KHẢO sát sự THAY đổi một số CHỈ số MIỄN DỊCH TRONG các NHÓM BỆNH THƯỜNG gặp ở TRẺ EM

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Hệ thống miễn dịch chế tự bảo vệ quan trọng thể, chống lại yếu tố gây hại Khi thay đổi đáp ứng miễn dịch thể dễ mắc số bệnh lý Ngược lại, thể bị bệnh dẫn đến thay đổi đáp ứng miễn dịch Như vậy, thay đổi tình trạng miễn dịch vừa nguyên nhân, vừa hậu nhiều rối loạn bệnh lý Sự phát triển trẻ năm đầu đời có vai trò quan trọng hệ miễn dịch, giúp cho trẻ chống chọi lại tác nhân gây bệnh Đây giai đoạn mà hệ miễn dịch vừa phát triển, vừa phải thực nhiệm vụ Có nhiều nghiên cứu cho thấy thay đổi cách đáp ứng hệ miễn dịch trẻ có điểm giống có nhiều điểm khác so với người trưởng thành Mặt khác, người ta thấy rằng, nhiễm khuẩn bệnh gặp nhiều thời kỳ sơ sinh so với thời kỳ tuổi trẻ khác Nguyên nhân phần hệ miễn dịch trẻ sơ sinh tiếp xúc đột ngột với loại kháng nguyên môi trường sống, đồng thời hệ miễn dịch trẻ sơ sinh chưa đủ trưởng thành để chống lại vi sinh vật Do đó, việc khảo sát tình trạng tế bào phân tử miễn dịch bệnh nhi quan trọng, nhằm giúp cơng tác dự phòng, chẩn đốn, điều trị tiên lượng bệnh thực hiệu Hiện nay, có nhiều nghiên cứu giới khảo sát thay đổi tế bào phân tử miễn dịch, liên quan đến nhiều bệnh lý khác bệnh nhiễm trùng không nhiễm trùng Trong bệnh không nhiễm như: Eman cộng (2008) thấy có giảm tế bào TCD3, TCD8 NK bệnh đái đường type trẻ em [1]; giảm tế bào TCD4 trẻ nhiễm Arsenic [2] Đặc biệt, bệnh nhiễm trùng, có nhiều nghiên cứu như: Jonathan S Boomer cộng (2014) thấy có chết theo chương trình tế bào TCD4, TCD8 máu bệnh nhân nhiễm khuẩn huyết [3] Erwin W Gelfand cộng (2017) nghiên cứu hoạt động lympho T viêm phổi dị ứng, thấy tế bào TCD4 giảm TCD8 tăng [4]; Irma Kacprzak-Bergman cộng (2001), cho thấy viêm màng não quai bị có kháng thể IgG IgM cao[5] Tuy nhiên Việt Nam chưa có nghiên cứu chi tiết tình trạng đáp ứng miễn dịch bệnh lý trẻ em Vì vậy, chúng tơi nghiên cứu đề tài với hai mục tiêu: Mô tả thay đổi tế bào lympho T nhóm, tế bào lympho B, tế bào NK số nhóm bệnh thường gặp trẻ em Bệnh viện Nhi Trung Ương Mô tả thay đổi loại kháng thể IgA, IgG, IgM số nhóm bệnh thường gặp trẻ em Bệnh viện Nhi Trung Ương Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm miễn dịch trẻ em Hệ thống miễn dịch thể trưởng thành theo tuổi, phát triển để bảo vệ thể khỏi yếu tố gây bệnh nội bào (virus) vi khuẩn sinh sống, nhân lên ngoại bào, khoang thể Trong thể người, đáp ứng miễn dịch chia thành hai loại: miễn dịch tự nhiên (miễn dịch không đặc hiệu) miễn dịch thu (miễn dịch đặc hiệu), hai loại liên hệ mật thiết với - Miễn dịch không đặc hiệu: + Thực bào: Các tế bào thực bào xuất vào giai đoạn túi noãn bào thai Các bạch cầu hạt bạch cầu đơn nhân có vào tháng thứ thai kỳ Chức tế bào tăng dần theo tuổi thai lúc đời, trẻ bị giảm đáp ứng miễn dịch dễ mắc bệnh nhiễm trùng Các đại thực bào có khả thực bào từ bào thai hoạt tính diệt vi khuẩn lúc đẻ bình thường thấp Tính hóa hướng động trẻ em đạt tới mức người lớn trẻ vài năm tuổi Tính thực bào diệt vi sinh vật đạt mức bình thường trẻ sơ sinh khỏe