Đang tải... (xem toàn văn)
Mô tả đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm, kết quả phân tích steroid niệu của 12 bệnh nhân thiếu hụt enzym 5α-reductase type 2 được chẩn đoán dựa trên kỹ thuật định lượng steroid niệu bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS).
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ĐỊNH LƯỢNG STEROID NIỆU BẰNG GC-MS TRONG CHẨN ĐỐN RỐI LOẠN PHÁT TRIỂN GIỚI TÍNH DO THIẾU ENZYM 5α-REDUCTASE TYPE Trần Thị Ngọc Anh*, Trần Thị Chi Mai**, Nguyễn Việt Hoa*, Trần Minh Điển***, Vũ Chí Dũng***, Greaves F Ronda**** TĨM TẮT Đặt vấn đề: Thiếu enzym 5α-reductase type hai nguyên nhân thường gặp gây rối loạn phát triển giới tính nam giới cần chẩn đoán sớm Mục tiêu: Mô tả đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm, kết phân tích steroid niệu 12 bệnh nhân thiếu hụt enzym 5α-reductase type chẩn đoán dựa kỹ thuật định lượng steroid niệu phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) Phương pháp nghiên cứu: Định lượng steroid mẫu nước tiểu ngẫu nhiên 30 bệnh nhân mắc rối loạn phát triển giới tính năm 2016 - 2018 kỹ thuật GC-MS Kết quả: 12 bệnh nhân nam chẩn đoán thiếu hụt enzym 5α-reductase type kỹ thuật định lượng steroid niệu với đặc trưng tỷ lệ 5α-THF/THF thấp Các dấu hiệu lâm sàng điển hình bệnh nhân 5α-reductase type dương vật nhỏ, lỗ đái thấp thể nặng, bìu chẻ đôi Kết luận: Lần Việt Nam, kỹ thuật định lượng steroid niệu GC-MS giúp chẩn đoán 12 bệnh nhân mắc rối loạn phát triển giới tính thể thiếu enzym 5α-reductase type Từ khóa: Rối loạn phát triển giới tính, thiếu 5α-reductase type 2, GC-MS ABSTRACT APPLICATION OF GC-MS URINE STEROID METABOLOME IN DIAGNOSIS OF SEXUAL DEVELOPMENT DUE TO DEFICIENCY OF ENZYME 5α-REDUCTASE TYPE Tran Thi Ngoc Anh, Tran Thi Chi Mai, Nguyen Viet Hoa, Tran Minh Đien, Vu Chi Dung, Greaves F Ronda * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 3- 2019: 445-451 Background: The deficiency of enzyme 5α-reductase type is one of the two most common reasons causing 46, XY disorders of sexual development (DSD) in man which needs to be early diagnosed Objectives: To describe clinical signs, biochemical and urinary steroid profiling of twelve patients with 5αreductase type deficiency diagnosed by gas chromatography- mass spectrometry (GC-MS) urine steroid analysis Materials and methods: Random urine samples of 30 DSD patients in the period 2016-2018 were quantitated their steroid composition by GC-MS The clinical and biochemical features of the twelve patients were also observed and described Results: Among patients with DSD, twelve were diagnosed with 5α-reductase type deficiency by GC-MS urinary steroid analysis The 5α-THF/THF ratios of these patients were low The clinical signs include: bifid scrotum, hypospadias servere, micropenis The characteristic pattern of GC-MS urine steroid profiling helped to * Bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức, *** Bệnh viện Nhi Trung Ương, Tác giả liên lạc: BS Trần Thị Ngọc Anh, ĐT: 0904395444, ** Trường Đại học Y Hà Nội, **** Đại học RMIT – Australia Email: ngocanhbm@gmail.com Hội Nghị Khoa Học Công Nghệ Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch 445 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 confirm the diagnosis of 5α-reductase type deficiency in these twelve DSD patients Conclusions: For the first time in Viet Nam, twelve patients with DSD were diagnosed with 5α-reductase type deficiency by GC-MS urine steroid analysis Keywords: Disorders of sexual development (DSD), 5α-reductase type deficiency, GC-MS triển giới tính số bệnh nhân ĐẶT VẤN ĐỀ chẩn đoán xác định thiếu enzym 5αEnzym 5α-reductase xúc tác phản ứng khử reductase type nhờ gửi mẫu làm phân tích gen liên kết đơi C4-C5 vòng A nhân sterol nước ngồi số chất có testosterone Mục tiêu thành 5α-dihydrotestosterone (5α-DHT) - chất Mô tả đặc điểm lâm sàng, xét nghiệm kết có tác dụng mạnh testosterone 10 lần phân tích steroid niệu 12 bệnh nhân mắc thụ thể androgen Thiếu enzym 5αthiếu hụt enzym 5α-reductase type phát reductase type bệnh lý di truyền đột biến định lượng steroid niệu theo phương gen SRD5A2 nhiễm sắc thể số (2p23), gây pháp GC-MS giảm phần hồn tồn hoạt tính enzym 5α-reductase Đặc điểm lâm sàng bật ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU bệnh nhân thiếu 5α-reductase type dấu Đối tượng nghiên cứu hiệu nữ hóa trẻ nam mang nhiễm sắc thể 46, Nhóm bệnh XY phận sinh dục không phân biệt Tiêu chuẩn lựa chọn nam nữ với dương vật nhỏ, bìu chẻ đơi, lỗ đái thấp, ẩn tinh hồn(5) Thiếu enzym 5α-reductase Bệnh nhân nam rối loạn phát triển giới tính type bệnh gặp, số nước có tần xuất theo phân loại Chicago 2006(6) gồm bệnh nhân mắc cao Dominica, Thổ Nhĩ Kỳ phận sinh dục không rõ ràng, không phân Lebanon, Hy Lạp(8) Định lượng steroid niệu biệt nam nữ; bệnh nhân bất thường giải GC-MS sử dụng giới phẫu quan sinh dục ngồi; bệnh tiêu chuẩn chẩn đốn quan trọng thiếu hụt nhân phát triển khơng hồn tồn giải phẫu bẩm sinh enzym tham gia tổng hợp hormon tuyến sinh dục steroid có thiếu 5α-reductase type 2(5,7) Tiêu chuẩn loại trừ Phân tích đột biến gen SRD5A2 sử dụng để Bệnh nhân nữ, bệnh nhân chẩn đoán tăng khẳng định thiếu hụt 5α-reductase type 2(4,5) Một sản thượng thận bẩm sinh số ca lâm sàng thiếu enzym 5α-reductase type công bố với triệu chứng thường gặp dương vật nhỏ, lỗ đái thấp, bìu chẻ đơi, ẩn tinh hồn, nữ hóa(4,5,8) Các đặc trưng định lượng steroid niệu GC-MS công bố bệnh nhân thiếu 5α-reductase type tỷ lệ 5αTHF/THF (THF: tetrahydrocortisol), An/Et (Androsterone/Etiocholanolone), 11-OH An/11OH Et 5α-THB/THB (THB: tetrahydrocorticosterone) thấp so với giá trị tham chiếu(3,5,9) Tại bệnh viện Hữu nghị Việt Đức bệnh viện Nhi trung ương, có nhiều bệnh nhân mắc tăng sản thượng thận bẩm sinh rối loạn phát 446 Thời gian lấy mẫu Từ tháng 1/2016 đến 5/2018 Địa điểm lấy mẫu Khoa Nội tiết- Chuyển hóa - Di truyền bệnh viện Nhi Trung ương khoa phẫu thuật Nhi – bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức Nhóm chứng 103 trẻ nam khỏe mạnh cộng đồng có độ tuổi từ tháng đến 12 tuổi, tương ứng với nhóm bệnh để xây dựng khoảng tham chiếu steroid niệu giúp chẩn đoán thiếu 5α-reductase type (sử dụng Bảng 3) Hội Nghị Khoa Học Công Nghệ Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Mẫu bệnh phẩm Mẫu nước tiểu ngẫu nhiên, thể tích >3 mL bảo quản -200C đến phân tích Phương pháp nghiên cứu Mơ tả cắt ngang hàng loạt ca bệnh Thiết kế nghiên cứu Thăm khám lâm sàng triệu chứng lâm sàng đặc điểm giới tính (bộ phận sinh dục) Làm xét nghiệm nhiễm sắc thể Định lượng FSH, LH, testosterone hệ thống miễn dịch tự động Roche Cobas e601 Định lượng steroid niệu cho tất mẫu nước tiểu trẻ khỏe mạnh bệnh nhân mắc rối loạn phát triển giới tính Xây dựng khoảng tham chiếu steroid niệu cho trẻ em bình thường tỷ lệ 5α-THF/THF, An/ Et từ 103 trẻ nam khỏe mạnh Trong THF, 5α-THF sản phẩm chuyển hóa nước tiểu cortisol, An Et sản phẩm chuyển hóa testosterone 5αdihydrotestosterone nước tiểu So sánh kết bệnh nhân nam, mắc rối loạn phát triển giới tính với khoảng