hiện diện của biofilm trên mô va viêm mạn tính

Nghiên cứu với mục tiêu nhằm khảo sát sự hiện diện của màng sinh học (biofilm) vi khuẩn trong mô viêm VA mạn tính và đặc điểm vi trùng học của viêm VA mạn tính có và không có biofilm. Nghiên cứu tiến hành trên 67 ca viêm VA mạn tính có nạo VA tại bệnh viện Đại học Y Dược Hồ Chí Minh từ 10/2011-5/2012.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA BIOFILM TRÊN MÔ VA VIÊM MẠN TÍNH Phùng Khánh Quyên*, Lâm Huyền Trân**, Hứa Thị Ngọc Hà*** TÓM TẮT Mục tiêu: Khảo sát diện màng sinh học (biofilm) vi khuẩn mơ viêm VA mạn tính đặc điểm vi trùng học viêm VA mạn tính có khơng có biofilm Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu tiến cứu mơ tả cắt ngang có can thiệp phẫu thuật 67 ca viêm VA mạn tính có nạo VA bệnh viện ĐH Y Dược Hồ Chí Minh từ 10/2011 – 5/2012 Xác định biofilm nhuộm Hematoxylin Eosin, quan sát kính hiển vi quang học cấy vi trùng tạo biofilm Kết quả: Tỷ lệ viêm VA mạn tính có biofilm 61,2%, vi trùng thường gặp viêm VA mạn có biofilm là: Streptococcus spp, Staphylococcus coagulase (-), Staphylococcus aureus Kết luận: Khơng có liên quan độ lớn VA với diện biofilm bề mặt VA viêm mạn tính, khơng có triệu chứng lâm sàng hình ảnh nội soi mũi xoang đặc trưng nhóm viêm VA mạn có biofilm phẫu thuật nạo VA mang lại cải thiện rõ rệt Từ khóa : Màng sinh học, viêm VA ABSTRACT EXAMINE THE PRESENCE OF BIOFILM ON CHRONIC ADENOIDITIS Phung Khanh Quyen, Lam Huyen Tran, Hua Thi Ngoc Ha * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 34 - 38 Objectives: Examine the presence of bacterial biofilm on chronic adenoiditis and Microbiological characteristics of biofilm (-) and biofilm (+) chronic adenoiditis Subject and method: Cross-sectional prospective study describes the surgical intervention in 67 patients with chronic adenoiditis who had undergone an adenoidectomy at the HCM city University Medical Center from 10/2011 to 5/2012 Determine biofilm by Hematoxylin Eosin staining method, observed by the optical microscopy and bacterial cultures generated biofilm Results: The rate of biofilm (+) chronic adenoiditis is 61.2%, The most frequent micro-organisms in biofilm (+) chronic adenoiditis were Streptococcus spp, Staphylococcus coagulase negative, Staphylococcus aureus Conclusion: There was no relation between adenoid hypertrophic degree and the presence of biofilm on adenoid surface, there were featured clinical symptoms and sinusitic endoscopic signs of biofilm (+) chronic adenoiditis and the adenoidectomy brought significant improvement Key words: Biofilm, adenoiditis ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm VA mạn tính hay tái tái lại phì đại VA bệnh thường gặp tai mũi họng trẻ em Nó gây biến đổi hành vi phát triển trẻ Đôi để lựa chọn phương pháp điều trị tốt cho trẻ, người thầy thuốc phải yêu cầu can thiệp phẫu thuật Trong năm * Bệnh viện Mắt Răng Hàm Mặt An Giang ** Bộ môn Tai Mũi Họng - Đại Học Y Dược TP HCM *** Bộ môn Tai Mũi Họng - Đại Học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: BS Phùng Khánh Quyên ĐT: 0918527820 Email: phungkhanhquyen@yahoo.com, 34 Chuyên Đề Tai Mũi Họng – Mắt Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 gần vai trò biofilm bệnh nhiễm trùng mạn tính đề cập phổ biến Biofilm màng mỏng bao bọc vi khuẩn với khuôn polysaccharide, axit nucleic protein Nhờ khả tạo biofilm mà vi khuẩn có khả đề kháng với kháng sinh tăng lên gấp 500 lần Bằng cách tạo biofilm, vi khuẩn tồn bề mặt mô trở thành nguồn gốc nhiều bệnh nhiễm trùng mạn tính có viêm VA mạn tính Tại số nước giới có nhiều nghiên cứu biofilm mơ VA viêm mạn tính Tuy nhiên, chưa có đề tài nước nghiên cứu diện biofilm viêm VA mạn tính Mục tiêu Mục tiêu tổng quát Khảo sát diện biofilm vi khuẩn mơ viêm VA mạn tính Nghiên cứu Y học Tất bệnh nhân điều trị nội khoa tích cực thất bại Tiêu chuẩn loại trừ Bệnh nhân không nội soi Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu tiến cứu mơ tả cắt ngang có can thiệp phẫu thuật Cỡ mẫu 67 bệnh nhân Phương pháp tiến hành Bước 1: Vào lần đầu thăm khám, bệnh nhân đánh giá bệnh trước mổ, lượng giá mức độ nặng bệnh qua dấu hiệu lâm sàng (điểm triệu chứng SNOT-20) nội soi Mục tiêu chuyên biệt Khảo sát đặc điểm mẫu tần suất diện biofilm mơ VA viêm mạn tính Bước 2: Phẫu thuật nạo VA hướng dẫn nội soi mũi thực phòng mổ với phương pháp gây mê nội khí quản đặt qua đường miệng Phân tích đặc điểm vi trùng học viêm VA mạn tính có khơng có biofilm Bước 3: Lấy bệnh phẩm mổ bao gồm: Đánh giá hiệu nạo VA điều trị viêm VA mạn tính có khơng có biofilm - Sinh thiết VA cấy mủ: Dùng kìm Blakesley đưa đến vị trí VA bấm mẫu mô VA nơi diện mủ hướng dẫn qua nội soi Sau dùng que bơng vơ trùng quệt vào lòng kìm Blakesley lấy mủ Que lấy mủ chuyển đến phòng xét nghiệm vi sinh ĐH Y Dược TP HCM để cấy vi trùng ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Các bệnh nhân viêm VA mạn tính có định phẫu thuật nạo VA Bệnh Viện Đại Học Y Dược khoảng thời gian từ 10/2011 – 5/2012 Tiêu chuẩn chọn mẫu Bệnh nhân có triệu chứng viêm VA mạn tính chẩn đốn dựa dấu hiệu lâm sàng, nội soi (bệnh ≥ tháng tái phát ≥ đợt cấp/6 tháng, đợt tái phát kéo dài ngày) định phẫu thuật nạo VA Bệnh nhân có định phẫu thuật nạo VA có/khơng có cắt amiđan Bệnh nhân có tuổi từ đến 15 tuổi - Lấy mẫu mô VA: Thìa nạo đưa vào đến vị trí VA qua đường miệng sau nạo VA hướng dẫn nội soi Lấy mẫu mô VA cho vào lọ chứa Formaldehyt 10% Sau gửi mơn Giải Phẫu Bệnh trường ĐH Y Dược TP HCM tìm biofilm bề mặt mơ VA kính hiển vi quang học cách nhuộm Hematoxylin Eosin Bước 4: Sau 12 tuần, khám lại đánh giá lại đối tượng tham gia nghiên cứu triệu chứng bệnh sau phẫu thuật nạo VA Chuyên Đề Tai Mũi Họng – Mắt 35 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học Bảng 4: Kết cấy vi trùng KẾT QUẢ Bảng Đặc điểm dịch tễ mẫu Đặc điểm dịch tễ Số ca Tỷ lệ/số trung bình Giới : Nam Nữ Nơi cư trú : Hồ Chí Minh Các tỉnh Nhóm tuổi: Mẫu giáo (4–5tuổi) Cấp (6–11tuổi) Cấp hai (12–15tuổi) Tuổi trung bình 44 23 58 43 17 67 65,67% 34,33% 13,43% 86,57% 10,45% 64,18% 25,37% 9,09 ± 2,81 tuổi Nhận xét: Trong mẫu nghiên cứu, nam chiếm tỷ lệ cao nữ với tỷ lệ nam:nữ = 1,9:1 có phân bố không đồng nơi cư trú, bệnh nhân tỉnh chiếm tỷ lệ cao gấp 6,5 lần bệnh nhân TP Hồ Chí Minh Bệnh nhân nhóm tuổi cấp (6 – 11 tuổi) chiếm đa số mẫu nghiên cứu 64,18% tuổi trung