Bài viết nghiên cứu tiến hành trên 30 thỏ, mỗi thỏ được gây hai vết bỏng độ sâu trên lưng bằng nhiệt ướt. Một nhóm được che phủ bằng tấm vật liệu tương đương trung bì chế tạo từ tế bào (TB) gốc (TBG) trung mô màng dây rốn người (vùng A), một nhóm đối chứng (vùng B). Bắt đầu che phủ vết thương (VT) bỏng sau bằng tấm vật liệu tương đương trung bì từ ngày thứ 5 sau cắt lọc hoại tử.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ CỦA TẤM VẬT LIỆU TƢƠNG ĐƢƠNG TRUNG BÌ TRÊN VẾT BỎNG NHIỆT THỰC NGHIỆM Đinh Văn Hân*; Phan Minh Hồng** TĨM TẮT Nghiên cứu tiến hành 30 thỏ, thỏ đƣợc gây hai vết bỏng độ sâu lƣng nhiệt ƣớt Một nhóm đƣợc che phủ vật liệu tƣơng đƣơng trung bì chế tạo từ tế bào (TB) gốc (TBG) trung mơ màng dây rốn ngƣời (vùng A), nhóm đối chứng (vùng B) Bắt đầu che phủ vết thƣơng (VT) bỏng sau vật liệu tƣơng đƣơng trung bì từ ngày thứ sau cắt lọc hoại tử Kết quả: tốc độ biểu mơ hóa vùng A vùng B thời điểm ngày thứ 10 sau ghép TBG khác biệt có ý nghĩa thống kê Tỷ lệ VT bỏng vùng A khỏi hoàn toàn (46,67%) cao so với vùng B (40%) thời điểm 16 - 20 ngày sau gây bỏng Tỷ lệ nhiễm khuẩn không khác vùng Ngày thứ 10 sau ghép TBG trung mơ, vùng A có số lƣợng TB viêm nhiều so với vùng B, p < 0,05 Tấm vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có biểu làm tăng q trình liền VT so với nhóm chứng, đó, vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có tác dụng hạn chế nhiễm khuẩn vết bỏng chƣa thể rõ ràng * Từ khóa: Vết bỏng nhiệt thực nghiệm; Tấm vật liệu tƣơng đƣơng trung bì; Tác dụng Assessing effects of transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cells on experimentally induced thermal burns SUMMARY 30 healthy rabbits were given full-thickness thermal burns, each rabbit had two burn wounds areas on back One area was covered by umbilical cord mesenchymal stem cells after necrosis tissue early-excision on 5th day of burn (A area); the rest was used as controls (B area) Results: the epithelization rate of A and B areas at 10-day period after the transplantation had a statistical difference The complete healing rate of burn wounds in A area was higher than that in B area (73.3 vs 60%), at period of 16 - 20 days after inducing burn injuries The infection rate between the two areas was not different At the 10 day-period after the transplantation, the number of infection cells in A area was statistically significant lower than in A area (p < 0.05) Human umbilical cord mesenchymal stem cells enhanced burn wound healing faster than the controls, while their effectiveness on inhibiting infection at the burn wounds were not clearly * Key words: Experimental induced thermal burn; Human umbilical cord mesenchymal stem cells; Effect ĐẶT VẤN ĐỀ Vật liệu tƣơng đƣơng da đƣợc