Đề tài được thực hiện với mục tiêu nhằm nghiên cứu điều chế và tiêu chuẩn hóa secnidazol, và nghiên cứu tiến hành phương pháp xây dựng qui trình điều chế sernidazol theo 2 bước. Tổng hợp 2-methyl-5- nitroimidazol bằng phản ứng nitro hóa 2-methylimidazol. Ngưng tụ 2-methylimidazol với propylen oxyd thu được secnidazol.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ TIÊU CHUẨN HÓA SECNIDAZOL Trương Phương*, Trần Thị Trúc Thanh*, Phạm Thị Diệu Thảo* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu điều chế secnidazol điều kiện Việt Nam tiêu chuẩn hóa sản phẩm Phương pháp: Xây dựng qui trình điều chế sernidazol theo bước Tổng hợp 2-methyl-5- nitroimidazol phản ứng nitro hóa 2-methylimidazol Ngưng tụ 2-methylimidazol với propylen oxyd thu secnidazol Xây dựng chuẩn hóa quy trình kiểm nghiệm secnidazol Áp dụng quy trình kiểm nghiệm để định lượng secnidazol tổng hợp với điều kiện khảo sát biệt dược thị trường Việt Nam (Flagentyl 500 mg) Kết quả: Xây dựng tối ưu hóa quy trình điều chế secnidazol Xây dựng tiêu chuẩn cho nguyên liệu secnidazol Kết luận: Từ nguyên liệu rẻ tiền, sẵn có Việt Nam xây dựng qui trình điều chế sernidazol thuốc dùng trị lỵ số bệnh ký sinh trùng Qui trình tối ưu hóa nên đơn giản, phù hợp với điều kiện Việt Nam Sản phẩm sernidazol tổng hợp tiêu chuẩn hóa giúp ích cho việc ổn định qui trình sản xuất ổn định chất lượng sản phẩm Từ khóa: Secnidazol, 2- methylimidazol, 2-methyl-5- nitroimidazol, tối ưu hóa, tiêu chuẩn hóa ABSTRACT STUDY ON THE PREPATION AND STANDARDIZATION OF SECNIDAZOLE Truong Phuong, Tran Thị Truc Thanh, Pham Thi Dieu Thao * Y Hoc TP Ho Chi Minh* Vol 15 - Supplement of No - 2011: 305 - 312 Objective: Study on the process for producing secnidazole in Vietnamese condition Built a standard for analyzing the product Method: Establish the process for the preparation of secnidazole through two steps Step 1: Nitrosation of 2methyl imidazole to get 2-methyl-5- nitroimidazole Step 2: Condensation of 2-methyl-5- nitroimidazole and propylene oxyde to obtain sernidazole Establish the control process of secnidazole Applying the above process for quantification on the product secnidazole and on the special medicine (Flagentyl 500mg) Result: We studied and established the optimal process prepation of secnidazole Setting the standards for the material secnidazole Conclusion: From cheap and available materials such as 2-methyl imidazole, propylene oxide…, we have synthesized secnidazole which is a antidisentery and antiparasite drug.The procedure has been optimized for simplicity and compatibility with Vietnamese conditions The product sernidazole has been standardized for stabilizing the producing process as well as the quality of product Keywords: Secnidazole, 2- methylimidazole, 2-methyl-5- nitroimidazole, optimize, standardization người lành mang mầm bệnh có nơi lên đến 25%, ĐẶT VẤN ĐỀ thành phố Hồ Chí Minh tỷ lệ trung bình Lỵ Amíp tình trạng nhiễm trùng ruột già 8% Đây bệnh nhiễm ký sinh gây tử vong Entamoeba histolitica, bệnh xảy khấp nơi đứng thứ giới sau sốt rét giới với tỷ lệ 10% Ở Việt Nam, tỷ lệ *Bộ mơn Hóa Dược - Khoa Dược - Đại học Y Dược TP HCM Tác giả liên lạc: PGS TS Trương Phương ĐT: 0908553419 Chuyên Đề Dược Khoa Email: phuongnq@hcm.fpt.vn 305 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Secnidazol dẫn chất nitroimidazol, để điều trị bệnh Amíp, Giardia Trichomonas gây Secnidazol có thời gian bán hủy dài nhóm nitroimidazol, lợi hoạt chất này(3) Secnidazol sử dụng từ lâu nhiều biệt dược: Flagentyl, Cedazol đưa vào danh mục thuốc thiết yếu Việt nam lần thứ V Tuy vậy, chưa có cơng trình nghiên cứu tổng hợp secnidazol Việt Nam Nguyên liệu dùng cho kiểm nghiệm Isopropanol, Acetonitril, methanol (Merck,) dùng cho HPLC Bản mỏng silicagel GF254 Secnidazol chuẩn (Aventis) 2- methylimidazol (Acros) tinh khiết phân tích 2-methyl-5- nitroimidazol (Acros) tinh khiết phân tích Trong thông báo kết nghiên cứu tổng hợp secnidazol với hi vọng tạo thêm nguồn nguyên liệu cho công nghiệp Dược Việt Nam Thiết bị Quang phổ kế UV-VIS Shimadzu UV Probe 2550 HPLC Waters 2695 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đầu dò DAD Waters 2614 Đối tượng Màng lọc 0,45 µm (cellulose acétat) Sartorius Tổng hợp xây dựng tiêu chuẩn secnidazol dược dụng, Màng lọc 0,45 µm GHP Acrodisc 13 Cột sắc ký Phenoménex C18 15cm x 4,6 mm, µm Nguyên liệu Nguyên liệu tổng hợp Acid formic, methanol, cloroform, acid sulfuric, acid nitric, acid acetic, amoniac (Trung quốc) tinh khiết hóa học Phương pháp nghiên cứu Tổng hợp secnidazol Quá trình tổng hợp secniazol gồm giai đoạn: - Điều chế 2-methyl-5- nitroimidazol(4) H N CH3 + H2SO4 HNO3 O O N H N CH3 N N Điều chế secnidazol(2) OH O O N H N N CH3 Acid formic O O + CH3 Kiểm nghiệm secnidazol tổng hợp Secnidazol chưa có dược điển nên chưa tiêu chuẩn thức Trong phần chúng tơi tiến hành xây dựng tiêu chuẩn cho sản phẩm sở: 306 O N CH3 N CH3 N Chuyên luận dược điển Việt Nam IV metronidazol qui trình điều chế chất tương tự Các tài liệu tiêu chuẩn hóa thẩm định qui trình kiểm nghiệm Các phân tích qui trình tổng hợp secnidazol Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Nhận xét: tỉ lệ thể tích acid nitric acid sulfuric ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng Tỉ lệ tối ưu khảo sát 2: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tổng hợp 2-methyl-5- nitroimidazol Khảo sát sơ Trong bình cầu hai cổ gắn sinh hàn hồi lưu, cho vào mL acid sulfuric đậm đặc, thêm tiếp 20,5 g 2-methylimidazol Lắc làm lạnh hỗn hợp