NGHIÊN cứu ĐỊNH LƯỢNG STEROID NIỆU BẰNG GCMS TRONG CHẨN đoán rối LOẠN SINH TỔNG hợp STEROID bẩm SINH ở TRẺ EM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THỊ NGỌC ANH NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG STEROID NIỆU BẰNG GC/MS TRONG CHẨN ĐOÁN RỐI LOẠN SINH TỔNG HỢP STEROID BẨM SINH Ở TRẺ EM ĐỀ CƯƠNG DỰ TUYỂN NGHIÊN CỨU SINH HÀ NỘI - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THỊ NGỌC ANH NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG STEROID NIỆU BẰNG GC/MS TRONG CHẨN ĐOÁN RỐI LOẠN SINH TỔNG HỢP STEROID BẨM SINH Ở TRẺ EM Chuyên ngành: Hóa sinh y học Mã số: 62720112 ĐỀ CƯƠNG DỰ TUYỂN NGHIÊN CỨU SINH NGƯỜI DỰ KIẾN HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Trần Thị Chi Mai PGS.TS Trần Minh Điển HÀ NỘI – 2015 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BÀI LUẬN VỀ DỰ ĐỊNH NGHIÊN CỨU Họ tên thí sinh: TRẦN THỊ NGỌC ANH Cơ quan công tác: Bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức Chuyên ngành dự tuyển: Hóa sinh y học Mã số: 62720112 LÝ DO LỰA CHỌN ĐỀ TÀI, LĨNH VỰC NGHIÊN CỨU Rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid bệnh lý tuyến thượng thận gây giảm sản xuất nhiều hormon vỏ thượng thận thiếu hụt enzyme đồng thời gây tăng tổng hợp hormone tiền chất trước vị trí enzyme thiếu hụt hormone theo đường khác Bệnh phát trẻ sinh tuổi thiếu niên, người trưởng thành Việc chẩn đoán điều trị sớm có vài trị đặc biệt quan trọng với trẻ sơ sinh trẻ nhỏ nhằm hạn chế biến chứng rối loạn muối nước, rối loạn phát triển giới tính Sử dụng kỹ thuật sắc ký khí - khối phổ (GC/MS) tiêu chuẩn vàng chẩn đoán xác định rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid, đem lại hình ảnh tồn diện hormon steroid có nguồn gốc tuyến thượng thận thơng qua sản phẩm chuyển hóa nước tiểu Bệnh phẩm nước tiểu nên phù hợp với trẻ sơ sinh, không gây tổn thương cho trẻ bệnh phẩm máu Phát điều trị sớm cho trẻ bị rối loạn chuyển hóa hormon steroid đem lại kết tốt cho phát triển trưởng thành trẻ Việc triển khai áp dụng kỹ thuật sắc ký khí - khối phổ điều kiện Việt Nam khoa xét nghiệm Hóa sinh - Bệnh viện Nhi trung ương cần thiết để phục vụ chẩn đoán nhiều bệnh lý trẻ em đặc biệt hội chứng rối loạn chuyển hóa Sự cần thiết phải thiết lập giá trị tham chiếu cho xét nghiệm triển khai hệ thống trẻ sơ sinh Việt Nam làm điều kiện để chẩn đoán bệnh lý rối loạn chuyển hóa hormon steroid Đồng thời, ứng dụng kỹ thuật GC/MS để sàng lọc, chẩn đoán trẻ em có triệu chứng rối loạn chuyển hóa hormon steroid, phát sớm phát trường hợp nhẹ, chưa chẩn đoán kỹ thuật áp dụng MỤC TIÊU VÀ MONG MUỐN ĐẠT ĐƯỢC KHI ĐĂNG KÝ ĐI HỌC NGHIÊN CỨU SINH Ứng dụng kỹ thuật giới vào điều kiện Việt Nam để nghiên cứu chuyên sâu bệnh học, chẩn đoán điều trị cần thiết đặc biệt bệnh viện chuyên khoa tuyến cuối Sau thực đề tài này, biết thêm kỹ thuật GC/MS ứng dụng kỹ thuật chẩn đoán bệnh lý rối loạn chuyển hóa steroid cho trẻ em người trưởng thành để chẩn đoán xác định loại trừ Học nghiên cứu sinh trường Đại học Y Hà Nội hội để tiếp thu kiến thức chun mơn, nâng cao trình độ kỹ nghiên cứu Sau thực đề tài này, tơi có khả thực nghiên cứu đánh giá, so sánh xét nghiệm có phịng xét nghiệm nhằm đảm bảo nâng cao chất lượng xét nghiệm Triển khai, áp dụng xét nghiệm giới vào phòng xét nghiệm để giúp bác sỹ lâm sàng chẩn đốn sớm xác bệnh lý mà lâm sàng yêu cầu, đặc biệt nhóm bệnh lý rối loạn chuyển hóa thường gặp Việt Nam kỹ thuật cập nhật giới LÝ DO LỰA CHỌN CƠ SỞ ĐÀO TẠO Lựa chọn trường Đại học Y Hà Nội sở đào tạo nghiên cứu sinh trường đại học tiếng, thành lập từ năm 1902 với nhiều thành tích lĩnh vực đào tạo, nghiên cứu khoa học Tại đây, tơi có hội học tập, nghiên cứu tối đa với thầy giỏi chuyên gia đầu ngành chuyên ngành Trường Đại học Y Hà Nội nơi học tập năm sinh viên học viên cao học, nơi đào tạo tốt với bác sỹ DỰ ĐỊNH VÀ KẾ HOẠCH