Tác dụng hướng estrogen của viên nang cứng từ lá Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) trên chuột nhắt trắng bị cắt buồng trứng

Viên nang cứng từ lá Chùm ngây (trồng tại tỉnh An Giang) được nghiên cứu thực nghiệm tác dụng estrogen với mục đích cung cấp các dữ liệu khoa học cho ứng dụng lá Chùm ngây trong việc nâng cao chất lượng sống của phụ nữ ở giai đoạn tiền mãn kinh và mãn kinh.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học TÁC DỤNG HƯỚNG ESTROGEN CỦA VIÊN NANG CỨNG TỪ LÁ CHÙM NGÂY (MORINGA OLEIFERA LAM.) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG BỊ CẮT BUỒNG TRỨNG Nguyễn Thị Thu Hương*, Mai Thành Chung* TÓMTẮT Mục tiêu nghiên cứu: Viên nang cứng từ Chùm ngây (trồng tỉnh An Giang) nghiên cứu thực nghiệm tác dụng estrogen với mục đích cung cấp liệu khoa học cho ứng dụng Chùm ngây việc nâng cao chất lượng sống phụ nữ giai đoạn tiền mãn kinh mãn kinh Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino cắt bỏ buồng trứng (gây giảm sinh dục) sau 15 ngày chia ngẫu nhiên thành lô chứng (uống nước cất), lô thử (uống viên nang Chùm ngây) lô đối chiếu (uống estradiol valerat) Sau 15 ngày dùng thuốc, giải phẫu cân trọng lượng tử cung định lượng nồng độ 17β-estradiol huyết tương Tiến hành song song với lô chuột bình thường Kết quả: Viên nang Chùm ngây liều uống viên/kg trọng lượng chuột (tương đương với liều quy đổi người - viên/ngày) không ảnh hưởng trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột giảm sinh dục Trên chuột bình thường, viên nang Chùm ngây khơng ảnh hưởng nồng độ 17βestradiol huyết tương chuột Trên chuột giảm sinh dục, viên nang Chùm ngây liều viên/kg làm tăng nồng độ 17β-estradiol huyết tương (tăng 56,15%), đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng giảm sinh dục phục hồi giá trị sinh lý Kết luận: Viên nang từ Chùm ngây liều uống viên/kg trọng lượng chuột thể tác dụng estrogen qua việc phục hồi nồng độ estradiol huyết tương chuột nhắt trắng bị giảm sinh dục cắt buồng trứng Từ khóa: Lá Chùm ngây, chuột cắt bỏ buồng trứng, tác dụng estrogen ABSTRACT THE ESTROGENIC EFFECTS OF HARD CAPSULE FROM MORINGA OLEIFERA LEAVES IN OVARIECTOMIZED MICE Nguyen Thi Thu Hương, Mai Thanh Chung * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 83 – 87 Objectives: Moringa capsules made from Moringa oleifera leaves harvested in An Giang province were subjected to study its estrogenic effects in order to provide scientific data for the application of Moringa oleifera leaves as nutraceutical in the life quality of premenopausal/menopause women Methods: 15-day after ovariectomy, female Swiss albino mice were randomly divided into control groups (distilled water), test groups (Moringa capsules) or positive control groups (estradiol valerate) After 15-day administration, the uterus weights and plasma 17β-estradiol levels were determined Results: Moringa capsules at the oral dose of to capsules/kg mouse body weight (equivalent to to capsules/day on human dosage based on conversion coefficient) did not effect on the uterus weights of naïve mice and ovariectomized mice Moringa capsules did not change plasma 17β-estradiol levels in naïve mice In ovariectomized mice, Moringa capsules at dose of capsules/kg elevated plasma 17β-estradiol levels reached  Trung Tâm Sâm Dược liệu TP Hồ Chí Minh - Viện Dược liệu Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương ĐT: 02838274377 Email: huongsam@hotmail.com 83 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 56.15% significant increase as compared to ovariectomized controls and restored to the normal values Conclusions: Moringa capsules at dose of capsules/kg mouse body weight had estrogenic effect by the increase of plasma 17β-estradiol levels in ovariectomized mice Keywords: Moringa oleifera leaves, ovariectomized mice, estrogenic effect cảnh tăng đường huyết(4) Nghiên cứu gần ĐẶT VẤN ĐỀ chứng minh tác dụng hạ đường huyết Thời kỳ tiền mãn kinh, mãn kinh điều hòa lipid máu chế phẩm từ Chùm chuyển tiếp tự nhiên mà tất phụ nữ phải trải ngây (viên nang Chùm ngây)(3,6) Kế thừa kết qua đời, xảy suy giảm chức nghiên cứu Chùm ngây, đề tài buồng trứng dẫn đến việc sản xuất hormon thực nhằm khảo sát tác dụng estrogen sinh dục nữ (estrogen) bị giảm Theo Tổ chức Y viên nang Chùm ngây chuột nhắt trắng tế Thế giới (WHO), độ tuổi mãn kinh trung bình ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU phụ nữ 51 tuổi khoảng tuổi phổ biến mà phụ nữ trải qua thời kỳ mãn kinh 48 Đối tượng nghiên cứu 55 tuổi Trong giai đoạn thể người phụ nữ Viên nang cứng Chùm ngây bào chế có nhiều thay đổi, rối loạn tâm sinh lý tăng quy mô pilot từ cao chiết cồn Chùm ngây (cao nguy bệnh lý khác Liệu pháp hormon chiết tiêu chuẩn hóa với hàm lượng thay giúp cải thiện rối loạn nâng isoquercitrin 0,263%) đạt tiêu chuẩn sở cao chất lượng sống người phụ nữ Trung tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí dẫn đến nhiều tác dụng phụ gây Minh Chế phẩm từ Chùm ngây khảo sát nguy hiểm(1) Do đó, việc tìm đến liều tương đương với liều dự kiến sử dụng phytoestrogen tự nhiên, có tính an tồn người tính theo hệ số quy đổi viên xu hướng phổ biến viên/kg trọng lượng chuột Cây Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) số thảo dược có giá trị chữa bệnh bổ sung dinh dưỡng cho thể Nhiều nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng cho thấy bột cao chiết từ Chùm ngây có tác dụng bảo vệ tế bào theo hướng chống tổn thương oxy hóa, tác dụng kháng viêm, giảm đau, chống loét dày, tác dụng hạ huyết áp, tăng cường miễn dịch, tác dụng ổn định đường huyết điều hòa rối loạn lipid máu(11) Ở Việt Nam, Chùm ngây sử dụng thức uống dinh dưỡng tạo sản phẩm theo hướng hỗ trợ điều trị Nghiên cứu trước Trung tâm Sâm Dược liệu TP.HCM cho thấy cao chiết từ Chùm ngây (được thu hái Huyện Tri Tôn, Tỉnh An Giang) thể tác dụng nội tiết tố sinh dục nữ (tác dụng kiểu estrogen)(2,7), tác dụng tăng lực, bảo vệ gan trước tổn thương gan thực nghiệm gây paracetamol(5) tác dụng điều hòa đường huyết chuột nhắt bị cắt buồng trứng có bệnh 84 Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng cái, chủng Swiss albino, - tuần tuổi, cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế – TP Nha Trang Chuột nuôi thực phẩm viên, nước uống đầy đủ để ổn định tuần trước thử nghiệm Chuột cho uống mẫu thử với thể tích 10 ml/kg trọng lượng chuột Gây mơ hình chuột nhắt trắng giảm sinh dục Thiết kế nghiên cứu thực nghiệm, đo lường độc lập đánh giá thay đổi trọng lượng tử cung nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột bị cắt buồng trứng (giảm sinh dục) so với chứng sinh lý (chuột bình thường) Tác dụng cao chiết thay đổi so sánh thống kê với lô chứng (không điều trị) với lô thuốc đối chiếu (estrogen tổng hợp) Chuột nhắt gây mê ether, Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 