mạnh sau 12 tuổi, giảm trẻ đẻ thấp cân trẻ đủ tháng có stress + Tế bào diệt tự nhiên (NK): Các tế bào diệt tự nhiên từ tuần thứ thời kỳ bào thai gan, tỷ lệ phần trăm tế bào máu cuống rốn tương đương với người lớn, hoạt tính chúng yếu Sự suy yếu chức tế bào thấy rõ trẻ sơ sinh đẻ non bị nhiễm virus (nhiễm herpes) Sự suy giảm tăng lên gấp bị rối loạn hoạt động IL-2, suy giảm thụ thể tiếp nhận IL-2 tế bào NK Ngược lại, IL-6 bù đắp suy giảm này, mở hướng điều trị [6] + Bổ thể: Sự tổng hợp bổ thể bào thai xuất từ tuần thứ Nồng độ huyết tương tất protein hệ thống bổ thể trẻ sơ sinh tháp người lớn, nồng độ thấp tuổi thai - Miễn dịch đặc hiệu: + Tế bào lympho T: Tiền thân tế bào T từ gan thai nhi bắt đầu di chuyển đến trung mô quanh tuyến ức lúc tuần tuổi thai Sự trưởng thành hay giáo dục tuyến ức lympho T xảy thời kỳ bào thai thời gian ngắn sau sinh Tế bào T bắt đầu di chuyển từ tuyến ức đến lách, hạch bạch huyết, ruột thừa vào tuần thứ 11-12 tuổi thai đến amygdale vào 14-15 tuần tuổi thai Lympho T trưởng thành có khả nhận diện phản ứng lại kháng nguyên lạ Số lượng lympho T trẻ em cao người lớn số tế bào lympho tuyệt đối cao Tại thời điểm sinh, hầu hết chức miễn dịch qua trung gian tế bào đầy đủ đa số lympho T chưa trưởng thành + Tế bào lympho B: Bắt đầu xuất gan thai nhi vào tuần thai kỳ Sau từ gan bào thai di chuyển vào tủy xương đòn lúc tuần tuổi xương dài lúc 10 tuần Các tế bào lympho B trưởng thành có mặt máu vào tuần thứ 11 thai kỳ, đạt đến mức người lớn tủy xương, máu lách vào tuần thứ 22 thai kỳ Tương bào thường không tìm thấy quan lympho thai nhi trước tuần 20 tuần thai kỳ Tế bào lympho B có mặt máu cuống rốn với tỷ lệ phần trăm cao đáng kể so với trẻ em người lớn, trẻ sơ sinh bình thường, số lượng tế bào lympho tuyệt đối cao trẻ lớn 1.2 Những tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch Các tế bào hệ thống miễn dịch xếp thành hai nhóm, là: miễn dịch không đặc hiệu miễn dịch đặc hiệu Trong đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu, chủ yếu tế bào bạch cầu đa nhân, đại thực bào tế bào NK Trong đó, lympho lại tế bào tham gia chủ yếu đáp ứng miễn dịch đặc hiệu Q trình biệt hóa tế bào dòng lympho, chất liên quan đến xuất hàng loạt kháng nguyên bề mặt (CD) Trong đó, hầu hết kháng nguyên bề mặt xác định kháng thể đơn dòng [7], [8] Hình 1.1 Q trình biệt hóa tế bào dòng lympho [9] 1.2.1 Tế bào lympho T Tế bào gốc định hướng lympho T di chuyển đến tuyến ức để biệt hóa thành dòng T [10], [11] Lympho T nhận biết kháng nguyên thông qua thụ thể TCR (T cell receptor) có bề mặt tế bào Các peptid kháng ngun kết hợp với phức hợp hòa hợp mơ chủ yếu tương đồng MHC (Major Histocompatibility Complex) bộc lộ bề mặt tế bào trình diện kháng nguyên Sau nhận biết kháng nguyên, lympho T bắt đầu tăng sinh Tế bào T, tạo nên “tế bào nhớ”, tế bào tồn yên lặng nhận kháng nguyên loại kháng nguyên xâm nhập vào thể lần sau, tạo “tế bào hiệu lực” (effective cell) diệt tế bào nhiễm bệnh (tế bào T độc) giúp đỡ lympho B sản xuất kháng thể (T helper) Sau hoạt hóa, tế bào sản xuất protein hòa tan chủ yếu lymphokin (interleukin