THỰC HIỆN Đề tài thực sở y tế lớn, có uy tín chất lượng bệnh viện Nhi trung ương, bệnh viện Phụ sản Hà Nội, trường Đại học Y Hà Nội Đề tài gồm mục tiêu:  Xây dựng chuẩn hóa quy trình kỹ thuật định lượng đồng thời số sản phẩm chuyển hóa steroid nước tiểu kỹ thuật GC/MS  Thiết lập giá trị tham chiếu sản phẩm chuyển hóa steroid niệu trẻ sơ sinh khỏe mạnh hệ thống GC/MS  Ứng dụng kỹ thuật GC/MS phân tích steroid niệu để chẩn đoán bệnh nhi nghi ngờ rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid vỏ thượng thận Bước 1: Xây dựng thẩm định quy trình chuẩn định lượng sản phẩm chuyển hóa hormon steroid nước tiểu kỹ thuật GC/MS điều kiện phòng xét nghiệm Việt Nam: tính độ xác ngắn hạn dài hạn, giới hạn định lượng, độ xác thực cách so sánh với kết ngoại kiểm Bước 2: Thu thập mẫu nước tiểu tươi 120 trẻ sơ sinh khỏe mạnh nam nữ tương đương sinh bệnh viện phụ sản Hà nội, làm xét nghiệm hệ thống GC/MS để thiết lập giá trị tham chiếu cho trẻ sơ sinh Việt Nam Bước 3: Những trẻ nghi ngờ mắc hội chứng rối loạn chuyển hóa hormon steroid phân tích GC/MS với mẫu nước tiểu tươi để chẩn đoán Thời gian thực hiện: tháng 9/2015 đến 12/2017 Địa điểm thực hiện: Khoa Hóa sinh, Khoa nội tiết –Chuyển hóa - Di truyền Bệnh viện Nhi trung ương KINH NGHIỆM Tôi tốt nghiệp loại giỏi trường Đại học Y Hà Nội năm 2000, chuyển tiếp học cao học khóa năm 2001 – 2003 Sau tốt nghiệp làm việc khoa Hóa Sinh – Bệnh viện Bạch Mai tám năm từ 2003 đến 2011 Khoa Hóa sinh bệnh viện Bạch Mai sở hàng đầu chuyên ngành hóa sinh y học với trang thiết bị đại, tổ chức hoạt động chun nghiệp, khoa học Tơi có khả làm chủ kỹ thuật mới, triển khai áp dụng thành công hệ thống chuẩn bị mẫu tự động MPA (module preanalytic) Việt Nam đạt giải tham gia hội thao sáng tạo tuổi trẻ ngành y tế khu vực Hà Nội lần thứ XXIV – năm 2011 Từ tháng năm 2011 đến nay, công tác Bệnh viện Hữu Nghị Việt Đức, thực cơng việc xét nghiệm Huyết học, hóa sinh, miễn dịch phòng xét nghiệm theo yêu cầu thực nhiều nghiên cứu xét nghiệm hóa sinh, miễn dịch bệnh nhân nhiễm virus viêm gan B viêm gan C Tại đây, nhận thấy cịn nhiều bệnh lý chưa chẩn đốn xác định kỹ thuật có, cần triển khai thêm nhiều kỹ thuật mới, đại phù hợp để chẩn đốn sớm xác bệnh lý rối loạn chuyển hóa thường gặp có rối loạn chuyển hóa hormon steroid nguồn gốc tuyến thượng thận Cần thiết phối hợp từ nhiều chuyên ngành khác nhau, đặc biệt xét nghiệm để phục vụ chẩn đoán, theo dõi, điều trị Với tiến y học giới, cần triển khai kỹ thuật Việt Nam, với kinh nghiệm kiến thức đào tạo lĩnh vực xét nghiệm hóa sinh huyết học, tơi tự tin chun mơn có khả thực kỹ thuật khó, triển khai DỰ KIẾN VIỆC LÀM VÀ CÁC NGHIÊN CỨU TIẾP THEO SAU KHI TỐT NGHIỆP Sau tốt nghiệp, tiếp tục công tác Bệnh viện Việt Đức thực nghiên cứu lĩnh vực cận lâm sàng (hóa sinh, huyết học) ưu tiên thực nghiên cứu Các xét nghiệm sau đánh giá phương pháp xây dựng giá trị tham chiếu thực thường quy bệnh viện Nhi trung ương để chẩn đốn sớm xác nhóm bệnh lý rối loạn chuyển hóa hormon steroid cho trẻ sơ sinh trẻ em Việt Nam Tôi mong muốn tiếp tục thiết lập giá trị tham chiếu cho xét nghiệm khác sử dụng phòng xét nghiệm nước lấy giá trị tham chiếu từ nước từ nghiên cứu trước khơng cịn phù hợp với giá trị sinh học người Việt Nam thời điểm ĐỀ XUẤT NGƯỜI HƯỚNG DẪN Tiến sỹ Trần Thị Chi Mai, giảng viên mơn Hóa sinh, trường Đại học Y Hà Nội: Tiến sỹ có nhiều kinh nghiệm giảng dạy, nghiên cứu khoa học hướng dẫn nhiều học viên sau đại học đạt kết cao Tiến sỹ có nhiều kinh nghiệm lĩnh vực hóa sinh y học hóa sinh nhi khoa Phó giáo sư, tiến sỹ Trần Minh Điển Phó giám đốc bệnh viện Nhi trung ương Phó giáo sư có nhiều kinh nghiệm lĩnh vực nhi khoa tham gia hướng dẫn nhiều học viên sau đại học MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH .9 17-OHP 17 hydroxy progesterone 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hormon steroid 1.1.1 Sinh tổng hợp hormon steroid vỏ thượng thận 1.1.2 Chuyển hóa hormon steroid 1.1.3 Tác dụng sinh học hormon steroid vỏ thượng thận .9 1.2 Bệnh lý rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid .10 1.3 Các rối loạn khác tuyến vỏ thượng thận 18 1.4 Các kỹ thuật phân tích steroid 19 Bao gồm kỹ thuật định lượng hormon steroid, tiền chất hormon máu định lượng sản phẩm chuyển hóa hormon steroid nước tiểu 19 1.4.1 Kỹ thuật miễn dịch 19 1.4.2 Kỹ thuật sắc ký 21 1.4.3 Kỹ thuật phân tích gen 24 1.