nghiên cứu phát triển chế tạo thực nghiệm từ vài thập kỷ trƣớc [1, 2] Tuy nhiên, vật liệu có hạn chế sử dụng nhƣ hiệu thành công điều trị, thiếu thành phần trung bì * Viện Bỏng Lê Hữu Trác ** Bệnh viện Chợ Rẫy Người phản hồi (Corresponding): Phan Minh Hoàng (dminhhoang2010@gmail.com) Ngày nhận bài: 3/6/2013; Ngày phản biện đánh giá báo: 30//2013 Ngày báo đăng: 1/10/2013 28 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 Do đó, số vật liệu khác đƣợc chế tạo dựa công nghệ mô tạo vật liệu bao gồm thành phần tƣơng tƣơng biểu bì thành phần tƣơng đƣơng trung bì cách kết hợp yếu tố trung bì biểu bì, yếu tố đƣợc phát triển dựa nguyên lý ni cấy ngun bào sợi TB biểu bì giá đỡ chiều nhƣ collagen Một số vật liệu tƣơng đƣơng trung bì đƣợc sử dụng để phát triển nghiên cứu chế tạo vật liệu thay da Tuy nhiên, vật liệu phải dùng thành phần đồng loại hay dị loại nhƣ collagen bò [5, 6] trung bì khơng TB sống lấy từ tử thi [7] giá đỡ tổng hợp polymer [8]…, thành phần đắt tiểm ẩn nguy lây bệnh truyền nhiễm… Trong da, nguyên bào sợi TB chủ yếu đƣợc bao quanh đệm gian bào Đặc biệt, liền VT da, vai trò nguyên bào sợi tạo ECM đáng nhiều so với da bình thƣờng Nguyên bào sợi da nuôi cấy đƣợc ghi nhận tăng sinh tổng hợp đệm gian bào có mặt số hormon hay yếu tố tăng trƣởng [10] Gần đây, nguyên bào sợi đƣợc biệt hóa từ TBG trung mô màng dây rốn Các TB có khả nhân lên mạnh nhiều nguyên bào sợi da Hơn nữa, dây rốn rác thải y học, nhƣng lại nguồn mô cung cấp TB lý tƣởng dây rốn có diện tích 3.000 - 4.000 cm2, cần mẫu dây rốn cung cấp số lƣợng lớn TB trung mô để chế tạo tế bào hay vật liệu tƣơng đƣơng trung bì dùng nghiên cứu in vitro điều trị bệnh Trong điều kiện nay, chúng tơi phát triển loại vật liệu tƣơng đƣơng trung bì cách nuôi cấy TBG trung mô môi trƣờng đặc biệt có chứa số yếu tố để tạo TB, sau thay mơi trƣờng chun biệt cho nguyên bào sợi kích thích chúng tiết ra, thành phần đệm gian bào để tạo vật liệu tƣơng đƣơng trung bì mà khơng cần giá đỡ hay thành phần dị loại hay đồng loại khác Chúng đánh giá loại vật liệu nghiên cứu hình thái cấu trúc mơ, siêu cấu trúc mơ TB vật liệu Đồng thời, đánh giá khả ứng dụng in vivo vật liệu cách ghép chúng lên động vật với mơ hình điều trị VT vết bỏng nghiệm thỏ ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu - 30 thỏ khỏe mạnh Thỏ thí nghiệm trƣởng thành (từ 10 - 12 tháng tuổi), trƣớc thí nghiệm đƣợc theo dõi từ - ngày - Tiêu chuẩn lựa chọn: thỏ khỏe mạnh, nhanh nhẹn, mắt sáng, lơng mƣợt, khơng có bệnh ngồi da, đƣờng ruột, cân nặng từ - kg, thỏ đƣợc nuôi đảm bảo theo tiêu chuẩn thực nghiệm - Trong thời gian thực nghiệm, thỏ đƣợc nhốt riêng chuồng, có đánh số để tiện việc theo dõi Chất liệu nghiên cứu Tấm vật liệu tƣơng đƣơng trung bì Labo Nghiên cứu ứng dụng điều trị bỏng, Viện Bỏng Lê Hữu Trác chế tạo Phƣơng pháp nghiên cứu * Gây bỏng thực nghiệm: Mỗi thỏ đƣợc gây vết bỏng lƣng với độ sâu tƣơng đƣơng Vết bên phải (gọi tắt vùng A) đƣợc che phủ vật liệu tƣơng đƣơng trung bì vào ngày thứ sau gây bỏng Vết bên trái (gọi tắt vùng B) đƣợc ghép màng tegaderm đơn khơng có tế bào Gây bỏng theo phƣơng 30 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 pháp Halovec Pociado 1961 (có cải tiến) Cố định thỏ vào bàn thí nghiệm chuyên dụng Cạo lông vùng lƣng thành mảng đối xứng, vùng cạo lơng hình tròn có đƣờng kính cm Diện tích gây bỏng là: S = Πr² = 3,14 x 2,5² = 19,6 cm² Gây mê tĩnh mạch thỏ ketamin mg/kg cân nặng Dụng cụ gây bỏng bình kim loại hình trụ, đáy tròn có đƣờng kính cm, cao 25 cm (có cán cầm tay) Đổ nƣớc sơi (t = 1000C) vào bình đến độ cao 10 cm Đặt đáy bình vào vùng da chuẩn bị, lúc đặt túi cát nặng kg lên miệng bình Giữ túi cát vào cán bình cho thăng bằng, không xê dịch để tạo vết bỏng đồng Thời gian áp đáy bình vào da thỏ 30 giây để tạo vết bỏng sâu độ IV Sau gây bỏng, vùng tổn thƣơng có màu trắng đục, da xung quanh vết bỏng xung huyết màu hồng nhạt Thỏ tỉnh sau vài phút ăn uống sau vài * Phương pháp tạo vật liệu tương đương trung bì: Ni cấy TB trung mơ với số lƣợng tƣơng đƣơng 5.000 TB/cm2 đĩa nuôi cấy, d = 100 mm Sau đạt 100% độ che phủ (confluent), tiếp tục đƣợc nuôi cấy thêm vài tuần Trong thời gian nuôi cấy, thay mơi trƣờng biệt hóa ngun bào sợi để kích thích tiết đệm gian bào Khi TB mọc chồng lấn nhiều lớp lên có đệm gian bào, vật liệu quan sát rõ mắt thƣờng dƣới kính hiển vi Dấu hiệu thấy rõ vật liệu bắt đầu co tách khỏi bề mặt nuôi cấy mép đĩa Dùng dụng cụ cell lifter gạt nhẹ để tách hoàn toàn vật liệu khỏi bề mặt đĩa Tấm vật liệu sau đƣợc sử dụng cho nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc ghép điều trị VT bỏng thực nghiệm Tiến hành 10 thí nghiệm, sử dụng dòng TB P3 P4 thu đƣợc từ mô dây rốn * Ghép vật liệu tương đương trung bì lên vết bỏng: Chuẩn bị sẵn TB đặt lên vết bỏng vùng A vào ngày thứ sau gây bỏng Sau đặt, dùng lớp gạc vaseline để áp cố định TB lên VT bỏng Đối với vết bỏng vùng B, phủ màng tegaderm khơng có TBG, sau đắp gạc có tẩm vaselin * Xét nghiệm vi khuẩn bỏng: Tiến hành xét nghiệm vi khuẩn vùng VT nghiên cứu đối chứng thời điểm khác nhau: trƣớc ghép TB (ngày thứ sau gây bỏng), ngày thứ sau ghép TB (ngày thứ 10 sau gây bỏng), ngày thứ 10 sau ghép TB (ngày thứ 15 sau gây bỏng) Xác định loài số lƣợng vi khuẩn/cm² bề mặt vết bỏng * Xét nghiệm mô học: - Sinh thiết mô vết bỏng dụng cụ sinh thiết (Biopsy punch) vào thời điểm: trƣớc ghép TB (D1), ngày thứ sau ghép (D5) tức ngày thứ 10 sau gây bỏng, ngày thứ 10 sau ghép TB (D10) tức ngày 15 sau gây bỏng - Nhuộm hematoxylin-eosin (HE) - Quan sát tiêu dƣới kinh