So sánh kết quả có thai giữa 2 phương pháp phôi đông lạnh chậm và phôi thủy tinh hóa

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Thành cơng quy trình thụ tinh ống nghiệm thể qua tỉ lệ mang thai Hiện nay, xu hướng giảm số lượng phôi chuyển không làm giảm tỉ lệ mang thai Việc lựa chọn phơi có chất lượng tốt để chuyển, kết hợp với chương trình trữ lạnh giúp người bệnh tiết kiệm chi phí đáng kể, đồng thời góp phần cải thiện tỉ lệ thai cộng dồn chu kỳ có kích thích buồng trứng tăng tính an tồn kỹ thuật điều trị Theo thống kê Van Voorhis (1995), trữ lạnh phơi có khả làm tăng tỉ lệ mang thai lên khoảng 6,6%, tính nỗn thu sau chọc hút chi phí điều trị giảm 25-45% so với chu kì chuyển phơi tươi, bên cạnh kết sản khoa lại cao hẳn[1] Theo số nghiên cứu, chu kỳ chuyển phôi trữ lạnh, nguy sinh non thai lưu thấp so với chuyển phơi tươi [2],[3],[4] Do đó, chuyển phơi trữ lạnh xu hướng chọn lựa tốt cho bệnh nhân trung tâm Việt Nam nói riêng giới nói chung Vấn đề chất lượng phôi sau rã đông, tỷ lệ thai lâm sàng, tỷ lệ thai tiến triển tỷ lệ đẻ sống tiêu chí để đánh giá hiệu quy trình trữ lạnh quan tâm ngày nhiều Để khai thác giá trị mà chương trình đem lại, hệ thống trữ lạnh phù hợp vấn đề đặt cho trung tâm TTON nước giới Hiện có phương pháp trữ lạnh áp dụng là: Hạ nhiệt độ chậm thủy tinh hóa Sự khác biệt phương pháp nằm chỗ có hay khơng hình thành tinh thể đá nội bào ngoại bào Hạ nhiệt độ chậm gọi phương pháp trữ lạnh có kiểm sốt tốc độ làm lạnh (Controlled - rate freezing) phương pháp Whittingham giới thiệu lần vào năm đầu thập niên 70 mơ hình phơi chuột Em bé từ phôi người đông lạnh giới đời phương pháp ghi nhận vào năm 1983 [5] Trong phương pháp hạ nhiệt độ chậm, mẫu tế bào làm lạnh với tốc độ hạ nhiệt chậm (1-30C/1 phút) từ nhiệt độ sinh lý xuống nhiệt độ thấp (khoảng - 800C) trước đưa mẫu vào lưu trữ ni - tơ lỏng Ngồi ra, tốc độ rã đơng diễn chậm, trình xâm nhập loại bỏ chất bảo vệ đông lạnh (CPA) diễn qua nhiều bước nhỏ Do nồng độ CPA sử dụng thấp trải qua nhiều bước, tế bào tránh sốc thẩm thấu gây nồng độ CPA, đồng thời khả gây độc cho tế bào thấp Vào năm 1985, Rall Fahy chứng minh phơi chuột đông lạnh thành công phương pháp mới, gọi thủy tinh hóa(non - equylibrium cryopreservation method) [6] Em bé giới đời kỹ thuật báo cáo vào năm 2002 (Liebermann cs.,2002; Shaw Jones,2003) [7], [8] Trong kỹ thuật thủy tinh hóa, ba yếu tố quan trọng góp phần vào thành cơng kỹ thuật nồng độ CPA sử dụng, tốc độ hạ nhiệt/làm ấm thể tích mẫu trữ lạnh (Vajta Nagy, 2006), (Yahin Arav, 2007) [9],[10] Để chuyển lượng mơi trường có chứa phơi từ dạng lỏng thành dạng "kính", CPA cần phải sử dụng nồng độ cao Việc lựa chọn phương pháp trữ lạnh phụ thuộc vào nhiều yếu tố (1) hạn chế tối đa thương tổn cho tế bào (2) khả hồi phục hoạt động sinh lý tế bào, (2) tính thuận tiện, (3) tính đơn giản khả chuyển giao kỹ thuật dễ dàng (4) điều kiện cụ thể labo Trong thời gian dài, dù có hạn chế mặt hiệu hạ nhiệt độ chậm xem phương pháp trữ lạnh chuẩn mực ngành công nghiệp chăn nuôi IVF người Trái lại, khoảng thời gian dài sau giới thiệu, thủy tinh hóa xem kỹ thuật mang tính thử nghiệm nhiều lý Trong đó, lo ngại độc tính có việc