interferon) Các lymphokin có tác dụng hỗ trợ, hoạt hóa lympho B, tế bào diệt tự nhiên NK, đại thực bào, tác động lympho T nhằm tăng cường hiệu lực trình đáp ứng miễn dịch thể Quần thể lympho T bao gồm nhiều nhóm có chức khác nhau, điều hòa đáp ứng miễn dịch bao gồm: tế bào lympho T hỗ trợ (Th) T ức chế (Ts); theo khả cảm ứng hoạt động (Ti) tế bào khác thành tế bào lympho T độc (Tc) Từ tế bào gốc vạn → Tế bào tiền thân dòng lympho (gọi tiền T) Tế bào tiền T đến tuyến ức để chọn lọc [12] Giai đoạn trưởng thành tuyến ức thay đổi mặt chức tế bào lympho T Chính xuất dấu ấn khác Trong thời gian chúng lưu lại tuyến ức, tế bào T huấn luyện có khả nhận biết KN phân biệt KN với KN lạ Sau chọn lọc kép , lympho T kết thúc trình trưởng thành tuyến ức Các dấu ấn màng tế bào lympho T: Đặc trưng tế bào lympho phân tử bề mặt hình thành nhóm định KN, xác định nhờ kháng thể đơn dòng Các phân tử định KN coi dấu ấn để phân biệt tế bào lympho giai đoạn khác viết tắt CD (Cluster of differentiation) Bên cạnh dấu ấn phân biệt, tế bào lympho T có thụ thể với KN, gọi TCR - Phân tử CD3: Là tổ hợp gồm chuỗi từ 20-26 kDa: 1γ, 1δ, 2ε, 2ξ liên kết với TCR, có mặt tế bào lympho T trưởng thành Vai trò tiếp xúc với kháng nguyên nằm phân tử MHC tế bào trình diện tương ứng chuyển tín hiệu kháng nguyên vào nguyên sinh chất tế bào lympho T - Phân tử CD4: monome có khu vực nằm bên ngồi tế bào CD4 đặc trưng nhóm quần thể tế bào lympho T hỗ trợ dùng phối tử với phân tử MHC lớp II Phân tử CD4 hoạt động kết dính cách kết hợp trực tiếp với MHC lớp II, phân tử ổn định tác động qua lại TCR với kháng nguyên peptid, làm tăng cường mối liên kết TH, Tc APC - Phân tử CD8: hình thành chuỗi α β nối với dây nối đồng hóa trị Phân tử CD8 đặc trưng cho nhóm quần thể tế bào lympho T độc ức chế Các tế bào lympho T có dấu ấn CD8 nhận biết kháng nguyên kết hợp với phân tử MHC lớp I trình diện bề mặt APC phù hợp với MHC lớp I Phân tử CD8 hoạt động kết dính nhằm ổn định tương tác kháng nguyên TCR kết hợp trực tiếp CD8 với phân tử MHC lớp I Phân tử CD4, CD8 có khả thứ phối hợp với phân tử MHC lớp II lớp I, cho phép phân cơng biệt hóa nhóm quần thể kết hợp với tế bào trình diện KN (APC) CD4 với tế bào đích hay APC CD8 Ở máu ngoại vi, số lượng tỷ lệ nhóm lympho tương đối ổn định Phần lớn (60-75%) tế bào lympho lympho nhỏ, thuộc lympho T Chức lympho T đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào gồm mẫn muộn, thải ghép, phản ứng dị ứng tiếp xúc đáp ứng gây độc với tế bào đích Khi hoạt hóa, lympho T tiết số cytokin đóng vai trò quan trọng điều hòa sinh máu [13], [14], [8] Ngoài ra, lympho T tạo thuận lợi cho việc sản xuất kháng thể lympho B Có hai nhóm quan trọng việc thực chức lympho T TCD4 TCD8 Bình thường, tỷ lệ TCD4/TCD8 từ 1,4 đến 1,6 [15], [16] Trong số trường hợp bệnh lý, cân miễn dịch bị thay đổi (đảo ngược) gọi tượng “ rối loạn cân miễn dịch ” Tùy theo trạng thái giai đoạn bệnh lý mà tượng phá vỡ cân miễn dịch nguyên nhân hay hậu Hậu tất yếu tình trạng hoạt tính ức chế hệ thống miễn dịch trội Lúc này, cách thức can thiệp người thầy thuốc lại ln ln giống nhau, tác động để