1. Trang chủ
  2. » Thể loại khác

Phát hiện đột biến kháng thuốc của HBV trên bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị bằng kỹ thuật giải trình tự

4 74 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 4
Dung lượng 285,21 KB

Nội dung

Nội dung bài viết với mục tiêu xác định đột biến kháng thuốc của HBV trên bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị. Nghiên cứu tiến hành từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014 tiến hành thu thập mẫu huyết thanh từ bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị tại một số phòng khám chuyên khoa gan mật, tiêu hóa tại TP. Cần Thơ.

Trang 1

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ bản của Số 1 * 2015 Nghiên cứu Y học

PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN KHÁNG THUỐC CỦA HBV TRÊN BỆNH NHÂN NHIỄM HBV MẠN TÍNH CHƯA ĐIỀU TRỊ BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ

Nguyễn Thị Hải Yến*, Nguyễn Thanh Bảo**, Cao Minh Nga**

TĨM TẮT

Đặt vấn đề: Các thuốc tương tự nucleos(t)ide là một trong 2 nhĩm thuốc được sử dụng điều trị bệnh viêm

gan B mạn tính hiện nay (nhĩm cịn lại là Interferon), cĩ tác dụng ức chế quá trình nhân lên của virus Tuy nhiên, khi sử dụng với thời gian kéo dài, dưới áp lực chọn lọc của thuốc dễ làm phát sinh những đột biến kháng thuốc trên virus Tại Việt Nam chưa cĩ nhiều nghiên cứu về đột biến kháng thuốc trên người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị

Mục tiêu: Xác định đột biến kháng thuốc của HBV trên bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị Phương pháp: Tiền cứu, mơ tả cắt ngang Từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014 tiến hành thu thập mẫu

huyết thanh từ bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị tại một số phịng khám chuyên khoa gan mật, tiêu hĩa tại TP Cần Thơ Thực hiện các xét nghiệm HBeAg bằng kỹ thuật ELISA, định lượng HBV DNA bằng kỹ thuật Realtime PCR Các mẫu huyết thanh cĩ kết quả định định lượng HBV DNA > 10 3 copies/ml được giải trình tự xác định đột biến kháng thuốc

Kết quả: Cĩ 362 mẫu huyết thanh cĩ tải lượng HBV DNA > 10 4 copies/ml được giải trình tự tìm đột biến kháng thuốc Khơng phát hiện được các đột biến cĩ liên quan đến kháng các thuốc tương tự nucleos(t)ide Cĩ 29 mẫu cĩ đột biến V207M ( 8% ) Số mẫu huyết thanh cĩ HBeAg (+) là 196 mẫu (54,1%) Cĩ 238 mẫu huyết thanh (65,7 %) cĩ tải lượng HBV DNA trong huyết thanh ≥ 10 5 copies/ml Tỉ lệ đột biến rtV207M ở nhĩm cĩ tải lượng HBV DNA trong huyết thanh ≥ 10 5 copies/ml cao hơn ở nhĩm cĩ tải lượng HBV DNA trong huyết thanh < 10 5 copies/ml cĩ ý nghĩa thống kê Khơng ghi nhân mối liên quan giữa đột biến rtM207V với các yếu tố tuổi, giới tính và tình trạng HBeAg

Kết luận: Khơng phát hiện được các đột biến cĩ liên quan đến kháng các thuốc tương tự nucleos(t)de Tỉ lệ

đột biến rtV207M là 8% Cĩ sự khác biệt cĩ ý nghĩa thống kê về sự phân bố của đột biến này ở 2 nhĩm HBV DNA < 10 5 copies/ml và ≥ 10 5 copies/ml

Từ khĩa: viêm gan B, đồng phân nucleos(t)ide, đột biến kháng thuốc, nhiễm HBV mạn tính, bệnh nhân

chưa điều trị.

