Phân tích tính đa hình và đột biến nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai và thai chết lưu

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Sẩy thai (ST), thai chết lưu (TCL) nhiều nguyên nhân nhiễm trùng, bất thường hormon, bệnh mãn tính, dị dạng tử cung, bất thường di truyền… Đặc biệt thai sẩy, thai chết lưu ba tháng đầu thai kì phơi thai mang đột biến nhiễm sắc thể (NST) đóng vai trò chủ yếu [1] Trường hợp ngun nhân bố mẹ mang đột biến NST dẫn đến bất thường phân ly NST trình giảm phân tạo nên giao tử bất thường nguy mang thai bất thường cao gây sẩy thai, thai chết lưu Bị sẩy thai thai chết lưu gánh nặng tâm lý kinh tế cho bệnh nhân, gia đình bệnh nhân xã hội Xét nghiệm phân tích NST cặp vợ chồng nhằm tìm nguyên nhân gây sẩy thai, thai chết lưu đồng thời đưa lời khuyên di truyền góp phần nâng cao chất lượng sinh sản cộng đồng xã hội Nhiều cơng trình nghiên cứu nước giới phân tích NST cặp vợ chồng có tiền sử ST, TCL, phát nhiều loại đột biến NST số lượng cấu trúc ví dụ chuyển đoạn tương hỗ, chuyển đoạn hòa nhập tâm, đảo đoạn, đoạn… Các đột biến có ảnh hưởng rõ rệt đến trình thai sản, đặc biệt gây ST, TCL thai phụ Ngoài đột biến số lượng cấu trúc NST nói trên, nhà di truyền học nói riêng nhà khoa học nói chung có nhiều nghiên cứu tính đa hình nhiễm sắc người Theo hệ thống danh pháp quốc tế di truyền người (ISCN) quan điểm số tác giả, biến đổi vùng dị nhiễm sắc biến đổi bình thường NST người, khơng tác động lên kiểu hình [2], [3], [4], y văn giới gọi chromosome variation Trong nghiên cứu gọi tính đa hình nhiễm sắc thể Tuy nhiên số nghiên cứu người ta nhận thấy tỷ lệ đa hình nhiễm sắc thể nhóm ST, TCL cao nhiều so với nhóm người khơng có tiền sử bất thường sinh sản Vậy liệu đột biến NST tính đa hình NST có tác động đến sẩy thai thai chết lưu nào? Trả lời câu hỏi giúp chẩn đốn, phòng tránh tiên lượng nguyên nhân gây sẩy thai, thai chết lưu, từ nâng cao chất lượng sinh sản Với mong muốn làm sáng tỏ nguyên nhân sảy thai, thai chết lưu, làm sở cho tư vấn di truyền định hướng cho việc điều trị, tiến hành nghiên cứu “Phân tích tính đa hình đột biến nhiễm sắc thể cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai thai chết lưu” với mục tiêu: Mơ tả dạng đa hình NST cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai, thai chết lưu Phân tích đột biến nhiễm sắc thể cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai, thai chết lưu Chương TỔNG QUAN 1.1 Đại cương sẩy thai, thai chết lưu 1.1.1 Khái niệm sẩy thai thai chết lưu 1.1.1.1 Sẩy thai Có nhiều quan niệm ST khác tùy theo nước, chủ yếu khác quy định thời gian mang thai Theo Tổ chức Y tế giới (TCYTTG), ST tượng kết thúc trình thai nghén cách tự nhiên trước thai nhi đạt tới độ tuổi sống bên