Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật strip assay và cộng hưởng từ trong chẩn đoán và theo dõi điều trị bệnh thalassemia

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thalassemia (tan máu bẩm sinh) thuộc nhóm bệnh rối loạn tổng hợp huyết sắc tố, bệnh di truyền phổ biến giới với ước tính khoảng 7% dân số mang gen bệnh [1] Bệnh gây đột biến gen quy định tổng hợp chuỗi hemoglobin- thành phần quan trọng tạo nên huyết sắc tố Bệnh dẫn đến cân cấu tạo chuỗi hemoglobin, làm biến đổi thành phần huyết sắc tố dẫn tới tượng vỡ hồng cầu (tan máu), gây tình trạng thiếu máu Mức độ phổ biến bệnh tùy thuộc vào quốc gia, khu vực Theo Tổ chức y tế giới, bệnh huyết sắc tố ảnh hưởng tới 71% số nước giới [2] Hàng năm có khoảng 330.000 trẻ sinh bị bệnh (trong 83% hồng cầu hình liềm 17% bệnh Thalassemia) [2],[3] Bệnh thalassemia liên quan đến nguồn gốc dân tộc, phân bố khắp toàn cầu song có tính địa dư rõ rệt, thường gặp vùng Địa Trung Hải, khu vực Trung Đông Đông Nam Á [1],[3],[4] Gen tổng hợp chuỗi alpha nằm nhiễm sắc thể số 16, gen tổng hợp chuỗi beta nằm nhiễm sắc thể số 11 Đột biến xảy vị trí đoạn ADNA tùy mức độ dạng đột biến mà gây hậu giảm không tổng hợp chuỗi globin tương ứng [1],[3],[5] Đột biến chuỗi beta thường đột biến điểm với khoảng 200 đột biến ; đột biến gen alpha thường đột biến đoạn đột với khoảng 300 đột biến [3] Việc kết hợp nhiều loại đột biến người làm kiểu hình bệnh phong phú, từ người mang gen tới người bị bệnh thể nhẹ, thể nặng hay nặng…[5],[6] Người bệnh mang nhiều bệnh lý huyết sắc tố kết hợp với thalassemia, thể kết hợp beta HbE, alpha HbE, alpha beta… [5],[6] Trong năm gần đây, phát triển sinh học phân tử góp phần tích cực để chẩn đốn kiểu đột biến gen giúp công tác tư vấn, quản lý nguồn gen phòng bệnh ngày tốt Những kỹ thuật dựa nguyên lý PCR (Polymerase Chain Reaction – phản ứng tổng hợp chuỗi) ngày cải tiến ứng dụng rộng rãi chẩn đoán bệnh, chẩn đốn trước sinh [7] Trong đó, phương pháp PCR dùng strip essay sử dụng nhiều quốc gia, phát 21 đột biến gen α-blobin 22 đột biến gen β-globin phổ biến khu vực Đông Nam Á [7],[8],[9] Đây phương pháp có nhiều ưu điểm chưa nghiên cứu ứng dụng rộng rãi nước ta Đối với bệnh nhân thalassemia, hậu nặng nề dư thừa sắt, lâu dài dẫn đến biến chứng mang tính hệ thống nhiều quan tim, gan, tuyến nội tiết Theo chuyên gia Liên đoàn Thalassemia quốc tế tải sắt nguyên nhân gây nên 70% tử vong bệnh nhân thalassemia [10] Những phác đồ thải sắt phổ biến sử dụng deferipron, desferoxamin, deferaxirox giúp cải thiện kiểm sốt tình trạng thải sắt bệnh nhân thalassemia [10],[11] Để theo dõi hiệu đánh giá tình trạng thải sắt, người ta thường sử dụng xét nghiệm định lượng ferritin huyết Tuy nhiên, xét nghiệm khơng đánh giá xác tình trạng ứ sắt nội tạng gan, tim [10],[11],[12] Những năm gần đây, nhiều nước giới ứng dụng kỹ thuật cộng hưởng từ (Magnetic Resonance Imaging –MRI) để đánh giá tình trạng thải sắt Đây kỹ thuật có nhiều ưu điểm, đặc biệt khơng xâm phạm, khơng dùng tia X, có khả ứng dụng rộng rãi sở có máy chụp cộng hưởng từ [11],[13],[14],[15], [16] Tuy nhiên, nước ta chưa có nhiều cơng trình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật chẩn đốn theo dõi tình trạng tải sắt bệnh nhân thalassemia, bệnh nhân có truyền máu Theo Liên đồn Thalassemia Thế giới, thalassemia bệnh phòng (preventable) chữa (treatable) [1] Chính thế, việc nghiên cứu, ứng dụng kỹ thuật tiên tiến chẩn đoán, theo dõi điều trị thalassemia vô quan trọng cấp thiết, đặc biệt nước ta bệnh chưa có xu hướng kiểm sốt Chính lý đó, chúng tơi thực đề tài: "Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật strip assay cộng hưởng từ chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh thalassemia" với hai mục tiêu: Phát đột biến gen globin kỹ thuật strip assay Ứng dụng kỹ thuật cộng hưởng từ gan tim để theo dõi điều trị tải sắt bệnh nhân thalassemia CHƯƠNG TỔNG QUAN CHƯƠNG 1Bệnh thalassemia CHƯƠNG 2Đặc điểm dịch tễ học bệnh thalassemia CHƯƠNG 3Khái niệm Thalassemia (còn biết với tên “Bệnh thiếu máu vùng biển” hay “bệnh thiếu máu Cooley”) phát Thomas B Cooley vào năm 1925 [3] Đây bệnh thiếu máu tan máu di truyền, giảm hẳn tổng hợp loại chuỗi globin Tuỳ theo thiếu hụt tổng hợp chuỗi alpha (α), beta (β), mà có tên gọi α-thalassemia, β-thalassemia [3],[5],[6] CHƯƠNG 4Dịch tễ Thalassemia rối loạn di truyền phổ biến giới, bệnh liên quan đến nguồn gốc dân tộc, phân bố khắp toàn cầu song có tính địa dư rõ rệt, bệnh thường gặp vùng Địa Trung Hải, khu vực Trung Đông, Đông Nam Á Bắc Phi Theo báo cáo Liên đoàn Thalassemia quốc tế - 2007, số người mang gen bệnh thalassemia chiếm khoảng 7% dân số giới mang Ở Đông Nam Á, tỷ lệ mang gen bệnh thalassemia cao, 30-40% bị αthalassemia, 1-9% bị β-thalassemia; 50-60% bị HbE vùng biên giới Thái Lan, Lào Campuchia [4] Tỷ lệ thalassemia Quảng Đông (Trung Quốc) 11,07% [17], Quảng Tây 19,8% [18] Ở Việt Nam, số nghiên cứu từ năm 2010 đến cho thấy tỷ lệ mang gen thalassemia từ 3,5-28% tùy dân tộc khu vực [19],[20],[21] Từ đó, thấy thalassemia thực bùng nổ Việt Nam CHƯƠNG 5Cơ chế bệnh sinh CHƯƠNG 6Rối loạn tổng hợp huyết sắc tố (Hemoglobin – Hb) Hemoglobin (Hb) thành phần chủ yếu hồng cầu, chiếm 28% trọng lượng hồng cầu, tương ứng 14,6g tromg 100 ml máu toàn phần Mỗi phân tử Hb có tiểu đơn vị, tiểu đơn vị gồm chuỗi globin nhân hem, sắc tố chứa sắt hóa trị (+2) Có nhiều loại globin, thuộc hai họ (họ alpha khơng alpha),mỗi loại có số lượng trình tự acid amin đặc trưng, chuỗi họ alpha (α ) là: α ξ (zeta), chuỗi α có 141 axit amin có cấu trúc gần giống nhau; chuỗi họ không α là: beta (β), delta (δ), gamma (γ) epxilon (ε), chuỗi β có 146 axit amin Mỗi phân tử Hb bình thường tạo hai chuỗi họ αglobin hai chuỗi không α globin với tỷ lệ cân Có nhiều loại Hb khác tạo nên từ chuỗi globin khác nhau, có khả gắn kết vận chuyển oxy khác tùy theo giai đoạn trưởng thành thể [3], [6],[22],[23] Sự tổng hợp chuỗi globin gen quy định Tổn thương gen làm giảm tổng hợp chuỗi globin Tổn thương gen  globin làm giảm tổng hợp chuỗi  globin dẫn đến thừa chuỗi không  (là chuỗi   globin), chuỗi thừa trùng hợp với tạo Hb bất thường Hb Bart’s (4) HbH (4) Tổn thương gen  globin làm giảm tổng hợp chuỗi  globin, bên cạnh đó, tăng hoạt động trở lại gen  globin tăng hoạt động gen  globin (ở trẻ sau đời), chuỗi kết hợp với chuỗi  globin tạo HbF (22), HbA2 (22) Khả vận chuyển oxy Hb bất thường dẫn đến thiếu oxy tổ chức [3],[5],[6],[10] CHƯƠNG 7Sinh hồng cầu không hiệu lực Giảm tổng hợp chuỗi  globin làm thừa chuỗi -globin ngược lại Các chuỗi globin thừa lắng đọng màng hồng làm tổn thương gây vỡ hồng cầu Chuỗi α globin tự khơng thể tạo thành phân tử huyết sắc tố hồn chỉnh, bị kết tủa tạo thành thể vùi tế bào tiền thân dòng hồng cầu giai đoạn tổng hợp huyết sắc tố Những thể vùi lớn làm phá huỷ nguyên hồng cầu, gây sinh hồng cầu không hiệu lực tất thể β-thalassemia Trong thể nặng, phần lớn tế bào đầu dòng hồng cầu bị phá huỷ tuỷ xương [3],[10] CHƯƠNG 8Tan máu Cơ chế phá huỷ hồng cầu lắng đọng chuỗi globin hình thành hemichrome từ chuỗi globin dư thừa gây phá huỷ cấu trúc màng hồng cầu thoái giáng chuỗi α-globin, ε-globin tự do, hem, hemin (oxy hoá heme) ion sắt tự đóng vai trò quan trọng phá huỷ màng hồng cầu Chuỗi globin tự kết hợp với protein màng hồng cầu làm thay đổi cấu trúc chức màng hồng cầu làm hồng cầu dễ bị đại thực bào bắt giữ hệ liễn võng [3],]10] Giảm chuỗi globin (β+) β- Khơng có chuỗi globin (β0) β- Thừa chuỗi α- globin Kết tủa nguyên HC tủy xương Tổn thương màng HC máu ngoại vi Phá hủy nguyên HC tủy xương Tan máu Sinh HC không hiệu lực THIẾU MÁU Tăng Erythropoietine Mở rộng khoang sinh máu Tăng hấp thu sắt Truyền máu Quá tải sắt Biến dạng xương Biến chứng tim Tử vong Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh beta thalassemia [10] Vì thế, triệu chứng thalassemia hội chứng thiếu máu tan máu mạn tính Nếu khơng truyền máu sớm định kỳ, bệnh nhân bị biến chứng biến dạng xương tình trạng tăng sinh tạo máu mức Bên cạnh đó, thể tăng hấp thu sắt việc đưa lượng lớn sắt vào thể qua truyền máu làm cho bệnh nhân bị tải sắt [11] CHƯƠNG 9Chẩn đoán, phân loại bệnh thalassemia Do đa dạng di truyền mà biểu thalassemia đa dạng, tùy theo số lượng đột biến, kiểu đột biến, phối hợp đột biến mà có nhiều mức độ biểu khác từ thể ẩn (không có biểu lâm sàng) đến mức độ nặng (tử vong từ bào thai) Hiện có nhiều cách thức phân loại bệnh