lập lại trạng thái cân miễn dịch nói [17], [18] 1.2.1.1 Chức tế bào TCD4 đáp ứng miễn dịch Chức nhận biết kháng ngun Tế bào TCD4 có vai trò quan trọng bậc nhận biết kháng nguyên lạ (kháng nguyên ngoại sinh) Khi kháng nguyên xâm nhập vào thể, hầu hết bị đại thực bào bắt giữ, cắt thành mảnh peptid thẳng lên bề mặt tế bào nhờ phân tử MHC lớp II Phân tử gắn kết đặc hiệu với phân tử CD4 bề mặt tế bào TCD4 nên thụ thể TCD4 (TCR) có điều kiện nhận diện kháng nguyên (mảnh peptid) MHC lớp II trình bề mặt đại thực bào Khi có nhận diện kháng nguyên ngoại lai thông qua phức hợp TCR-MHC lớp II-peptid lạ tạo khuếch đại tương tác hai chiều đại thực bào tế bào lympho TCD4 Đại thực bào tiết IL-1 để hoạt hóa TCD4 TCD4 hoạt hóa tiết IFN-γ kích thích ngược lại làm cho đại thực bào trở thành tế bào trình diện kháng nguyên (APC) tốt Chức điều hòa miễn dịch Đây giai đoạn diễn sau nhận biết kháng nguyên.Sự hoạt hóa tế bào TCD4 thể chỗ, cytokin IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ… mà tiết tác động lên loạt tế bào khác, mà trước hết lên thân TCD4, TCD8, lympho B Kết tế bào TCD4 phát triển mạnh mẽ; đại thực bào, tế bào lympho B, tế bào TCD8, tế bào NK hoạt hóa đồng loạt trở thành tế bào thực thi (effector cell) Đại thực bào hoạt hóa có khả thực bào trình diện kháng nguyên tốt Tế bào lympho B tác dụng IL-2, IL-4, IL-5 hoạt hóa thành tương bào sinh kháng thể tham gia đáp ứng miễn dịch dịch thể chống lại vi khuẩn xâm nhập Tế bào TCD8 hoạt hóa IL-2 IFN-γ TCD4 tiết có khả tiêu diệt tế bào đích, tế bào bị nhiễm virus hay tế bào ung thư Hình 1.2 Chức tế bào TCD4 đáp ứng miễn dịch [19] 1.2.1.2 Chức tế bào TCD8 đáp ứng miễn dịch TCD8 hay gọi tế bào T độc (CTL-cytotoxic T lymphocyte) loại tế bào lympho, có kháng nguyên CD8 bề mặt Hầu hết tế bào CTLs có thụ thể tế bào T bề mặt gọi TCRs, thụ thể đặc hiệu với kháng nguyên Các kháng nguyên thông thường sản phẩm tổ chức ung thư virus, có khả kích thích đáp ứng miễn dịch Các kháng nguyên bên tế bào gắn với phân tử MHC lớp I tế bào trình diện kháng nguyên, phân tử MHC I trình diện màng tế bào Các tế bào T nhận kháng nguyên, thụ thể TCRs đặc hiệu với kháng nguyên, TCRs gắn với phức hợp MHC lớp I kháng nguyên, sau tế bào T tiêu diệt tế bào bị nhiễm 10 Hình 1.3 Chức tế bào TCD8 đáp ứng miễn dịch [20] 1.2.2 Tế bào lympho B Lympho B chiếm khoảng 20-25% lympho lưu hành biệt hóa thành tương bào sản xuất kháng thể dịch thể (đáp ứng miễn dịch dịch thể), có hỗ trợ từ Th không cần hỗ trợ, tùy thuộc vào loại kháng nguyên gây đáp ứng miễn dịch [21], [22] Bắt nguồn từ tế bào gốc đầu dòng lympho, lympho B phân chia biệt hóa trưởng thành tủy xương người Ở lồi chim, q trình phân chia biệt hóa xảy quan đặc biệt gọi túi fabricius (bursa of fabricius) tế bào gọi lympho B Tế bào gốc trải qua nhiều bước biến đổi để sinh tế bào lympho B trưởng thành Có thể tóm tắt q trình biệt hóa sau: - Sắp xếp lại gen chuỗi nặng Ig giai đoạn B sớm - Xuất IgM đơn dòng bào tương giai đoạn tiền B - Lympho B trưởng thành có IgM (và thường IgD) bề mặt, khơng có bào tương - Lympho B trưởng thành kích thích KN trải qua q trình biệt hóa