Nội dung bài viết với mục tiêu xác định và mô tả sự phân bố kiểu gen của HBV trên người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị tại TP. Cần Thơ. Nghiên cứu tiến hành từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014 tiến hành thu thập mẫu huyết thanh từ bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị tại một số phòng khám chuyên khoa gan mật, tiêu hóa tại TP. Cần Thơ
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 SỰ PHÂN BỐ KIỂU GEN HBV Ở NGƯỜI NHIỄM HBV MẠN TÍNH TẠI TP CẦN THƠ Nguyễn Thị Hải Yến*, Nguyễn Thanh Bảo**, Cao Minh Nga** TÓM TẮT Đặt vấn đề: Nhiễm HBV vấn đề sức khỏe toàn cầu Việt Nam nước có tỉ lệ nhiễm HBV cao (10-20%) Tại vùng đồng Sơng Cửu Long nói chung TP Cần Thơ nói riêng, chưa có nghiên cứu kiểu gen HBV đối tượng người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị Mục tiêu: Xác định mơ tả phân bố kiểu gen HBV người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị TP Cần Thơ Phương pháp: Nghiên cứu tiền cứu, mô tả cắt ngang Từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014 tiến hành thu thập mẫu huyết từ bệnh nhân nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị số phòng khám chun khoa gan mật, tiêu hóa TP Cần Thơ Thực xét nghiệm HBeAg Tiến hành định lượng HBV DNA kỹ thuật Realtime PCR phòng xét nghiệm vi sinh Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, chọn mẫu huyết có kết định định lượng HBV DNA > 103 copies/ml tiến hành giải trình tự xác định kiểu gen viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Kết quả: Có 473 mẫu huyết có tải lượng HBV DNA > 103 copies/ml giải trình tự xác định kiểu gen Có kiểu gen phát B C với tỉ lệ 73,4 26,6% Tỉ lệ mẫu huyết có HBeAg (+) 57,3% Tải lượng HBV DNA huyết ≥ 105 copies/ml chiếm tỉ lệ 68,7% Không ghi nhân mối liên quan kiểu gen với yếu tố giới tính, tải lượng HBV DNA huyết tình trạng HBeAg Kết luận: Trên đối tượng người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị TP cần Thơ, có kiểu gen ghi nhận B (73,4%) C (26,6%) Không ghi nhân mối liên quan kiểu gen với yếu tố giới tính, tải lượng HBV DNA huyết tình trạng HBeAg Từ khóa: kiểu gen, virus viêm gan B, nhiễm HBV mạn tính, bệnh nhân chưa điều trị ABSTRACT THE GENOTYPE DISTRIBUTION OF HEPATITIS B VIRUS IN CHRONIC HEPATITIS B VIRUS INFECTED PATIENTS IN CAN THO CITY Nguyen Thi Hai Yen, Nguyen Thanh Bao, Cao Minh Nga * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 19 - Supplement of No - 2015: 374 - 377 Background: Hepatitis B virus infection is an important problem of health worldwide VietNam is one of coutries with hight prevalence of HBV infection (10 - 20%) There has been no study about HBV genotype in Mekong delta area and CanTho city Objectives: Identify and describe the distribution of HBV genotype in chronic hepatitis B virus infected patients in CanTho city Methods: Retrospective, cross-sectional description method Sera of chronic hepatitis B virus infected patients were collected at some hepatobiliary and gastrointestinal clinics in CanTho city from January 2013 to December 2014 HBeAg tests were done HBV DNA quantitating were taken by Realtime PCR method in * Khoa Y, Đại học Cần Thơ ** Bộ môn Vi sinh, Khoa Y - Đại học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: ThS BS Nguyễn Thị Hải Yến ĐT: 0908600366 Email: haiyenydct@yahoo.com 374 Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 Nghiên cứu Y học University of Medicine and Pharmacy in Ho Chi Minh city Samples with over 103 HBV DNA copies/ml sera were identified genotypes by sequencing at Pasteur institute