hiển vi quang học có độ phóng đại 40 - 400 lần, nhận xét biến đổi TB cấu trúc mô Đếm số lƣợng TB cấu trúc mô Đếm số lƣợng TB viêm (bạch cầu trung tính, đại thực bào, TB lympho), nguyên bào sợi, TB sợi, mạch máu tân tạo đơn vị diện tích (ĐVDT) dƣới kính hiển vi quang học có gắn vi mét thị kính (1 ĐVDT = 122.400 µm²) Mỗi tiêu đếm ĐVDT, lấy giá trị trung bình cho tiêu Xác định số phân bào (Mitose Index-MI) cách đếm số lƣợng TB phân chia 200 TB sừng lớp mầm 31 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Diễn biến lâm sàng thỏ nghiên cứu * Thay đổi trọng lượng thỏ trình gây bỏng thực nghiệm: 2.4 2.32 2.3 1.96 2.2 kg 2.13 2.06 2.1 1.9 1.8 1.7 Lần Lần Lần Lần Biểu đồ 1: Thay đổi trọng lƣợng thỏ nghiên cứu (Lần 1: trước gây bỏng thực nghiệm; lần 2: ngày thứ sau bỏng [(ngày bắt đầu ghép TB)]; lần 3: ngày thứ 10 sau bỏng (ngày thứ sau ghép TB); lần 4: ngày thứ 15 sau bỏng (ngày thứ 10 sau ghép TB) Trọng lƣợng thỏ giảm ngày đầu sau gây bỏng thực nghiệm Trọng lƣợng giảm tính chất chấn thƣơng cấp tính, đau đớn, VT bỏng rộng sâu, khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Ở thời điểm 10 ngày sau gây bỏng (5 ngày sau ghép TB), trọng lƣợng thỏ bắt đầu hồi phục, đến thời điểm 15 ngày sau gây bỏng (10 ngày sau ghép TB), trọng lƣợng thỏ trở gần với giá trị ban đầu trƣớc gây bỏng * Diễn biến chỗ vùng tổn thương: Bảng 1: Diễn biến hình ảnh lâm sàng chỗ VT bỏng thực nghiệm có ghép TBG (vùng A) vùng không ghép TBG (vùng B) THỜI ĐIỂM VÙNG A VÙNG B ngày đầu sau - VT viêm nề, sung huyết đỏ Nền VT hoại - VT viêm nề, sung huyết đỏ Nền VT gây bỏng tử trắng rải rác đỏ, đôi chỗ hoại tử trắng - Bờ mép VT không viêm nề Trƣớc ghép - Bờ mép VT không viêm nề - Nền VT ẩm, giả mạc bám dễ bóc, viêm - Nền VT ẩm, giả mạc màu vàng nhạt nề giảm, hoại tử trắng bám VT, tiết dịch vừa, đôi chỗ hoại tử trắng - Bờ mép VT không viêm nề - Bờ mép VT không viêm nề Ngày thứ sau - VT khô, không tiết dịch Vảy tiết ghép (ngày thứ khô màu vàng sậm, cạo lớp vẩy tiết 10 sau bỏng) bên dƣới rƣớm máu Nền VT màu hồng nhạt - Bờ mép VT không viêm nề - VT sạch, tiết dịch Vảy tiết dễ bóc, màu vàng nhạt, cạo lớp vẩy tiết bên dƣới rƣớm máu Nền VT màu hồng - Bờ mép VT không viêm nề 32 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 (1) (2) (3) Ngày thứ 10 sau - Diện tích VT thu nhỏ, VT sạch, màu - Diện tích VT co nhỏ lại nhƣng lớn ghép hồng, mơ hạt đỏ, biểu mơ hóa từ bờ mép so với vùng A Nền VT ẩm, sạch, màu hồng nhạt, dịch tiết vừa Mô hạt đỏ, (ngày thứ 15 sau VT, mạch máu tăng sinh mạnh biểu mô hóa từ bờ mép VT chậm bỏng) - Bờ mép VT không viêm nề - Bờ mép VT không viêm nề Ngày thứ 15 sau - Nền VT phẳng, nông, không co dúm - Nền VT phẳng, rƣớm máu, sẹo co ghép (ngày thứ Biểu mơ hóa từ bờ mép VT tốt dúm Diện tích VT < cm , VT màu 