Chuẩn bị hỗn hợp gồm 40 ml acid nitric 75 ml acid sulfuric Phối hợp từ từ hỗn hợp hai acid vào bình cầu hai cổ (Thao tác tủ hốt làm lạnh phản ứng xảy mãnh liệt) Sau trì nhiệt độ phản ứng khoảng 40oC Ngừng phản ứng sau 7h Trung hòa hỗn hợp sau phản ứng dung dịch amoniac 25% (v/v), thu tủa Tái kết tinh sản phẩm dung dịch methanol - nước (7: 3) Thu 16,6g 2-methyl5-nitro-imidazol, nóng chảy 254-256 oC Hiệu suất 54% Khảo sát tỉ lệ mol 2-methyl imidazol acid nitric Tiến hành theo điều kiện: tỉ lệ mol 2- methyl imidazol acid nitric: 1:2,5; thời gian phản ứng t=7h; tỉ lệ acid nitric acid sulfuric 2: Thay đổi tỷ lệ mol -methyl imidazol acid nitric sau 20,5g: 16ml (1:1); 20,5g:24ml (1:1,5); 20,5g:32ml (1:2); 20,5g: 40ml (1:2,5); 20,5g:48ml(1:3) Bảng Kết khảo sát tỉ lệ mol 2methylimidazol acid nitric Tỉ lệ mol 2methylimidazol HNO3 1: Khối lượng thực tế (g) 3,95 10,86 23,94 25,01 22,32 5,04 11,23 23,09 24,36 23,16 4,58 11,84 24,57 22,43 23,01 1: 1,5 1: 1:2,5 1: Khảo sát tỉ lệ thể tích acid nitric HNO3 aid sulfuric H2SO4 Khối lượng lý thuyết (g) 31,75 Tiến hành theo điều kiện: tỉ lệ mol 2-methylimidazolvà acid nitric HNO3: 1:2,5; thời gian phản ứng t=7h Hiệu suất (%) 12,44 34,20 75,40 78,77 70,29 15,87 35,37 72,72 76,72 72,94 14,43 37,29 77,38 70,65 72,47 Thay đổi tỷ lệ thể tích acid nitric acid sulfuric sau 40ml: 40ml (1:1); 40ml:80ml (1:2); 40ml:120ml (1:3); 80ml:120ml (2:3) Kiểm tra sản phẩm mỏng với hệ dung môi: Cloroform: methanol = 9: phát vết soi UV 254 Bảng Kết khảo sát tỉ lệ thể tích acid nitric acid sulfuric Tỉ lệ thể tích HNO3 H2SO4 1:3 Khối lượng thực tế (g) 9,52 8,79 9,65 Khối lượng lý thuyết (g) Hiệu suất (%) Hiệu suất trung bình (%) 27,69 30,67 30,39 29,58 Chuyên Đề Dược Khoa 1: 2: 16,66 20,31 17,36 19,97 18,01 20,54 31,75 52,47 63,97 54,68 62,89 56,72 64,69 54,62 63,85 1: 18,84 18,30 18,79 59,34 57,65 59,21 58,73 Hiệu suất trung bình 14,25 36,62 75,17 75,38 71,90 (%) Nhận xét: hiệu suất phản ứng phụ thuộc vào tỉ lệ mol 2-methylimidazol acid nitric Từ thực nghiệm trên, tỉ lệ tối ưu khảo sát 1: 2,5 Khảo sát thời gian phản ứng Tiến hành theo điều kiện: Tỉ lệ thể tích acid nitric acid sulfuric 2:3 Tỉ lệ mol 2-methylimidazol acid nitric là: 1:2,5 Thay đổi thời gian: 5h, 7h, 9h, 12h, 15h Bảng Kết khảo sát thời gian phản ứng Thời gian phản ứng (h) 12 15 13,75 19,69 20,64 24,77 20,75 Khối lượng thực tế (g) 11,23 20,63 19,88 25,98 20,56 10,94 18,41 19,37 26,45 19,98 Khối lượng lý thuyết 31,75 (g) 307 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Thời gian phản ứng (h) Nhận xét: Các kết cho thấy tỉ lệ mol 2-methyl-5-nitro-imidazol propylen oxyd có ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng tỉ lệ mol 1:5 cho kết tốt Hiệu suất (%) 12 15 43,31 64,88 65,01 78,02 65,35 35,37 61,83 62,61 