sử dụng CPA nồng độ cao phơi khó khăn việc thiết lập hệ thống làm lạnh với tốc độ cao trở ngại Vì vậy, nay, nhà khoa học giớivẫn liên tục thực nghiên cứu so sánh ưu nhược điểm phương pháp, theo dõi sức khỏe, bệnh tật trẻ sinh từ phương pháp trữ lạnh để đưa lựa chọn tối ưu an toàn Tại trung tâm hỗ trợ sinh sản Quốc Gia, kỹ thuật đông lạnh chậm thực thành cơng năm 2002, thủy tinh hóa bắt đầu triển khai năm 2006, với phôi giai đoạn phân chia (phôi ngày phôi ngày 3) Tại thời điểm nghiên cứu (2012- 2013), hầu hết trung tâm hỗ trợ sinh sản Việt Nam, thực thủy tinh hóa phơi tiếp tục rã đơng phơi đơng lạnh chậm Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu theo dõi dọc Việt Nam, đánh giá hiệu quy trình trữ lạnh thơng qua tiêu chí:tỷ lệ phơi sống, tỷ lệ có thai, tỉ lệ sinh sống, yếu tố liên quan, tiên lượng đến tỷ lệkết có thai, theo dõi hình thành phát triển chiều cao, cân nặng, thể chất, trí tuệ, tâm vận động, bệnh tật từ trẻ sinh tuổi để đưa tiên lượng cho phát triển cho trẻ sinh từ phương pháp Do chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: "So sánh kết có thai phương pháp phơi đơng lạnh chậm phơi thủy tinh hóa" với mục tiêu: So sánh tỷ lệ phôi sống sau rã đông phương pháp phôi đông lạnh chậm phơi thủy tinh hóa So sánh kết có thai phương pháp phơi đơng lạnh chậm phơi thủy tinh hóa Hiệu hai phương pháp đông lạnh chậm đông lạnh thủy tinh hóa thụ tinh ớng nghiệm" với mục tiêu: Mô tả tỷ lệ phôi sống sau rã đông hai phương pháp đông lạnh chậm đơng phơi thủy tinh hóa Đánh giá mợt số yếu tố liên quan tiên lượng hai phương pháp đông lạnh chậm đông phôi thủy tinh hóa ChươngHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 KỸ THUẬT TRỮ LẠNH TRONG HỖ TRỢ SINH SẢN Trữ lạnh kỹ thuật nhằm lâu dài tế bào, mô điều kiện nhiệt độ âm sâu, thường -196ºC Tại nhiệt độ hoạt động chuyển hoá tế bào bị ngưng trệ hoàn toàn sau rã đơng tế bào/mơ khơi phục hồn tồn cấu trúc chức Kỹ thuật trữ lạnh trải qua lịch sử phát triển dài với đời nhiều thành tựu, từ kinh nghiệm hạn chế ban đầu trữ lạnh tinh trùng thực nghiệm phát triển nhanh chóng kỹ thuật phức tạp trữ lạnh phơi,tế bào gốc, mơ buồng trứng, nỗn… để ứng dụng điều trị Ngồi lợi ích mà kỹ thuật trữ lạnh đóng góp cho mục tiêu nghiên cứu, trữ lạnh xem kỹ thuật thiếu điều trị vô sinh thụ tinh ống nghiệm Trữ lạnh nghiên cứu triển khai tinh trùng Đây xem bước khởi đầu cho việc phát triển kỹ thuật nhóm tế bào khác Hiện nay, trữ lạnh tinh trùng triển khai rộng rãi, nhằm mục đích thành lập ngân hàng tinh trùng, bảo tồn khả sinh sản cho nam giới trước điều trị bệnh lý ác tính hay để sử dụng tương lai [5] Ngoài ra, trữ lạnh tinh trùng cho trường hợp phẫu thuật lấy tinh trùng giúp hạn chế số lần phẫu thuật cho bệnh nhân [6] Vai trò việc trữ lạnh phôi nâng cao hiệu chu kỳ kích thích buồng trứng IVF chứng minh Trữ lạnh phơi gọi biện pháp hiệu việc làm giảm tỉ lệ đa thai hạn chế nguy kích buồng trứng nặng [7] Bên cạnh kỹ thuật trữ lạnh phôi, gần trữ lạnh nỗn mơ buồng trứng báo cáo thành cơng Trữ lạnh nỗn mơ buồng trứng có nhiều ưu điểm, với mục đích bảo tồn khả sinh sản cho người phụ nữ ví dụ: phụ nữ độc thân,dùng hóa chất, tia xạ, tránh trở ngại pháp lý, tôn