ĐáNH GIá kết QUả bảo QUảN LạNH TINH TRùNG NGƯờI BằNG 3 PHƯƠNG PHáP hạ NHIệT sử DụNG máy NICOOL LM10, hơi NITƠ LỏNG và tủ LạNH âm sâu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ -*** - PHM HNG MINH ĐáNH GIá KếT QUả BảO QUảN LạNH TINH TRùNG NGƯờI BằNG PHƯƠNG PHáP Hạ NHIệT Sử DụNG MáY NICOOL LM10, HƠI NITƠ LỏNG Và Tủ LạNH ¢M S¢U Chuyên ngành : Mô - Phôi thai học Mã số : 60720102 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học TS Đào Thị Thúy Phượng HÀ NỘI - 2019 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT : Tinh trùng BQL : Bảo quản lạnh WHO : World Health Organization / Tổ chức y tế giới DNA : Deoxyribonucleic acid CSF : Cryosurvival factor / Chỉ số sống sót sau bảo quản lạnh IUI : Intra Uterine Insemination / Bơm tinh trùng vào buồng tử cung IVF : In Vitro Fertilization / Thụ tinh ống nghiệm ICSI : Intra - cytoplasmmic Sperm Injection / Bơm tinh trùng vào bào tương noãn CPA : Cryoprotectant Agent / Chất bảo vệ lạnh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tinh trùng số định đông lạnh tinh trùng 1.1.1 Tinh trùng 1.1.2 Một số định đông lạnh tinh trùng 1.2 Những nghiên cứu bảo quản lạnh sâu tinh trùng người 1.2.1 Lịch sử phát triển 1.2.2 Những nghiên cứu phương pháp bảo quản lạnh sâu tinh trùng người 1.2.3 Kết hỗ trợ sinh sản sử dụng tinh trùng bảo quản lạnh 20 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 23 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu .23 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .23 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu phương pháp chọn mẫu 23 2.2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 2.2.4 Kỹ thuật công cụ thu thập số liệu .24 2.2.5 Kỹ thuật khống chế sai số .24 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu 24 2.2.7 Quy trình nghiên cứu 25 2.2.8 Phương tiện nghiên cứu 26 2.3 Kỹ thuật tiêu nghiên cứu 26 2.3.1 Kỹ thuật nghiên cứu 26 2.3.2 Các tiêu nghiên cứu 31 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu .32 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Đặc điểm mẫu tinh dịch nghiên cứu .33 3.1.1 Phân bố mẫu nghiên cứu theo lứa tuổi 33 3.1.2 Đặc điểm chung đại thể 33 3.1.3 Đặc điểm chung vi thể 34 3.2 Ảnh hưởng phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10 chất lượng tinh trùng 34 3.2.1 Về khả sống tinh trùng 34 3.2.2 Về khả di động tinh trùng 35 3.2.3 Về tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 35 3.3 Ảnh hưởng phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng chất lượng tinh trùng .36 3.3.1 Về khả sống tinh trùng 36 3.3.2 Về khả di động tinh trùng 36 3.3.3 Về tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 37 3.4 Ảnh hưởng phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu chất lượng tinh trùng .37 3.4.1 Về khả sống tinh trùng 37 3.4.2 Về khả di động tinh trùng 38 3.4.3 Về tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 38 3.5 Đánh giá chất lượng phương pháp bảo quản lạnh 39 3.5.1 Sau bảo quản lạnh 10 ngày 39 3.5.2 Sau bảo quản lạnh 30 ngày 39 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 40 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 41 DỰ TRÙ KINH PHÍ 42 DỰ TRÙ TIẾN ĐỘ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Chất