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật GC/MS giới Việt Nam 25 1.6 Thẩm định phương pháp 27 1.7 Thiết lập giá trị tham chiếu .28 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tượng nghiên cứu .30 2.2 Phương pháp nghiên cứu 30 2.3 Trang bị, hoá chất chất liệu nghiên cứu 30 2.3.1 Trang thiết bị 30 2.3.2 Hoá chất vật tư tiêu hao 31 2.3.3 Chất liệu nghiên cứu 32 2.4 Nội dung nghiên cứu .32 2.4.1 Xây dựng thẩm định quy trình chuẩn định lượng steroid niệu .33 2.4.2 Thiết lập giá trị tham chiếu steroid niệu trẻ sơ sinh 36 2.4.3 Chẩn đoán rối loạn tổng hợp steroid trẻ em 37 2.5 Phân tích xử lý số liệu 37 Chương 39 DỰ KIẾN KẾT QUẢ 39 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 39 3.2 Xây dựng đánh giá quy trình chuẩn định lượng hormon steroid niệu 39 3.2.1 Các sản phẩm phân tích GC/MS .39 3.2.2 Giới hạn định lượng sản phẩm phân tích GC/MS .41 Giới hạn đường chuẩn định lượng với sản phẩm steroid (nồng độ thấp cịn đo – nồng độ chuẩn khơng pha loãng) 41 3.2.3 Độ thu hồi phân tích GC/MS .42 PT: phân tích 42 3.2.4 Độ chụm kỹ thuật phân tích steroid niệu GC/MS .43 3.2.5 Độ xác thực kết GC/MS so sánh với kết ngoại kiểm .43 3.3 Thiết lập giá trị tham chiếu cho xét nghiệm định lượng steroid niệu kỹ thuật GCMS trẻ sơ sinh Việt Nam 43 3.4 Chẩn đoán hội chứng rối loạn sinh tổng hợp hormon steroid vỏ thượng thận trẻ em 45 Chương 48 DỰ KIẾN BÀN LUẬN 48 4.1 Quy trình chuẩn định lượng hormon steroid niệu kỹ thuật GC/MS .48 4.2 Giá trị tham chiếu xét nghiệm steroid niệu kỹ thuật GC/MS trẻ sơ sinh Việt Nam 49 4.3 Kết định lượng hormon steroid niệu trẻ em nghi ngờ mắc rối loạn sinh tổng hợp hormon steroid 50 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 52 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Các sản phẩm chuyển hóa hormon steroid định lượng GC/MS .39 Bảng 3.2: Giới hạn định lượng sản phẩm chuyển hóa steroid niệu 41 Bảng 3.3: Tỷ lệ % thu hồi sản phẩm chuyển hóa steroid niệu 42 Bảng 3.4 Giá trị SD đánh giá độ chụm ngắn hạn dài hạn với n=20 43 Bảng 3.5: Nồng độ sản phẩm chuyển hóa steroid trẻ sơ sinh theo giới tính.43 Bảng 3.6: Nồng độ sản phẩm chuyển hóa steroid theo tuổi trẻ sơ sinh 44 Bảng 3.7: Đặc điểm lâm sàng chẩn đoán bệnh lý thiếu hụt enzyme 45 Bảng 3.8: Đặc điểm xét nghiệm bệnh nhi RLCH steroid 46 DANH MỤC HÌNH Hình 1.2: Sơ đồ sinh tổng hợp chuyển hóa hormon tuyến vỏ thượng thận [17] 17 Hình 3.1: Sắc ký đồ sản phẩm phân tích khối phổ trẻ bình thường 40 Hình 3.2: Sắc ký đồ bệnh nhân thiếu hụt 21-hydroxylase (minh họa) 46 Hình 3.3: Sắc ký bệnh nhân thiếu hụt 17α-hydroxylase (minh họa) 47 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACTH Adrenocorticotropic hormon CAH Congenital adrenal hyperplasia CBG Corticosteroid binding globulin CMIA Chemiluminescent Microparticle Immunoassay CLIA Clinical Laboratory Improvement Amendments CV Coefficient variation DELFIA Time resolved fluorometric assay DHT Dehydro testosterone DHEA Dehydroepiandosterone DSD: Disorder of sexual development ECLIA Electrochemiluminescence immunoassay ELISA Enzym linked immunoassay FSH Follice stimulating hormon GC/MS Gas chromatography – mass spectrometry GnRH Gonadotropin releasing hormon IFCC International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medecine KN Kháng nguyên KT Kháng thể