giáo không cần kích thích buồng trứng (đối với trữ lạnh mơ buồng trứng) [8] Ngồi trữ lạnh nỗn giúp thành lập ngân hàng noãn, biện pháp gia tăng tính an tồn thuận tiện kĩ thuật IVF xin noãn [9] Với tiềm ứng dụng rộng rãi lợi ích mà trữ lạnh mang lại lĩnh vực hỗ trợ sinh sản nêu trên, trữ lạnh trở thành kỹ thuật vô quan trọng khơng thể thiếu chương trình IVF Một số ý kiến cho phát triển rộng rãi hỗ trợ sinh sản ngày phụ thuộc lớn vào tỉ lệ thành công kỹ thuật trữ lạnh [10] 1.2 LỊCH SỬ CỦA TRỮ LẠNH Sự thành công trữ lạnh rã đông tinh trùng tuyết Spallanzani vào năm 1776 xem tảng cho phát triển kỹ thuật trữ lạnh sau [11] Vào kỷ 19, hiểu biết hố lỏng chất khí tiềm ứng dụng chúng làm lạnh lưu trữ mẫu vật nhiệt độ thấp có bước phát triển Năm 1866, trữ lạnh giao tử lồi động vật có vú điều kiện nhiệt độ thấp nhiệt độ sinh học thực sau bác sĩ quân đội người Ý Mantegazza khám phá tinh trùng người bị bất động làm lạnh tuyết khả di động phục hồi sau rã đông [12] Mặc dù nhiều nghiên cứu trữ lạnh tinh trùng tiến hành động vật khác vào năm thập niên 30-40, trữ lạnh chưa có bước tiến đáng kể Polge cộng (1968), phát tình cờ, cho thấy khả bảo vệ tinh trùng bò q trình đơng lạnh rã đơng glycerol [13] Khi bổ sung glycerol trữ lạnh, người ta ghi nhận khả di động tinh trùng sau rã đông cải thiện đáng kể Đầu thập niên 1950, người ta ứng dung glycerol trữ lạnh tinh trùng người cho thấy tinh trùng sau rã đơng có khả thụ tinh với nỗn [12] Đây tiền đề cho hàng triệu em bé đời từ kĩ thuật bơm tinh trùng vào buồng tử cung (IUI) với tinh trùng trữ lạnh giới, sở phát triển đơng lạnh nỗn phơi Năm 1983, đời em bé giới từ phôi đông lạnh từ kỹ thuật hạ nhiệt độ chậm đánh dấu bước ngoặt lớn lĩnh vực IVF [5] Khơng lâu sau đó, năm 1985, trữ lạnh cực nhanh hay kỹ thuật thuỷ tinh hoá Rall Fahy báo cáo động vật có vú Đây kỹ thuật đánh giá có tiềm khắc phục số nhược điểm hạ nhiệt độ chậm trước [6] Cho đến nay, có hàng triệu trẻ sinh từ phơi đơng lạnh 1000 trẻ từ chu kỳ IVF có sử dụng nỗn sau rã đơng từ hai kỹ thuật 1.3 NHỮNG THAY ĐỔI BÊN TRONG TẾ BÀO TRONG Q TRÌNH TRỮ LẠNH Hình 1.1: Phản ứng phơi cho vào mơi trường có chứa CPA (CPA: chất bảo vệ lạnh) A: Phôi phôi bào B: Các phơi bào bị nước làm cho kích thước phôi co nhỏ (khi vừa tiếp xúc môi trường trữ lạnh) C: Khi CPA vào bên phôi bào thay lượng nước tế bào đi, lúc kích thước phơi phục hồi Nguyên tắc trữ lạnh giảm nhiệt độ môi trường chứa mẫu tế bào hay mẫu mô xuống nhiệt độ thấp, thường 196ºC (nhiệt độ sôi nitơ lỏng) Ở nhiệt độ thấp này, hầu hết hoạt động sinh học bên tế bào bao gồm phản ứng sinh hoá hoạt động trao đổi chất bị ngừng lại Nhờ đó, tế bào sống dạng tiềm sinh (hybernate) bảo quản thời gian dài Với điều kiện nhiệt độ thấp, phân tử nước, chất hồ tan mơi trường xung quanh vật chất bên tế bào tồn dạng kết hợp (dạng tinh thể dạng kính), đó, khơng có yếu tố từ mơi trường bên bên ngồi tác động đến tế bào giai đoạn Tuy nhiên, nhiệt độ thể đa số loài kiểm sốt chặt chẽ, động vật có vú Do đó, q trình trữ lạnh, việc hạ nhiệt độ tế bào mức 0ºC đưa tế bào vào môi trường không sinh lý Hậu tổn thương xảy tất giai đoạn trình hạ nhiệt độ Trong trình làm lạnh rã đông, số thay đổi môi