ngồi tử cung; trục xuất tống phơi thai thai nhi ngồi có trọng lượng < 500 gam (tương ứng với tuổi thai < 22 tuần) [5] Theo hướng dẫn Quốc gia dịch vụ chăm sóc sức khỏe sinh sản Việt Nam, ST trường hợp thai rau bị tống khỏi buồng tử cung trước 22 tuần (kể từ ngày đầu kỳ kinh cuối) [6] Như vậy, thời gian mang thai, Việt Nam áp dụng định nghĩa TCYTTG Ở Mỹ có số định nghĩa liên quan đến ST sau [7]: - ST sinh hóa tượng sẩy thai sau có dấu hiệu sinh hóa tồn thai - ST sớm ST tháng đầu, sau có dấu hiệu mặt mơ học có hình ảnh siêu âm - ST tự nhiên ST < 20 tuần tuổi tính từ ngày đầu kỳ kinh cuối - Sẩy thai liên tiếp (STLT) ST từ hai hai lần 1.1.1.2 Thai chết lưu Khái niệm thai chết lưu chưa có thống nước Theo TCYTTG, TCL thai chết trước khỏi tử cung người mẹ không phân biệt thời gian mang thai [5] Ở Việt Nam, thai chết lưu thai chết lưu buồng tử cung 48 Cũng Việt Nam, dựa vào triệu chứng hướng xử trí, thai chết lưu phân loại thai chết lưu sớm 20 tuần thai chết lưu muộn 20 tuần [8] 1.1.2 Nguyên nhân yếu tố nguy gây sẩy thai, thai chết lưu Bảng 1.1: Nguyên nhân thai [9] Nhóm nguyên nhân Di truyền Tự miễn Dị dạng tử cung Nhiễm trùng Nội tiết Bệnh lý đông máu Môi trường Các nguyên nhân cụ thể Lệch bội, đột biến NST giới tính, rối loạn đơn gen (Mendel), di truyền đa nhân tố, đột biến NST bố mẹ, đảo đoạn Bệnh tự miễn (lupus hệ thống, hội chứng antiphospholipid…), nguyên nhân miễn dịch đồng loại (truyền máu, ghép tạng…) Tử cung: Bất thường ống Muller, vách ngăn tử cung, tử cung sừng, tử cung đôi, polyp tử cung Khuyết tật mắc phải hội chứng Asherman Cổ tử cung bất thường Listeria monocytogens, Toxoplasma gondii, rubella, Herpes simplex virus, sởi, Clamydia, CMV, Coxackie virus Tiểu đường Kháng thể kháng giáp, suy giáp, cường giáp Bất thường pha hoàng thể Buồng trứng đa nang Tăng prolactin Prothombin G20210 A gen trội Thiếu yếu tố V Leiden trội Thiếu yếu tố Protein S, C Thiếu Antithrombin III Hút thuốc, nghiện rượu, sử dụng nhiều cafein Tuy nhiên, 20-50% số trường hợp thai chết lưu không rõ nguyên nhân có đầy đủ phương tiện thăm dò có [10] 1.1.2.1 Các ngun nhân khơng bất thường di truyền [8]  Nguyên nhân từ phía mẹ - Mẹ bị bệnh lý mạn tính, bệnh nội tiết, nhiễm độc thai nghén, nhiễm trùng đặc biệt TORCH, nhiễm kí sinh trùng sốt rét, nhiễm độc mạn tính hay cấp tính… - Tử cung: tất kiểu dị dạng tử cung gây sẩy thai, thai chết lưu: tử cung nhi tính, tử cung dị dạng, tử cung phát triển làm cho thai bị nuôi dưỡng dẫn đến chết lưu, hở eo tử cung nguyên nhân hay gặp gây sẩy thai liên tiếp đặc biệt tháng đầu - Ngoài sang chấn, tuổi mẹ cao, dinh dưỡng kém, lao động vất vả, đời sống khó khăn nguyên nhân yếu tố thuận lợi dẫn đến sẩy thai, thai chết lưu  Nguyên nhân từ phía thai - Thai già tháng: bánh