thành tương bào sản xuất kháng thể Nguyễn Thị Thanh LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Thị Thanh, học viên cao học khóa 24, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Miễn dịch, xin cam đoan Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Nguyễn Thanh Bình Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2017 Người viết cam đoan Nguyễn Thị Thanh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ Viết Tắt ADCC Tên Tiếng Anh Antibody Dependent Cell Tên Tiếng Việt Độc tế bào phụ thuộc kháng APC Cytotoxicity Antigen Presenting Cells thể Tế bào trình diện kháng BLTH CD CFU-HL Cluster of Defferentiation Colony Forming Unit – Human ngun Bệnh lý tiêu hóa Cụm biệt hố Đơn vị tạo cụm lympho CTL EDTA Lymphocyte Cytotoxic T Lymphocyte Ethylene Diamine Tetraacetic người Tế bào T độc Thuốc chống đông máu FSC HIV Acid Forward Scatter Human Immunodeficiency Virus Tán xạ thẳng Virus gây suy giảm miễn dịch người IFN Ig IL LGL MHC NK NKH PBS SD SGMD SLE SSC TCR Th TNF Interferon Immunoglobulin Interleukin Large Granular Lymphocyte Major Histocompatibility Complex Natural Killer cell Phosphate Buffer Saline Standard Deviation Systemic Lupus Erythematosus Slide Scatter T Cell Receptor T helper Tumor Necrosis Factor Kháng thể Interleukin Tế bào lympho hạt lớn Phức hợp hòa hợp mơ chủ yếu Tế bào diệt tự nhiên Nhiễm khuẩn huyết Dung dịch đệm phosphat Độ lệch chuẩn Suy giảm miễn dịch Lupus ban đỏ hệ thống Tán xạ bên Thụ thể tế bào lympho T Tế bào lympho T hỗ trợ Ti Ts Tc VPQP VNMN T inducer T suppressor T cytotoxic Tế bào lympho T cảm ứng Tế bào lympho T ức chế Tế bào lympho T gây độc Viêm phế quản phổi Viêm não màng não MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm miễn dịch trẻ em .3 Hệ thống miễn dịch thể trưởng thành theo tuổi, phát triển để bảo vệ thể khỏi yếu tố gây bệnh nội bào (virus) vi khuẩn sinh sống, nhân lên ngoại bào, khoang thể Trong thể người, đáp ứng miễn dịch chia thành hai loại: miễn dịch tự nhiên (miễn dịch không đặc hiệu) miễn dịch thu (miễn dịch đặc hiệu), hai loại liên hệ mật thiết với - Miễn dịch không đặc hiệu: + Thực bào: Các tế bào thực bào xuất vào giai đoạn túi noãn bào thai Các bạch cầu hạt bạch cầu đơn nhân có vào tháng thứ thai kỳ Chức tế bào tăng dần theo tuổi thai lúc đời, trẻ bị giảm đáp ứng miễn dịch dễ mắc bệnh nhiễm trùng Các đại thực bào có khả thực bào từ bào thai hoạt tính diệt vi khuẩn lúc đẻ bình thường thấp Tính hóa hướng động trẻ em đạt tới mức người lớn trẻ vài năm tuổi Tính thực bào diệt vi sinh vật đạt mức bình thường trẻ sơ sinh khỏe mạnh sau 12 tuổi, giảm trẻ đẻ thấp cân trẻ đủ tháng có stress + Tế bào diệt tự nhiên (NK): Các tế bào diệt tự nhiên từ tuần thứ thời kỳ bào thai gan, tỷ lệ phần trăm tế bào máu cuống rốn tương đương với người lớn, hoạt tính chúng yếu Sự suy yếu chức tế bào thấy rõ trẻ sơ sinh đẻ non bị nhiễm virus (nhiễm herpes) Sự suy giảm tăng lên gấp bị rối loạn hoạt động IL-2, suy giảm thụ thể tiếp nhận IL-2 tế bào NK Ngược lại, IL-6 bù đắp suy giảm này, mở hướng điều trị [6] + Bổ thể: Sự tổng hợp bổ thể bào thai xuất từ tuần thứ Nồng