trường chứa tế bào thân tế bào ảnh hưởng đến cấu trúc, chức năng, toàn vẹn khả sống tế bào sau rã đông Một chu kỳ trữ lạnh thường trải qua ba giai đoạn quan trọng Đông lạnh: Đưa tế bào từ nhiệt độ sinh lý 37ºC xuống nhiệt độ thấp -196ºC Lưu trữ: Mẫu tế bào bảo quản nitơ lỏng Rã đông: Đưa tế bào từ nhiệt độ thấp ni-tơ lỏng nhiệt độ sinh lý cần để tế bào tiếp tục phát triển Trong trình làm lạnh, tuỳ theo giai đoạn hạ nhiệt mà tổn thương tế bào khác Trong giai đoạn hạ nhiệt từ 15ºC đến -5ºC, hạt lipid, màng giàu lipid sợi vi ống bên tế bào bị tổn thương [10] Đây tổn thương khơng thể phục hồi đơng lạnh nỗn So với loài khác, giọt lipid chứa tế bào noãn người tương đối thấp Nhưng điều không loại trừ khả tổn thương tế bào nỗn người q trình đơng lạnh Mặt khác, khoảng nhiệt độ gây tổn thương màng polymer hố vi ống, làm rối loạn khả xếp nhiễm sắc thể mặt phẳng xích đạo tế bào phân chia kết gây tượng lệch bội trình phân chia tế bào [15] Một số ảnh hưởng khác mà khoảng nhiệt độ gây cho tế bào thường nhắc đến việc giảm tốc độ hoạt động men (enzyme) sử dụng q trình chuyển hố tế bào Nghiên cứu cho thấy nhiệt độ giảm từ 37ºC xuống 7ºC hoạt động men giảm lần Tuy nhiên, ảnh hưởng việc giảm hoạt động men lên khả phát triển tế bào sau chưa làm sáng tỏ [16] Bên cạnh khí hồ tan, mơi trường ni cấy tế bào thường dùng khí CO làm hệ đệm để cân pH môi trường Khi nhiệt độ hạ xuống thấp, khí khơng dạng hồ tan môi trường mà tách tạo thành bọt khí Số lượng kích thước bọt khí lớn việc chèn ép làm tổn thương đến cấu trúc tế bào nghiêm trọng [17] Khi tế bào làm lạnh từ -5ºC đến -15ºC tượng hình thành tinh thể đá từ phân tử nước tinh khiết môi trường sát bên ngồi tế bào (mơi trường ngoại bào) bên tế bào (môi trường nội bào) xuất Sự hình thành tinh thể đá gây tổn thương học lên màng tế bào bào quan bên Đây giai đoạn gây tổn thương lớn quan trọng mà tế bào phải trải qua trình làm lạnh rã đơng [10] Nước thành phần chiếm thể tích lớn bên tế bào môi trường bên tế bào Khi nhiệt độ giảm, số lượng phân tử nước chuyển thành tinh thể đá tăng, lượng nước thể lỏng giảm dần, hậu nồng độ chất tan môi trường ngoại bào tăng gây cân áp lực thẩm thấu tế bào với môi trường Hậu nước từ bên tế bào chất bị rút ngồi kích thước tế bào trở nên co nhỏ Nếu tế bào bị co nhỏ mức, tổn thương màng lipoprotein tế bào xảy phục hồi [18] Tăng nhiệt độ tiềm tàng hậu hình thành tinh thể đá Các phân tử nước chuyển sang rắn giải thoát lượng nhiệt Nếu lúc có nhiều phân tử nước chuyển sang thể rắn nhiệt lượng đủ lớn để làm thay đổi nhiệt độ từ vài độ âm lên 0ºC Sự thay đổi nhiệt độ đột ngột làm ảnh hưởng đến cấu trúc chức tế bào sau rã đơng hay chí làm tế bào chết trình làm lạnh Do đó, q trình hạ nhiệt độ chậm, việc hạn chế phân tử nước chuyển trạng thái lúc tối quan trọng Từ -50ºC đến -150ºC, tổn thương màng suốt đứt gãy màng suốt không giống đứt gãy màng suốt xảy tượng sốc thẩm thấu Ở nhiệt độ lưu trữ mẫu (dưới -150ºC thường nhiệt độ ni-tơ lỏng -196ºC), tế bào bị ảnh hưởng bất lợi tồn quy trình trữ lạnh Tuy nhiên, phản ứng tạo thành gốc tự sản phẩm đứt gãy đại phân tử xạ ion hoá hay sản phẩm không mong muốn này, tác động xạ có khả gây đứt gãy gây tổn thương