Khảo sát sự hiện diện của vi khuẩn escheria coli beta lactammase phổ rộng trên gà xuất thịt ở nông hộ tại một số huyện tỉnh trà vinh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y  CHAU SI THA KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI SINH BETA-LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ BỆNH TẠI HUYỆN CẦU KÈ TỈNH TRÀ VINH LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y  Luận Văn Tốt Nghiệp Ngành Thú Y Tên đề tài: KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI SINH BETA-LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ BỆNH TẠI HUYỆN CẦU KÈ TỈNH TRÀ VINH Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS TS LƯU HỮU MÃNH CHAU SI THA MSSV: 3092231 Lớp: CN0967A1 Cần Thơ, 05/2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Khảo sát diện vi khuẩn Escherichia coli sinh beta-lactamase phổ rộng gà bệnh huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh” sinh viên Chau Si Tha thực Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ, từ tháng 01 đến tháng 05 năm 2015 Cần Thơ, ngày……tháng……năm 2015 Cần Thơ, ngày……tháng……năm 2015 Duyệt Bộ Môn Giáo Viên Hướng Dẫn PGs Ts Lưu Hữu Mãnh Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2015 Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD i LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin thành kính gửi tới cha mẹ, người nuôi dưỡng dạy dỗ nên người, cho có ngày hôm Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban Giám Hiệu trường Đại học Cần Thơ, Ban chủ nhiệm Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng toàn thể quý Thầy Cô Bộ môn Thú Y, Bộ môn Chăn nuôi tận tình giảng dạy, truyền đạt cho kiến thức văn hóa đạo đức, lối sống suốt trình học tập trường Đó hành trang quý giá giúp vào đời tảng cho công việc sống để tự tin vững bước đường chọn Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn PGs Ts Lưu Hữu Mãnh, Th.s Bùi Thị Lê Minh, người hết lòng bảo, động viên suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến anh chị Cao học Thú y K20, tất bạn bè giúp đỡ thời gian học tập thực đề tài Chân thành cảm ơn ! Cần thơ, ngày 20 tháng 05 năm 2015 Chau Si Tha ii TÓM TẮT Đề tài: “Khảo sát diện vi khuẩn Escherichia coli sinh beta - lactamase phổ rộng gà bệnh huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh” thực từ tháng đến tháng năm 2015 Bộ môn Thú y khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dụng trường Đại học Cần Thơ Bằng phương pháp đĩa kết hợp phân lập 11/20 gà bệnh nhiễm E coli ESBL với tỉ lệ nhiễm 55% Trong gà thịt bệnh nhiễm E coli ESBL 100% (10/10 con) gà đẻ bệnh 10% (1/10 con) khác biệt có ý nghĩa thống kê Kết khảo sát mẫu phân, thịt, gan, phổi gà thịt bệnh khác biệt có ý nghĩa thống kê gà đẻ bệnh khác biệt ý nghĩa thống kê Kiểm tra tính nhạy cảm chủng E coli ESBL phân lập số loại kháng sinh phương pháp kháng sinh đồ dựa theo nguyên lý Kirby – Bauer thu kết sau: tỉ lệ kháng cefaclor, cefuroxime, ampicillin 100%, trimethoprime + sulfamethoxazol 83,33%, nhiên E coli ESBL nhạy cảm số kháng sinh fosfomycin amikacin (100%), doxycyline (79,17%), kanamycin (70,83 %) Các chủng E coli ESBL kháng từ đến loại kháng sinh với 12 kiểu đa kháng xác định iii MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn .ii Tóm tắt iii Mục lục Danh sách bảng vi Danh sách hình vii Danh sách chữ viết tắt viii CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Khái quát Escherichia coli .2 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Đặc tính nuôi cấy 2.1.3 Đặc tính sinh hoá 2.1.4 Cấu trúc kháng nguyên 2.1.5 Độc tố vi khuẩn 2.1.6 Yếu tố kháng khuẩn E coli 2.1.7 Sức đề kháng E.coli 2.1.8 Tính gây