rau bị lão hóa, khơng đảm bảo ni dưỡng thai, dẫn đến thai chết lưu khơng xử trí kịp thời - Đa thai: thai chết trường hợp truyền máu cho nhau, thai cho máu dễ bị chết lưu - Bất đồng nhóm máu mẹ yếu tố Rh, thai dễ bị sẩy thai, thai chết lưu lần có thai  Nguyên nhân từ phần phụ - Dây rốn: dây rốn thắt nút, dây rốn ngắn tuyệt đối, dây rốn quấn cổ… - Bánh rau: bánh rau xơ hóa, bánh rau bị bong… - Nước ối: đa ối cấp tính hay mạn tính, thiểu ối 1.1.2.2 Các yếu tố nguy gây sẩy thai, thai chết lưu - Tiểu đường: Đây nguyên nhân hay gặp gây biến chứng cho thai cho người mẹ thời gian mang thai Tỷ lệ sẩy thai, thai chết lưu nhóm mẹ tiểu đường tuýp cao gấp 2,5 lần so với nhóm mẹ khơng bị tiểu đường [11] - Viêm nhiễm phụ khoa: Nhiễm khuẩn ngược dòng gây thai dị dạng, đẻ non, nặng gây thai chết lưu [8],[12] - Chỉ số khối thể mẹ trước mang thai (PBMI): Những phụ nữ có PBMI ≥25 có nguy TCL cao lần nhóm PBMI ≤20 [13] - Tuổi mẹ: Hoesli cs nhận thấy tỷ lệ sẩy thai tăng lên theo tuổi mẹ Tỷ lệ tăng lên cách rõ rệt người phụ nữ từ 35 tuổi trở lên [14] - Tuổi bố: Slama R cộng nghiên cứu nhóm phụ nữ 25 tuổi 35 tuổi có chồng 35 tuổi kết luận tuổi người chồng tăng tăng nguy sẩy thai người vợ 30 tuổi [15] - Hút thuốc thời kì mang thai: Hút thuốc làm tăng nguy sẩy thai thai chết lưu nhóm mẹ hút thuốc chủ động thụ động [16] - Uống rượu thời kì mang thai: Windham cs nhận thấy: nguy sẩy thai tăng gấp lần nhóm phụ nữ uống rượu ≥3 cốc/tuần tháng đầu thai kì [17] 1.1.2.3 Nguyên nhân bất thường di truyền  Nguyên nhân bất thường gen Rối loạn đơn gen ngày quan tâm tìm nguyên nhân sẩy thai, thai chết lưu Những nhóm rối loạn đơn gen liên quan tới ST, TCL bao gồm đột biến gen liên quan tới điều hòa hệ thống miễn dịch làm tổ (như đột biến vô nghĩa gen HLA-G) [18, 19], đột biến gen gây tình trạng tăng đơng máu (như prothrombin G20210A gen trội, thiếu yếu tố V Leiden trội, Thiếu yếu tố Protetin S; C, thiếu Antithrombin III) [20] đột biến gen enzyme đặc hiệu, bao gồm enzyme chuyển angiotensin, ubiquitin proteinase, phosphatase kiềm người [21],[22, 23] Các gen có vai trò chu trình khử độc Glutathione, bảo vệ phơi khơng bị suy yếu q trình oxy hóa ví dụ Glutathione S-transferase theta 1(GSTT1) Glutathione S-transferase Mu 1(GSTM1) [24] Đột biến gen MTHFR gây rối loại hấp thu acid folic gây ST,TCL [25]  Nguyên nhân bất thường di truyền mức độ nhiễm sắc thể - Bất thường nhiễm sắc thể bố mẹ Nguyên nhân chủ yếu ST, TCL di truyền, đặc biệt di truyền tế bào [26], [27] Trung bình khoảng 4% cặp vợ chồng bị ST, TCL có vợ chồng mang đột biến NST tỷ lệ cặp đôi bình thường 0,2% [28] Mặc dù người mang NST chuyển đoạn cân ln có kiểu hình bình thường tỷ lệ ST, TCL cao hơn, điều bố mẹ mang chuyển đoạn cân NST, trình phân ly giảm phân