khác cho ADN Mặc dù vậy, nay, chưa có chứng rõ ràng ảnh hưởng xạ lên mẫu tế bào lưu trữ ni-tơ lỏng 10 1.4 CÁC BIỆN PHÁP HẠN CHẾ TỔN THƯƠNG TẾ BÀO TRONG TRỮ LẠNH 1.4.1 Sử dụng chất bảo vệ lạnh (CPA) Sự hình thành tinh thể đá trình hạ nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng quan trọng đến khả sống tế bào sau chu trình làm lạnh - rã đơng [17] Tinh thể đá hình thành ngẫu nhiên vị trí bên bên ngồi tế bào Do đó, việc hạn chế hình thành tinh thể đá điều kiện tiên để chương trình trữ lạnh đạt tỉ lệ thành công cao Việc phát vai trò glycerol trữ lạnh xem phát kiến quan trọng, góp phần thúc đẩy kỹ thuật trữ lạnh phát triển [19] Nhiều thử nghiệm khác thực với mục đích tìm chất với khả bảo vệ tế bào sống suốt q trình đơng lạnh rã đông tương tự glycerol Những chất gọi tên chung chất bảo vệ đông lạnh CPA chất có khả giống hồ tan nước gây cản trở chuyển trạng thái nước đá Chúng tương tác với phân tử sinh học với vai trò “thay nước” tế bào, nhờ hạn chế hình thành tinh thể đá nội bào nhiệt độ hạ thấp [20] Một vai trò khác CPA không phần quan trọng tế bào bảo vệ nhiệt độ thấp [10] Do không tạo thành tinh thể, CPA hạn chế gia tăng nồng độ chất hồ tan Nó gắn kết lên màng bào tương để bảo vệ tế bào phân tử nước ngoại bào bắt đầu chuyễn sang dạng tinh thể Tuy nhiên, ghi nhận hiệu loại CPA lên tế bào khác dựa quan sát thực tế, chưa chứng minh chế [11] Hai dạng CPA thường sử dụng đơng lạnh CPA có khả thẩm thấu CPA khơng có khả thẩm thấu qua màng tế bào Hai loại CPA có tính chất cách thức hoạt động khác nhau, hỗ trợ cho 90 C Pope, Cook EKD, Arny M, Novak A and Grow DR (2004) Influence of embryo transfer depth on in vitro fertilization and embryo transfer outcomes Fertil Steril81,51–58 91 J Family, Elham Azimi Nekoo, MD, Maryam Chamani, MD, Ensieh Shahrokh Tehrani, MD, et al “Artificial Endometrial Preparation for Frozen-Thawed Embryo Transfer with or without Pretreatment with Depot Gonadotropin Releasing Hormone Agonist in Women with Regular Menses”, J Family Reprod Health 2015 Mar; 9(1): 1–4 92 Simon A., Hurwitz A., Zentner B.S., Bdolah Y and Laufer N (1998) Transfer of frozen–thawed embryos in artificial prepared cycles with and without prior gonadotrophin-releasing hormone agonist suppression: a prospective randomized study Hum Reprod, 13, 2712–2717 93 Glujovsky D1, Pesce R, Fiszbajn G, et al “Endometrial preparation for women undergoing embryo transfer with frozen embryos or embryos derived from donor oocytes” Cochrane Database Syst Rev 2010 Jan 20;(1) 94 Ghobara T 1, Vandekerckhove P (2008) Cycle regimens for frozenthawed embryo transfer, Cochrane Database Syst Rev., 2008 Jan 23;(1) 95 Nguyễn Thị Liên Hương (2014) "Nghiên cứu kỹ thuật hỗ trợ phơi mang tia laser số định bệnh nhân thụ tinh ống nghiệm", Tạp chí nghiên cứu Y học, số 2, 5-9 96 Martins WP, Rocha IA, Ferriani RA, Nastri CO (2011) “Assisted hatching of human embryos: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials”, Hum Reprod Update 2011 JulAug;17(4):438-53 97 Hán Mạnh Cường (2010), "Đánh giá hiệu phương pháp hỗ trợ phơi màng chuyển phơi đông lạnh bệnh viện phụ sản Trung Ương", Luận văn Thạc sỹ y học 98 Yang W, “Combined