bệnh 2.1.9 Một số bệnh E coli gây gia cầm 2.2 Khái niệm đề kháng kháng sinh 2.3 Kháng sinh nhóm beta-lactam 2.3.1 Kháng sinh nhóm beta-lactam 2.3.2 Cơ chế tác dụng nhóm kháng sinh nhóm beta-lactam .10 2.3.3 Cơ chế đề kháng kháng sinh vi khuẩn E coli sinh ESBL 10 2.4 Khái quát men beta-lactamase phổ rộng .11 2.4.1 Sơ lược beta-lactamase phổ rộng .11 2.4.2 Các loại beta-lactamase phổ rộng 11 2.4.3 Tình hình nghiên cứu E.coli sinh ESBL người động vật .14 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 iv 3.1 Phương tiện nghiên cứu 15 3.1.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu .15 3.1.2 Dụng cụ, hóa chất môi trường nuôi cấy .15 3.2 Phương pháp nghiên cứu 15 3.2.1 Phương pháp thu thập bảo quản mẫu 15 3.2.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn E coli sinh ESBL 16 3.2.3 Phương pháp xác định độ nhạy cảm .18 3.2.4 Phương pháp xử lý thống kê 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN .21 4.1 Kết tỷ lệ nhiễm E coli ESBL gà bệnh 21 4.2 Kết tỷ lệ nhiễm E coli ESBL số quan 22 4.3 Kết kiểm tra độ nhạy cảm E coli ESBL với kháng sinh .23 4.4 Kết kiểm tra tính đa kháng 25 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 26 5.1 Kết luận 26 5.2 Đề nghị .26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 PHỤ LỤC 30 v DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Loại gà số lượng khảo sát 15 Bảng 3.2 Tiêu chuẩn đường kính vòng vô khuẩn số loại kháng sinh (CLSI , 2014) 18 Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm E coli ESBL gà bệnh Cầu Kè, Trà Vinh 21 Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm E coli ESBL mẫu gà bệnh Cầu Kè, Trà Vinh 22 Bảng 4.3 Độ nhạy cảm E.coli ESBL với kháng sinh gà thịt bệnh 23 Bảng 4.4 Kiểu đa kháng E coli ESBL với kháng sinh gà thịt bệnh 25 vi DANH SÁCH HÌNH Sơ đồ Tên sơ đồ Trang Hình 2.1 Sơ đồ mối quan hệ kháng sinh, vi khuẩn thể Hình 2.2 Cơ chế đề kháng kháng sinh vi khuẩn 10 Hình 3.1 Phương pháp đĩa kết hợp xác định E coli ESBL 16 Hình 3.2 Quy trình phân lập E coli sinh beta - lactamase phổ rộng 17 Hình 3.3 Sơ đồ xác định mức độ kháng kháng sinh 19 Hình 3.4 Cách đo đường kính vòng vô khuẩn 21 Hình 4.1 Biểu đồ độ nhạy cảm E coli ESBL 24 vii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT E coli Escherichia coli ESBL Extended Spectrum Beta Lactamase S Smooth R Rough M Moucoid MC MacConkey Agar NA Nutrient Agar MHA Muller Hinton Agar IMViC Indole-Methyl Red-Voges Proskauer-Citrate MR Methyl Red VP Voges- Proskauer CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute SHV Sulphydryl variable CTX Cefotaxime TEM Temoneira (một loại enzym beta-lactamase đặt theo tên bệnh nhân mang vi khuẩn tiết enzym này) CTX-M Loại ESBL có hoạt tính mạnh cefotaxime, phân lập Munich OXA Oxacllinase S Susceptible I Intermediate R Resistant Am Ampicillin Cu Cefuroxime Cr Cefaclor Ge Gentamicin viii Vòng vô khuẩn Hình 3.4 Cách đo đường kính vòng vô khuẩn Nếu xung quanh đĩa kháng sinh có vòng suốt, vòng vô khuẩn, nơi mà tác động kháng sinh vi khuẩn không mọc Trong trường hợp ta tiến hành đo đường kính vòng vô khuẩn thước palme So sánh đường kính vòng vô khuẩn với đường kính vòng vô khuẩn chuẩn, lúc ta kết luận vi khuẩn nhạy cảm, đối kháng hay nghi ngờ (trung gian) tác dụng kháng sinh 3.3.4 Phương pháp xử lý thống kê So sánh tỉ lệ nhiễm mẫu phân tích phương pháp Fixer exactly test dùng phần mềm Minitab 16.0 Phân tích kết kháng sinh đồ tỉ lệ nhạy E coli ESBL với kháng sinh phần mềm Microsoft Exel 2003 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết tỷ lệ nhiễm E coli ESBL gà bệnh Cầu Kè, Trà Vinh Qua khảo sát 20 gà bệnh gồm 10 gà đẻ bệnh 10 gà thịt bệnh với triệu chứng bệnh điển tiêu chảy phân xanh cây, hôi thối, chảy nước mũi, khò khè, thể trạng gà ốm, lông xù, mặt tái Kết tỉ lệ nhiễm E coli sinh ESBL gà bệnh trình bày bảng 4.1 Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm E coli ESBL gà bệnh Cầu Kè, Trà Vinh: (n=20) Đối tượng Số mẫu khảo sát (con) Số mẫu nhiễm (con) Tỉ lệ nhiễm (%) Gà thịt bệnh 10 10 100a Gà đẻ bệnh 10 10b Tổng 20 11 55 Ghi chú: giá trị mang chữ a, b khác cột, khác có ý nghĩa thống kê (p[...]