in Ho Chi Minh city Results: 473 samples with over 103 HBV DNA copies/ml sera of chronic hepatitis B virus infected patients were available for genotype identifying The genotypes of HBV were B (73.4%) and C (26.6%) The ratio of HBeAg positive was 57.3% There were 68.7% samples with over 104 HBV DNA copies/ml sera No relationship between HBV genotypes and gender, HBV DNA copies quantity in sera or HBeAg status was seen Conclusion: The genotypes of HBV in chronic hepatitis B virus infected patients were B (73.4%) and C (26.6%) There was no significant difference in the distribution of HBV genotypes in groups of gender, HBV DNA copies quantity in sera and HBeAg status Key words: genotype, Hepatitis B (HBV), chronic HBV infection, treatment naïve patient ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Nhiễm HBV vấn đề sức khỏe toàn cầu cho dù nỗ lực nhằm hạn chế lây nhiễm áp dụng Hiện nay, giới ước tính có khoảng tỷ người bị nhiễm HBV Trong số có khoảng 400 triệu người mang HBV mạn tính (HBV carier)(2,10) Hàng năm, có gần triệu người chết bệnh lý liên quan đến nhiễm HBV xơ gan, ung thư gan(15,10) Thiết kế nghiên cứu Cho đến có 10 kiểu gen (genotype) HBV phát (A → J) dựa khác 8% tồn trình tự chuỗi gen HBV(9) Qua nghiên cứu gần đây, người ta nhận thấy kiểu gen HBV có liên quan đến diễn tiến bệnh bệnh cảnh lâm sàng, đáp ứng với điều trị tỉ lệ chuyển đổi huyết điều trị(9,8,14) Việt Nam số nước có tỉ lệ nhiễm HBV cao Các nghiên cứu cho thấy kiểu gen thường gặp Việt Nam B C(3,7,5,6,13) Gần đây, kiểu gen I được tìm thấy ở Việt Nam Lào(9) Tuy nhiên, vùng đồng Sơng Cửu Long nói chung TP Cần Thơ nói riêng, chưa có nghiên cứu kiểu gen HBV đối tượng người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị Chúng tơi thực nghiên cứu với mục tiêu xác định kiểu gen HBV người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị TP cần Thơ mô tả phân bố kiểu gen HBV theo số yếu tố tuổi, giới tính, tải lượng HBV DNA huyết tình trạng HBeAg Bệnh nhân chọn vào mẫu nghiên cứu lấy huyết làm xét nghiệm HBeAg kỹ thuật ELISA bệnh viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ Sau đó, mẫu tiến hành định lượng HBV DNA kỹ thuật Realtime PCR phòng xét nghiệm Vi sinh Trường Đại học Y dược TP Hồ Chí Minh Những mẫu có tải lượng virus > 103 copies/ml xác định kiểu gen HBV kỹ thuật giải trình tự viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Nhiễm Tiền cứu, mơ tả cắt ngang Đối tượng nghiên cứu Người nhiễm HBV có HBsAg(+) tháng đến khám số phòng khám chuyên khoa gan mật, tiêu hóa TP Cần Thơ từ tháng 1/2013 đến tháng 9/2014 Phương pháp nghiên cứu Biến số nghiên cứu: giới, tuổi, kiểu gen HBV, tải lượng DNA HBV huyết Nhập phân tích số liệu phần mền SPSS 18.0, dùng phép kiểm χ2 để so sánh tỉ lệ với mức có ý nghĩa p 103 copies/ml để thực kỹ thuật giải trình tự xác định kiểu gen virus 375 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 Nghiên cứu Y học Đặc điểm mẫu nghiên cứu Bảng 1: Đặc điểm mẫu nghiên cứu (n=473) Yếu tố Giới HBeAg Nam Nữ (+) (-) Tần suất 271 202 271 202 Tỉ lệ (%) 57,3 42,7 57,3 42,7 Trong số 473 bệnh nhân lấy huyết xác định kiểu gen có 271 nam (57,3%) 202 nữ (42,7%) Có 271 mẫu huyết có HBeAg (+) (57,3%) Các kiểu gen (genotype) HBV phát Bảng 2: Các kiểu gen (genotype) HBV phát (n=473) Genotype B C Tần suất 347 126 Tỉ lệ (%) 73,4 26,6 Chúng tơi ghi nhận có diện kiểu gen HBV B C với tỉ lệ 73,4 % 26,6 % Kết phù hợp với nghiên cứu khác kiểu gen HBV châu Á Việt Nam(3,7,5,6,11,10) Kiểu gen B chiếm tỉ lệ 71,8%, kiểu gen phổ biến người châu Á Việt Nam Các tác giả Nguyễn Hùng Cường, Hồ Thị Thanh Thủy Đặng Mai Anh Tuấn ghi nhận tỉ lệ kiểu gen B tương tự (77,61%; 78% 75%) với kỹ thuật xác định kiểu gen khác nhau(3,5,6) Theo số tác giả, bệnh lý gan mạn tính châu Á liên quan đến kiểu gen C nhiều kiểu gen B(14) Trong nghiên cứu chúng tôi, kiểu gen C chiếm tỉ lệ 26,6%, tương tự số nghiên cứu khác tác giả nước(3,5,6) Trong nghiên cứu kiểu gen HBV trẻ em tác giả Cao Minh Nga, tỉ lệ kiểu gen C 7,6%(2), thấp tỉ lệ kiểu gen C nghiên cứu số nghiên cứu khác đối tượng người lớn Sự khác biệt đối tượng người lớn nghiên cứu nghiên cứu khác thuộc nhóm bệnh nhân có diễn tiến mạn tính có biến chứng nhiễm HBV Điều phù hợp với y văn ghi nhận kiểu gen C thường gây tổn thương gan nặng kiểu gen khác(2,8,10) 376 Trong nghiên cứu Lê Hữu Song đối tượng bệnh nhân ung thư gan ghi nhận tỉ lệ kiểu gen C 79,6%(8) Điều lần cho thấy kiểu gen C thường cho diễn tiến lâm sàng nặng kiểu gen khác Chúng không ghi nhận diện kiểu gen khác kiểu gen A I kiểu gen cho có diện Việt Nam(7,14) Mặc khác, chúng tơi dùng kỹ thuật giải trình tự để xác định kiểu gen dựa khác biệt tối thiểu 8% trình tự nucleotide nên chúng tơi khơng ghi nhận trường hợp đồng bội nhiễm kiểu gen B C số nghiên cứu khác sử dụng kỹ thuật Realtime PCR để xác định kiểu gen(6) Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo giới tính Bảng 3: Sự phân bố kiểu gen ( genotype) HBV theo giới tính Giới tính Nam (n=271) Nữ (n=202) Genotype B 205 (75,6%) 142 (70,3%) Genotype C 66 (24,4%) 60 (29,7%) Ở 271 mẫu huyết bệnh nhân nam, có 205 mẫu có kiểu gen B (75,6%) 66 mẫu có kiểu gen C (24,4%) Ở 202 mẫu huyết bệnh nhân nữ, có 142 mẫu có kiểu gen B (70,3%) 60 mẫu có kiểu gen C (29,7%) Sự phân bố kiểu gen nhóm nam nữ khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p=0,193) Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo tải lượng HBV DNA huyết Bảng 4: Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo tải lượng HBV DNA huyết HBV DNA (copies/ml) < 10 (n=148) ≥ 10 (n=325) Genotype B 106 (71,6%) 241 (74,1%) Genotype C 42 (28,4%) 84 (25,9% Chúng tiến hành định lượng HBV DNA kỹ thuật Realtime PCR để chọn mẫu huyết có tải lượng HBV DNA > 103 copies/ml để thực giải trình tự xác định kiểu gen Chúng tơi ghi nhận có 148 mẫu (31,3%) có HBV DNA < 105 copies/ml 325 mẫu (68,7%) HBV DNA ≥ 105 copies/ml Tải lượng virus cao Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Phụ Số * 2015 ghi nhận 109 copies/ml Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê phân bố kiểu gen HBV nhóm có tải lượng virus máu cao thấp khác (p=0,564) Sự phân bố genotype HBV theo kháng nguyên HBeAg Bảng 5: Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo kháng nguyên HBeAg HBeAg Dương tính (n=271) Âm tính (n=202) Genotype B 206 (76 %) Genotype C 65 ( 24 %) 141 ( 69,8 %) 61 ( 30,2 %) Tất mẫu xác định kiểu gen làm xét nghiệm HBeAg kỹ thuật ELISA Trong số 271 mẫu có HBeAg (+), kiểu gen B có 206 mẫu (76 %), kiểu gen C có 65 mẫu (24 %) Trong số 202 mẫu có HBeAg (-), kiểu gen B có 141 mẫu (69,8 %), kiểu gen C có 61 mẫu (30,2 %) Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê phân bố kiểu gen nhóm HBeAg(+) HBeAg (-) (p=0,131) KẾT LUẬN 11 Qua nghiên cứu kiểu gen HBV đối tượng nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị TP Cần Thơ, rút kết luận sau: 12 10 Có kiểu gen HBV phát B C với tỉ lệ 73,4 % 26,6 % Không ghi nhân mối liên quan kiểu gen với yếu tố giới tính, tải lượng HBV DNA huyết tình trạng HBeAg TÀI LIỆU THAM KHẢO Cao Minh Nga, Nguyễn Thanh Bảo, Nguyễn Thị Hải Yến, Trần Thị Như Lê, Trần Thị Ngọc Anh (2011) Sự phân bố kiểu gen (genotype) virus