20 sau bỏng) hồng nhạt - VT khỏi Bảng 2: Diện tích sẹo bỏng sau liền (cm2) THỜI ĐIỂM DIỆN TÍCH SẸO BỎNG SAU KHI LIỀN p Vùng A (n = 30) Vùng B ( n = 30) D5 4,68 ± 1,64 4,5 ± 1,48 0,488 D10 14,18 ± 3,33 12,52 ± 2,83 < 0,05 D15 16,95 ± 2,31 15,74 ± 1,93 < 0,05 Diện tích sẹo bỏng liền vùng A cao vùng B có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) vào ngày thứ 10 sau ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì Bảng 3: Tỷ lệ % liền VT theo thời gian THỜI ĐIỂM TỶ LỆ PHẦN TRĂM DIỆN TÍCH VẾT THƢƠNG ĐÃ LIỀN p Vùng A (n = 30) Vùng B (n = 30) D5 26,53 ± 12,04 25,84 ± 11,4 0,601 D10 77,44 ± 12,24 68,76 ± 11,14 < 0,05 D15 93,23 ± 3,74 87,36 ± 4,78 < 0,05 Tốc độ biểu mô hóa vùng A nhanh vùng B Tuy nhiên, thay đổi tốc độ biểu mơ hóa vùng A vùng B ngày đầu sau ghép khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,601) Nếu so sánh thay đổi tốc độ biểu mơ hóa vùng A vùng B khoảng thời gian ngày thứ 10 sau ghép TBG, khác biệt có ý nghĩa thống kê diện tích (p < 0,05), chứng tỏ sau, tốc độ biểu mơ hóa vùng A nhanh vùng B Bảng 4: So sánh tỷ lệ VT khỏi hoàn toàn vùng A vùng B giai đoạn VÙNG A THỜI GIAN VÙNG B p Số thỏ % Số thỏ % < 15 ngày sau gây bỏng 0 0 > 0,05 16 - 20 ngày sau gây bỏng 14 46,67 12 40 > 0,05 > 20 ngày sau gây bỏng 16 53,33 18 60 > 0,05 Tổng 30 100 30 100 Trong giai đoạn 16 - 20 ngày, tỷ lệ VT bỏng vùng A khỏi hoàn toàn (46,67%) cao so với vùng B (40%), nhiên chƣa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 33 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 Xét nghiệm vi khuẩn VT vùng nghiên cứu vùng đối chứng Bảng 5: Tần suất xuất vi khuẩn qua thời điểm nghiên cứu VÙNG A (n = 30) THỜI GIAN VÙNG B (n = 30) Số mẫu (+) % Số mẫu (+) % Lần 1 3,33 10 Lần 16,67 23,33 Lần 13,33 10 Tổng 10 33,33 13 43,33 (Lần 1: ngày thứ sau ghép TB; lần 2: ngày thứ sau ghép TB; lần 3: ngày thứ 10 sau ghép TB) Số vết bỏng vùng A bị nhiễm khuẩn 10 mẫu, số vết bỏng vùng B bị nhiễm khuẩn 13 mẫu Nhƣ vậy, số vết bỏng bị nhiễm khuẩn vùng A vùng B tƣơng đƣơng Khi xét chủng vi khuẩn gây nhiễm khuẩn vết bỏng, thấy chủ yếu vết bỏng bị nhiễm E.coli E.cloacae (14/23 vết bỏng) Bảng 5: Số vết bỏng hai vùng bị nhiễm với chủng vi khuẩn CHỦNG VI KHUẨN VÙNG A VÙNG B E coli E cloaceae S aureus 1 P mirabilis K pneumoniae 1 Aci baumannii Shi boydi Kết nghiên cứu mô học tiêu sinh thiết Bảng 6: Hình thái mơ vùng A vùng B trƣớc sau ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì THỜI ĐIỂM VÙNG A Ngay trƣớc Bề mặt tổn thƣơng khơng có hoại tử, đƣợc ghép TB phủ lớp tơ huyết mỏng Mơ phía dƣới có dịch phù, xen kẽ TB viêm chủ yếu bạch cầu đa nhân trung tính, rải rác đại thực bào, nguyên bào sợi VÙNG B Bề mặt tổn thƣơng khơng có hoại tử, đƣợc phủ lớp tơ huyết mỏng Mơ phía dƣới có dịch phù, xen kẽ TB viêm, chủ yếu bạch cầu đa nhân trung tính, rải rác đại thực bào nguyên bào sợi Ngày thứ sau Mơ liên kết mỏng có TB viêm, nhiều nguyên Mô liên kết dày, nhiều TB viêm, nguyên ghép TB bào sợi tân mạch, khơng có dịch phù viêm bào sợi tân mạch, phù viêm nhẹ Ngày thứ 10 sau ghép TB Mô liên kết TB viêm, nguyên bào sợi, TB sợi, tân mạch 20/30 VT đƣợc che phủ lớp biểu bì mỏng nhƣng chƣa đủ lớp Lớp TB biểu bì liên kết chặt chẽ với chân bì, lớp TB mầm tăng phân chia Mơ liên kết có nhiều TB viêm nhƣng trƣớc, khơng có phù viêm nhiều ngun bào sợi, nhiều tân mạch 16/30 VT có biểu bì che phủ, có phân chia TB mầm 34 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 Bảng 7: Thay đổi số lƣợng TB viêm vết bỏng THỜI ĐIỂM SỐ TB VIÊM/ĐVDT Vùng A (n=30) Vùng B (n=30) p D1 30,16 ± 7,41 31,46 ± 5,98 0,375 D5 18,86 ± 4,46 18,1 ± 5,08 0,475 D10 8,96 ± 1,8 12,5 ± 3,01 < 0,05 Số lƣợng TB viêm hai vùng nghiên cứu tƣơng đƣơng - Ngày thứ sau ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì, số lƣợng TB viêm vùng tăng nhẹ so với trƣớc lúc ghép TBG Vùng B tăng so với vùng A, nhƣng ý nghĩa thống kê Bảng 9: Thay đổi số lƣợng tân mạch THỜI ĐIỂM SỐ LƢỢNG TÂN MẠCH/ĐVDT p Vùng A Vùng B (n = 30) (n = 30) D1 2,10 ± 1,39 1,83 ± 0,91 0,318 D5 3,50 ± 1,04 3,67 ± 1,02 0,484 D10 7,23 ± 1,13 4,90 ± 0,95 < 0,05 Tại thời điểm ngày nghiên cứu thứ 10, số lƣợng tân mạch tăng lên nhiều so với ngày nghiên cứu thứ vùng A vùng B Số lƣợng tân mạch vùng A cao so với vùng B có ý nghĩa thống kê Bảng 10: Thay đổi số phân bào lớp mầm mô vết thƣơng THỜI ĐIỂM - Ngày thứ 10 sau ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì, số lƣợng TB viêm CHỈ SỐ PHÂN BÀO (có hiệu chỉnh MI x 100) Vùng B (n = 30) Vùng B (n = 30) p hai vùng giảm mạnh Trong đó, vùng A D5 1,53 ± 0,5 1,47 ± 0,49 > 0,05 có số lƣợng TB viêm nhiều so với D10 2,47 ±0,56 1,86 ± 0,51 < 0,05 vùng B, p < 0,05 Bảng 8: Thay đổi số lƣợng nguyên bào sợi hai vùng A vùng B trƣớc sau ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì THỜI ĐIỂM SỐ LƢỢNG NGUYÊN BÀO SỢI/ĐVDT p Vùng A (n = 30) Vùng B (n = 30) D1 13,86 ± 5,40 13,53 ± 3,13 0,714 D5 37,20 ± 8,26 36,56 ± 9,35 0,76 D10 67,10 ± 9,09 36,56 ± 0,38 < 0,05 Ngày thứ 10 sau ghép TBG trung mô, số lƣợng nguyên bào sợi/ĐVDT vùng A B tăng so với trƣớc ghép có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Vào thời điểm bắt đầu nghiên cứu, không xác định số phân bào Vào ngày thứ nghiên cứu, số phân bào vùng A cao vùng B, nhƣng khơng có ý nghĩa thống kê Vào ngày thứ 10 nghiên cứu, số phân bào vùng A cao vùng B có ý nghĩa thống kê, p < 0,05 BÀN LUẬN Tác dụng trình liền VT vật liệu tƣơng đƣơng trung bì - Trên vết bỏng thực nghiệm thỏ, vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có biểu làm tăng trình liền VT so với nhóm