tham chiếu, phát trường hợp có tỷ lệ 5α-THF/THF, tỷ lệ An/ Et thấp trẻ có nguy mắc thiếu hụt 5α-reductase type (theo nghiên cứu O.K Chan cộng sự)(4,5) Tách chiết DNA phân tích đột biến gen SRD5A2 để khẳng định chẩn đốn (Hiện bệnh nhân phân tích gen SRD5A2, 7/7 bệnh nhân có đột biến gây bệnh) Trang thiết bị Hệ thống GC-MS Agilent Tủ lạnh, thiết bị làm khơ khí nitơ, tủ ấm, trang thiết bị phòng xét nghiệm Hóa chất: enzym glucuronidase, TMSI, methoxyamin, vitamin C, acetat, HCl, Iso-octan hãng Merck, Sigma Aldrich, Kura Quy trình định lượng steroid niệu GC-MS Thủy phân steroid niệu liên hợp enzym glucuronidase arylsulphatase Tách chiết steroid tự cột Bond-Elut C18 Làm khơ Nghiên cứu Y học hồn tồn dung dịch sau tách chiết khí ni tơ Tạo dẫn xuất oxim methylsilyl methoxyamine/pyridine 3% Tạo dẫn xuất trimethylsylil trimethylsylin imidazol (TMSI) Tách chiết mẫu steroid Iso-octan, mẫu phân tích máy GC-MS 7890A hãng Agilent Xây dựng đường chuẩn từ mẫu chuẩn steroid phân tích mẫu bệnh, áp dụng phần mềm Chem Station để tính nồng độ steroid niệu cở mẫu bệnh dựa vào đường chuẩn Kỹ thuật có độ lặp lại CV đạt 1,01-7,72(%) mẫu nước tiểu bình thường 0,78-9,2(%) mẫu bệnh lý Độ tái lặp CV đạt 10,16-14,53(%) mẫu bình thường 12,51-16,95(%) mẫu bệnh lý Giới hạn định lượng 0,05 - 0,27(µmol/L) độ thu hồi sản phẩm chuyển hoá steroid đạt 90-115(%)(3) Kết định lượng steroid niệu tính đơn vị µmol/L µmol/mmol creatinine Đạo đức y học Đề tài hội đồng đạo đức y học trường Đại học Y Hà Nội thông qua, đồng ý người bệnh/gia đình người bệnh Xử lý số liệu Bằng phần mềm thống kê Excel, SPSS, tính giá trị khoảng tham chiếu tỷ lệ chẩn đốn 5αTHF/THF An/Et Tính giá trị 5α-THF/THF An/Et bệnh nhân so sánh với khoảng tham chiếu xây dựng từ 103 trẻ nam bình thường KẾT QUẢ Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm bệnh nhân thiếu 5α-reductase type Trong số 30 bệnh nhân rối loạn phát triển giới tính làm định lượng steroid niệu có 12 bệnh nhân nghi ngờ mắc thiếu enzym 5-reductase type có đặc điểm lâm sàng thể Bảng 12/12 bệnh nhân nam có nhiễm sắc thể 46, XY, không phát bất thường mặt nhiễm sắc thể Dấu hiệu lâm sàng không phân biệt nam nữ từ sinh khiến 6/12 bệnh nhân cho nữ Hiện tại, bệnh nhân có dương vật nhỏ nhiều so Hội Nghị Khoa Học Công Nghệ Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch 447 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học với tuổi, bìu chẻ đôi, lỗ đái thấp gốc dương vật, 1/12 bệnh nhân ẩn tinh hoàn bên (bệnh nhân số 4) Bốn bệnh nhân anh em hai gia đình, bệnh nhân số 10 hai anh em ruột, bệnh nhân số anh em ruột, bệnh nhân lại gia đình có chị gái, em gái khơng phát bất thường rối loạn phát triển giới tính Hai bệnh nhân 11 12 chưa xuất dấu hiệu dậy 13 tuổi Nồng độ FSH 12/12 bệnh nhân giới hạn bình thường (Bảng 2) Kết định lượng steroid niệu GC-MS 12/12 bệnh nhân có tỷ lệ 5α-THF/THF thấp khoảng tham chiếu (Bảng 3) Tỷ lệ An/Et thấp bệnh nhân có độ tuổi 6-13, tỷ lệ An/Et không xác định bệnh nhân tuổi nồng độ An Et giới hạn định lượng Bệnh nhân số chưa làm xét nghiệm Nồng độ testosterone LH cao bệnh nhân số Bảng 1: Đặc điểm lâm sàng bệnh nhân thiếu 5α-reductase type Bệnh Họ tên nhân Đỗ Đăng Qu Nguyễn Gia B Nguyễn Viết H Phạm Thanh Ph Đinh Xn C Lê Cơng Trí Ngh Trần Nguyễn H Đỗ Tiến Thg Đỗ Tiến Th 10 Trần Anh V 11 Nguyễn Đức A 12 Vi Thị Th NST 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY 46, XY Thời điểm Lâm sang Thời điểm có dấu hiệu GC-MS Khi sinh Ngoại hình nam, dương vật nhỏ 0,5cm, lỗ đái thấp tháng Khi sinh Dương vật