lượng tinh dịch mẫu nghiên cứu .34 Bảng 3.2 Tỷ lệ tinh trùng sống trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10 34 Bảng 3.3 Khả di động tinh trùng trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10 .35 Bảng 3.4 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10 .35 Bảng 3.5 Tỷ lệ tinh trùng sống trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng 36 Bảng 3.6 Khả di động tinh trùng trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng 36 Bảng 3.7 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng 37 Bảng 3.8 Tỷ lệ tinh trùng sống trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu 37 Bảng 3.9 Khả di động tinh trùng trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu 38 Bảng 3.10 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu 38 Bảng 3.11 Chất lượng tinh trùng 10 ngày sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu 39 Bảng 3.12 Chất lượng tinh trùng 30 ngày sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu 39 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố mẫu nghiên cứu theo lứa tuổi .33 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc tinh trùng trưởng thành .4 Hình 1.2 Cryovial 1,8M .13 Hình 1.3 Máy hàn miệng cọng rạ CBS SYMS III 13 Hình 1.4 Bảo quản lạnh tinh trùng đông lạnh phôi cọng rạ nitơ lỏng, Phòng thí nghiệm điều trị hỗ trợ y tế Limoges 17 ĐẶT VẤN ĐỀ Vô sinh vấn đề ngày quan tâm nghiên cứu tính chất ảnh hưởng sâu rộng đến chất lượng sống nhiều cặp vợ chồng tồn giới Tỷ lệ vơ sinh giới dao động khoảng - 12% cặp vợ chồng độ tuổi sinh đẻ Tại Việt Nam, tỷ lệ mức 7,7% [1] Do đó, nhu cầu hỗ trợ sinh sản cải tiến kỹ thuật hỗ trợ sinh sản cấp thiết Một kỹ thuật thường sử dụng hỗ trợ sinh sản bảo quản lạnh tinh trùng phục vụ cho thụ tinh nhân tạo Nguyên lý kỹ thuật làm môi trường nước tế bào biến đổi thành thể rắn, tức làm ngừng chuyển động phân tử trình sinh học tế bào Mục tiêu bảo quản lạnh sau đưa nhiệt độ 37°C, tế bào trở lại hoạt động sống bình thường, khơng bị ảnh hưởng cấu trúc chức [2], [3] Sau tan đông mật độ, độ di động, khả sống tinh trùng giảm so với trước, đứt gãy DNA xuất nhiều hơn, ảnh hưởng trực tiếp đến kết hỗ trợ sinh [4], [5], [6], [7] Nhiều nghiên cứu thực để khảo sát yếu tố ảnh hưởng lên chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh như: chất lượng tinh trùng trước bảo quản, lọc rửa tinh trùng trước bảo quản, loại mơi trường, quy trình hạ nhiệt quy trình tan đơng, bảo quản thể tích lớn tinh trùng [8], [9], [10], [11] Qua đưa quy trình phù hợp, hiệu để mẫu tinh sau tan đông có khả thụ tinh phát triển thành em bé khỏe mạnh Tại Việt Nam, kỹ thuật bảo quản lạnh tinh trùng ứng dụng nhiều trung tâm nghiên cứu sôi nhiều khía cạnh Tuy nhiên, làm cách để tăng tỷ lệ tinh trùng chất lượng tốt, đơn giản giản bước trình bảo quản lạnh câu hỏi đặt cho nhà nghiên cứu Vì lý đó, chúng tơi thực đề tài nghiên cứu "Đánh giá kết bảo quản lạnh tinh trùng người phương pháp hạ nhiệt sử dụng máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu" với mục tiêu: Đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tinh dịch bình thường So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo lạnh phương pháp hạ nhiệt độ sử dụng máy Nicool 10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tinh trùng số định đông lạnh tinh trùng 1.1.1 Tinh trùng Tinh trùng sản phẩm ngoại tiết tinh hồn, có cấu tạo phù hợp với chức vận động mang gen đơn bội Sự sinh tinh tinh nguyên bào phân chia nhiều lần biệt hóa thành tinh trùng ống sinh tinh; sau tinh trùng thành thục mào tinh hồn có khả vận động thụ tinh Hai tinh hoàn đàn ơng trẻ có khả sinh khoảng 120 triệu tinh trùng ngày, đa số chúng dự trữ ống dẫn tinh, phần nhỏ dự trữ mào tinh Quá trình từ tinh trùng sinh từ ống sinh tinh tinh hoàn trưởng thành hoàn toàn mào tinh hệ thống ống dẫn kéo dài khoảng 72 - 74 ngày Khi đạt cực khoái giao hợp, tinh dịch phóng hỗn dịch bao gồm tinh trùng thành thục dịch từ ống dẫn tinh (chiếm 10%), dịch từ túi tinh (chiếm 60%), dịch tuyến tiền liệt (30%) lượng nhỏ dịch từ tuyến niêm mạc Thời gian sống tinh trùng khác nhau, phụ thuộc vào môi trường chứa chúng Trong ống sinh tinh, tinh trùng có khả sống đến vài tuần; âm đạo ngày để mơi trường ngồi thể nhanh chết [12], [13] Tinh trùng người có khả chịu thay đổi nhiệt độ (làm lạnh, làm ấm) chúng bị tổn thương q trình giữ lạnh, rã đông so với loại tế bào khác Nguyên nhân lượng nước tinh trùng thấp, khoảng 50% Tuy nhiên, trữ đông gây tổn hại đến chức tinh trùng, đặc biệt tỷ lệ sống chức di động Việc tối ưu hóa quy trình trữ lạnh giúp tinh trùng kéo dài thời gian bảo quản lên đến vài chục năm mà đảm bảo khả thụ tinh [14], [15] Năm 2013, Andras báo cáo ca sinh thành công em bé thụ tinh tinh trùng người cha trữ lạnh trước 40 năm [16] Hình 1.1 Cấu trúc tinh trùng trưởng thành (Nguồn: Histology and Cell Biology 4th Edition, 2012) 1.1.2 Một số định đông lạnh tinh trùng Tinh dịch bệnh nhân nam bị vô sinh bất thường tinh trùng thường lọc rửa để tuyển chọn tinh trùng khỏe mạnh sau đưa vào bảo quản lạnh để lưu trữ mẫu tinh quý phục vụ cho kỹ thuật hỗ trợ sinh sản 35 3.3.1 Về khả sống tinh trùng Bảng 3.5 Tỷ lệ tinh trùng sống trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng (n=30) Thời điểm Trước bảo nghiên cứu quản (I) Các số Tỷ lệ % tinh trùng sống (± SD) Sau bảo quản 10 ngày (II) 30 ngày (III) p (I-II) (I-III) (II-III) Nhận xét: 3.3.2 Về khả di động tinh trùng Bảng 3.6 Khả di động tinh trùng trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng (n=30) Thời điểm Trước bảo nghiên cứu quản (I) Các số CSF di động tiến tới (± SD) Sau bảo quản 10 ngày (II) CSF di động (± SD) Tỷ số TT di động tiến tới (± SD) Tổng số TT di động (± SD) Nhận xét: 3.3.3 Về tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 30 ngày (III) p (I-II) (I-III) (II-III) 36 Bảng 3.7 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng (n=30) Thời điểm nghiên cứu Sau bảo quản Trước bảo quản 10 ngày 30 ngày (I) (II) (III) Các số p (I-II) (I-III) (II-III) Tỷ lệ % TT hình thái bình thường (± SD) Nhận xét: 3.4 Ảnh hưởng phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu chất lượng tinh trùng 3.4.1 Về khả sống tinh trùng Bảng 3.8 Tỷ lệ tinh trùng sống trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu (n=30) Thời điểm nghiên cứu Sau bảo quản Trước bảo quản 10 ngày 30 ngày (I) (II) (III) Các số Tỷ lệ % tinh trùng sống (± SD) Nhận xét: 