81,76 64,76 34,56 57,98 61,01 83,31 62,93 Hiệu suất trung bình 37,73 61,56 62,87 81,03 64,35 (%) Nhận xét: thời gian phản ứng ảnh hưởng đến hiệu suất thời gian tối ưu 12h Điều chế secnidazol Khảo sát sơ Trong bình cầu hai cổ hòa tan 3,1 g 2methyl-5-nitro-imidazol (0,025mol) 15 ml acid formic 85%, làm lạnh dung dịch thu khoảng 14oC Thêm 3,5 ml (0,05mol) propylen oxyd vòng 15 phút Duy trì nhiệt độ hỗn hợp khoảng 14 oC Ngừng phản ứng sau h Thêm vào hỗn hợp phản ứng 20ml nước lạnh Thêm từ từ dung dịch amoniac 25% (pH dung dịch không 8) Tủa tạo thành Rửa tủa với 20 ml nước lạnh sấy khô Tái kết tinh toluen, thu 2,31g secnidazol, nóng chảy 76oC Hiệu suất 15,8% Kiểm tra sản phẩm mỏng với hệ dung môi: Cloroform: methanol = 9: phát vết soi UV 254 Khảo sát thời gian phản ứng Tiến hành theo điều kiện:; dung môi: acid formic; tỉ lệ mol 2-methyl-5-nitroimidazol propylen oxyd 1:5 Thay đổi thời gian phản ứng: 7h, 10, 12, 14h Bảng Kết khảo sát thời gian phản ứng Thời gian phản ứng (h) Khối lượng thực tế (g) 5,98 5,07 4,86 Khối lượng lý thuyết (g) Hiệu suất (%) Hiệu suất trung bình (%) 32,32 27,41 26,27 28,67 10 12 6,21 8,85 5,76 10,05 4,94 10,17 18,5 33,57 47,84 31,14 54,32 26,70 54,97 30,47 52,38 14 7,94 6,13 6,58 42,92 31,14 35,57 36,54 Nhận xét: thời gian tối ưu cho phản ứng tổng hợp secnidazol 12h Khảo sát dung môi Tiến hành theo điều kiện: Thời gian phản ứng t=12h; tỉ lệ mol 2methyl-5-nitro-imidazol propylen oxyd: 1: Khảo sát tỉ lệ mol 2- methyl- 5-nitro imidazol propylen oxyd Thay đổi: Dung môi: acid formic acid acetic Tiến hành theo điều kiện: Thời gian phản ứng t=7h; dung môi: acid formic Bảng Kết khảo sát dung môi Thay đổi tỉ lệ mol 2- methyl- 5-nitro imidazol propylen oxyd: 1: 2, 1: 3, 1: 5, 1,7 Bảng Kết khảo tỉ lệ mol 2- methyl- 5nitro imidazol propylen oxyd Tỉ lệ mol 2- methyl- 5nitro imidazol propylen 1: oxyd 2,31 3,57 Khối lượng thực tế (g) 1: 1: 1:7 3,12 4,35 6,89 7,12 5,67 5,32 2,94 2,99 7.58 5,21 12,48 19,29 15,89 15,87 18,5 16,86 37,24 30,6 23,51 38,49 28,75 16,16 40,97 28,1 18,84 38,9 29,15 Khối lượng lý thuyết (g) Hiệu suất (%) Hiệu suất trung bình (%) 308 Dung mơi Acid acetic 2,18 1,95 Khối lượng thực tế (g) Acid formic 8,85 10,05 1,75 Hiệu suất (%) Hiệu suất trung bình (%) 10,17 18,5 Khối lượng lý thuyết (g) 11,78 10,54 9,46 10,59 47,84 54,32 54,97 52,38 Nhận xét: acid formic hòa tan nguyên liệu hoàn toàn nên cho kết tốt Xây dựng tiêu chuẩn secnidazol Cơ sở để xây dựng tiêu chuẩn cho secnidazol chuyên luận dược điển Việt Nam IV metronidazol(5) Sau tiến hành kiểm nghiệm giời hạn tạp chất kết cho thấy Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 secnidazol tổng hợp đạt tất tiêu chuẩn qui định cho metronidazol chúng tơi chọn tiêu tương tự metronidazol (trừ tạp chất liên quan) OH O O