độ huyết tương tất protein hệ thống bổ thể trẻ sơ sinh tháp người lớn, nồng độ thấp tuổi thai - Miễn dịch đặc hiệu: + Tế bào lympho T: Tiền thân tế bào T từ gan thai nhi bắt đầu di chuyển đến trung mô quanh tuyến ức lúc tuần tuổi thai Sự trưởng thành hay giáo dục tuyến ức lympho T xảy thời kỳ bào thai thời gian ngắn sau sinh Tế bào T bắt đầu di chuyển từ tuyến ức đến lách, hạch bạch huyết, ruột thừa vào tuần thứ 11-12 tuổi thai đến amygdale vào 14-15 tuần tuổi thai Lympho T trưởng thành có khả nhận diện phản ứng lại kháng nguyên lạ Số lượng lympho T trẻ em cao người lớn số tế bào lympho tuyệt đối cao Tại thời điểm sinh, hầu hết chức miễn dịch qua trung gian tế bào đầy đủ đa số lympho T chưa trưởng thành + Tế bào lympho B: Bắt đầu xuất gan thai nhi vào tuần thai kỳ Sau từ gan bào thai di chuyển vào tủy xương đòn lúc tuần tuổi xương dài lúc 10 tuần Các tế bào lympho B trưởng thành có mặt máu vào tuần thứ 11 thai kỳ, đạt đến mức người lớn tủy xương, máu lách vào tuần thứ 22 thai kỳ Tương bào thường khơng tìm thấy quan lympho thai nhi trước tuần 20 tuần thai kỳ Tế bào lympho B có mặt máu cuống rốn với tỷ lệ phần trăm cao đáng kể so với trẻ em người lớn, trẻ sơ sinh bình thường, số lượng tế bào lympho tuyệt đối cao trẻ lớn 1.2 Những tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch .4 1.2.1 Tế bào lympho T .5 1.2.2 Tế bào lympho B 10 1.2.3 Tế bào NK .13 1.3 Đáp ứng miễn dịch chống vi sinh vật 15 1.3.1 Miễn dịch chống vi khuẩn ngoại bào 15 1.3.2 Miễn dịch chống vi khuẩn nội bào 16 1.3.3 Miễn dịch chống virus 18 1.4 Các phương pháp xác định tế bào miễn dịch 19 1.4.1 Phương pháp hình thái học 19 1.4.2 Phương pháp hóa mơ miễn dịch 19 1.4.3 Phương pháp miễn dịch huỳnh quang 20 1.4.4 Phương pháp đếm tế bào dòng chảy .20 1.5 Tình hình nghiên cứu rối loạn miễn dịch liên quan trẻ em 23 1.5.1 Nghiên cứu giới .23 1.5.2 Nghiên cứu Việt Nam .24 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 25 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ .25 2.2 Phương pháp nghiên cứu .25 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .25 2.2.2 Quy trình nghiên cứu 25 2.3 Tiêu chuẩn chẩn đoán số bệnh thường gặp[42] 26 2.3.1 Viêm phế quản phổi 26 - Chẩn đoán xác định: triệu chứng viêm đường hơ hấp + hình ảnh X quang 26 Tùy theo mức độ hình ảnh X quang có: 26 + Những đám mờ tập trung nốt mờ rải rác nhu mơ phổi .27 + Có hình bóng 27 - Cấy dịch tìm nguyên nhân: .27 + Lấy dịch mũi họng 27 + Lấy dịch nội khí quản 27 + Soi tươi nuôi cấy .27 - Làm xét nghiệm CRP (nếu cần) 27 2.3.2 Nhiễm khuẩn huyết .27 Chẩn đoán xác định: Triệu chứng lâm sàng nhiễm khuẩn chỗ + cấy máu dương tính 27 2.3.3 Bệnh lý tiêu hóa 27 Chẩn đoán xác định: Triệu chứng lâm sàng + cấy phân, soi phân tươi .27 2.3.4 Viêm não - màng não 27 Chẩn đoán xác định: Triệu chứng lâm sàng thần kinh, hội chứng màng não + xét nghiệm dịch não tủy 27 Xét nghiệm dịch não tủy thường thấy: 27 + Áp lực tăng, nước đục (ám khói đục mủ) .27 + Số lượng bạch cầu 500 bạch cầu/ml, bạch cầu trung tính chiếm ưu 27 + Protein tăng 1g/l, glucose giảm 2,2 mmol/l 27 2.3.5 Suy giảm miễn dịch .27 Chẩn