3.4.2 Về khả di động tinh trùng p (I-II) (I-III) (II-III) 37 Bảng 3.9 Khả di động tinh trùng trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu (n=30) Thời điểm Trước bảo nghiên cứu quản (I) Các số CSF di động tiến tới (± SD) Sau bảo quản 10 ngày (II) 30 ngày (III) p (I-II) (I-III) (II-III) CSF di động (± SD) Tỷ số TT di động tiến tới (± SD) Tổng số TT di động (± SD) Nhận xét: 3.4.3 Về tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường Bảng 3.10 Tỷ lệ tinh trùng có hình thái bình thường trước sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu (n=30) Thời điểm Trước bảo nghiên cứu quản (I) Các số Tỷ lệ % TT hình thái bình thường (± SD) Sau bảo quản 10 ngày (II) 30 ngày (III) Nhận xét: 3.5 Đánh giá chất lượng phương pháp bảo quản lạnh 3.5.1 Sau bảo quản lạnh 10 ngày p (I-II) (I-III) (II-III) 38 Bảng 3.11 Chất lượng tinh trùng 10 ngày sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu (n=30) Phương pháp Bằng máy Nicool hạ nhiệt LM10 Chỉ số (± SD) Bằng nitơ lỏng (± SD) Bằng tủ lạnh âm sâu p (± SD) CSF di động tiến tới (%) CSF di động (%) Tỷ lệ TT sống (%) Tỷ lệ TT hình thái bình thường (%) Nhận xét: 3.5.2 Sau bảo quản lạnh 30 ngày Bảng 3.12 Chất lượng tinh trùng 30 ngày sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu (n=30) Phương pháp Chỉ số Bằng máy Nicool hạ nhiệt LM10 (± SD) Bằng nitơ lỏng (± SD) CSF di động tiến tới (%) CSF di động (%) Tỷ lệ TT sống (%) Tỷ lệ TT hình thái bình thường (%) Nhận xét: CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Bằng tủ lạnh âm sâu (± SD) p 39  Bàn luận đối tượng phương pháp nghiên cứu  Bàn luận chất lượng mẫu tinh dịch bảo quản theo phương pháp hạ nhiệt độ nấc máy Nicool LM10  Bàn luận chất lượng mẫu tinh dịch bảo quản theo phương pháp hạ nhiệt độ nitơ lỏng  Bàn luận chất lượng mẫu tinh dịch bảo quản theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu  So sánh hiệu phương pháp 40 DỰ KIẾN KẾT LUẬN  Theo kết nghiên cứu 41 DỰ TRÙ KINH PHÍ Stt Chủng loại Sperm Freeze Đơn vị Số lượng Đơn giá (VNĐ) Thành tiền (VNĐ) ml 63ml/2 lọ 590.000/lọ 1.180.000 427.250/50ml 1.709.000 Feticult Flushing ml 180ml Nitơ lỏng lit 100 20.000 2.000.000 Lọ đựng tinh dịch 35 8.400 249.000 Lam 500 17.000/ 100 85.000 Lamelle 500 52.500/ 100 263.000 Pipette Pasteur 350 7.665 2.683.000 Criovial 1,8ml 200 5.202 1.040.400 Găng tay đôi 250 50.000/50 đôi 250.000 10 In ấn tài liệu 1.000.000 1.000.000 11 5% phát sinh 522.883 11 Tổng 10.981.000 42 DỰ TRÙ TIẾN ĐỘ Tháng 07/2018 : Thông qua đề cương Tháng 08/2018 - 10/2018 : Tập huấn kỹ thuật xét nghiệm tinh dịch đồ bảo quản lạnh Tháng 11/2018 - 02/2019 : Thực nghiên cứu thu thập số liệu Tháng 03/2019 - 04/2019 : Phân tích xử lý số liệu Tháng 05/2019 - 08/2019 : Hoàn thành luận văn TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Viết Tiến, Ngơ Văn Tồn, Bạch Huy Anh (2010) Tỷ lệ mắc vô sinh số yếu tố ảnh hưởng Tạp Chí Nghiên Cứu Y học, 70, 114–122 Chen Y Liu R (2007) [Cryopreservation of spermatozoa] Zhonghua Nan Ke Xue, 13(8), 734–738 Trương Công Hổ Hồ Mạnh Tường (2001) Phương pháp xét nghiệm tinh dịch Phương pháp trữ lạnh tinh trùng Bệnh viện Từ Dũ, thành phố Hồ Chí Minh Esteves S.C., Spaine D.M., Cedenho A.P (2007) Effects of