thalassemia dựa vào lâm sàng, xét nghiệm phương pháp điều trị CHƯƠNG 10Chẩn đoán thể bệnh Chẩn đoán dựa vào thành phần huyết sắc tố xác định đột biến gen - -thalassemia: có Hb Bart’s, HbH (4), có đột biến gen  globin - -thalassemia: HbF tăng, HbA2 tăng xác định đột biến gen  globin - -thalassemiaphối hợp  thalassemia: HbF tăng, HbA2 tăng xác định đột biến gen  globin gen  globin - Thalassemia phối hợp với huyết sắc tố bất thường như:thalassemia với HbE ( HbF, HbE) đột biến Cd26 phối hợp đột biến gây thalassemia; -thalassemia với HbCs (HbH, HbCS) đột biến đoạn globin phối hợp đột biến điểm HbCs [3],[5],[6],[10] CHƯƠNG 11Chẩn đoán mức độ nặng nhẹ thalassemia  Mức độ nặng: Chỉ gặp -thalassemia (Hb Bart’s) Lâm sàng: biểu sớm thai với dấu hiệu phù rau thai, suy tim, gan lách to, chậm phát triển não… thường tử vong trước đời, sản phụ có nguy đa ối, thiếu ối, tiền sản giật, đẻ non Cận lâm sàng: máu thai nhi có Hb Bart’s > 85%; xét nghiệm ADN có đột biến gen -globin kiểu gen ( / )như đồng hợp tử SEA/ SEA, THAI/-SEA …[3],[5],[6],[10],[24],[25]  Mức độ nặng: Lâm sàng: Thiếu máu nặng, thường biểu sớm trẻ tuổi có nhiều biến chứng, lách thường to độ III Cận lâm sàng: Hb < 70 g/L; - -thalassemia: đột biến làm gen alpha có đột biến điểm (tạo chuỗi globin bất thường kí hiệu αT), kiểu gen ( /αT), phổ biến là: SEA/ αCs; SEA/ αQs …[3],[5],[6],[10],[24],[25] - β-thalassemia: kiểu đột biến β0/β0; β+/β+, β0/β+, β0/βE[3],[5],[6],[24] - β-thalassemia/HbE : kiểu đột biến β0/βE [3],[5],[6],[10]  Mức độ trung bình: Lâm sàng: Thiếu máu vừa, triệu chứng thường xuất trẻ tuổi, lách to độ II, III Cận lâm sàng: Hb khoảng 70 - 100g/L - - thalassemia (HbH): có Hb Bart’s (100g/L - -thalassemia: có Hb Bart’s ( 200 ml/kg/năm mà khơng kèm ngun nhân khác làm giảm Hb; Tăng tình trạng sắt (dù thải sắt theo phác đồ); Lách to gây cản trở sinh hoạt hàng ngày gây đau cho người bệnh; Giảm bạch cầu tiểu cầu cường lách - Điều trị biến chứng: suy sinh dục, loãng xương, biến chứng gan, biến chứng tim - Thuốc kích thích tổng hợp HbF:  thalassemia trung bình - Ghép tế bào gốc tạo máu đồng loài: thalassemia nặng 19 150 Bakir ML Belhoul KM, Kadhim AM, Dewedar HE, Eldin MS, Alkhaja FA (Ann Saudi Med 2013 Jan-Feb), "Prevalence of iron overload complications among patients with bthalassemia major treated at Dubai Thalassemia Centre", Ann Saudi Med, tr 33(1):18-21 151 Ersi Voskaridou, Evangelos Terpos (2004) New insights into the pathophysiology and management of osteoporosis in patients with beta thalassaemia British Journal of Haematology 127, p 127–139 152 Maria G Vogiatzi, Eric A Macklin (2009) Bone disease in thalassemia: a frequent and still unresolved problem J Bone Miner Res 24(3): 543 – 557 153 Dresner Pollack R (2000), Bone mineral metabolism in adults with betathalassaemia