đoán xác định: Bệnh nhi bị nhiễm khuẩn tái diễn nhiều lần + xét nghiệm tế bào miễn dịch (T, B, NK) 27 2.4 Các quy trình kỹ thuật 28 2.4.1 Kỹ thuật xác định tế bào T, B, NK phương pháp đếm tế bào dòng chảy 28 2.4.2 Quy trình định lượng kháng thể 30 2.5 Xử lý số liệu nghiên cứu .31 2.6 Các biến số nghiên cứu .31 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu .31 Chương KẾT QUẢ 32 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 32 3.1.1 Các nhóm bệnh thường gặp có định xét nghiệm tế bào miễn dịch (T, B, NK) 32 3.1.2 Phân bố đối tượng theo giới tính nhóm bệnh thường gặp 32 3.2 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể viêm phế quản phổi 33 3.2.1 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP theo nhóm tuổi .34 Các loại kháng thể: Tỷ lệ trường hợp có IgG tăng mạnh (59%), IgM tăng (42%) 35 Các loại kháng thể: Tỷ lệ trường hợp có IgG tăng mạnh (57.5%), IgM tăng (32.5%) 36 Các loại kháng thể: Tỷ lệ trường hợp có IgG tăng (37.04%), IgM tăng (44.44%) 37 3.2.2 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP theo nguyên nhân nhóm tuổi 37 Tế bào miễn dịch: Trong VPQP virus, tỷ lệ trường hợp có TCD3 giảm nhẹ (24.24%), TCD4 giảm (37.88%), TCD8 tăng (32.58%) NK giảm nhẹ (20.45%) 38 Các loại kháng thể: Tỷ lệ trường hợp có IgG tăng mạnh (57.39%), IgM tăng (40.87%) 38 3.3 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể bệnh lý tiêu hóa .46 3.4 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể nhiễm khuẩn huyết 47 3.5 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể viêm não màng não 48 3.6 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể suy giảm miễn dịch 49 Chương 50 BÀN LUẬN 50 4.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 50 4.1.1 Các nhóm bệnh thường gặp có định xét nghiệm tế bào miễn dịch 51 4.1.2 Phân bố đối tượng theo giới tính nhóm bệnh thường gặp 51 4.2 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể viêm phế quản phổi 52 4.2.1 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP theo nhóm tuổi .53 4.2.2 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP theo nguyên nhân 55 4.2.3 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể bệnh lý tiêu hóa .58 4.2.4 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể nhiễm khuẩn huyết 60 4.2.5 Sự thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể viêm não- màng não .61 4.2.6 Sự thay đôi tế bào miễn dịch loại kháng thể suy giảm miễn dịch 62 KẾT LUẬN 63 KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO MỤC LỤC 14 DANH MỤC BẢNG 21 DANH MỤC BIỂU ĐỒ 23 DANH MỤC HÌNH 24 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Các nhóm bệnh thường gặp có xét nghiệm tế bào miễn dịch .32 Bảng 3.2 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP .34 Bảng 3.3 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP .34 0-11 tháng tuổi 35 Bảng 3.4 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP .35 12-23 tháng tuổi 35 Bảng 3.5 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP .36 24-60 tháng tuổi 36 Bảng 3.6 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP virus 37 Bảng 3.7 