pentoxifylline treatment before freezing on motility, viability and acrosome status of poor quality human spermatozoa cryopreserved by the liquid nitrogen vapor method Braz J Med Biol Res, 40(7), 985–992 Rahiminia T., Hosseini A., Anvari M cộng (2017) Modern human sperm freezing: Effect on DNA, chromatin and acrosome integrity Taiwan J Obstet Gynecol, 56(4), 472–476 Nguyễn Khang Sơn Phạm Thị Thu Thủy So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu nhược tinh lọc rửa không lọc rửa trước bảo quản , accessed: 23/05/2019 Sharma R., Kattoor A.J., Ghulmiyyah J cộng (2015) Effect of sperm storage and selection techniques on sperm parameters Syst Biol Reprod Med, 61(1), 1–12 Keros V., Rosenlund B., Hultenby K cộng (2005) Optimizing cryopreservation of human testicular tissue: comparison of protocols with glycerol, propanediol and dimethylsulphoxide as cryoprotectants Hum Reprod, 20(6), 1676–1687 Jeyendran R.S., Acosta V.C., Land S cộng (2008) Cryopreservation of human sperm in a lecithinsupplemented freezing medium Fertil Steril, 90(4), 1263– 1265 10 Isachenko V., Maettner R., Petrunkina A.M cộng (2011) Cryoprotectant-free vitrification of human spermatozoa in large (up to 0.5 mL) volume: a novel technology Clin Lab, 57(9–10), 643–650 11 Liu J., Wang W., Liu X cộng (2018) Supplementation of cryopreservation medium with TATPeroxiredoxin fusion protein improves human sperm quality and function Fertil Steril, 110(6), 1058–1066 12 Phạm Thị Minh Đức (2011) Sinh lý sinh dục sinh sản Sinh lý học Nhà xuất Y học, 347–351 13 Lê Đăng Khoa Dương Quang Huy Vô sinh nam, Phòng khám nam khoa muộn - Bệnh viện Hùng Vương 14 Feldschuh J., Brassel J., Durso N cộng (2005) Successful sperm storage for 28 years Fertil Steril, 84(4), 1017 15 WHO | WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen WHO, , accessed: 24/05/2019 16 Szell A.Z., Bierbaum R.C., Hazelrigg W.B cộng (2013) Live births from frozen human semen stored for 40 years J Assist Reprod Genet, 30(6), 743–744 17 Frainais C., Vialard F., Rougier N cộng (2010) Impact of freezing/thawing technique on sperm DNA integrity in HIV-1 patients J Assist Reprod Genet, 27(7), 415–421 18 Sherman J.K (1990) Cryopreservation of humen semen CRC Handbook of the Laboratory Diagnosis and Treatment of Infertility 1041–1045 19 Lovelock J.E Polge C (1954) The immobilization of spermatozoa by freezing and thawing and the protective action of glycerol Biochem J, 58(4), 618–622 20 Kara W.S (2012) The Birth of the Sperm Bank The Annals of Iowa 241–276 21 Endo Y., Fujii Y., Shintani K cộng (2012) Simple vitrification for small numbers of human spermatozoa Reprod Biomed Online, 24(3), 301–307 22.Aizpurua J., Medrano L., Enciso M cộng (2017) New permeable cryoprotectant-free vitrification method for native human sperm Hum Reprod, 32(10), 2007–2015 23 Isachenko V., Isachenko E., Katkov I.I cộng (2004) Cryoprotectant-Free Cryopreservation of Human Spermatozoa by Vitrification and Freezing in Vapor: Effect on Motility, DNA Integrity, and Fertilization Ability Biol Reprod, 71(4), 1167–1173 24 Bernstein AD, Petropavlovski VV (1937) Influence of nonelectrolytes on viability of spermatozoa Buleten Experimentalnoi Biologii i Medicini III 21–25 Buleten Experimentalnoi Biologii i Medicini, III, 21–25 25 Ghasem S., Rahim F., Jasemi Zergani M (2009) Vitrification of Small Volume of Normal Human Sperms: Use of Open Pulled Straw Carrier Journal of Medical Sciences, 26 Zhu J., Wu L.