dùng cột phần ống dẫn trứng lại sau cắt bỏ buồng trứng Khâu vết mổ vô trùng sát trùng vết thương dung dịch cồn iod (Povidine®) Chuột sau cắt buồng trứng chăm sóc để ổn định tuần Sau tuần, khảo sát vết phết dịch nhờn âm đạo ngày để xác định chuột bị cắt bỏ hoàn tồn buồng trứng Loại bỏ động vật có vết phết động dục dương tính (giai đoạn estrus) ngày cuối(8) Tác động kiểu estrogen cao Chùm ngây đánh giá qua thay đổi trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột bị cắt buồng trứng Chuột bình thường chuột bị giảm sinh dục chia lô (n = 8-10) cho uống nước cất (lô chứng), viên nang Chùm ngây (lơ thử) hay Progynova® (chứa estradiol valerat mg/viên, Bayer Co Germany; lô đối chiếu) 15 ngày 24 sau lần dùng thuốc cuối cùng, giải phẫu xác định trọng lượng tử cung [g %, (Trọng lượng tử cung/trọng lượng chuột) x 100] Song song, lấy máu tĩnh mạch đuôi chuột đem định lượng nồng độ 17βestradiol huyết tương theo protocol Kit ELISA Genway Ltd Co., USA Định lượng 17β-estradiol huyết tương kỹ thuật ELISA Bảng Quy trình định lượng (theo hướng dẫn Bộ kit E2-EASIA, Genway Ltd Co., USA) Calibrator Mẫu huyết (µL) tương (µL) Chuẩn (calibrator) 50 Mẫu 50 Estradiol-HRP 50 50 Anti-estradiol 50 50 Ủ nhiệt độ phòng lắc ngang liên tục 700 rpm Hút bỏ toàn thể tích giếng Rửa lần với 0,4 ml dung dịch rửa (Wash Buffer) Dung dịch chất 200 µL 200 µL TMB (Tetramethylbenzidine) Ủ 30 phút nhiệt độ phòng lắc ngang liên tục 700 rpm H2SO4 1,8 N 50 µL 50 µL Đọc độ hấp thu bước sóng 450 nm vòng sau thêm dung dịch dừng phản ứng Nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột nội suy từ phương trình logarithm: y Nghiên cứu Y học = 89,16e-0,00x với R² = 0,986 Đánh giá kết Các số liệu biểu thị trị số trung bình: M ± SEM (Standard error of the mean – sai số chuẩn giá trị trung bình) xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One–Way ANOVA Student-Newman-Keuls test (phần mềm SigmaStat 3.5, Systat Software, Inc., USA.) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% p < 0,05 so với lô chứng KẾT QUẢ-BÀN LUẬN Kết Bảng cho thấy trọng lượng tử cung lô chứng giảm sinh dục giảm 42,95%, đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bình thường Estradiol valerat làm tăng trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục (p < 0,001) Viên nang Chùm ngây không ảnh hưởng trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột giảm sinh dục, cho thấy chế phẩm chưa thể tác dụng kiểu estrogen phát triển tử cung chuột Bảng Trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục sau dùng thuốc 15 ngày Lơ (n=10) Trọng lượng tử cung (g%) Chuột bình Chuột giảm thường sinh dục ### 0,156 ± 0,008 0,089 ± 0,011 Chứng Viên nang Chùm ngây 0,141 ± 0,006 (1 viên/kg) Viên nang Chùm ngây 0,148 ± 0,005 (2 viên/kg) Estradiol valerat 0,5 ### 0,608 ± 0,057 mg/kg (##) ## 0,107 ± 0,013 ### 0,064 ± 0,004 *** 0,219 ± 0,013 p < 0,01, (###) p < 0,001 so với lơ chứng bình thường p< 0,001 so với lô chứng giảm sinh dục (***) Kết Bảng cho thấy lơ chứng giảm sinh dục có nồng độ 17β-estradiol huyết tương giảm 45,91%, đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bình thường Estradiol valerat làm tăng nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột bình thường chuột giảm sinh dục (p < 0,001) Trên chuột bình thường, viên nang 85 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Chùm ngây không ảnh hưởng nồng độ 