bình trẻ cao 9,09 ± 2,81 tuổi Biofilm (+) Biofilm (-) Phép kiểm p(²) = 0,86 > 0,05 p(²) = 0,93 > 22 (84,62%) 0,05 p(²) = 0,99 > 12 (46,15%) 0,05 p(²)= 0,07 > 14 (53,85%) 0,05 p(²)= 0,09 > 10 (38,46%) 0,05 P (Fisher) = 0,29 (11,54%) > 0,05 Nghẹt mũi 34 (82,93%) 22 (84,62%) Chảy mũi 35 (85,37%) Ho kéo dài 19 (46,34%) Ngủ ngáy 13 (31,71%) Thở miệng (19,51%) Nói mũi kín (2,44%) Nhận xét: Khơng có khác biệt triệu chứng nhóm có khơng có biofilm Bảng 3: Độ phát VA nhóm Độ phát VA Biofilm (+) Độ I Độ II Độ III Độ IV Tổng Biofilm (-) (19,51%) (23,08%) 18 (43,9%) 10 (38,46%) 12 (29,27%) (15,38%) (7,32%) 6(23,08%) 41 (100%) 26 (100%) Tổng cộng 14 (20,9%) 28 (41,79%) 16 (23,88%) (13,43%) 67 (100%) Nhận xét: Khơng có mối liên quan độ lớn VA với hình thành biofilm, p(χ²) = 0,22 36 Biofilm (+) Biofilm (-) 34 (82,93%) 25 (96,15%) (17,07%) (3,85%) 41 (100%) 26 (100%) Tổng số 59 (88,06%) (11,94%) 67 (100%) Nhận xét: Khơng có khác biệt kết cấy vi trùng nhóm có khơng có biofilm, p (Fisher) = 0,14 Bảng Viêm xoang dịch khe Đặc điểm Biofilm (+) Viêm xoang: Có 82,93% Không 17,07% Khe Dịch 36,59% Dịch mủ 46,34% Không dịch 17,07% Biofilm (-) Phép kiểm 34,62% P(χ²) = 0,00 < 0,05 65,38% 11,54% 23,08% 65,38% P(χ²) = 0,00 < 0,05 Nhận xét: Có khác biệt viêm xoang tính chất dịch khe giữa nhóm có khơng có biofilm Bảng 6: Loại vi trùng Loại vi khuẩn Bảng Đặc điểm triệu chứng lâm sàng Triệu chứng Cấy vi trùng Dương Âm Tổng số Biofilm (+) Biofilm (-) Tổng cộng Staphylococc (19,51%) (3,85%) (13,43%) coagulase (-) Staphylococcaureu (12,2%) 11 42,31% 16 (23,88%) s Loại vi khuẩn Biofilm (+) Biofilm (-) Tổng cộng Streptococc spp 20 15 (19,23%) (36,59%) (29,85%) Streptococc β tiêu (2,44%) (3,85%) huyết (2,99%) Streptococc (4,88%) (3,85%) pyogenes (4,48%) Streptococc 1 (2,44%) viridans (0%) (1,49%) Pseudomonaerugin (2,44%) (3,85%) osa (2,99%) loại vi khuẩn (2,44%) (19,23%) (8,96%) Không mọc (17,07%) (3,85%) (11,94%) Tổng số 41 26 67 Nhận xét: Có khác biệt có ý nghĩa thống kê loại vi khuẩn nhóm có khơng có biofilm với độ tin cậy 95%, p(Fisher) = 0,005 Bảng So sánh trước nạo VA Nhóm Thời gian/đợt Biofilm (+) Biofilm (-) Điểm SNOT-20: Biofilm (+) Biofilm (-) Trước mổ 4,32 ± 2,45 3,73 ± 2,27 32,56 ± 12,28 35,42 ± 18,09 Sau mổ 1,46 ± 0,64 1,08 ± 0,27 9,1 ± 4,78 6,85 ± 4,97 Chuyên Đề Tai Mũi Họng – Mắt Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nhận xét: Giữa trước sau mổ có khác biệt (có ý nghĩa thống kê) thời gian bệnh/đợt điểm triệu chứng nhóm có khơng có biofilm với p = 0,000 < 0,05 độ tin cậy 95% Trước mổ, khơng có khác biệt thời gian bệnh/đợt điểm triệu chứng nhóm có khơng có biofilm p > 0,05 Nhưng sau nạo VA, có khác biệt thời gian bệnh/đợt điểm triệu chứng nhóm có khơng có biofilm với độ tin cậy 95%, p < 0,05, nhóm biofilm (-) cải thiện nhiều nhóm biofilm (+) BÀN LUẬN Bảng 8: Tỷ lệ triệu chứng lâm sàng nghiên cứu Tác giả Nghẹt mũi Chảy mũi Ho kéo dài Ngủ ngáy Thở miệng Nói giọng mũi Osman Bahadir 91,6% 75% Phạm Đ Nguyên 91,8% 68,9% 83% 85% 72,1% 59% 23% Chúng 83,58% 85,07% 46,27% 40,3% 26,87% 5,97% Nhận xét: Qua bảng cho thấy triệu chứng chảy mũi nghẹt mũi chiếm tỷ lệ gần giống tác giả Osman Bahadir(2) Phạm Đình