chứng: 35 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QN SỰ SỐ 8-2013 + Diễn biến lâm sàng vùng bỏng đƣợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì diễn thuận lợi cho trình liền VT, rõ rệt so với vùng chứng + Tốc độ liền VT vùng đuợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì diễn nhanh so với vùng chứng + Ở giai đoạn 16 - 20 ngày sau gây bỏng, vết bỏng đƣợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì khỏi hồn tồn tồn có tỷ lệ cao so với vùng chứng - Tác dụng việc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì đến nhiễm trùng vết bỏng: qua kết vi khuẩn học thấy số lƣợng vết bỏng đƣợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì bị nhiễm khuẩn tƣơng đƣơng với số lƣợng vết bỏng nhóm chứng bị nhiễm khuẩn, chứng tỏ việc ghép khơng có ảnh hƣởng đến tình trạng nhiễm trùng vết bỏng - Tác dụng việc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì đến q trình biến đổi mơ học vết bỏng: qua kết nghiên cứu mô học, thấy việc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì làm cho diễn biến mơ học vết bỏng thuận lợi cho trình liền VT so với nhóm chứng: thời điểm ngày sau ghép, số TB viêm tăng cao hai vùng, nhƣng đến ngày thứ 10 sau ghép, số TB viêm vùng ghép TBG trung mô giảm mạnh so với vùng chứng Điều cho thấy vật liệu tƣơng đƣơng trung bì ảnh hƣởng chủ yếu đến trình biểu biến đổi mơ học VT Cơ chế liền VT ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì Trong nghiên cứu này, tác dụng vật liệu tƣơng đƣơng trung bì VT bỏng sâu chủ yếu thể qua giảm số lƣợng TB viêm Chính tác dụng mà q trình liền VT diễn nhanh vùng đƣợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì [7] Có thể giải thích điều thơng qua chế: vật liệu tƣơng đƣơng trung bì đƣợc ghép vết bỏng trực tiếp tiết cytokin kích thích TB chỗ tăng tiết cytokin để thúc đẩy liền VT Nhƣng vật liệu tƣơng đƣơng trung bì lại có tác dụng VT bỏng thực nghiệm thỏ? Về điểm này, số tác giả chứng minh vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có thành phần biệt hóa từ TBG trung mơ dây rốn ngƣời khơng có tính kháng ngun ghép cao thân chúng có HLA-G, HLA-E có tác dụng ức chế phản ứng thải ghép [9, 10] Có thể suy luận vật liệu tƣơng đƣơng trung bì tồn lâu VT bỏng thỏ có đủ thời gian để tiết cytokin kích thích TB chỗ tiết cytokin thúc đẩy trình liền VT Nhƣng giả thiết cần đƣợc chứng minh thêm để góp phần làm sáng tỏ chế liền VT bỏng sâu việc ghép TBG trung mô dây rốn ngƣời KẾT LUẬN - Trên vết bỏng thực nghiệm thỏ, vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có biểu làm tăng q trình liền VT so với nhóm chứng - Tác dụng vật liệu tƣơng đƣơng trung bì việc hạn chế nhiễm khuẩn vết bỏng chƣa rõ ràng Trong đó, việc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì làm