NGHIÊN cứu hệ THỐNG tái SINH IN VITRO PHỤC vụ CHUYỂN GEN ở cây đậu NHO NHE (VIGNA UMBELLATA)

MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Đậu Nho nhe có tên khoa học Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & Ohashi thuộc họ Đậu (Fabaceae) hay thường gọi đậu gạo, đậu nâu Loài đậu phát lần Ấn Độ, sau Ohwi Ohashi miêu tả khoa học vào năm 2010 Đậu Nho nhe phân bố rộng từ miền Nam Trung Quốc sau lan rộng miền Bắc Việt Nam, Lào, Thái Lan, Ở nước ta, đậu Nho nhe trồng chủ yếu tỉnh miền núi phía Bắc Cao Bằng, Lào Cai, Yên Bái Đậu đỗ nói chung đậu Nho nhe nói riêng nhóm có giá trị dinh dưỡng cao, đóng vai trị thiết yếu để nâng cao tiêu chuẩn thực phẩm cho người đặc biệt nước phát triển tình trạng thiết hụt protein Đậu Nho nhe thường sử dụng làm thức ăn cho người vật nuôi, năm, hệ rễ phát triển mạnh, có nhiều nốt sần chứa vi khuẩn cố định đạm nên thường trồng luân canh với lúa ngô để tăng vụ cải tạo đất bạc màu chống xói mịn Đậu Nho nhe sinh trưởng nhanh, sau tháng phủ kín đất, đặc biệt hàm lượng dinh dưỡng thân cao, làm phân bón tốt Một số nghiên cứu gần đây, cịn cho thấy đậu Nho nhe ngồi lương thực thiết yếu cịn có tác dụng việc chữa bệnh Ở Trung Quốc, đậu Nho nhe dùng loại dược liệu để chữa bệnh liên quan đến đau nhức xương khớp, hay sắc uống để giải độc, giảm phù nề [41] Tuy nhiên, trồng thuộc họ Đậu có khả chống chịu tác nhân bất lợi từ ngoại cảnh khả ngày bị suy giảm nghiêm trọng biến đổi khí hậu Do nghiên cứu tìm biện pháp cải thiện khả chống chịu họ Đậu nói chung đậu Nho nhe nói riêng quan tâm mang tính thời Có nhiều cách tiếp cận nghiên cứu nâng cao khả chống chịu họ Đậu lai hữu tính, đột biến thực nghiệm cơng nghệ gen Trong ứng dụng kỹ thuật chuyển gen để làm tăng khả chống chịu stress phi sinh học hướng tiếp cận có triển vọng Việc xây dựng hệ thống tái sinh giai đoạn có ý nghĩa quan trọng định lớn đến thành công kỹ thuật chuyển gen Đối với họ Đậu đậu tương, đậu xanh, đậu cove việc xây dựng hệ thống tái sinh in vitro nghiên cứu khẳng định Cịn đậu Nho nhe, lồi hai mầm tái sinh ống nghiệm hay không, tái sinh từ phận cây, công thức mơi trường thích hợp cho tái sinh đa chồi Đây câu hỏi đặt cho nghiên cứu Xuất phát từ lý xây dựng đề tài cho luận văn thạc sĩ là: “Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe (Vigna umbellata)” Mục tiêu nghiên cứu Xác định hệ thống tái sinh đa chồi in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện khử trùng hạt để tạo mẫu ống nghiệm - Nghiên cứu tái sinh đa chồi in vitro qua mô sẹo, nách mầm, chồi - Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng BAP, kinetin đến tạo đa chồi đậu Nho nhe - Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi in vitro - Nghiên cứu điều kiện chuyển đậu Nho nhe in vitro ngồi mơi trường tự nhiên Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY ĐẬU NHO NHE 