ABSTRACT

DETECTION OF ANTIVIRAL DRUGS RESISTANTS MUTANTS OF HEPATITIS B VIRUS AMONG TREATMENT NẠVE CHRONIC HEPATIS B VIRUS INFECTED PATIENTS BY SEQUENSING

Nguyen Thi Hai Yen, Nguyen Thanh Bao, Cao Minh Nga

* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 19 - Supplement of No 1 - 2015: 365 - 368

Background: Nucleot(s)ide analogs group is one of two kinds of antiviral drug for treating Hepatitis B (the

other one is Interferon), which inhibits effectively the replication of virus However, when long term using, it is easily to emerge drug resistant mutants in virus There have not been many studies in drug resistant mutants of HBV among treatment nạve chronic hepatitis B virus infected patients

Objectives: To determine the rates of drug resistant mutants in treatment nạve chronic hepatitis B virus

* Khoa Y, Đại học Cần Thơ ** Bộ mơn Vi sinh, Khoa Y - Đại học Y Dược TP HCM

Tác giả liên lạc: ThS BS Nguyễn Thị Hải Yến ĐT: 0908600366 Email: haiyenydct@yahoo.com

Trang 2

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ bản của Số 1 * 2015

Chuyên Đề Nội Khoa 366

infected patients

Methods: Retrospective, cross-sectional description method Sera of chronic hepatitis B virus infected

patients were collected at some hepatobiliary and gastrointestinal clinics in CanTho city from January 2013 to December 2014 HBeAg tests were done HBV DNA quantitating were taken by Realtime PCR method Samples with over 10 3 HBV DNA copies/ml sera were detected drug resistant mutants by sequencing

Results: 362 samples with over 10 3 HBV DNA copies/ml sera of treatment nạve chronic hepatitis B virus infected patients were available for resistant mutants detecting No resistant mutant was detected in these samples 29 samples (8%) with rtV207M mutant was detedcted There were 196 samples (54.1%) with HBeAg positive.There were 238 samples (65.7%) with 10 3 HBV DNA copies/ml viral load There was a significant association between the ratio of rtV207M mutant and viral loading No relationship was seen between rtV297M mutant and gender or HBeAg status

Conclusion: No resistant mutant was detected in these samples The mutant of rtV207M was 8% There

was a significant association between the ratio of rtV207M mutant and viral loading

Keywords: Hepatitis B (HBV), nucleos(t)ide analogs, drugs-resistant mutation, chronic HBV infection,

treatment nạve patient

ĐẶT VẤN ĐỀ

Viêm gan B (HBV) đang là một vấn đề sức

khỏe được quan tâm trên tồn thế giới khơng

những vì tỉ lệ người nhiễm bệnh cao mà cịn do

những biến chứng nguy hiểm của bệnh như xơ

gan và ung thư tế bào gan Hiện nay cĩ 2 nhĩm

thuốc được sử dụng trong điều trị HBV Đĩ là các

thuốc tương tự nucleos(t)de và các Intreferon

Nhĩm thuốc tương tự nucleos(t)de cĩ tác dụng ức

chế quá trình nhân lên của virus, ít tác dụng phụ

và được sử dụng chủ yếu trong điều trị HBV Tuy

nhiên, khi sử dụng với thời gian kéo dài, dưới áp

lực chọn lọc của thuốc dễ làm phát sinh những đột

biến kháng thuốc trên virus, làm giảm hiệu quả

điều trị Tại Việt Nam, đã cĩ nhiều nghiên cứu về

điều trị(1,6,7,8) Riêng đối với người nhiễm HBV mạn

tính chưa điều trị, tại Việt Nam chưa cĩ nhiều

nghiên cứu về đột biến kháng thuốc

ĐỐ I TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Thiết kế nghiên cứu

Tiền cứu, mơ tả cắt ngang

Đối tượng nghiên cứu

Người nhiễm HBV cĩ HBsAg(+) trên 6 tháng

đến khám tại một số phịng khám chuyên khoa

gan mật, tiêu hĩa tại TP Cần Thơ từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014

Phương pháp nghiên cứu

Bệnh nhân được chọn vào mẫu nghiên cứu được lấy huyết thanh làm xét nghiệm HBeAg bằng kỹ thuật ELISA tại bệnh viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ Sau đĩ, các mẫu này được tiến hành định lượng HBV DNA bằng kỹ thuật Realtime PCR phịng xét nghiệm Vi sinh Trường

tải lượng virus > 103 copies/ml được tiến hành giải trình tự trên đoạn gen P của HBV để phát hiện đột biến kháng thuốc(9) Kỹ thuật giải trình tự được thực hiện tại viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Biến số nghiên cứu: giới, tuổi, tải lượng DNA HBV trong huyết thanh

Nhập và phân tích số liệu bằng phần mền SPSS 18.0, dùng phép kiểm χ2 để so sánh các tỉ lệ với mức cĩ ý nghĩa thống kê p<0,05