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể VPQP vi khuẩn 39 Bảng 3.8 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .39 VPQP 0-11 tháng tuổi virus 40 Bảng 3.9 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .40 VPQP 0-11 tháng tuổi vi khuẩn 40 Bảng 3.10 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .41 VPQP 12-23 tháng tuổi virus 41 Bảng 3.11 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .43 VPQP 12-23 tháng tuổi vi khuẩn .43 Bảng 3.12 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .43 VPQP 24-60 tháng tuổi virus 44 Bảng 3.13 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .44 VPQP 24-60 tháng tuổi vi khuẩn .44 Bảng 3.14 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể bệnh lý tiêu hóa 46 Bảng 3.15 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể .47 nhiễm khuẩn huyết .47 Bảng 3.16 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể viêm não - màng não .48 Bảng 3.17 Thay đổi tế bào miễn dịch loại kháng thể suy giảm miễn dịch 49 Bảng 3.18 Chỉ số loại kháng thể SGMD .49 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố giới tính theo nhóm bệnh .33 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Q trình biệt hóa tế bào dòng lympho [9] .5 Hình 1.2 Chức tế bào TCD4 đáp ứng miễn dịch [19] Hình 1.3 Chức tế bào TCD8 đáp ứng miễn dịch [20] 10 Hình 1.4 Thay đổi dấu ấn bề mặt q trình trưởng thành biệt hóa lympho B [24] 11 Hình 1.5 Các loại kháng thể [26] .13 Hình 1.6 Gây độc tế bào tế bào phụ thuộc kháng thể [32] 14 Hình 1.7 Đáp ứng miễn dịch thích ứng với vi khuẩn ngoại bào [33] .16 Hình 1.8 Đáp ứng miễn dịch với vi khuẩn nội bào [33] .17 Hình 1.9 Đáp ứng miễn dịch chống virus [33] .19 Hình 1.10 Sơ đồ sơ lược nguyên lý hoạt động máy đếm tế bào dòng chảy 21 Hình 1.11 Cơ chế tán xạ ánh sáng laser qua tế bào [35] 22 Hình 1.12 Tương quan cường độ huỳnh quang mật độ kháng thể gắn bề mặt tế bào [35] 22 Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 26 Hình 2.2 Các bước kỹ thuật xác định tế bào T, B, NK 30 + Nguyên lý quy trình: Khi bệnh phẩm trộn với dung dịch đệm dung dịch kháng huyết IgA, IgG IgM bệnh phẩm kết hợp đặc hiệu với kháng kháng thể người tạo thành phức hợp Sự thay đổi mật độ quang phức hợp phản ánh nồng độ IgA, IgG IgM bệnh phẩm 30 + Các bước thực quy trình: .30 Ly tâm mẫu bệnh phẩm phút với tốc độ 3000v/phút 30 Nạp bệnh phẩm vào Rack đặt vào máy 30 Cho máy chạy theo hướng dẫn 30 Tự động in kết sau máy phân tích xong 30 ... Ương Mô tả thay đổi loại kháng thể IgA, IgG, IgM số nhóm bệnh thường gặp trẻ em Bệnh viện Nhi Trung Ương 3 Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm miễn dịch trẻ em Hệ thống miễn dịch thể trưởng thành theo... đáp ứng miễn dịch bệnh lý trẻ em Vì vậy, chúng tơi nghiên cứu đề tài với hai mục tiêu: Mô tả thay đổi tế bào lympho T nhóm, tế bào lympho B, tế bào NK số nhóm bệnh thường gặp trẻ em Bệnh viện... trẻ em người lớn, trẻ sơ sinh bình thường, số lượng tế bào lympho tuyệt đối cao trẻ lớn 1.2 Những tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch Các tế bào hệ thống miễn dịch xếp thành hai nhóm, là: miễn