-M., Jin R.-T cộng (2012) [Ultra-rapid cryopreservation of human spermatozoa with different concentrations of sucrose] Zhonghua Nan Ke Xue, 18(11), 1009–1013 27 Kotdawala A.P., Kumar S., Salian S.R cộng (2012) Addition of zinc to human ejaculate prior to cryopreservation prevents freeze-thaw-induced DNA damage and preserves sperm function J Assist Reprod Genet, 29(12), 1447–1453 28 Hallak J., Sharma R.K., Wellstead C cộng (2000) Cryopreservation of human spermatozoa: comparison of TEST-yolk buffer and glycerol Int J Fertil Womens Med, 45(1), 38–42 29 McGonagle L.S., Goldstein M., Feldschuh J cộng (2002) The influence of cryoprotective media and processing procedures on motility and migration of frozenthawed human sperm Asian J Androl, 4(2), 137–141 30 Huang D.-H., Zhao H., Xiong C.-L cộng (2006) [Effects of union of albumin and egg yolk on human semen cryopreservation] Zhonghua Nan Ke Xue, 12(2), 115–119 31 Dashtestani F., Ghourchian H., Najafi A (2018) Albumin coated copper-cysteine nanozyme for reducing oxidative stress induced during sperm cryopreservation Bioorg Chem, 80, 621–630 32 Trịnh Sinh Tiên (2002), Nghiên cứu áp dụng quy trình bảo quản tinh trùng người lạnh sâu môi trường Glycerol, Geyc Sperm freeze, Đại học Y Hà Nội 33 Cavalcante M.B., Duarte A.B.G., Araujo D.O (2006) Cryopreservation of human -comparison between methods of freezing and types of storage 28(12), 708–714 34 Cryovial with External Thread, Self-Sealing Cap, 1.8 ml, Skirted (Sterile) - Cryogenic Storage, Consumables STARLAB , accessed: 01/07/2019 35 CBS SYMS III Sealer and Spares – for CBS High Security Tubes and Straws | | Cryolab , accessed: 25/05/2019 36 Polge C., Smith A.U., Parkes A.S (1949) Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures Nature, 164(4172), 666 37 Isachenko E., Isachenko V., Katkov I.I cộng (2003) Vitrification of mammalian spermatozoa in the absence of cryoprotectants: from past practical difficulties to present success Reprod Biomed Online, 6(2), 191–200 38 Nawroth F., Isachenko V., Dessole S cộng (2002) Vitrification of human spermatozoa without cryoprotectants Cryo Letters, 23(2), 93–102 39 Rahana A.R., Ng S.P., Leong C.F cộng (2011) Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia Singapore Med J, 52(10), 734–737 40 Sánchez R., Risopatrón J., Schulz M cộng (2012) Vitrified sperm banks: the new aseptic technique for human spermatozoa allows cryopreservation at -86 °C Andrologia, 44(6), 433–435 41 Hammadeh M.E., Szarvasy D., Zeginiadou T cộng (2001) Evaluation of cryoinjury of spermatozoa after slow (programmed biological freezer) or rapid (liquid nitrogen vapour) freeze-thawing techniques J Assist Reprod Genet, 18(7), 364–370 42 Slabbert M., du Plessis S.S., Huyser C (2014) Large volume cryoprotectant-free vitrification: an alternative to conventional cryopreservation for human spermatozoa Andrologia, 47(5), n/a-n/a 43 Tilden W.A (2009), A