analysis of endometrial thickness and pattern in predicting clinical outcomes of frozen embryo transfer cycles with morphological good-quality blastocyst: A retrospective cohort study”.Medicine (Baltimore) 2018 Jan;97(2):e9577 99 WHO Child Growth Standards, WHO library cataloguing-in- Publication Data, ISBN 924 154693X- NLM Classification VS 1032007 100 Nguyễn Th ị Xuyên ch u biên (2014) “ H ương d ân phát hi ện s ơm, can thiệp s ơm tr e em khuy ết t ật”; Tai li ệu danh cho cán b ộ y t ế; Bộ Y tế Vi ệt Nam 2014; trang 38-58 101 Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE Special Interes Group of Embryology (2011).The Istanbbul consensus workshop on embryo asseemet:Preceedings of an expertmeeting Hum Reprod, 26 (6): 1270 – 1283 102 Zhang T, Li Z, Ren X, “Endometrial thickness as a predictor of the reproductive outcomes in fresh and frozen embryo transfer cycles: A retrospective cohort study of 1512 IVF cycles with morphologically good-quality blastocyst”.Medicine (Baltimore) 2018 Jan;97(4):e9689 103 Bu Z, Wang K, Dai W, Sun Y “Endometrial thickness significantly affects clinical pregnancy and live birth rates in frozen-thawed embryo transfer cycles”.Gynecol Endocrinol 2016 Jul;32(7):524-8 104 Peeraer K,“Frozen-thawed embryo transfer in a natural or mildly hormonally stimulated cycle in women with regular ovulatory cycles: a RCT”.Hum Reprod 2015 Nov;30(11):2552-62 105 Mojtaba.R.V et al (2009) “Vitrification versus slow- freezing gives excellentsurvival, post- warming embryo morphology and pregnancy outcomes for humancleaved embryos ” Journal Assist Reprod Genet Jun; 26(6), 347- 354 106 Rama Raju et al (2008) “Vitrification of human 8- cell embryo, a modifiedprotocol for better pregnancy rate” Reprod, Biomed online; 11; 434- 437 107 Li Y (2007) “Comparison of vitrification and slow- freezing of human day 3cleavage stage embryos: post- vitrification development and pregnancy outcome” Zhonghua fu chan ke za zhi; volume 42, issue 11 108 Balaban B et al (2008) “A randomized controlled stydy of human days embryocryopreservation by slow - freezing or vitrification: vitrification is associated withhigher survival, metabolism and blastocyst formation” Human Reprod; 23(9);1976-1982 109 Chi F et al- 2013 “Vitrification of day cleavage – stage embryos yields betterclinical outcome in comparison with vitrification of day cleavage – stageembryo” Zygote 2013.Aug 22: 1-8 110 Nguyễn Thị Thu Lan- 2011 “Trữ lạnh phôi ph ương pháp thuỷ tinhhố” Vơ sinh va hỗ trợ sinh sản, Hosrem 08/05/2011 111 Rama Raju et al – 2009 “Neonatal outcome after vitrified day embryo transfers:a preliminary stydy” Fertil Steril 2009; 92: 143-8 112 Nina Desai et al- 2010 “Clinical pregnancy and live births after transfer ofembryosvitrified day ” Reproductive Bio Medicine online (2010) 20, 808-813 113 Giovanna Fasano et al – 2014 “A randomized controlled trial comparing twovitrification methods versus slow-freezing for cryopreservation of human cleavagestage embryos” J Assist Reprod Genet Fer 2014; 31(2): 241-247 114 Sophie Debrock (2015), “Vitrification of cleavage stage day embryos results in higher live birth rates than