diễn biến mơ học vết bỏng thuận lợi cho trình liền VT TÀI LIỆU THAM KHẢO Lee DY, Ahn HT, Cho KH A new skin equivalent model: use of a dermal substrate which combines de-epidermized dermis with fibroblast-populated collagen matrix J Dermatol 36 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 Sci 2000, 23, pp.132-137 Lee DY, Cho KH The effects of epidermal keratinocytes and dermal fibroblasts on the formation of cutaneous basement membrane in three-dimensional culture systems Arch Dermatol Res 2005, 296, pp.296-302 Green H, Kehinde O, Thomas J Growth of cultured human epidermal cells into multiple epithelia suitable for grafting Proc Natl Acad Sci USA 1979, 76, pp.5665-5668 Ehrlich HP Understanding experimental biology of skin equivalent: from laboratory to clinical use in patients with burns and chronic wounds Am J Surg 2004, 187, pp.29s-33s Boyce ST, Michel S, Reichert U, Schroot B, Schmidt R Reconstructed skin from cultured human keratinocytes and fibroblasts on a collagen-glycosaminoglycan biopolymer substrate Skin Pharmacol 1990, 2, pp.136-143 Maruguchi T, Maruguchi Y, Suzuki S, Matsuda K, Toda KI, Isshiki N A new skin equivalent: keratinocytes proliferated and differentiated on collagen sponge containing fibroblasts Plast Reconstr Surg 1994, 93, pp.537-544 Regnier M, Prunieras M, Woodley D Growth and differentiation of adult human epidermal cells on dermal substrates Front Matrix Biol 1981, 9, pp.4-35 Cooper ML, Hansbrough JF, Spielvogel RL, Cohen R, Bartel RL, Naughton G In vivo optimization of a living dermal substitute employing cultured human fibroblasts on a biodegradable polyglycolic acid or polyglactin mesh Biomaterials 1991, 12, pp.243-248 Goldstein RH, Poliks CF, Pilch PF, Smith BD, Fine A Stimulation of collagen formation by insulin and insulin-like growth factor I in cultures of human lung fibroblasts Endocrinology 1989, 124, pp.964-970 10 Russell SB, Russell JD, Trupin KM Collagen synthesis in human fibroblasts: effects of ascorbic acid and regulation by hydrocortisone J Cell Physiol 1981, 109, pp.121-131 37 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2013 38 ... đĩa Tấm vật liệu sau đƣợc sử dụng cho nghiên cứu đánh giá hình thái cấu trúc ghép điều trị VT bỏng thực nghiệm Tiến hành 10 thí nghiệm, sử dụng dòng TB P3 P4 thu đƣợc từ mô dây rốn * Ghép vật liệu. .. có ý nghĩa thống kê, p < 0,05 BÀN LUẬN Tác dụng trình liền VT vật liệu tƣơng đƣơng trung bì - Trên vết bỏng thực nghiệm thỏ, vật liệu tƣơng đƣơng trung bì có biểu làm tăng q trình liền VT so... sau gây bỏng, vết bỏng đƣợc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì khỏi hồn tồn tồn có tỷ lệ cao so với vùng chứng - Tác dụng việc ghép vật liệu tƣơng đƣơng trung bì đến nhiễm trùng vết bỏng: qua