LC/MS/MS Liquid chromatography Tandem mass spectrometry LH Luteinizing hormon RIA Radioimmunoassay SD Standard deviation SHBG Sex hormon binding globulin SIM Selected ion monitoring TMSI (N-trimethylsilyl) imidazole TSTTBS Tăng sản thượng thận bẩm sinh USP Urine steroid metabolomic profiling UDPGA Uridine diphosphoglucuronic acid 17-OHP 17 hydroxy progesterone 51 ngày đầu trẻ tính tốn 11 tỷ lệ tiền chất sản phẩm chuyển hóa cortisol để chẩn đốn nhóm bệnh thiếu hụt enzym gây TSTTBS trẻ Sử dụng kết hợp xét nghiệm hóa sinh máu steroid niệu phương pháp hiệu sàng lọc, chẩn đoán xác định bệnh lý rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid [68],[69] Những sai số kỹ thuật GC/MS cần phát hạn chế để đảm bảo kết xác [70] Bàn luận bệnh lý TSTTBS phát nghiên cứu có thiếu hụt 21-hydroxylase bệnh gặp khác Bàn luận phương pháp GC/MS chẩn đoán xác định nguyên nhân gây TSTTBS 52 DỰ KIẾN KẾT LUẬN Quy trình chuẩn định lượng sản phẩm chuyển hóa hormon steroid niệu kỹ thuật sắc ký khí – khối phổ xây dựng thành cơng thẩm định, áp dụng điều kiện phòng xét nghiệm Việt Nam đạt yêu cầu độ xác độ xác thực Giá trị tham chiếu steroid niệu trẻ sơ sinh khỏe mạnh thiết lập phân tích kỹ thuật GC/MS: Sản phẩm chuyển hóa Androsterone Etiocholanolone Dehydroepiandrosterone 11-ketoandrosterone 11β-hydroxyandrosterone 11β-hydroxyetiocholanolone Androstenetriol Pregnanediol Pregnanetriol Tetrahydrocortisone Tetrahydrocortisol Allo Tetrahydrocortisol α-Cortolone β-Cortolone α-Cortol β-Cortol TB ± SD (95% CI) Trẻ nam Trẻ nữ Sử dụng kỹ thuật GC/MS để phân tích steroid niệu giúp chẩn đốn xác định phân loại bệnh lý rối loạn chuyển hóa steroid trẻ em Phát bệnh thiếu hụt enzyme sau: 21-hydroxylase, thiếu hụt enzym A, B… TÀI LIỆU THAM KHẢO Philip Felig and Lawrence A Frohman (2001) Part IV: Adernal disease Endocrinology & metabolism, foufth edition, McGraw-Hill, Inc 385-524 Maria I New and Robert C Wilson (1999) Steroid disorders in children: Congenital adrenal hyperplasia and apparent mineralocorticoid excess PNAS, vol 96, no 22: 12790-12797 Anna Biason Lauber (1996) Disorders of Steroid synthesis and metabolism Physician’s Guide to the laboratory diagnosis of metabolic diseases, Second edition, Springer, 551-572 Maria New, Oksana Lekarev, Karen Lin-Su, Alan Parsa et al (2013) Congenital Adrenal Hyperplasia, Genetic Steroid Disorders, Elsevier, San Diego, CA Michael P Caulfield, Thomas Lynn, Michael E Gottschalk (2002) The diagnosis of congenital adrenal hyperplasia in the newborn by Gas Chromatography/Mass Spectrometry analysis of random urine specimens The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 87, 3682-3690 Pang S, Hotchkiss J, Drash AL, Levine LS, New MI (1997) Microfilter paper method for 17α-hydroxyprogesterone radioimmunoassay: it’s application for rapid screening for congenital adrenal hyperplasia J Clin Endocrinol Metab 45, 1003-1008 Heitty J van der Kamp and Jan M Wit (2004) Neonatal screening for congenital adrenal hyperplasia Europeian Journal of Endocrinology 151, 71-75 Larson A, Thil’len A, Hagenfeldt L, Dobeln von U, Guthenberg C (1992) Screening of half a million Swedish newborn infants for congenital adrenal hyperplasia Screening 1, 159-166 Balsamo A, Cacciari E, Piazzi S, Cassio A, Bozza D, Pirazzoli P, Zappella F (1996) Congenital adrenal hyperplasia: neonatal mass screening compared with clincal diagnosis only in the Emilia Romagna region of Italy 1980-1995 Pediatrics 98, 362-367 10 Steigert M, Choenle EJ, Biason-Lauder A, Torresani T (2002) High reliability of neonatal screening for congenital adrenal hyperplasia in Switzerland Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 87: 4106-4110 11 Thil’en A, Nordenstrom A, Hagenfeldt L, von Dobeln U, Guthenberg C, Larsson A (1998) Benefits of neonatal screening for congenital adrenal hyperplasia (21-hydroxylase deficiency) in Sweden Pediatrics 101(4):11-19 12 Eyskens F (1997) Screening for inborn errors of metabolism: the experience in the province of Antwerp PhD Thesis University for Antwerp 13 Heather NL, Seneviratne SN, Webster D, Derraik JG, Jefferies C, CarllJ, Jiang J et al (2015) Newborn screening for congenital adrenal hyperplasia in New Zealand, 1994-2013 J Clin Endocrionl Metab 100(3):1002-1008 14 Keiko Homma, Tomonobu Hasegawa, Eiko Takeshita, Kiyoaki Wantanabe et al (2004) Elevated urine pregnanetriolone definitively establishes the diagnosis of classical 21-Hydroxylase deficiency in term and preterm neonates J Clin Endocirnol Metab 89: 6087-6091 15 Brossaud J, Barat P, Gualde D, Corcutff JB (2009) Cross reactions elicited by serum 17-OH progesterone and 11-deoxycortisol in cortisol assays Clin Chim Acta 407:72-74 16 Pang S, Clack A (1990) Newborn screening, prenatal diagnosis, and prenatal treatment of congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency Trends in Endocrinology and Metabolism, 1:300-307 17 Nils Krone, Beverly A Hughes, Gareth G Lavery, Paul M Stewart, Wiebke Arlt and Cedric H L Shackleton (2010) Gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) remains a preeminent discovery tool in clinical steroid investigations even in the era of fast liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) J Steroid Biochem Mol Biol 121, 496-504 18 John W Honour (2009) Diagnosis of diseases of steroid hormon production, metabolism and action J Clin Res Ped Endo 1, 209-226 19 John W Honour (2010) Steroid assays in paediatric endocrinology J Clin Res Ped Endo 2: 1-16 20 S A Wudy, M Hartmann and J Homoki (2000) Hormoral diagnosis of 21hydroxylase deficiency in plasma and urine of neonates using benchop gas chromatography – mas spectrometry, Journal of Endocrinology 165: 679-683 21 J W Honour and C G D Brook (1997) Clinical indications for the use of urinary steroid profiles in neonates and children Ann Clin Biochem 34: 45-54 22 Angel OK Chan, CC Shek (2012) Urinary steroid profiling in the diagnosis of congenital adrenal hyperplasia and disorders of sex development: Experience of a urinary steroid referral centre in Hong Kong Clinical Biochemistry 46: 327-334 23 Masakatsu Sone, Hirotaka Shibata, Keiko Homma, Naohisa Tamura Jun-ichi Akahira, Satoshi Hamada, Mitsuhiko Yahata, Nobuyuki Fukui, Hiroshi Itoh, Hironobu Sasano, Kazuwa Nakao (2009) Close examination of steroidogenesis disorders in a DOC and progesterone-producing adenocortical carcinoma Endocr 35:25-33 24 SC Tiu, Angel OK Chan, Norman F Taylor (2009) Use of urinary steroid profilding for diagnosing and monitoring adenocortical tumours, Hong Kong Med J 15: 463-470 25 Takashi Suzuki, Makoto Ueki, Hidenari Sakuta, Makoto Fujisaki et al (2003) Newly identified steroid hormon in urine of patients with Cushing syndrome: 3α, 11β-Dihydroxy-4-Androsten-17-one Endocrine Journal 50: 571-577 26 David S Millingtong (1996) Tandem mass spectrometry in clinical diagnosis, Physician’s Guide to the laboratory diagnosis of metabolic diseases, Second edition, Springer: 57-76 27 Chan AO, But BW, Lee CY, Lam YY, Ng KL, Tung JY, Kwan EY, Chan YK, Tsui TK, Lam AL, Tse WY, Cheung PT, Shek CC (2013) Diagnosis of 5αreductase deficiency: is measurement of dihydrotestosterone essential? Clinical Chemistry 59: 798-806 28 C G D Brook (2000) Antenatal treatment of a mother bearing a fetus with congenital adrenal hyperplasia Arch Dis Child Fetal Neonatal 82:176-181 29 Neville AM, Mackay AM (1972) The structrure of the human adrenal cortex in health and disease Clin Endocrinol Metab 1:361 30 Brooks RV (1979) Biosynthesis and metabolism of adrenalcortical steroids, in James VHT: The adrenal Gland New York, Raven: p67 31 Netter FH (1965) Endocrine system and selected