17βestradiol huyết tương chuột Lô chuột giảm sinh dục cho uống viên nang Chùm ngây liều viên/kg có nồng độ 17β-estradiol huyết tương không khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng giảm sinh dục khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bình thường, cho thấy viên nang Chùm ngây liều chưa thể tác dụng suy giảm nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột bị cắt buồng trứng Nồng độ 17β-estradiol huyết tương lô chuột giảm sinh dục cho uống viên nang Chùm ngây liều viên/kg tăng 56,15%, đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng giảm sinh dục phục hồi giá trị sinh lý, cho thấy viên nang Chùm ngây liều thể tác dụng điển hình liều viên/kg suy giảm nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột bị cắt buồng trứng (Bảng 3) Bảng Nồng độ 17β-estradiol lơ chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục sau dùng thuốc 15 ngày Lô (n=10) Chứng Viên nang Chùm ngây (1 viên/kg) Viên nang Chùm ngây (2 viên/kg) Estradiol valerat 0,5 mg/kg Nồng độ 17β-estradiol (pg/ml) Chuột bình Chuột giảm thường sinh dục ### 27,36 ± 3,29 14,80 ± 0,083 # 24,86 ± 1,91 19,79 ± 2,40 24,61 ± 2,89 23,31 ± 2,22 (56,15%) ** ### 57,58 ± 2,04 (110,45%) *** 61,57 ± 5,22 (316,0%) (##) p < 0,01, (###) p < 0,001 so với lơ chứng bình thường p< 0,05, (***) p< 0,001 so với lô chứng giảm sinh dục ( ): Tỷ lệ % tăng so với lô chứng tương ứng (*) BÀN LUẬN Các nghiên cứu in vivo để khảo sát tác dụng kiểu estrogen phytoestrogen thường lựa chọn khảo sát loài gặm nhấm đối tượng như: động vật chưa trưởng thành (hoạt động nội tiết tố sinh dục chưa hoàn chỉnh), động vật bị hủy tuyến yên (cơ quan 86 trung ương điều hành hoạt động quan sinh dục) hay động vật bị gây giảm sinh dục (động vật bị cắt hai buồng trứng để loại ảnh hưởng estrogen nội sinh) Kết khảo sát trước cho thấy cao Chùm ngây có tính an tồn tác dụng kiểu estrogen điển hình mơ học nội mạc tử cung chuột cống trắng bị cắt hai buồng trứng với 70% số chuột có xuất ưu tế bào biểu mô vảy, tương tự tác dụng estrogen tổng hợp estradiol valerat (100% số chuột có xuất ưu tế bào biểu mô vảy) Kết mô học nội mạc tử cung lơ chuột cống non uống cao Chùm ngây có tăng sinh tế bào biểu mô vảy nhanh so với lô chứng uống nước cất (7) Kết nghiên cứu đề tài tương đồng với nghiên cứu trước(9,10), cho thấy viên nang Chùm ngây liều viên/kg, uống 15 ngày phục hồi suy giảm nồng độ 17β-estradiol huyết tương chuột bị cắt buồng trứng không gây ảnh hưởng nồng độ 17βestradiol huyết tương chuột bình thường Kết cho thấy ưu điểm viên nang Chùm ngây so với estradiol valerat, estrogen tổng hợp thể tác dụng estrogen chuột bình thường chuột giảm sinh dục Kết hướng tới triển vọng ứng dụng lâm sàng viên nang Chùm ngây để cải thiện chất lượng sống phụ nữ thời kỳ tiền mãn kinh mãn kinh, giúp hạn chế tác dụng phụ không mong muốn liệu pháp hormon thay Kết đề tài cho thấy viên nang Chùm ngây liều viên/kg sau 15 ngày uống không ảnh hưởng trọng lượng tử cung chuột bình thường chuột giảm sinh dục Tuy nhiên dựa vào kết khảo sát độc tính bán trường diễn cho thấy viên nang Chùm ngây liều viên/kg sau tháng uống làm tăng trọng lượng buồng trứng-tử cung chuột bình thường, đặt giả thuyết tác dụng viên nang Chùm ngây phát triển tử cung chuột nhắt trắng xuất sau thời gian sử dụng dài Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 KẾT LUẬN Viên nang từ Chùm ngây liều uống viên/kg trọng lượng