N CH3 N CH3 N C7 H11N3O3 P.t.l: 185,18 Secnidazol 2-Dimethyl-5-nitro-1Himidazol-1-ethanol; phải chứa từ 97,0 đến 101,0% C7 H11N3O3, tính theo chế phẩm làm khơ Tính chất Bột kết tinh màu trắng vàng Khó tan nước, aceton, ethanol 96% methylen clorid Định tính A Phổ hồng ngoại chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại secnidazol chuẩn (ĐC) B Nhiệt độ nóng chảy:74- 76oC Độ màu sắc dung dịch Hòa tan 1,0 g chế phẩm dung dịch acid hydrocloric M (TT) pha lỗng thành 20 ml với dung mơi Dung dịch thu không đục hỗn dịch chuẩn đối chiếu số II có màu khơng đậm dung dịch màu mẫu Tạp chất liên quan Xác định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (Xem phần định lượng) Trên mẫu tổng hợp sắc ký đồ cho 1pic cò thời gian lưu trùng với pic secnidazol chuẩn Nghiên cứu Y học Mất khối lượng làm khô Không 0,5% (1,000 g; 100 – 105 oC; giờ) Tro sulfat Không 0,1% Dùng 1,0 g chế phẩm Định lượng Trong phần tiến hành khảo sát phương pháp định lượng secnidazol HPLC Khảo sát điều kiện phân tích - Cân xác khoảng 2,5 mg secnidazol 2,5 mg metronidazol làm mẫu chuẩn Phối hợp đồng lượng vào bình định mức 20ml, thêm methanol đến khoảng 15ml, lắc bổ sung đến vừa đủ 20ml Nồng độ dung dịch 125 mcg/ml - Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 µm - Thử nghiệm hệ dung môi Bảng Các hệ sắc ký thử nghiệm Thử nghiệm Pha động Thành phần ACN/H2O MeOH/ H2O MeOH/ H2O MeOH/ H2O Tỉ lệ 50/50 30/70 40/60 50/50 Nhận xét: pha động thử nghiệm có độ phân giải thời gian phân tích tốt, Kiểm tra tính tương thích hệ HPLC Cân xác khoảng 2,5 mg secnidazol 2,5 mg metronidazol làm mẫu chuẩn Cho vào bình định mức 20ml, thêm methanol đến khoảng 15 ml, lắc bổ sung đến vừa đủ 20 ml (dung dịch mẫu chuẩn) Cân xác khoảng 2,5 mg secnidazol 2,5 mg metronidazol làm mẫu thử Cho vào bình Kim loại nặng Không 20 phần triệu định mức 20 ml, thêm methanol đến khoảng 15 Lấy 1,0 g chế phẩm tiến hành thử theo phương pháp Dùng ml dung dịch chì mẫu 10 phần triệu (TT) để chuẩn bị mẫu đối chiếu dịch mẫu thử).Lọc dung dịch qua màng lọc Chuyên Đề Dược Khoa ml, lắc bổ sung đến vừa đủ 20 ml (dung 0,45 µm 309 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Tiêm lần dung dịch mẫu chuẩn gồm chuẩn nội (metronidazol) chuẩn ngoại (secnidazol) nồng độ 125 mcg/ mL Tính CV% thông số kỹ thuật Tiêm lần dung dịch mẫu thử gồm chuẩn nội (metronidazol) sản phẩm tổng hợp (secnidazol) nồng độ 125 mcg/ mL Tính CV% thông số kỹ thuật Bảng Kết kiểm tra tính tương thích hệ HPLC mẫu chuẩn Lần tiêm Trung bình SD CV% tR1 tR2 (Secnidazol (Metronidazol) mẫu chuẩn) 3,356 3,352 3,345 3,347 3,348 3,345 3,349 0,004 0,119 5,145 5,135 5,139 5,132 5,136 5,129 5,136 0,005 0,099 tR1/tR2 0,6523 0,6528 0,6509 0,6522 0,6519 0,6522 0,6520 0,001 0,088 Spic1 Spic2(Secnidazol (Metronidazol) mẫu chuẩn) 4889423 4905022 4924126 4957212 4948613 4909326 4922287 24021,88 0,488 3753659 3804402 3765175 3781286 3797008 3769142 3778445 17811,08 0,471 Spic1/Spic2 0,7677 0,7756 0,7646 0,7628 0,7673 0,7678 0,7676 0,004 0,522 Bảng Kết kiểm tra tính tương thích hệ HPLC mẫu thử Lần tiêm Trung bình SD CV% tR1 tR3 (Metronidazol) (Secnidazol mẫu thử) 3,357 3,346 3,359 3,348 3,352 3,355 3,353 0,005 0,139 5,145 5,132 5,142 5,135 5,140 5,151 5,141 0,006 0,122 Kết bảng cho thấy mẫu chuẩn mẫu thử thoả mãn yêu cầu tính tương thích hệ thống với CV% t0,05(N-2)=2,5706: b có ý nghĩa thống kê Vậy: # = 0,0069x - # Thử nghiệm tính tương thích phương trình hồi quy (phép kiểm Fisher) F=189405 > F (1,5)=6,6079: phương trình hồi quy tương thích Nhận xét: kết phân tích thống kê cho thấy tỉ lệ diện tích pic nồng độ có tương quan tuyến tính Vậy, quy trình thỏa mãn yêu cầu tính tuyến tính quy trình phân tích khoảng tuyến tính 25 – 250 µg/ L Độ tin cậy Cân xác khoảng 62,5 mg secnidazol mẫu chuẩn 62,5 mg metronidazol mẫu chuẩn Phối hợp đồng lượng vào bình định mức 50ml, thêm methanol đến khoảng 45 ml, lắc đều, S1 S2 Metronidazol Secnidazol 4292288 4515363 4432980 4488403 4403693 4428716 3492846 3670038 3606355 3659012 3583456 3599116 S1 /S2 0,8137 0,8128 0,8135 0,8152 0,8137 0,8127 Hàm C lượng (µg/ mL) (g/100g) 117,9347 94,3477 117,7955 94,2364 117,9027 94,3221 118,1471 94,5176 117,9332 94,3465 117,7793 94,2234 4426907 3601804 0,8136 117,9154 94,3323 77855,7 63506 1,75869 1,76317 0,0009 0,1121 0,1322 0,1121 0,1058 0,1121 Nhận xét: phương pháp có độ lặp lại tốt CV% < 2% Độ - Chuẩn bị dung dịch mẹ secnidazol mẫu thử, có nồng độ 500 µg/ mL - Từ dung dịch mẹ này, tiến hành pha dung dịch có nồng độ secnidazol 100 µg/ ml nồng độ metronidazol 125 µg /ml - Chuẩn bị bình định mức có nồng độ senidazol (tổng hợp) 100 µg /mL, nồng độ secnidazol (mẫu chuẩn) tương ứng 80, 100, 120 µg/ml nồng độ metronidazol (mẫu chuẩn) 125 µg/ mL (3 bình định mức cho nồng độ secnidazol mẫu chuẩn) - Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 µm - Tiêm mẫu thử lần địều kiện tương tự - Tính độ hồi phục mẫu thử Bảng 12 Kết độ Mức độ 80% S1 S2 Metronidazol Secnidazol 4060158 4044881 4109184 5018731 5021409 5060533 Chuyên Đề Dược Khoa C (µg/ mL) 179,14 179,92 178,48 Chuẩn thêm vào Chuẩn phát (µg/ mL) (µg/ mL) 80 79,12 79,87 78,43 Đô hồi phục (%) 98 99,84 98,04 311 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Mức độ 100% 120% S1 S2 Metronidazol Secnidazol 4077681 4049325 4060203 4048086 4068078 4050350 5588178 5593905 5600776 6097835 6169658 6113034 C (µg/ mL) 198,61 200,21 199,92 218,31 219,8 218,73 Chuẩn thêm vào Chuẩn phát (µg/ mL) (µg/ mL) 100 120 98,56 100,16 99,87 118,26 119,75 118,68 Đô hồi phục (%) 98,56 100,16 99,87 98,55 99,79 