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Trong thời gian từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014, chúng tơi thu thập được 362 mẫu huyết thanh của bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa

điều trị, cĩ tải lượng HBV DNA > 103 copies/ml để thực hiện kỹ thuật giải trình tự phát hiện đột biến kháng thuốc

Trang 3

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ bản của Số 1 * 2015 Nghiên cứu Y học

Đặc điểm mẫu nghiên cứu

Trong số 362 bệnh nhân được lấy huyết thanh

được tiến hành giải trình tự, có211 bệnh nhân

nam (58,3%) và 151 bệnh nhân nữ (41,7%) 196

mẫu huyết thanh có HBeAg (+) (54,1%)

Đột biến phát hiện được

Chúng tôi không phát hiện được những đột

biến của HBV trên đoạn gen được giải trình tự đã

được biết có liên quan đến sự đề kháng với các

thuốc tương tự nucleos(t)de Tuy nhiên có 29 mẫu

(8%) xuất hiện đột biến rtV207M Đây là đột biến

cho đến nay được cho là không liên quan đến

kháng thuốc Trong nghiên cứu của tác giả M.H

Nguyen và cs trên đối tượng viêm gan B mạn

tính chưa điều trị cũng ghi nhận sự hiễn điện của

đột biến này với tỉ lệ 16,7%(5) Tác giả R Salpini và

cs cũng tìm thấy đột biến rtV207L/ M với tỉ lệ

0,7% trên bệnh nhân chưa điều trị Đây là một

trong những đột biến đang được xem xét liệu có

giữ vai trò đối với kháng thuốc của HBV(10)

trị có tỉ lệ thấp, ngay cả đối với những thuốc đã

được sử dụng rộng rãi trong thời gian qua như

Lamivudin(2,3,4)

Tác giả Nguyễn Hùng Cường nghiên cứu trên

đối tượng tiêm chích ma túy và gái mại dâm tại

Hải Phòng ghi nhận có 3,84% đột biến kháng

Lamivudine, không thấy đột biến kháng Tenofovir

và Entercavir(2) Đặng Mai anh Tuấn nghiên cứu

trên những bệnh nhân viêm gan B mạn tính tại

bệnh viện Nhiệt đới TP Hồ Chí Minh ghi nhận tỉ lệ

đột biến kháng thuốc là 9,28%(1) Tuy nhiên trong

nghiên cứu này không phân biệt bệnh nhân đã

điều trị và chưa điều trị Các nghiên cứ trên đối

tượng bệnh nhân viêm gan B đã điều trị cao hơn

nhiều so với bệnh nhân chưa điều trị(7,8)

Sự phân bố đột biến rtV207M theo giới tính

Bảng 1: Sự phân bố đột biến theo giới tính

Giới tính Có đột biến Không đột biến

Có 21 bệnh nhân nam và 8 bệnh nhân nữ có

đột biến rtV207M Sự phân bố đột biến rtV207M

trên 2 nhóm nam và nữ không có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,108)

Sự phân bố đột biến rtV207M theo tải lượng HBV DNA trong huyết thanh

Bảng 2: Sự phân bố đột biến rtV207M theo tải lượng

HBV DNA trong huyết thanh (n=362)

HBV DNA (copies/ml) Có đột biến Không đột biến

< 10 5 (n=124) 5 119

≥ 10 5 (n=238) 24 214 Trong 124 mẫu huyết thanh có tải lượng virus

< 105 copies/ml có 5 mẫu mang đột biến rtV207M Trong 238 mẫu huyết thanh có tải lượng virus ≥

105 có 5 mẫu mang đột biến rtV207M Có mối liên quan giữa đột biến rtV207M và tải lượng virus trong máu (p=0,044)

Sự phân bố đột biến rtV207M theo kháng nguyên HBeAg

Bảng 3: Sự phân bố đột biến rtV207M theo kháng

nguyên HBeAg (n=362)

HBeAg Có đột biến Không đột biến

Dương tính (n=196) 20 176

Âm tính (n=166) 9 157 Trong 176 mẫu huyết thanh có HBeAg (+), có

20 mẫu có đột biến rtV207M và trong 157 mẫu huyết thanh có HBeAg (-) có 9 mẫu có đột biến rtV207M Sự phân bố đột biến này trên 2 nhóm HBeAg(+) và HBeAg (-) không có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,095)

KẾT LUẬN

Trong nghiên cứu này, chúng tôi không phát hiện được các đột biến liên quan đến kháng thuốc