major and intermedia, Br J Haematol 111(3):902-7 154 Cohen A.R, Glimm E, and Porter J.B (2008) Effect of transfusional iron intake on response to chelation therapy in β-thalassemia major Blood 2008 111:583-587; doi: https://doi.org/10.1182/blood-2007-08- 109306 155 Viprakasit V, Lee C.L, Chong Q.T (2009) Iron chelation therapy in the management of thalassemia: the Asian perspectives Int J hematol (2009) 90 : 435 – 445 156 Puliyel M, Sposto R, Berdoukas V.A, (2013) Ferritin trends not predict changes in total body iron in patients with transfusional iron overload American Journal of Hematology, Vol 89, No 4, April 2014 p 391 – 394 157 BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Mã BA: (Nhóm 1) Mã XN: I Hành Họ tên mẹ: Năm sinh: Dân tộc: 20 Họ tên bố: Năm sinh: Dân tộc: Họ tên (nếu có): Năm sinh: Dân tộc: Địa chỉ: II Tiền sử gia đình: Bên họ nội: Bên họ ngoại: III Bệnh sử III.1 Người mẹ: III.2 Người bố: III.3 Người (nếu có) IV.Lâm sàng IV.1 Người mẹ: IV.2 Người bố: IV.3 Người (nếu có) V Xét nghiệm Chỉ số XN Người mẹ Tổng phân tích tế bào máu: HC (T/L) Hb (g/L) Hct (L/L) MCV (fL) MCH (pg) MCHC (pg) RDW (%) Thành phần huyết sắc tố HbA1 (%) HbA2 (%) HbE (%) HbF (%) HbH (%) Hb khác (%) Người bố Con 1(nếu có) Con 2(nếu có) 21 Đột biến DNA Âm tính Dương tính VI Xét nghiệm dịch ối: Tuổi thai Các đột biến khảo sát: Đột biến phát được: VII Xét nghiệm trẻ sau sinh - Tổng phân tích tế bào máu: - Thành phần huyết sắc tố: - Đột biến DNA: BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU (Nhóm 2) I Hành Họ tên : Học vấn/nghề nghiệp: Địa chỉ: II Tiền sử gia đình: Bên họ nội: Bên họ ngoại: III Bệnh sử: Thời điểm chẩn đoán bệnh Mã BN: Mã lưu trữ: Năm sinh: Dân tộc: 22 Thời điểm truyền máu lần đầu, tần suất truyền máu Thời điểm bắt đầu thời thải sắt, liều lượng điều trị Tuổi dậy, mãn dục IV Lâm sàng Chiều cao, cân nặng Da, niêm mạc Hệ tim mạch: Nhịp tim, huyết áp Hệ thần kinh Hệ xương khớp Gan, lách V Xét nghiệm Chỉ số XN Sau Sau Sau Lần tháng tháng tháng Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi HC (T/L) X X X Hb (g/L) X X X Hct (L/L) X X X MCV (fL) X X X MCH (pg) X X X MCHC (pg) X X X RDW (%) X X X Thành phần huyết sắc tố HbA1 (%) X HbA2 (%) X HbE (%) X HbF (%) X HbH (%) X X X X X X X X Sau Sau Sau Sau Sau 12 15 18 21 24 tháng tháng tháng tháng tháng X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Ghi 23 Hb khác (%) MRI Gan (LIC) Tim (T2*) Sinh hóa máu Fe Ferritin GOT GPT Bilirubin TP Bilirubin GT Glucose lúc đói Glucose HbA1C CPK Canxi Canxi ion Canxi niệu Phosphate máu (ALP) Magne máu Vitamin B12 Acid folic FSH LH Testosterol X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X >14 (nam) Estradiol (nữ) X X X tuổi >13 Prolactin (nữ) X X X tuổi >13 tuổi >13 Progesterol X X X (nữ) FT3 FT4 TSH