chuột thể tác dụng estrogen qua việc phục hồi nồng độ estradiol huyết tương chuột nhắt trắng bị giảm sinh dục cắt buồng trứng LỜI CÁM ƠN: Bài báo phần kết đề tài Nghiên cứu khoa học mã số 373.2015.9 thuộc Sở Khoa học Công nghệ Tỉnh An Giang, cấp kinh phí từ Ủy Ban Nhân dân tỉnh An Giang theo Quyết định số 2572/QĐ ngày 13/11/2015 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cobin RH, Goodman NF; AACE Reproductive Endocrinology Scientific Committee (2017) “American Association of Clinical Endocrinologists (AACE)/American College of Endocrinology (ACE) Position Statement on menopause-2017 update” Endocr Pract; 23(7):869-880 Đỗ Minh Anh, Nguyễn Văn Nghi, Nguyễn Thị Thu Hương (2012) “Tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nữ cao chiết từ Chùm ngây“ Tạp chí Dược liệu; 17(2): 73-77 Nguyễn Thị Thu Hương, Chung Thị Mỹ Duyên, Nguyễn Thị Ngọc Đan (2017) “Tác dụng điều hòa lipid máu chế phẩm từ Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) chuột nhắt trắng bị gây tăng lipid máu tyloxapol” Y học TP Hồ Chí Minh; 21(6): 49-54 Nguyen Thi Thu Huong, Huynh Nha Van, Le Quang Binh (2013) “Hypoglycemic effects of Moringa oleifera leaves extract on ovariectomized mice” Proceedings of The Eighth Indochina Conference; 676-680 Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Hoàng Minh, Nguyễn Lĩnh Nhân, Lý Hải Triều, Nguyễn Thị Ngọc Đan (2016) “Khảo sát Nghiên cứu Y học tác dụng tăng lực bảo vệ gan Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) thực nghiệm” Y học TP Hồ Chí Minh; 20(6): 222-227 Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Hoàng Minh, Nguyễn Thị Ngọc Đan (2017) “Nghiên cứu thực nghiệm tác dụng bảo vệ gan chế phẩm từ Chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) tổn thương gan mạn ethanol” Y học TP Hồ Chí Minh; 21(6): 125-130 Nguyễn Thị Thu Hương, Phạm Thị Nguyệt Hằng, Đỗ Thị Phương (2014) “Tác dụng cao chiết cồn từ Chùm ngây nội mạc tử cung chuột cống trắng giảm sinh dục” Tạp chí Dược liệu; 19(2): 67-73 OECD (2007) Uterotrophic bioassay in rodents: A short-term screening test for oestrogenic properties OECD guideline for the testing of chemicals No.440 Shukla S, Mathur R, Prakash AO (1988) “Biochemical and physiological alterations in female reproductive organs of cyclic rats treated with aqueous extract of Moringa oleifera Lam” Acta Eur Fertil.; 19: 225–232 10 Shukla S, Mathur R, Prakash AO (1989) “Histoarchitecture of the genital tract of ovariectomized rats treated with an aqueous extract of Moringa oleifera roots” J Ethnopharmacol.; 25(3): 249261 11 Stohs SJ, Hartman MJ (2015) “Review of the Safety and Efficacy of Moringa oleifera” Phytotherapy Res.; 29(6): 796-804 Ngày nhận báo: 25/04/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/06/2018 Ngày báo đăng: 20/09/2018 87 ... thấy viên nang Chùm ngây liều viên/ kg sau tháng uống làm tăng trọng lượng buồng trứng- tử cung chuột bình thường, đặt giả thuyết tác dụng viên nang Chùm ngây phát triển tử cung chuột nhắt trắng. .. chuột bị cắt buồng trứng (Bảng 3) Bảng Nồng độ 17β-estradiol lô chuột bình thường chuột bị gây giảm sinh dục sau dùng thuốc 15 ngày Lô (n=10) Chứng Viên nang Chùm ngây (1 viên/ kg) Viên nang Chùm. .. điểm viên nang Chùm ngây so với estradiol valerat, estrogen tổng hợp thể tác dụng estrogen chuột bình thường chuột giảm sinh dục Kết hướng tới triển vọng ứng dụng lâm sàng viên nang Chùm ngây