... vi khuẩn E coli sinh beta - lactamase phổ rộng trên gà bệnh tại huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh được thực hiện Mục tiêu của đề tài: - Xác định tỉ lệ nhiễm của vi khuẩn E coli sinh ESBL trên gà bệnh tại một số hộ chăn nuôi - Xác định tỉ lệ nhạy cảm của vi khuẩn E coli sinh ESBL đối với một số loại kháng sinh 1 CHƯƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Khái quát về Escherichia coli E coli thường xuất hiện sớm ở người và... các hộ chăn nuôi tại huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh Tại mỗi hộ chọn gà ngẫu nhiên theo số mẫu cần khảo sát và đánh số thứ tự từng con Đối với mẫu phân gà thì thu ngay tại nông hộ, dùng tampon vô trùng đưa vào hậu môn và phết, ghi kí hiệu và trữ trong thùng đựng mẫu Tổng số gà 20 con gồm 10 gà đẻ bệnh và 10 gà thịt bệnh, mỗi con lấy 4 loại mẫu Bảng 3.1 Loại gà và số lượng khảo sát Loại mẫu Phân Thịt Gan Phổi... kháng kháng sinh của vi khuẩn đường ruột nói chung và vi khuẩn E coli nói riêng đang ngày một tăng, làm cho hiệu quả điều trị giảm, thậm chí nhiều loại kháng sinh còn bị vô hiệu hóa hoàn toàn 21 4.2 Kết quả tỷ lệ nhiễm E coli ESBL trên mẫu thịt, gan, phổi và phân của gà bệnh ở Cầu Kè, Trà Vinh Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm E coli ESBL trên các mẫu của gà bệnh ở Cầu Kè, Trà Vinh Gà thịt bệnh (n=10) Gà đẻ bệnh (n=10)... lệ nhiễm E coli ESBL trên gà bệnh ở Cầu Kè, Trà Vinh Qua khảo sát 20 con gà bệnh gồm 10 gà đẻ bệnh và 10 gà thịt bệnh với các triệu chứng bệnh điển hình như tiêu chảy phân xanh lá cây, hôi thối, chảy nước mũi, khò khè, thể trạng gà ốm, lông xù, mặt tái Kết quả tỉ lệ nhiễm E coli sinh ESBL trên gà bệnh được trình bày ở bảng 4.1 Bảng 4.1 Tỷ lệ nhiễm E coli ESBL trên gà bệnh ở Cầu Kè, Trà Vinh: (n=20)... mẫu gà thịt và 150 mẫu swab phân, phát hiện được 7/304 mẫu có E coli sinh ESBL chiếm tỷ lệ 2,3% Theo Overdevest et al., (2011), nghiên cứu tại Hà Lan trên thịt của 160 con gà phát hiện 158 con nhiễm E coli sinh ESBL chiếm tỉ lệ 98,75% Tuy nhiên, cho đến nay vi c nghiên cứu các chủng E coli sinh ESBL trên gia cầm tại Vi t Nam còn ít Xuất phát từ lý do này, đề tài: “ Khảo sát sự hiện diện của vi khuẩn. .. Vinh: (n=20) Đối tượng Số mẫu khảo sát (con) Số mẫu nhiễm (con) Tỉ lệ nhiễm (%) Gà thịt bệnh 10 10 100a Gà đẻ bệnh 10 1 10b Tổng 20 11 55 Ghi chú: các giá trị mang chữ a, b khác nhau trong cùng một cột, thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (p ... KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y  Luận Văn Tốt Nghiệp Ngành Thú Y Tên đề tài: KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI SINH BETA- LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ BỆNH TẠI... BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: Khảo sát diện vi khuẩn Escherichia coli sinh beta- lactamase phổ rộng gà bệnh huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh sinh vi n Chau Si Tha thực Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học... sinh beta - lactamase phổ rộng gà bệnh huyện Cầu Kè tỉnh Trà Vinh thực Mục tiêu đề tài: - Xác định tỉ lệ nhiễm vi khuẩn E coli sinh ESBL gà bệnh số hộ chăn nuôi - Xác định tỉ lệ nhạy cảm vi khuẩn