Đột biến rtV207M xuất hiện ở 29 mẫu chiếm tỉ lệ 8% Có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về sự phân bố của đột biến này ở 2 nhóm HBV DNA <

105 copies/ml và ≥ 105 copies/ml

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Đặng Mai Anh Tuấn, Võ Đức Xuyên An, Phạm Hùng Vân (2010) Tìm hiểu đột biến kháng Adefovir và lamivudine trên HBV tách chiết từ huyết thanh bệnh nhân viêm gan B mãn tính Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh Tập 14 Phụ bản số 2 Tr.: 287-293

2 Ma J, Zhang Y, Chen X, Jin Y, Chen D, Wu Y, Cui J, Wang H,

L Jiu, Li N, Gao F (2013) “Association of Preexisting Drug-Resistance Mutationsand Treatment Failure in Hepatitis B

Patients” PLoS ONE.8(7): e67606

Trang 4

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ bản của Số 1 * 2015

Chuyên Đề Nội Khoa 368

3 Margeridon-Thermet S, Shulman NS, Ahmed A, Shahriar R,

Liu T, Wang C, Holmes SP, Babrzadeh F, Gharizadeh B,

Hanczaruk B, Simen BB, Egholm M, Shafer RW (2009)

“Ultra-Deep Pyrosequencing of Hepatitis B Virus Quasispeciesfrom

Nucleoside and Nucleotide Reverse-Transcriptase Inhibitor

(NRTI) – Treated Patients and NRTI - Nạve Patients J Infect

Dis May 1; 199(9): 1275–85

4 Mirandola S, Campagnolo D, Bortoletto G, et al (2011)

“Large-scale survey of naturally occurring HBV

polymerasemutations associated with anti-HBV drug

resistancein untreated patients with chronic hepatitis B”

Journal of Viral Hepatitis 18:e212–e216

5 Nguyen MH, Garcia RT, Trinh HN, Nguyen HA, Nguyen

KK, Nguyen LH & Levitt B (2009) Prevalence of hepatitis B

virus DNA polymerase mutations intreatment-nạve patients

with chronic hepatitis Aliment Pharmacol Ther; 30: pp 1150–8

6 Nguyễn Hùng Cường, Nguyễn Bảo Trân, Hồng Thị

Thanh Huyền, Azumi Ishizaki, Hiroshi Ichimura, Phạm

Văn thức (2013) “Nghiên cứu tỉ lệ đột biến gen kháng

thuốc của HBV ở đối tượng tiêm chích ma túy và gái mại

dâm ở Hải Phịng” Tạp chí Y-Dược học quân sự số 6:57-63

7 Nguyễn Thị Nhã Đoan, Bùi Hữu Hồng, Phạm Hùng Vân

(2011) “Đột biến kháng thuốc trên bệnh nhân viêm gan virus B

mạn đang điều trị bằng các thuốc tương tự nucleos(t)ide” Tạp

chí Y học TP Hồ Chí Minh Tập 15 Phụ bản số 2 Tr.110-116

8 Nguyễn Sử Minh Tuyết, Hồ Thị Thanh Thủy, Nguyễn Thanh

Bảo, Cao Minh Nga (2010) “Phát hiện đột biến rtL180M và

rtM204V/I kháng Lamivudine ở bệnh nhân nhiễm HBV mạn

tính bằng kỹ thuật Real-time PCR” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh Tập 14 Phụ bản số 1 Tr.509-512

9 Rybicka M, Stalke P, Dreczewski M, Smiatacz T, Bielawski

KP (2014) “High-Through put Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization–Timeof Flight Mass Spectrometry as an Alternative Approach to Monitoring Drug Resistance of

Hepatitis B Virus.” Journal of Clinical Microbiology January ;

52(1): pp 9 –14

10 Salpini R, Svicher V, Cento V, Gori C, Bertoli A, Scopelliti F, Micheli V, Cappiello T, Spanị A, Rizzardini G, De Sanctis

GM, Sarrecchia C, Angelico M, Perno CF (2011)

“Characterization of drug-resistance mutations in HBV D-genotype chronically infected patients, nạve to antiviral

drugs” Antiviral Research 92:382–5

Ngày nhận bài báo: 27/10/2014 Ngày phản biện nhận xét bài báo: 30/10/2014 Ngày bài báo được đăng: 10/01/2015

Ngày đăng: 22/01/2020, 00:59

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w