Nguyên(5) Riêng triệu chứng ngủ ngáy thở miệng chúng tơi chiếm tỷ lệ tác giả khác lại cao Có khác biệt mẫu họ tỷ lệ VA lớn chiếm đa số nghiên cứu VA phát độ II độ III chiếm nhiều giống nghiên cứu Saylam G (2010)(6) Nhưng nghiên cứu Saylam G phân độ: riêng độ III VA bít lấp > 75% cửa mũi sau giống cộng chung lại độ III độ IV chúng tơi Còn nghiên cứu Phạm Đình Ngun VA to độ III chiếm tỷ lệ nhiều Bảng 9: Độ phát VA nghiên cứu Tác giả Độ I Độ II Saylam G 5,9% 44,1% Phạm.Đ Nguyên 0% 19,7% Chúng 20,9% 41,79% Độ III Độ IV 50% 60,7% 23,88% 19,7% 13,43% Nhận xét: Chúng kết luận khơng có khác biệt độ q phát VA nhóm có Chuyên Đề Tai Mũi Họng – Mắt Nghiên cứu Y học khơng có biofilm giống nghiên cứu Saylam G cho khơng có ảnh hưởng kích thước VA lên hình thành biofilm kích thước VA khơng liên quan với độ tuổi, giới tính thời gian mắc bệnh Theo Pillsbury cs cho kích thước VA khơng liên quan đến diện nhiễm trùng Bảng 10: Tần suất biofilm viêm VA mạn(1,3,4,8) Tác giả Galli J cs James Coticchia Kania RE cs Năm 2007 2007 2008 Phương pháp Tỷ lệ SEM 65,6% SEM 94,9% CLSMvà16S-DNA PCR 54% Al-Mazrou KA Winther Birgit cs Torretta Sara cs Chúng 2008 SEM 61% 2009 Nhuộm HE, PAS – KHV 89% quang học 2010 Bấm VA – Đo ảnh phổ 69,1% 2012 Nhuộm HE –KHV quang 61,2% học Nhìn chung tỷ lệ phát biofilm thay đổi khác tác giả Tuy nhiên, dù sử dụng phương pháp khác đa phần tác giả nhận thấy diện biofilm bệnh nhân viêm VA mạn cao (> 50%) Điều giải thích tình trạng dai dẳng khơng đáp ứng với kháng sinh bệnh viêm VA mạn tính Bảng 11 Kết cấy vi khuẩn dương tính(1,3,7) Tác giả Winther Birgit cs Galli J cs Swidsinski A Năm 1993 2007 2007 Galli J cs Al-Mazrou KA Winther Birgit cs Torretta Sara cs Chúng 2007 2008 2009 2010 2012 Phương pháp FISH TEM Cấy vi khuẩn Dịch Carnoy – FISH Cấy vi khuẩn Cấy vi khuẩn FISH Cấy vi khuẩn Cấy vi khuẩn Tỷ lệ 100% 81,3% 83% 86,6% 66% 100% 90,47% 88,06% Qua bảng cho thấy tỷ lệ cấy vi khuẩn dương tính chúng tơi gần giống với nghiên cứu Galli J (2007)(3), Swidsinski A (2007)(7) Torretta Sara (2010)(8) Nhưng thấp Winther Birgit phương pháp tác giả FISH có độ nhạy cao 37 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Bàn hiệu nạo VA Về vi trùng học Nghiên cứu Osma Bahadir (2006) (2) cải thiện triệu chứng sau nạo VA tháng bệnh nhân viêm tai mạn tính hay viêm tai tái tái lại có/khơng có kết hợp với phì đại VA Kết hầu hết triệu chứng sau mổ giảm nhiều so với trước mổ (giảm > 70%) riêng có triệu chứng nghe có cải thiện khơng nhiều 43,3% Nghiên cứu Paradise cs hiệu nạo VA trẻ viêm tai Kết trẻ nạo VA lâm sàng cải thiện tốt trẻ không nạo VA Một nghiên cứu khác, có cải thiện 56% tình trạng viêm xoang nhóm trẻ nạo VA trẻ khơng nạo VA cải thiện 24% Tỷ lệ viêm VA mạn có biofilm 61,2% tác nhân vi trùng thường gặp viêm VA mạn có biofilm là: Streptococcus spp 36,59%, Staphylococcus coagulase negative 19,51%, Staphylococcus aureus 12,2% Nghiên cứu Nhan Trừng Sơn năm 2001 cho thấy có cải thiện triệu chứng nghẹt mũi (giảm 86,9%) chảy mũi (giảm 77%) sau nạo VA Tương tự nghiên cứu Phạm Đình Nguyên(5) năm 2008 cho thấy có cải thiện triệu chứng sau nạo VA Nhìn chung đa số tác giả kết luận nạo VA đem đến cải thiện