Short History of the Progress of Scientific Chemistry in Our Own Times, BiblioBazaar 44 Yogev L., Kleiman S.E., Shabtai E cộng (2010) Long-term cryostorage of sperm in a human sperm bank does not damage progressive motility concentration Hum Reprod, 25(5), 1097–1103 45 Limited A Stock Photo - Cryopreservation of frozen sperm straws and embryos in liquid nitrogen, Medically Assisted Procreation Laboratory, Limoges Alamy, , accessed: 25/05/2019 46 Bell M., Wang R., Hellstrom W.J cộng (1993) Effect of cryoprotective additives and cryopreservation protocol on sperm membrane lipid peroxidation and recovery of motile human sperm J Androl, 14(6), 472–478 47 Vieira M.A., Nery S.F., Tavares R.L cộng (2012) Rapid thawing human sperm does not affect basic parameters in normozoospermic men: a double-blind prospective study Int Braz J Urol, 38(1), 108–115 48 Baum M., Orvieto R., Kon S cộng (2018) Comparison of effects of thawing entire donor sperm vial vs partial thawing (shaving) on sperm quality J Assist Reprod Genet, 35(4), 645–648 49 Eastick J., Venetis C., Cooke S cộng (2017) Is early embryo development as observed by time-lapse microscopy dependent on whether fresh or frozen sperm was used for ICSI? A cohort study J Assist Reprod Genet, 34(6), 733–740 50 Chen L., Zhu L., Cai C cộng (2018) Clinical and neonatal outcomes of intrauterine insemination with frozen donor sperm Syst Biol Reprod Med, 64(4), 240–245 51 Lansac J., Thepot F., Mayaux M.J cộng (1997) Pregnancy outcome after artificial insemination or IVF with frozen semen donor: a collaborative study of the French CECOS Federation on 21,597 pregnancies Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 74(2), 223–228 52 Friedler S., Raziel A., Soffer Y cộng (1998) The outcome of intracytoplasmic injection of fresh and cryopreserved epididymal spermatozoa from patients with obstructive azoospermia a comparative study Hum Reprod, 13(7), 1872–1877 53 Prins G.S., Dolgina R., Studney P cộng (1999) Quality of cryopreserved testicular sperm in patients with obstructive and nonobstructive azoospermia J Urol, 161(5), 1504–1508 PHỤ LỤC PHIẾU KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM TINH DỊCH ĐỒ I Hành Họ tên bệnh nhân: .Tuổi: Địa liên lạc: SĐT: Số ngày kiêng xuất tinh: Ngày lấy mẫu: Ngày rã đông lần 1: Ngày rã đông lần 2: II Kết xét nghiệm Mẫu tinh dịch Trước bảo quản Thể tích (ml) Tổng số tinh trùng (triệu/ml) Số tinh trùng sống (%) Số tinh trùng động tiến tới (%) di Số tinh động (%) di trùng Số tinh trùng hình thái bình thường (%) Sau bảo quản 10 ngày Sau bảo quản 30 ngày ... cứu "Đánh giá kết bảo quản lạnh tinh trùng người phương pháp hạ nhiệt sử dụng máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu" với mục tiêu: Đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tinh. .. theo phương pháp hạ nhiệt độ tủ lạnh âm sâu 38 Bảng 3. 11 Chất lượng tinh trùng 10 ngày sau BQL theo phương pháp hạ nhiệt độ máy Nicool LM10, nitơ lỏng tủ lạnh âm sâu 39 Bảng 3. 12 Chất lượng tinh. .. bảo quản lạnh sâu tinh trùng người 1.2.1 Lịch sử phát triển 1.2.2 Những nghiên cứu phương pháp bảo quản lạnh sâu tinh trùng người 1.2 .3 Kết hỗ trợ sinh sản sử dụng tinh trùng bảo quản