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại, đặc điểm sinh học đậu Nho nhe Đậu Nho nhe có tên khác như: đậu gạo, đậu nâu, đậu Cao Bằng, đậu đà, thua dài Tên khoa học đậu Nho nhe Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & Ohashi Đậu Nho nhe thuộc chi Đậu (Vigna), họ Đậu (Fabaceae), Đậu (Fabales), lớp Hai mầm (Magnoliopsida) Chi Vigna chi lớn họ Đậu, bao gồm chi phụ Vigna, Haydonia, Plectropic, Macrohynchus, Ceratotrophic, Lasionspron, Sigmoidotrotopis Đậu Nho nhe theo quan điểm lấy hạt bao gồm loại thuộc hai chi phụ Vigna Ceratotrophic Chi phụ Ceratotrophic cịn gọi nhóm đậu Châu Á mang mức độ điển hình thể mức độ cao cho Vigna Năm 1970, Vercourt công bố 16 loài Ceratotrophic hóa là: Đậu xanh ( Vigna radiata (L.) Wilczel), đậu gạo (Vigna umbellata (Thunb.)), đậu adzukia (Vigna anguilaris (Willd), đậu ván (Vigna aconiti (Jacp)), Vigna trilobala (L.) Wilczel Đậu Nho nhe dạng thân thảo, mọc thẳng đứng, bán thẳng xoắn có dây leo, thường có chiều dài từ 30-100 cm, số lồi cao đến 200 cm Thân có rãnh, phân nhánh Khi cịn non có lơng ngắn, mịn, trắng phát triển bao phủ, lông rụng dần lớn lên Lá đậu Nho nhe phần lớn mọc cách, thường kép ba chét, kèm hình giáo, chiều dài từ 6-9 cm, cuống dài từ 5-10 cm Hệ thống rễ đậu Nho nhe phát triển mạnh mẽ, rễ cắm sâu xuống đất 100-150 cm có nhiều nốt sần chứa vi khuẩn cố định đạm Hoa thường có màu vàng tươi vàng nhạt Cụm hoa hình chùm mọc từ nách Hoa lưỡng tính, khơng đều, mẫu Hoa thường có 10 nhị, màng hạt phấn có rãnh - lỗ Bộ nhụy gồm có nỗn với nhiều nỗn đảo hay cong Quả đậu Nho nhe dài hình dải cong, mọc đứng dài từ 7,5-12,5 cm, rộng 4- mm, chứa khoảng 6-10 hạt Hạt đậu dài 6-8 mm, rốn hạt lõm Hạt đậu Nho nhe có màu sắc đa dạng: vàng lục, vàng nâu, nâu, đen, đốm màu rơm Các hạt màu vàng lục thường trở thành màu nâu vàng trình lưu trữ Hạt màu vàng nâu cho có giá trị dinh dưỡng cao Đậu Nho nhe phát triển nhanh vào mùa hè Ở Ấn Độ Nepal, đậu Nho nhe gieo vào tháng 2, tháng để thu hoạch vào mùa hè tháng 7, tháng để thu hoạch vào tháng 12 Thời kỳ sinh trưởng thay đổi tùy theo giống vùng địa lý Khi trồng Ăng-gô-la (vĩ độ 6°-17°S), theo báo cáo, trưởng thành sau 60 ngày kể từ gieo hạt, Tây Bengal bán cầu bắc, trồng cần khoảng 130 ngày để tạo suất hạt giống kinh tế [40] Đậu Nho nhe họ đậu linh hoạt phát triển vùng cận nhiệt đới ẩm đến khí hậu ơn đới ấm áp mát mẻ Cây không chịu sương giá chịu nhiệt độ cao, thường tìm thấy mọc khu vực có nhiệt độ trung bình từ 18-30°C Phạm vi nhiệt độ cho tăng trưởng 10-40°C với mức tối ưu khoảng từ 18-30°C Đậu Nho nhe phát triển tốt vùng khí hậu ẩm ướt có khả chịu hạn tốt, để có suất tốt, địi hỏi lượng mưa hàng năm 1000-1500 mm Phạm vi lượng mưa hàng năm báo cáo cho tăng trưởng 3002000 mm với mức tối ưu khoảng 700-1500 mm Đậu Nho nhe phát triển mạnh điều kiện ánh sáng đầy đủ, tăng trưởng bị cản trở