triệu chứng lâm sàng Nghiên cứu cho thấy thời gian bệnh/đợt nhóm biofilm (+) giảm khoảng 66% nhóm biofilm (-) giảm khoảng 71% Điều cho thấy có cải thiện nhiều thời gian bệnh sau nạo VA nhóm khơng có biofilm cải thiện nhiều Tương tự với nghiên cứu Soheila Nikakhlagh (2010) Như nạo VA có hiệu tốt không chứng tỏ nạo VA tiệt trừ hoàn toàn biofilm KẾT LUẬN Về đặc điểm lâm sàng nội soi Khơng có khác biệt triệu chứng lâm sàng hình ảnh nội soi nhóm viêm VA mạn có biofilm khơng có biofilm khơng có liên quan độ lớn VA với diện biofilm VA viêm mạn tính 38 Về hiệu phẫu thuật nạo VA Phẫu thuật nạo VA mang lại cải thiện rõ rệt làm giảm tần suất bệnh viêm mũi họng, giảm mức độ nặng, giảm thời gian bệnh, giảm bệnh kèm Riêng nhóm viêm VA mạn khơng có Biofilm cho kết cải thiện nhiều KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu Biofilm viêm VA mạn với cỡ mẫu lớn hơn, thời gian theo dõi dài phối hợp kỹ thuật đại khác để xác định loại vi khuẩn đặc hiệu tạo biofilm, sử dụng loại kính hiển vi điện tử để xác định xác biofilm Đây tiền đề cho hàng loạt nghiên cứu sau liên quan đến biofilm viêm VA mạn tính TÀI LIỆU THAM KHẢO Al-Mazrou KA, Al-Khattaf AS (2008), "Adherent biofilms in adenotonsillar diseases in children" Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 134(1), 20-23 Bahadir O, Caylan R, Bektas D, Bahadir A (2006), "Effects of adenoidectomy in children with symptoms of adenoidal hypertrophy" Eur Arch Otorhinolaryngol, 263(2), 156-159 Galli J, Calo L, Ardito F, et al (2007), "Biofilm formation by Haemophilus influenzae isolated from adeno-tonsil tissue samples, and its role in recurrent adenotonsillitis" Acta Otorhinolaryngol Ital, 27(3), 134-138 Kania RE, Lamers GE, Vonk MJ, Dorpmans E, Struik J, et al (2008), "Characterization of mucosal biofilms on human adenoid tissues" Laryngoscope, 118(1), 128-134 Phạm Đình Nguyên (2008), "Khảo sát số trường hợp nạo VA trẻ em Coblation" Luận văn thạc sỹ y học.42-59 Saylam G, Tatar EC, Tatar I, et al (2010), "Association of adenoid surface biofilm formation and chronic otitis media with effusion" Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 136(6), 550-555 Swidsinski A, Goktas O, Bessler C, et al (2007), "Spatial organisation of microbiota in quiescent adenoiditis and tonsillitis" J Clin Pathol, 60(3), 253-260 Torretta S, Drago L, Marchisio P, et al (2010), "Diagnostic accuracy of nasopharyngeal swabs in detecting biofilmproducing bacteria in chronic adenoiditis: a preliminary study" Otolaryngol Head Neck Surg, 144(5), 784-788 Chuyên Đề Tai Mũi Họng – Mắt ... nội soi nhóm viêm VA mạn có biofilm khơng có biofilm khơng có liên quan độ lớn VA với diện biofilm VA viêm mạn tính 38 Về hiệu phẫu thuật nạo VA Phẫu thuật nạo VA mang lại cải thiện rõ rệt làm... tính Tuy nhiên, chưa có đề tài nước nghiên cứu diện biofilm viêm VA mạn tính Mục tiêu Mục tiêu tổng quát Khảo sát diện biofilm vi khuẩn mơ viêm VA mạn tính Nghiên cứu Y học Tất bệnh nhân điều trị... Bằng cách tạo biofilm, vi khuẩn tồn bề mặt mô trở thành nguồn gốc nhiều bệnh nhiễm trùng mạn tính có viêm VA mạn tính Tại số nước giới có nhiều nghiên cứu biofilm mơ VA viêm mạn tính Tuy nhiên,