PTH GH ACTH X X X X X X X X X X X X X X X X X X tuổi 24 ADH X Chẩn đốn hình ảnh Thể tích tinh X hồn (siêu âm) Kích thước tử X cung (siêu âm) Kích thước X buồng trứng (siêu âm) Kích thước X gan (siêu âm) Kích thước X lách (siêu âm) XN sàng lọc HCV X HbsAg X HIV X Điện tâm đồ X Siêu âm tim X VI X X X X >14 tuổi X X >13 tuổi X X >13 tuổi X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Điều trị Tổng số đơn vị /thể tích khối hồng cầu truyền thời gian nghiên cứu Thuốc thải sắt: loại thuốc, liều lượng Các điều trị khác 25 CÁC CHỮ VIẾT TẮT α β ADN ARMS FIL Hb HC HbE HbF HbCs HbQs HPLC HSs LCR MED MCS NST PCR SEA THAI : Alpha : Beta : Acid Deoxyribo Nucleotid : Amplification refractory mutation system Hệ thống khuếch đại đột biến có tính trơ : Filipino : Hemoglobin - Huyết sắc tố : Hồng cầu : Hemoglobin E : Hemoglobin fetal : Hemoglobin Constant Spring : Hemoglobin Quong Sze : High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng cao áp : Hypersensitive sites Vị trị nhậy cảm : Locus Control Region Vùng kiểm soát gen : Mediterranean Người Địa Trung Hải : Multispecies conserved sequences : Nhiễm sắc thể : Polymerase Chain Reaction Phản ứng khuyếch đại chuỗi : South East Asian Đông Nam Á : Thái Lan Vùng khơng mã hố có tính bảo thủ cao 26 10,17,18,42,69,87,88,91,93,94-97 1-9,11-16,19-41,43-68,70-86,89,90,92,98-MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Bệnh thalassemia .4 1.1.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh thalassemia .4 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh 1.1.3 Chẩn đoán, phân loại bệnh thalassemia .7 1.1.4 Điều trị bệnh thalassemia 10 1.2 Đột biến gen globin phương pháp phát 10 1.2.1 Gen globin đột biến .10 1.2.2 Các ứng dụng xác định đột biến gen globin .20 1.3 Quá tải sắt bệnh nhân thalassemia phương pháp đánh giá 21 1.3.2 Q trình chuyển hóa sắt 24 1.3.3 Quá tải sắt bệnh nhân thalassemia 25 1.3.4 Các phương pháp đánh giá tải sắt 31 1.3.5 Các nghiên cứu tình trạng tải sắt bệnh nhân thalassemia .36 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNGVÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Đối tượng nghiên cứu 38 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu: .38 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn loại trừ 38 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 39 2.2.2 Các số nghiên cứu 39 2.2.3 Cách chọn mẫu, bước tiến hành 43 2.3 Các tiêu chuẩn đánh giá, kỹ thuật phương pháp 45 2.3.1 Các tiêu chuẩn chẩn đoán 46 2.3.2 Các phương pháp kỹ thuật xét nghiệm 50 2.4 Điều trị theo dõi hiệu điều trị thải 58 2.4.1 Truyền máu: .58 2.4.2 Thải sắt .58 2.4.3 Đánh giá hiệu thải sắt 59 2.5 Xử lý số liệu 59 Mối tương quan hai biến định lượng đánh giá hệ số 60 2.6 Đạo đức nghiên cứu 60 2.7 Thời gian nghiên cứu .60 27 2.8 Địa điểm nghiên cứu .60 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 61 3.1 Kết xét nghiệm phát đột biến gen globin kỹ thuật StripAsssay 61 3.1.