trồng xen canh với trồng khác chẳng hạn ngơ, lúa [40] Lồi đậu trồng nhiều loại đất, loại đất thối hóa, khơ cằn, nghèo dinh dưỡng để có suất tối ưu, địi hỏi phải có đất màu mỡ Tuy nhiên, độ phì nhiêu đất cao cản trở hình thành làm giảm suất hạt Phạm vi pH đất cho tăng trưởng 5,5-8 với mức tối ưu khoảng 6-7,5 Đậu Nho nhe loại khỏe mạnh, có khả chống lại nhiều loại sâu bệnh, khơng cần phân bón chăm sóc đặc biệt q trình tăng trưởng Nó có nguồn gốc từ châu Á, tìm thấy Ấn Độ miền trung Trung Quốc sau lan sang Malaysia Loài đậu người Ả Rập đưa vào Ai Cập, dọc theo bờ biển phía Đơng châu Phi đảo Ấn Độ Dương Ngày nay, đậu Nho nhe trồng rộng rãi nước nhiệt đới châu Á, trồng Hoa Kỳ, Úc, Tây Nam châu Á, vùng nhiệt đới châu Phi châu Mỹ Ở nhiệt đới châu Phi, trồng Tây Phi, Đơng Phi đảo Ấn Độ Dương, gặp Trung Nam Phi Ở nước ta, đậu Nho nhe trồng chủ yếu tỉnh miền núi phía Bắc Cao Bằng, Lào Cai, Yên Bái, Hiện nay, chưa có số liệu cụ thể tình hình sản xuất đậu Nho nhe, nhiên loài đậu sản xuất chủ yếu vùng nhiệt đới châu Á, Nhật Bản nước nhập chính, nhà xuất Thái Lan, Myanmar Trung Quốc Madagascar nước xuất đậu Nho nhe Xuất trung bình hàng năm từ năm 1998-2000 ước tính 1100 triệu [40] Hình 1.1 Cây đậu Nho nhe (ảnh chụp tác giả vườn thí nghiệm Khoa Sinh học, 6/2018) 1.1.2 Giá trị dinh dưỡng giá trị sử dụng đậu Nho nhe Đậu Nho nhe loại đậu biết đến chưa sử dụng cách Tuy nhiên, gần loại đậu gây ý nhờ giá trị tiềm mặt dinh dưỡng Chất lượng dinh dưỡng hạt đậu Nho nhe cao so với nhiều loại đậu khác thuộc họ Vigna Trong nghiên cứu tại, 16 kiểu gen khác hạt đậu Nho nhe đánh giá thành phần dinh dưỡng là: hàm lượng protein, chất béo tổng hợp, chất xơ, carbohydrate, vitamin, khoáng chất, axit amin axit béo [28] Hạt đậu Nho nhe khô chứa nước 13,3%, protid 20,9%, lipid 0,9%, glucid 64,9%, xơ 4,8%, tro 4,2%, 100g cung cấp lượng 1373KJ Ðậu gạo chứa nhiều Ca, Fe, P loại vitamin nhóm B thiamin, niacin, riboflavin Nghiên cứu gần cho thấy đậu Nho nhe có hàm lượng Ca cao so với loại trồng họ Đậu khác tốt cho bà mẹ cho bú Protein cô đặc điều chế từ hạt đậu cho thấy tác dụng chống tăng huyết áp chuột đồng Botrytiscinerea, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani Mycosphaerella arachidicola [16] Hơn nữa, cho thấy giảm thiểu chống lại hoạt động mã ngược HIV-1 [18] Ở Ấn Độ đậu Nho nhe với bột gạo dùng làm thuốc đắp vào bụng để trị đau dày.Tuy nhiên, yếu tố chống dinh dưỡng tìm thấy hạt đậu Nho nhe bao gồm yếu tố ức chế trypsin, phytates, tannin oligosacarit Việc ngâm, tách vỏ, nảy mầm nấu chín làm giảm đáng kể yếu tố chống dinh dưỡng [33], [34] Đậu Nho nhe họ đậu đa năng, không phổ biến loại đậu khác: đậu đũa (Vigna unguiculata), đậu adzuki (Vigna angulari) đậu xanh (Vigna radiata), đậu Nho nhe lại loại thực phẩm quan trọng thiết yếu dinh dưỡng người nước phát triển, thiếu hụt nguồn dinh dưỡng