conventional slow freezing: A RCT’’Human Reproduction 30(8) · June 2015 115 Zhu Y, Huang H, Zhou F (2001) Analysis of factors influencing the clinical in a frozen thawed embryo transfer program Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi 36:290–292 116 Veleva Z, Orava M, Nuojua-Huttunen S, Tapanainen JS, Martikainen H (2013) Factors affecting the outcome of frozen-thawed embryo transfer Hum Reprod 2013 Sep;28(9):2425-31 117 Josephine Lemmen, PhD Clinical Embryologist, Fertility Clinic, Rigshospitalet, Copenhagen, Denmark “Criteria to select oocytes and embryos for cryoprsevation”,IVF wordwide Com Weissman 118 Neha Palo Chandel, Vidya V Bhat, B S Bhat (2016).Outcome Analysis of Day-3 Frozen Embryo Transfer v/s Fresh Embryo Transfer in Infertility: A Prospective Therapeutic Study in Indian Scenario J Obstet Gynaecol India 2016 Oct; 66(5): 345–351 119 Rienzi L (2017) Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance.Hum Reprod Update 2017 Mar 1;23(2):139-155 120 Ulla-Britt Wennerholm (2013) Perinatal out conmes of children born aftr frozen thawed embryo transfer: a Nordic cohort study from the CoNart as group Hum Repreduction , Volume 28, Issue, September 2013, Pages 2545-2553 121 Nguyễn Xuân Huy (2004), "Nghiên cứu kết thụ tinh ống nghiệm Bệnh viện phụ sản Trung Ương năm 2003", Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa 2, trường đại học y Hà Nội, tr 3-52 122 Afifa Sellami Christophe Sifer, Christophe Poncelet, Brigitte Martin- Pont, Raphael Porcher, Jean-Noel Hugues, Jean-Philippe Wolf (2006), "Day compared with day cryopreservation does not affect embryo survival but improves the outcome of frozen-thawed embryo transfers", Fertil Steril 86: 1537– 40 123 Antonina Sazonova; Karin (2012) Obstetric outcome in singletons after invitro fertilization with cryopreser thawed embryos Human Reproduction: Volume 27, Issue5, May 2012, pages 1343-1350 124 Pelkonen S1, Gissler M2, Koivurova S3, et al (2015): “Physical health of singleton children born after frozen embryo transfer using slow freezing: a 3-year follow-up study” Hum Reprod 2015 Oct;30(10):24118 doi: 10.1093/humrep/dev203 Epub 2015 Aug 20 125 Junwei Zhang, Mingze Du, Zhe Li, et al (2018): “Fresh versus frozen embryo transfer for full-term singleton birth: a retrospective cohort study” J Ovarian Res 2018; 11: 59 Belva F, Bonduelle M, Roelants M, et al (2016): “ Neonatal health including congenital malformation risk of 1072 children born after vitrified embryo transfer” Hum Reprod 2016;31(7):1610–1620 127 Kato O, Kawasaki N, Bodri D, et al (2012): “Neonatal outcome and birth defects in 6623 singletons born following minimal ovarian stimulation and vitrified versus fresh single embryo transfer” Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 2012;161(1):46–50 128 Belva F, Henriet S, Van den Abbeel E, et al (2008): “Neonatal outcome of 937 children born after transfer of cryopreserved embryos obtained by ICSI and IVF and comparison with outcome data of fresh ICSI and IVF cycles” Hum Reprod 2008;23(10):2227–2238 129 126 130 MỤC LỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH BỢ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN THỊ THANH LAN SO SÁNH KẾT QUẢ CÓ THAI GIỮA HAI PHƯƠNG PHÁP PHÔI ĐÔNG LẠNH CHẬM VÀ PHÔI THỦY TINH HÓA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN THỊ THANH LAN SO SÁNH KẾT QUẢ CÓ THAI GIỮA HAI PHƯƠNG PHÁP PHÔI ĐÔNG LẠNH CHẬM VÀ PHÔI THỦY TINH HÓA Chuyên ngành : Sản phụ khoa Mã số : 62720131 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Viết Tiến HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới GS.TS Nguyễn Viết Tiến, người thầy hướng dẫn chỉnh sửa thiếu sót động viên em suốt q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành luận án Em luôn ghi nhớ biết ơn Thầy Cô Bộ môn Phụ sản, Thầy Cô Hội đồng chấm đề cương, học phần, chuyên đề, tiểu luận tổng quan, Hội đồng chấm luận án sở bảo, cho em ý kiến quý báu để hoàn chỉnh luận án Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo sau Đại học, phòng ban chức Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi tới lãnh đạo toàn thể đồng nghiệp nghiệp Bệnh viện Phụ sản Hải Phòng, Trung tâm Hỗ trợ sinh sản Quốc gia - Bệnh viện Phụ sản Trung ương lời cảm ơn chân thành ln giúp đỡ mặt công việc học tập để yên tâm học tập nghiên cứu Con xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới Cha Mẹ bên giúp đỡ động viên lúc khó khăn nhất, ln định hướng cho bước sống, nghiệp hết ln tự hào bác sỹ Cuối tất yêu thương xin dành cho gia đình nhỏ tơi, nguồn sức mạnh cổ vũ vô tận cho vượt qua thử thách Tơi xin ghi lòng tạc tình cảm công ơn Ngày tháng năm 2019 NCS Phan Thị Thanh Lan LỜI CAM ĐOAN Tôi Phan Thị Thanh Lan nghiên cứu sinh khóa 31 Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Sản phụ khoa xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn GS.TS Nguyễn Viết Tiến Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Tác giả Phan Thị Thanh Lan CHỮ VIẾT TẮT BG : butylene glycol BN : Bệnh nhân CPA : Cryoprotective agents (Các chất bảo vệ đông lạnh) Dex : dextran DMSO : Dimethyl sulfoxide EG : ethylene glycol FET : Frozen Embryo Transfer (Chuyển phôi đông lạnh) Fic : Ficoll Gly : Glycerol HPC : hydroxypropyl cellulose IVF : Thụ tinh ống nghiệm Me2SO : dimethylsulfoxide Met : methanol NMTC : Niêm mạc tử cung PEG : polyethylene glycol PG : propylene glycol PR : Pregnance rate (tỷ lệ có thai) PROH : 1,2 – propanediol hay propylene glycol PVP : polyvilylpyrrolidone SR : Survial rate (tỷ lệ sống ) TB : Tế bào 6,17,32,33,34,35,36,76,80,87,89,90,92,94,96,97,99,101,103,104,106,108 ,111,112 1-5,7-16,18-31,37-75,77-79,81-86,88,91,93,95,98,100,102,105,107,109110,113-175,178- ... "So sánh kết có thai phương pháp phơi đơng lạnh chậm phơi thủy tinh hóa" với mục tiêu: So sánh tỷ lệ phôi sống sau rã đông phương pháp phôi đông lạnh chậm phơi thủy tinh hóa So sánh kết có thai. .. thai phương pháp phôi đông lạnh chậm phơi thủy tinh hóa Hiệu hai phương pháp đơng lạnh chậm đơng lạnh thủy tinh hóa thụ tinh ống nghiệm" với mục tiêu: Mô tả tỷ lệ phôi sống sau rã đông hai phương. .. phương pháp đông lạnh chậm đông phôi thủy tinh hóa Đánh giá mợt số ́u tố liên quan tiên lượng hai phương pháp đông lạnh chậm đơng phơi thủy tinh hóa 4 ChươngHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 KỸ THUẬT TRỮ LẠNH