98,9 Nhận xét:Theo ICH, quy trình thỏa mãn yêu cầu độ quy trình phân tích -Hàm lượng secnidazol chế phẩm Flagentyl 100,43 g/ 100g, Độ đặc hiệu Vậy, chế phẩm đạt tiêu chuẩn hàm lượng Chuẩn bị dung dịch mẫu thử tiến hành tiêm mẫu vào hệ thống sắc ký HPLC Thêm vào dung dịch mẫu thử lượng secnidazol mẫu chuẩn, tiếp tục tiến hành HPLC Nhận xét: bước sóng 318 nm, phổ mẫu chuẩn mẫu thử có pic thời gian lưu, pic metronidazol pic thứ secnidazol Sau thêm chuẩn, diện tích pic thứ tăng lên Phổ dung mơi pha động khơng có pic thời gian lưu metronidazol secnidazol Vì vậy, quy trình thỏa mãn yêu cầu đặc hiệu quy trính phân tích Bảng 4.13 kết định lượng secnidazol tổng hợp secnidazol Flagentyl Hàm C lượng (µg/ mL) Metronidazol Secnidazol (g/100g) Mẫu chuẩn 4104623 3512259 0,8557 124,01 99,21 Secnidazol 4223859 3541914 0,8385 121,53 97,223 tổng hợp Secnidazol 3868405 3350851 0,8662 125,54 100,43 Flagentyl S1 S2 S1 /S2 Nhận xét: KẾT LUẬN Xây dựng qui trình điều chế sernidazol theo bước: Tổng hợp 2-methyl-5- nitroimidazol phản ứng nitro hóa 2-methylimidazol Ngưng tụ 2-methylimidazol với propylen oxyd thu sernidazol Xây dựng chuẩn hóa quy trình kiểm nghiệm secnidazol Áp dụng quy trình kiểm nghiệm để định lượng secnidazol tổng hợp với điều kiện khảo sát biệt dược thị trường Việt Nam (Flagentyl 500 mg) TÀI LIỆU THAM KHẢO - Sau tái kết tinh, hàm lượng secnidazol từ quy trình tổng hợp 97.23g/ 100g 312 Bộ Y Tế, Dược Điển Viêt Nam IV, chuyên luận Metronidazol, p 405 Claude JEANMART, Mayer Naoum MESSER, New process for the preparation of 5-nitroimidazole derivatives, GB1278757, 1971 Escobedo A., Canete R., Gonzlez M E., Pareja A., Cimerman S and Almirall P (2003), “A randomized trial comparing mebendazole and secnidazole for the treatment of giardiasis”, Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 97 (5), 499 – 504 Nivikow S S., Khmel’nitskii L I., Lebedev O V., Seevast’yanova V V,, and Epishina l V (1970), “Nitration of imidazole with various nitrating agents”, Khimiya Geterotsiklicheskikh Soedinenii, (4), 503 – 507 Rhơne-Poulenc, Procd de prparation de drivs du nitro-5 imidazole, FR2079879A5, 1971 Chuyên Đề Dược Khoa ... khiết hóa học Phương pháp nghiên cứu Tổng hợp secnidazol Quá trình tổng hợp secniazol gồm giai đoạn: - Điều chế 2-methyl-5- nitroimidazol(4) H N CH3 + H2SO4 HNO3 O O N H N CH3 N N Điều chế secnidazol( 2)... -Hàm lượng secnidazol chế phẩm Flagentyl 100,43 g/ 100g, Độ đặc hiệu Vậy, chế phẩm đạt tiêu chuẩn hàm lượng Chuẩn bị dung dịch mẫu thử tiến hành tiêm mẫu vào hệ thống sắc ký HPLC Thêm vào dung... * 2011 Nghiên cứu Y học Tiêm lần dung dịch mẫu chuẩn gồm chuẩn nội (metronidazol) chuẩn ngoại (secnidazol) nồng độ 125 mcg/ mL Tính CV% thơng số kỹ thuật Tiêm lần dung dịch mẫu thử gồm chuẩn nội