viêm gan B (HBV) trẻ em nhiễm HBV Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh Tập 15 Phụ số Tr.190-194 Cheng CP, Lee PF, Liu WC, Wu IC, Chin CY, Chang TT, Tseng VS (2012) Anlysis of Precore/core covariances associated with viral kinetics and genotypes in hepatitis B e antigen-positive Chronic hepatitis B patients PLoS One Vol.7 (2): e32553 Nhiễm 13 14 15 Nghiên cứu Y học Đặng Mai Anh Tuấn, Võ Đức Xuyên An, Phạm Hùng Vân (2010) “Tìm hiểu đột biến kháng Adefovir lamivudine HBV tách chiết từ huyết bệnh nhân viêm gan B mãn tính” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh Tập 14 Phụ số Tr.287-293 Glebe D, Bremer CM (2013) “The molecular virology of hepatitis B virus” Seminars in Liver Disease Vol.33 No.2 pp 103-112 Hồ Thị Thanh Thủy, Nguyễn Bảo Toàn, Lê Huyền Ái Thúy, Nguyễn Duy Khánh, Cao Minh Nga, Vũ Thị Tường Vân (2009) “Ứng dụng kỹ thuật realtime RT-PCR xác định kiểu gene virus gây viêm gan siêu vi B C Bộ khoa học công nghệ” Tuyển tập Hội nghị Công nghệ sinh học tồn quốc khu vực phía Nam 2009 Nhà xuất Khoa học Kỹ Thuật Tr: 382-386 Joshi M, Deshpande JD (2011) “Polymerase chain reaction: methods, principles and application” International Journal of Biomedical Research Number 1, Volume pp 81-97 Kenji A (2010) “Molecular-based epidemiology and pathology of hepatitis B virus infection” Kỷ yếu Hội nghị Sinh học phân tử Hóa sinh Y học tòan quốc lần thứ 2, tr: 19-20 Lê Hữu Song (2013) “Kiểu gen vi rút viêm gan b liên quan tới đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng người mang vi rút không triệu chứng bệnh nhân ung thư gan” Tạp chí Y học thực hành (872) Số 6: 28-31 Liu CJ, Kao JH (2013) “Global Perspective on the Natural History of Chronic Hepatitis B: role of Hepatitis B virus genotypes A to J” Seminars in Liver Disease Vol.33 No.2/2013.pp 87-102 Locarnini S, Zoulim F (2010) “Molecular genetics of HBV infection” Antiviral therapy 2010 15Suppl 3:3-14 Nguyễn Hùng Cường, Nguyễn Bảo Trân, Hoàng Thị Thanh Huyền, Azumi Ishizaki, Hiroshi Ichimura, Phạm Văn thức (2013) “Nghiên cứu tỉ lệ đột biến gen kháng thuốc HBV đối tượng tiêm chích ma túy gái mại dâm Hải phòng” Tạp chí Y-Dược học quân số 6: 57-63 Shi Y, Wei F, Hu D, Li Q, Smith D, Li D, Chen D (2012) “Mutations in the major hydrophilic region (MHR) of hepatitis B virus genotype C in North China” Journal of Medical Virology 84: 1901-1906 Trần Thị Hải Âu, Vũ Thị Kim Liên, Đặng Đức Anh (2010) Nghiên cứu ứng dụng quy trình Multiplex - PCR xác định kiểu gen HBV số khu vực miền bắc Việt Nam năm 2008 Tạp chí Y học dự phòng Tập XX số 6(114) Tr: 122- 128 Trần Xuân Chương (2010) “Tổng quan kiểu gen virus viêm gan B ở Việt Nam”, Tạp chí gan mật, số 11: 5-10 Vivekanandan P, Singh OV (2010) Molecular Methods in the Diagnosis and Management of Chronic Hepatitis B Expert Rev Mol Diagn 10(7): 921-935 Ngày nhận báo: 27/10/2014 Ngày phản biện nhận xét báo: 30/10/2014 Ngày báo đăng: 10/01/2015 377 ... cứu kiểu gen HBV đối tượng người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị Chúng thực nghiên cứu với mục tiêu xác định kiểu gen HBV người nhiễm HBV mạn tính chưa điều trị TP cần Thơ mô tả phân bố kiểu gen. .. bội nhiễm kiểu gen B C số nghiên cứu khác sử dụng kỹ thuật Realtime PCR để xác định kiểu gen( 6) Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo giới tính Bảng 3: Sự phân bố kiểu gen ( genotype) HBV theo... nghĩa thống kê phân bố kiểu gen HBV nhóm có tải lượng virus máu cao thấp khác (p=0,564) Sự phân bố genotype HBV theo kháng nguyên HBeAg Bảng 5: Sự phân bố kiểu gen (genotype) HBV theo kháng nguyên