thức ăn như: Ấn Độ, Nepal, Thái Lan…trong có Việt Nam đặc biệt tỉnh miền núi phía Bắc (Lào Cai, Yên Bái, Cao Bằng…) Tất phận đậu ăn sử dụng chế phẩm thức ăn Hạt khơ luộc, ăn với cơm chúng thay gạo hầm nấu soup Ở số nước, hạt xay để tạo thành loại bột dinh dưỡng có thức ăn dành cho trẻ em Quả non, lá, rau mầm luộc ăn rau Quả non đơi cịn để ăn sống Đậu Nho nhe hữu ích cho chăn ni Những thứ cịn lại sau thu hoạch thân cây, lá, hạt… để tươi phơi khô sử dụng làm thức ăn cho súc Đậu Nho nhe dùng để làm phân xanh, mọc nhanh che phủ kín mặt đất hàng rào sống hay hàng rào sinh học Ở đồi vùng biên giới Nepal, người nông dân dùng đậu với hai mục đích làm thức ăn cho gia súc, cải tạo loại đất 1.2 NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT 1.2.1 Cơ sở khoa học kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Tính tồn tế bào Tất tế bào thể mang thơng tin di truyền giống Do chúng có tiềm tổng hợp nên protein giống Các tế bào lấy từ mô sống thể thực vật (bao phấn, đỉnh sinh trưởng, mầm, đoạn thân, rễ…) kích thích để tái sinh thành hồn chỉnh đặc trưng cho loài, phát triển hoa kết bình thường Q trình thơng qua phát sinh quan hình thành phơi vơ tính ni cấy điều kiện dinh dưỡng thích hợp có bổ sung chất kích thích sinh trưởng cần thiết Các loại mơ phân hố tách từ thể thực vật có khả tái sinh trực tiếp thành hoàn chỉnh, phát triển thành tế bào mơ sẹo Đó loại tế bào khơng phân hố, phân chia liên tục có khả phân hố thành phơi, chồi để tạo hồn chỉnh Khả gọi tính tồn tế bào [9], [14] Phản biệt hóa tái biệt hóa Quá trình tái sinh chia làm hai giai đoạn: phản biệt hóa tái biệt hóa Phản biệt hóa giai đoạn đưa tế bào từ trạng thái biệt hóa trở lại trạng thái chưa biệt hóa Các tế bào biệt hóa tế bào có chức định có cấu trúc phù hợp để hồn thành chức Q trình phản biệt hóa biến tế bào biệt hóa thành tế bào có hình thức giống tế bào đỉnh sinh trưởng (tế bào mầm phơi), chúng có đặc điểm: tế bào đậm đăc, không bào nhỏ li ti khơng có, nhân to, kích thước tế bào lớn Những tế bào coi phản biệt hóa xong điều kiện ni cấy định chúng phát triển thành thể Các mơ phản biệt hóa cần ni mơi trường chứa chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm Auxin gồm: 2,4-D, α-NAA, IAA, IBA [7] Tái biệt hóa giai đoạn tế bào phản biệt hóa phát triển thành hồn chỉnh có tế bào phơi hình thành thể [7] Trong thể, tế bào có khả biệt hóa, phản biệt hóa triển vọng nuôi cấy thành công khác Những tế bào chuyên hóa chức (đã biệt hóa sâu) khó xảy q trình biệt hóa ngược lại, tế bào mạch dẫn thực vật, tế bào thần kinh động vật Người ta chứng minh rằng: tế bào gần trạng thái phôi khả ni cấy thành cơng cao nhiêu [1] 1.2.2 Môi trường nuôi cấy tế bào thực vật Cơ sở cho việc xây dựng môi trường nuôi cấy việc xem xét thành phần cần cho sinh trưởng phát triển Đầu năm 20 có số cơng trình sử dụng mơi trường dinh dưỡng