metabolisc diseases Ciba collection of medical illustrations, Summitt, NY, Ciba Pharmaceutical 4: 77 32 Keiko Homma, Tomonobu Hasegawa, Masami Masumoto, Eiko Takeshita, Kiyoaki Wantanabe et al (2003) Reference values for urinary steroids in Japanese newborn infants: Gas chromatography/Mass spectrometry in selected ion monitoring, Endocrine Journal, 50: 783-792 33 Inborn error of steroid metabolism http://en.wikipedia.org/wiki/inborn errors of steoid metabolism 34 Zumoff B, Fukushima DK, Hellman L (1974) Intercomparison of four methods for measuring cortisol production J Clin Endocrinol Metab 38:p169 35 Esteban NV, Loughlin T, Yergey AL, Zawadzki JK et al (1991) Daily cortisol production rate in man determined by stable isotop dilution/ mass spectrometry J Clin Endocrinol Metab 72:p39 36 Ballard PL (1979) Delivery and transport of glucocorticoids to target cells Baxter JD, Rousseau GG: Glucocorticoid Hormone Action, New York, Springer Verlag, p 25 37 Peterson RE (1971) Metabolism of adrenal cortical steroids, in Christy NP: The Human Adrenal Cortex New York, Harper & Row, p 87 38 Bradlow HL, Monder C, Zumoff B (1982) Metabolism of cortoic acids in man J J Clin Endocrinol Metab 54:p296 39 Nelson DH (1980) The adrenal cortex: Physiological function and disease, in Smith LH: Major Problems in Internal Medicine, Philadelphia, Saunders, vol 18 40 Merke DP, Bornstein SR (2005) Congenital adrenal hyperplasia Lancet 365, 2125-2136 41 Speicer PW, White PC (2003) Congenital adrenal hyperplasia N Engl J Med 349,776-788 42 Lin D, Sugawara T, Strauss JF, Clark BJ, Stocco DM et al (1995) Role of steroidogenic acute response protein in adrenal and gonadal steroidogenesis Science 267:1828-1831 43 Biglieri EG, Herron MA, Brust N (1966) 17α-hydroxylation in men J Clin Invest 45:1946 44 Bongiovanni AM (1962) The adrenogenital syndrome with deficiency of 3βhydroxysteroid dehydrogenase J Clin Invest 41:2086 45 Maria New (2006) 21-Hydroxylase deficiency: Classical & Nonclassical congenital adrenal hyperplasia Edition Elsevier, San Tiago, CA 46 Maria New, White PC, Pang SA, Dupont B, Speiser PW (1989) The adrenal hyperplasia In Scriver, Beaudet, Sly, Valle The metabolic basis of inherited diseases 6th edition.p1881 47 White PC, Pascoe L (1992) Disorders of 11 β-hydroxylase isoenzymes Trends Endocrinol Metab 79:1 48 Zachmann M, Werder EA, Prader A (1982) Two types of male pseudohermaphroditism due to 17,20-desmolase deficiency J Clin Endocrinol Metab 55:487 49 Imperato McGinley J, Gautier T, Peterson RE, Shackleton C (1986) The prevalance of α-reductase deficiency in children with ambiguous genitalia in the Domenican Republic J Urol 136:867 50 Keiko Homma, Tomonobu Hasegawa, Toshiro Nagai et al (2006) Urine steroid hormon profile analysis in Cytochrome P450 Oxidoreductase deficiency: Implication for the backdoor pathway to dihydrotestosterone J Clin Endocrinol Metab 91: 2643-2649 51 Smith EP, Boyd J, Frank GR, Takahashi H, Cohen EM, Specker B, Williams TC, Lubann DB, Korach KS (1994) Estrogen resistance caused by a mutation in the estrogen receptor gen in a man New Eng J Med, 331: 1056-1061 52 Đỗ Trung Quân (2012) Hội chứng Cushing, Bệnh học nội khoa II, Trường Đại học Y Hà Nội: 347-359 53 Đỗ Trung Quân (2012) Suy thượng thận mạn tính, Bệnh học nội khoa II, Trường Đại học Y Hà Nội: 360-371 54 Đỗ Trung Quân (2012) Cường aldosteron, Bệnh học nội khoa II, Trường Đại học Y Hà Nội: 372-376 55 R M Raynolds, L A Shakerdi, K Sandhu, A M Wallace, P J Wood and B R Walker (2005) The utility of three different methods for measuring urinary 18-hydroxycortisol in the differential diagnosis of suspected primary hyperaldosteronism, European Journal of Endocrinology 152: 903-907 56 John W Honour, Richard Jones, Sam Leary, Jean Golding, Ken K Ong and David B Dunger (2007) Relationships of urinary adrenal steroid at age years with birth weight, postnatal growth, blood pressure, and glucose metabolism J of Clin Endocrinol Metab 92: 4340-4345 57 Rafael Timon, Guillermo Olcina, Pablo Tomas Carus, Armando Raimundo, Juan I Maynar, Marcos Maynar (2012) Urinary endogenous steroids and their relationships with BMD and body composition in healthy young males Endocrine 58 Claudia Rossi, Lisa Calton, Heather A Brown, Scott Gillingwater, A Michael Wallace et al (2011) Confirmation of congenital adrenal hyperplasia by adrenal steroid profiling of filter paper dried blood samples using ultra – performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, Clin Chem Lab Med 59 Jong Man Yoon, Kyung Ho Lee (2001) Gas chromatography and mass spectrometric analysis of conjugated steroids un urine J Bioci 26: 627-634 60 Bong Chul Chung, Hea Young P Choo, Tae Wook Kim et al (1990) Analysis of anabolic steroid using GC/MS with selected ion monitoring Journal of Analytical Toxicology, Vol 14: 91-95 61 James O Westgard (1999) Basic Method Validation, Training in analytical quality management for healthcare laboratories, Westgard Quality Corporation, 7614 Gray Fox Trail Madison, seconde edition 62 Harr KE, Flatland B, Nabity MB, Freeman KP (2013) ASVCP Guidelines Allowable total error (Biochemistry) Approved version 1.0 63 James O Westgard (1999) Method validation: The replication experiment, Basic Method Validation, Training in analytical quality management for healthcare laboratories, Westgard Quality Corporation: 82-88 64 James O Westgard (1999) Method validation: The Interference, Recovery, and Detection limit experiments, Basic Method Validation, Training in analytical quality management Corporation: 104-121 for healthcare laboratories, Westgard Quality 65 Garry L.Horowitz, Sousan Altaie, James C.Boyd, Ferruccio Cerriot et al (2010) Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guidline-Third edition, Vol 28, No 30 66 David A Armbruster, Terry Pry (2008) Limit of Blank, Limit of Detection and Limit of Quantitation Clin Biochem Rev 29: 49-52 67 IJ Philips, EM Conway, RA Hodkinson and JW Honour (2004) External quality assessment of urinary steroid profile analysis Ann Clin Biochem 41: 474-478 68 Shauna C Andeson, Susan Cockeyne (1993) Clinical chemistry concepts and applications W.B Sauders Company: 58 – 66 69 Honour JW (2001) Procedure for neonatal screening for congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency Hormon Research 55: 201-205 70 Ju-Yeon Moon, Young Wan Ha, Myeong Hee Moon, Bong Chul Chung, and Man Ho Choi (2010) Systematic Error in Gas Chromatography-Mass Spectrometry based quantification of Hydrolyzed urinary steroids, Cancer Epidemiol Biomarkers: 388-397 Phụ lục 1: CAM KẾT TỰ NGUYỆN THAM GIA ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU (DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH KHỎE MẠNH) Tôi tên là:………………………………………………là …… cháu ………………………………………………………………………………… Địa chỉ, điện thoại:…………………………………………………………… Bé sinh ngày……tháng … năm ……tại Bệnh viện………………………… Cân nặng sinh… kg, tuổi thai …… tuần Tình trạng sinh…………… Sau nghe giải thích ý nghĩa, tầm quan trọng lợi ích tham gia nghiên cứu thiết lập giá trị tham chiếu cho số số steroid niệu trẻ sơ sinh Tôi đồng ý tự nguyện tham gia phối hợp với nhóm nghiên cứu cơng việc sau: Lấy mẫu nước tiểu trẻ theo hướng dẫn Bảo quản mẫu nước tiểu tủ lạnh 4-8oC đến giao cho nhóm nghiên cứu Thơng báo tình trạng phát triển trẻ thơng tin cần thiết khác thời gian nghiên cứu Chúng tơi cam kết giữ bí mật tồn thơng tin trẻ gia đình Chúng tơi thơng báo qua điện thoại kết xét nghiệm trẻ tư vấn miễn phí vấn đề liên quan đến kết xét nghiệm Mọi vấn đề liên hệ theo địa chỉ: Ts Trần Thị Chi Mai, điện thoại số: 0934220994 Ths Trần Thị Ngọc Anh, điện thoại