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 61 3.1.2 Kết chẩn đoán đột biến gen globin StripAssay 63 3.2 Kết đánh giá tải sắt MRI 70 3.2.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 70 3.2.2 Đặc điểm tình trạng tải sắt 70 3.2.3 Mối liên quan tải sắt với tổn thương quan .74 3.2.4 Sự thay đổi số tải sắt sau năm điều trị 78 CHƯƠNG 83 BÀN LUẬN 83 4.1 Đặc điểm xét nghiệm Strip assay 83 4.1.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 83 4.1.2 Đặc điểm xác định đột biến gen globin người bệnh/ người mang gen bệnh thalassemia 89 4.2 Bàn luận kết nghiên cứu ứng dụng MRI chẩn đoán tải sắt bệnh nhân thalassemia 93 4.2.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 93 4.2.2 Đặc điểm tổn thương tổ chức tải sắt .98 4.2.3 Sự thay đổi tình trạng tải sắt sau điều trị năm 103 KẾT LUẬN 109 KIẾN NGHỊ 111 28 CHƯƠNG 135DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh beta thalassemia [14] Hình 1.3 Cấu trúc gen β-globin 11 Hình 1.4 Cấu trúc gen α-globin 13 Hình 1.5 Cơ chế hình thành đoạn 3.7kb 4.2kb gen α [22] 15 Hình 1.6 Một số đột biến đoạn gen αglobin 16 Hình 1.8 Cơ chế điều hòa chuyển hóa sắt hepcidin .27 Hình 1.9 Cơ chế bệnh sinh tình trạng tải sắt 29 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 45 Hình 2.2 Ảnh định vị buồng tim vị trí chụp theo trục ngắn tim 53 Hình 2.3 Ảnh định vị gan theo trục stagital coronal để lấy lát cắt axial gan 54 Hình 2.4 Đo ROI vị trí tất TE .55 Hình 2.5 Lượng giá nồng độ sắt gan tim bảng tính Excel 56 Hình 3.1 Hình ảnh minh họa đột biến gen globin test Globin StripAssay thai nhi 66 Hình 3.2 Hình ảnh minh họa đột biến gen globin test StripAssay bệnh nhân 69 Hình 3.3 Minh họa hình ảnh tải sắt gan nặng cộng hưởng từ .71 Hình 3.4 Hình ảnh tải sắt gan mức độ trung bình cộng hưởng từ 71 29 Hình 3.5 Minh họa hình ảnh tải sắt tim mức độ nặng cộng hưởng từ 72 30 CHƯƠNG 136DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các đột biến gây bệnh β-thalassemia thường gặp người VN[27], [28],[29] 13 Bảng 1.2 Sự phân bố sắt thể người [51] 22 Bảng 1.3 Tốc độ tích lũy sắt BN khơng dùng thuốc thải sắt [19] 26 Bảng 2.1 Cách tính điểm phân loại mức độ bệnh thalassemia 46 Bảng 2.2 Tiêu chuẩn phân nhóm 46 Bảng 2.3.Chỉ số ferritin huyết theo mức độ tải sắt 47 Bảng 2.4 Chỉ số LIC theo mức độ tải sắt gan 47 Bảng 2.4 Chỉ số T2*tim theo mức độ tải sắt tim 47 Bảng 2.5 Tiêu chuẩn chẩn đốn lỗng xương [101]: 50 Bảng 2.6 Thông số kỹ thuật đo sắt tim T2* .53 Bảng 2.7 Thông số kỹ thuật đo sắt gan GRE T2* 54 Bảng 2.8 Nhận định mức độ sắt gan 56 Bảng 2.9 Đánh giá mức độ tải sắt tim 56 Bảng 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 61 Bảng 