tổng hợp, ngồi muối khống nguồn cacbon bổ sung thêm vitamin số chất khác [7] Trong năm 60, nhiều môi trường nuôi cấy xây dựng sử dụng cần cải tiến chút Đó mơi trường White, Knop (1953), Mơi trường giàu chất dinh dưỡng Murashige - Skoog (1963) [23]; Môi trường có hàm lượng chất dinh dưỡng trung bình Gamborg (1968) Thành phần môi trường nuôi cấy mô thực vật thay đổi tùy theo lồi phận ni cấy Tùy theo mục đích ni cấy muốn trì mơ trạng thái mô sẹo, muốn tạo rễ, tạo mầm hay muốn tái sinh hồn chỉnh, mơi trường ni cấy phải thay đổi nhiều hay Tuy vậy, tất môi trường nuôi cấy có thành phần gồm: muối khống, cacbon, vitamin, chất điều khiển sinh trưởng, nhóm chất bổ sung, chất độn [7] Các nguyên tố khoáng đa lượng: Là nguyên tố muối khoáng sử dụng nồng độ 30ppm, tức 30mg/l, bao gồm nguyên tố sau: N, P, S, K, Mg, Ca Các nguyên tố có chức tham gia vào trình trao đổi chất tế bào xây dựng lên thành tế bào Các nguyên tố vi lượng Các nguyên tố vi lượng coi sở sống hầu hết trình tổng hợp chuyển hóa chất thực nhờ enzyme mà thành phần enzyme có ngun tố vi lượng Ngồi ra, ngun tố vi lượng cịn có tác động sâu sắc đến q trình quang hợp, hơ hấp, hấp thụ nước…Tuy nhiên, nhu cầu muối khống vi lượng ni cấy mơ thực vật lĩnh vực cịn nghiên cứu, nguyên tố vi lượng chứng minh thiếu phát triển mơ tế bào Vì vậy, cung cấp nguyên tố vi lượng nồng độ chúng môi trường nuôi cấy hầu hết dựa vào kinh nghiệm, trường hợp cụ thể không cần thiết Trong nuôi cấy mô thực vật, nguyên tố vi lượng sử dụng nồng độ thấp 30 ppm Bao gồm: Fe, B, Mn, I Mo, Cu, Zn, Ni, Co Nguồn cacbon Hầu hết mẫu mơ ni cấy dị dưỡng, khơng có khả tổng hợp cacbon Vì việc đưa vào mơi trường nuôi cấy nguồn cacbon hữu điều kiện bắt buộc Trong phần lớn môi trường nguồn cacbon lượng chủ yếu sucrose glucose, sucrose sử dụng 10 2.2.2 Chiều dài rễ Descriptives IBA sore 1,00 2,00 3,00 4,00 Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median 75 Statistic 2.7567 2.4168 3.0966 2.8315 2.7700 829 91025 0.00 4.25 4.25 52 -1.639 4.501 2.5557 2.3627 2.7486 2.5587 2.5150 267 51679 1.37 3.63 2.26 42 -.123 323 2.5927 2.2908 2.8946 2.6400 2.6700 654 80851 0.00 4.00 4.00 81 -1.070 2.821 2.7010 2.5441 2.8579 2.7043 2.7050 Std Error 16619 427 833 09435 427 833 14761 427 833 07672 5,00 6,00 Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 76 177 42023 1.67 3.74 2.07 35 -.075 1.370 2.5480 2.2575 2.8385 2.5811 2.5800 605 77806 0.00 4.00 4.00 1.00 -.819 3.013 1.7020 1.4166 1.9874 1.7244 2.0000 584 76440 0.00 3.00 3.00 50 -.764 828 427 833 14205 427 833 13956 427 833 Kết Test Ducan chieudaire N IBA Duncana Subset for alpha = 0.05 6.00 30 5.00 30 2.5103 2.00 30 2.5557 3.00 30 2.5927 4.00 30 2.7010 1.00 30 2.7567 Sig 1.6687 1.000 247 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30.000 77 2.3 Kết phân tích sau tuần 2.3.1 Số rễ /mẫu sau tuần Descriptives