số: 0904395444 Ngày……tháng……năm… Họ tên người vấn Họ tên người vấn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) Phụ lục 2: CAM KẾT TỰ NGUYỆN THAM GIA ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU (DÀNH CHO TRẺ NGHI NGỜ CÓ BỆNH RỐI LOẠN CHUYỂN HĨA HORMON STEROID) Tơi tên là:………………………………………………là …… cháu …………………………………………., sinh ngày……tháng … năm …… Địa chỉ: ……………………………………………………………………… Điện thoại:…………………………………………………………………… Sau nghe giải thích ý nghĩa, tầm quan trọng lợi ích tham gia nghiên cứu sàng lọc chẩn đoán bệnh rối loạn sinh tổng hợp chuyển hóa hormon steroid Tơi đồng ý tự nguyện tham gia phối hợp với nhóm nghiên cứu công việc sau: Lấy mẫu nước tiểu trẻ theo hướng dẫn Bảo quản mẫu nước tiểu tủ lạnh 4-8oC đến giao cho nhóm nghiên cứu Thơng báo tình trạng phát triển trẻ thông tin cần thiết khác thời gian nghiên cứu Chúng tơi cam kết giữ bí mật tồn thơng tin trẻ gia đình Chúng thông báo qua điện thoại kết xét nghiệm trẻ tư vấn miễn phí vấn đề liên quan đến kết xét nghiệm Mọi vấn đề liên hệ theo địa chỉ: Ts Trần Thị Chi Mai, điện thoại số: 0934220994 Ths Trần Thị Ngọc Anh, điện thoại số: 0904395444 Ngày……tháng……năm… Họ tên người vấn Họ tên người vấn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) Phụ lục 3: BỘ CÂU HỎI DÀNH CHO NGHIÊN CỨU Phần A: Dành cho nghiên cứu viên vấn trực tiếp kết hợp với thăm khám lâm sàng: Số nghiên cứu:………… Ngày………tháng…….năm……… Bệnh viện…………………………………… Họ tên trẻ: …………………………………… Tuổi…….năm…… tháng Giới tính: Nam/ Nữ Họ tên người vấn: …………………………, …… trẻ Điện thoại liên hệ: ………………………… Trẻ phát bệnh vào thời điểm…………………………khi trẻ …… tuổi (tháng) Phần B: Dành cho nhân viên y tế (nghiên cứu viên) Số nghiên cứu: ……………… Ngày thăm khám trẻ …………………… Tại Bệnh viện: ……………………… Tuổi trẻ: ………tuổi tháng (ghi rõ số tháng trẻ < tuổi) Dấu hiệu lâm sàng trẻ:…………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Phần C: Kết xét nghiệm Kết xét nghiệm sinh hóa: Ngày xét nghiệm……………………………… Na+ (mmol/L):…………… K+ (mmol/L)……………… Kết miễn dịch: 17-OHP ………………… Testosterone: ………………………………… Xét nghiệm khác: ……………………………………………………… …………………………………… ………………………………………… Phụ lục 4: CÁC SẢN PHẨM CHUYỂN HĨA CHÍNH CỦA HORMON STEROID KHI PHÂN TÍCH STEROID NIỆU BẰNG KỸ THUẬT GC/MS: Tên viết tắt Tên đầy đủ An Androsterone Et DHEA (and sulfate) 11β-OH-An 11β-OH-Et 11-OXO-Et Etiocholanolone Dehydroepiandrosterone 11β-Hydroxy-androsterone 11β-Hydroxy-etiocholanolone 11-Oxo-etiocholanolone 16α-DHEA 16α-OH-DHEA PDa Pregnanediola 5PD Pregnadienolb 17HP Pregnenediol Pregnadienol 17-OH-pregnanolone 3α5α17HP 3α5α-17-OH-pregnanolone PT 5PT PTONE THDOC 5αTHDOC THS THA 5αTHA THB 5αTHB THALDO THE THF 5αTHF α-Cortolone β-Cortolone α-Cortol Sản phẩm chuyển hóa Androstenedione, testosterone, 5α-dihydrotestosterone, DHEA Testosterone, DHEA Dehydroepiandrosterone 11β-OH-androstenedione, cortisol Cortisol Cortisol Dehydroepiandrosterone, Dehydroepiandrosterone-sulfate Progesterone, 11deoxycorticosterone Pregnenolone Pregnenolone (pregnenediol) 17-OH-progesterone 17-OH-progesterone and other fetal origin Pregnanetriol 17-OH-progesterone 5-Pregnenetriol 17-OH-pregnenolone Pregnanetriolone 21-Deoxycortisol Tetrahydrodeoxycorticosterone 11-Deoxycorticosterone 5α-Tetrahydrodeoxycorticosterone 11-Deoxycorticosterone Tetrahydro-11-deoxycortisol 11-Deoxycortisol Tetrahydro-11Corticosterone dehydrocorticosterone 5α-Tetra-11Corticosterone dehydrocorticosterone Tetrahydrocorticosterone Corticosterone 5α-Tetrahydrocorticosterone Corticosterone Tetrahydroaldosterone Aldosterone Tetrahydrocortisone Cortisol, cortisone Tetrahydrocortisol Cortisol 5α-Tetrahydrocortisol Cortisol α-Cortolone Cortisol, cortisone β-Cortolone Cortisol, cortisone α-Cortol Cortisol Tên viết tắt β-Cortol 6β-OH-cortisol Tên đầy đủ β-Cortol 6β-OH-cortisol Sản phẩm chuyển hóa Cortisol Cortisol