3.2 Đặc điểm huyết học người bệnh thalassemia 61 Bảng 3.3 Đặc điểm huyết học người nghi mang gen bệnh thalassemia .62 Bảng 3.4 Đặc điểm tiền sử sinh sản phụ 62 Bảng 3.5 Đặc điểm đột biến gen bố mẹ thai nhi 63 Bảng 3.6 Kết chẩn đoán trước sinh bệnh thalassemia 64 Bảng 3.7 Kết đột biến  globin phát thai nhi 64 31 Bảng 3.8 Kết đột biến  globin phát thai nhi 65 Bảng 3.9 Khả phát đột biến gen globin strip assay bệnh nhân người nghi ngờ mang gen bệnh thalassemia 67 Bảng 3.10 Kết đột biến phát bệnh nhân người theo dõi mang gen -thalassemia -globin StripAssay .67 Bảng 3.11 Kết đột biến phát bệnh nhân người theo dõi mang gen -thalassemia  Globin StripAssay .68 Bảng 3.12 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu .70 Bảng 3.13 Đặc điểm mức độ tải sắt nhóm bệnh 70 Biểu đồ 3.1 Dải phân bố nồng độ ferritin LIC nhóm bệnh nhân .72 Biểu đồ 3.2 Tương quan Ferritin LIC nhóm -thalalassemia mức độ nặng trung bình 73 Biểu đồ 3.3 Tương quan ferritin T2*tim 73 Bảng 3.14 Mối liên quan T2* tim ferritin .73 Bảng 3.15 Tương quan T2* tim LIC .73 Bảng 3.16 Mơí liên quan ferritin tăng enzyme SGOT 74 Biểu đồ 3.4 Tỷ lệ loại biến chứng tim mạch 75 Bảng 17 Tỷ lệ biến chứng tim theo nhóm bệnh 75 Bảng 3.18 Mối liên quan T2*tim với sức bóp tim 75 Bảng 3.19 Mỗi liên quan tỷ lệ bệnh nhân giảm hormn với mức độ tải sắt .76 Biểu đồ 3.5 Mối liên quan số lượng tuyến nội tiết giảm chức 77 32 với mức độ tải sắt 77 Bảng 3.20: Tỷ lệ mật độ xương cột sống thắt lưng cổ xương đùi 77 Biểu đồ 3.6 Mỗi tương quan mật độ xương với ferritin .78 Biểu đồ 3.7 Tỷ lệ kết thải sắt bệnh nhân nhóm nghiên cứu 78 Biểu đồ 3.8 Tỷ lệ mức độ tải sắt thay đổi nhóm LIC tăng 79 Bảng 3.21 Mối liên quan tỷ lệ mức độ tải sắt nặng gan trước sau điều trị nhóm điều trị có hiệu (LIC giảm) 79 Bảng 3.22 Đặc điểm thay đổi số số 80 Bảng 3.23 Đặc điểm thuốc thải sắt thể tích máu truyền 80 Bảng 3.24 Sự thay đổi số đánh giá tải sắt theo nhóm thuốc 81 Bảng 3.25 Sự thay đổi số số chức theo nhóm thuốc 81 Bảng 3.26 Sự thay đổi ferritin LIC sau thời gian điều trị 82 Bảng 4.1 Tỷ lệ phát đột biến thai nhi nghiên cứu 86 Biểu đồ 4.1 Tỷ lệ thay đổi LIC ferrtin nhóm bệnh 107 ... globin kỹ thuật strip assay Ứng dụng kỹ thuật cộng hưởng từ gan tim để theo dõi điều trị tải sắt bệnh nhân thalassemia CHƯƠNG TỔNG QUAN CHƯƠNG 1Bệnh thalassemia CHƯƠNG 2Đặc điểm dịch tễ học bệnh thalassemia. .. đặc biệt nước ta bệnh chưa có xu hướng kiểm sốt Chính lý đó, chúng tơi thực đề tài: "Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật strip assay cộng hưởng từ chẩn đoán theo dõi điều trị bệnh thalassemia" với hai... truyền máu Theo Liên đồn Thalassemia Thế giới, thalassemia bệnh phòng (preventable) chữa (treatable) [1] Chính thế, việc nghiên cứu, ứng dụng kỹ thuật tiên tiến chẩn đoán, theo dõi điều trị thalassemia