IBA sore 1,00 2,00 3,00 4,00 Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 78 Statistic 2.5667 2.0415 3.0919 2.5370 2.0000 1.978 1.40647 0.00 6.00 6.00 2.00 292 039 2.6000 3.1785 3.8215 3.5000 3.0000 741 86103 2.00 5.00 3.00 1.00 174 -.491 3.5000 2.0232 3.1768 2.5370 2.0000 2.386 1.54474 0.00 6.00 6.00 2.25 731 -.093 4.5000 3.9303 5.0697 Std Error 25679 427 833 28203 427 833 15720 427 833 27854 5,00 6,00 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 79 4.4444 4.0000 2.328 1.52564 3.00 7.00 4.00 3.00 562 -1.209 3.3000 2.6710 3.9290 3.1667 3.0000 2.838 1.68462 1.00 9.00 8.00 2.00 1.438 3.410 2.1667 1.6378 2.6955 2.1296 2.0000 2.006 1.41624 0.00 5.00 5.00 2.00 387 -.623 427 833 30757 427 833 25857 427 833 Kết Test Ducan sore Subset for alpha = 0.05 IBA Duncana 6,00 N 30 2.1667 1,00 30 2.5667 2.5667 2,00 30 2.6000 2.6000 5,00 30 3,00 30 4,00 30 Sig 3.3000 3.3000 3.5000 4.5000 272 061 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 80 589 1.000 2.3.2 Chiều dài rễ Descriptives IBA sore 1,00 2,00 3,00 4,00 Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median 81 Statistic 2.9837 2.6191 3.3482 3.0772 3.1600 953 97634 0.00 4.30 4.30 61 -1.894 4.573 2.8313 3.0546 3.4734 3.2641 3.2150 314 56073 2.25 4.30 2.05 79 -.073 -.763 3.2640 2.4938 3.1689 2.8589 2.7900 817 90395 0.00 4.50 4.50 83 -.527 2.335 3.6733 3.5169 3.8298 3.6430 3.6200 Std Error 17825 427 833 16504 427 833 10237 427 833 07648 5,00 6,00 Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 82 175 41890 3.13 4.90 1.77 57 1.051 1.147 2.8940 2.5768 3.2112 2.9378 2.7900 721 84935 0.00 4.50 4.50 1.04 -.959 3.595 2.7647 2.3436 3.1857 2.8248 3.0000 1.271 1.12754 0.00 4.67 4.67 1.03 -1.290 1.849 427 833 15507 427 833 20586 427 833 Kết Test Ducan sore Subset for alpha = 0.05 IBA Duncana 6,00 N 30 2.7647 2,00 30 2.8313 2.8313 5,00 30 2.8940 2.8940 1,00 30 2.9837 2.9837 3,00 30 4,00 30 Sig 3.2640 3.2640 3.6733 366 070 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 83 061 2.4 Kết phân tích sau tuần 2.4.1 Số rễ /mẫu sau tuần Descriptives IBA sore 1,00 2,00 3,00 4,00 Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 84 Statistic 2.5667 2.0415 3.0919 2.5370 2.0000 1.978 1.40647 0.00 6.00 6.00 2.00 292 039 2.7333 3.2601 4.0065 3.6111 3.5000 999 99943 2.00 6.00 4.00 1.00 383 -.265 3.6333 2.1537 3.3129 2.6852 2.5000 2.409 1.55216 0.00 6.00 6.00 2.25 479 -.372 4.7000 4.1527 5.2473 Std Error 25679 427 833 28338 427 833 18247 427 833 26760 5,00 6,00 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Lower Bound Confidence Upper Bound Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 85 4.6667 4.0000 2.148 1.46570 3.00 7.00 4.00 3.00 351 -1.288 3.3333 2.8301 3.8365 3.3519 3.0000 1.816 1.34762 0.00 6.00 6.00 1.00 -.389 918 2.2667 1.6954 2.8379 2.2407 2.0000 2.340 1.52978 0.00 5.00 5.00 2.00 445 -.682 427 833 24604 427 833 27930 427 833 Kết Test Ducan sore Subset for alpha = 0.05 IBA Duncana N 6,00 30 2.2667 1,00 30 2.5667 2,00 30 2.7333 5,00 30 3,00 30 4,00 30 Sig 2.7333 3.3333 3.3333 3.6333 4.7000 225 098 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 30,000 86 406 1.000 2.4.2 Chiều dài rễ Descriptives IBA 1.00 Statistic Mean 95% Std Error 3.0937 Lower Bound 2.7236 Upper Bound 3.4637 18095 Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean 3.1994 Median 3.3150 Variance 982 Std Deviation 99108 Minimum 00 Maximum 4.30 Range 4.30 Interquartile Range Skewness Kurtosis chieudaire 2.00 Mean 95% 61 -2.081 427 5.091 833 3.2083 21847 Lower Bound 3.1628 Upper Bound 3.5665 Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean 3.3533 Median 3.2900 Variance 292 Std Deviation 54057 Minimum 2.50 Maximum 4.50 Range 2.00 Interquartile Range Skewness Kurtosis 3.00 Mean Lower Bound 87 77 177 427 -.536 833 3.3647 9869 2.7615 95% Confidence Interval for Upper Bound 3.6552 Mean 5% Trimmed Mean 3.2130 Median 3.0000 Variance 1.432 Std Deviation 1.19662 Minimum 00 Maximum 6.00 Range 6.00 Interquartile Range 1.67 Skewness 047 427 1.064 833 4.4623 08287 Kurtosis 4.00 Mean 95% Lower Bound 4.2928 Upper Bound 4.6318 Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean 4.4485 Median 4.3350 Variance 206 Std Deviation 45390 Minimum 3.67 Maximum 5.50 Range 1.83 Interquartile Range Skewness Kurtosis 5.00 Mean 95% 66 552 427 -.082 833 3.2697 20044 Lower Bound 2.8597 Upper Bound 3.6796 Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean 3.2811 Median 3.1000 Variance 1.205 88 Std Deviation 6.00 1.09786 Minimum 00 Maximum 6.00 Range 6.00 Interquartile Range 1.20 Skewness -.163 427 Kurtosis 2.457 833 2.8833 21799 Mean 95% Lower Bound 2.4375 Upper Bound 3.3292 Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean 2.9444 Median 3.0000 Variance 1.426 Std Deviation 1.19397 Minimum 00 Maximum 5.00 Range 5.00 Interquartile Range 1.50 Skewness Kurtosis Kết Test Ducan chieudaire N IBA Duncana Subset for alpha = 0.05 6.00 30 2.8833 1.00 30 3.0937 2.00 30 3.2083 5.00 30 3.2697 3.00 30 3.3647 4.00 30 Sig 4.4623 085 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 89 -1.169 427 1.671 833 ... tiêu nghiên cứu Xác định hệ thống tái sinh đa chồi in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện khử trùng hạt để tạo mẫu ống nghiệm - Nghiên cứu tái sinh. .. chuyển gen Đối với họ Đậu đậu tương, đậu xanh, đậu cove việc xây dựng hệ thống tái sinh in vitro nghiên cứu khẳng định Còn đậu Nho nhe, lồi hai mầm tái sinh ống nghiệm hay không, tái sinh từ phận cây, ... cho tái sinh đa chồi Đây câu hỏi đặt cho nghiên cứu Xuất phát từ lý xây dựng đề tài cho luận văn thạc sĩ là: ? ?Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro phục vụ chuyển gen đậu Nho nhe (Vigna umbellata)? ??