dẫn tới 50-70% giao tử phơi có nhiễm sắc thể không cân [29] - Bất thường nhiễm sắc thể phôi thai Theo nghiên cứu phôi thai sẩy, thai chết lưu cho thấy tỷ lệ phơi thai bị hỏng có đột biến nhiễm sắc thể lên đến 50% [30], [31] Các đột biến nhiễm sắc thể liên quan đến NST thường 60%, monosomy X (20%) đa bội (20%) [32] Nguyên nhân gây đột biến không phân chia nhiễm sắc thể bất thường trình thụ tinh Khi sử dụng kỹ thuật FISH để sàng lọc phôi làm thụ tinh ống nghiệm cặp vợ chồng sẩy thai liên tiếp, tác giả nhận thấy tỷ lệ bất thường phôi 70% cao hẳn so với cặp chứng lứa tuổi khơng có tiền sử sẩy thai liên tiếp [29] Ở cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai thai chết lưu, thai hỏng lần trước đột biến nhiễm sắc thể tỉ lệ đột biến nhiễm sắc thể thai lần sau tăng lên Hassold nghiên cứu 40 cặp vợ chồng thấy nguy thai có nhiễm sắc thể đột biến lên tới 70% trước cặp vợ chồng mang thai đột biến nhiễm sắc thể Nguy 20% thai trước khơng đột biến nhiễm sắc thể [33]  Tác động tính đa hình nhiễm sắc thể sẩy thai, thai chết lưu Như trình bày trên, tính đa hình NST coi biến đổi bình thường NST người, cho khơng có tác động đến kiểu hình Tuy nhiên ngày có nhiều nghiên cứu tính đa hình NST gây ảnh hưởng lâm sàng định vô sinh hay ST, TCL Các biến đổi đa hình quan sát có tỷ lệ cao cặp vợ chồng có tiền sử ST TCL so với người có khả sinh sản bình thường [34] Một số nghiên cứu khác biến đổi vùng dị nhiễm sắc nhánh dài NST 1, 9, 16 có liên quan tới bất thường sinh sản [35] Tuy nhiên số nghiên cứu khác phủ nhận tác động tính đa hình nhiễm sắc thể tới ST, TCL [36] Một số khác cơng nhận trường hợp đa hình inv(9) (p12q13) có vai trò nhẹ gây ST, TCL [37] Hiện nay, tính đa hình nhiễm sắc thể gây bất thường sinh sản câu hỏi nhiều tranh luận nhà khoa học nói chung nhà di truyền học nói riêng 1.2 Các đột biến nhiễm sắc thể tính đa hình nhiễm sắc thể 1.2.1 Các đột biến nhiễm sắc thể người Trong nguyên nhân dẫn đến ST, TCL đột biến NST nguyên nhân chủ yếu đáng quan tâm Hầu hết dạng đột biến NST có ảnh hưởng đến q trình phát triển thai nhi, gây thai chết lưu tử cung, sẩy thai, dị dạng bẩm sinh hay bệnh lý di truyền Đột biến NST di truyền từ bố mẹ, đột biến phát sinh trình tạo nỗn, tạo tinh trùng, thụ tinh phát triển phơi Trong giai đoạn hợp tử chết sớm thường bất thường trứng tinh trùng 1.2.1.1 Đột biến số lượng Đột biến số lượng NST gồm hai dạng: đa bội (polyploidy) lệch bội (aneuploidy) * Đa bội thể: tượng tăng chẵn tăng lẻ NST Ví dụ: người 3n = 69 NST = thể tam bội (3n) Ở người, trường hợp đa lớn phôi thai chết giai đoạn trước sinh, vài trường hợp sống đến sinh sau sinh vài giờ, hầu hết sơ sinh bị dị tật * Lệch bội: tượng số lượng NST tế bào tăng lên giảm vài NST so với NST lưỡng bội * Lệch bội NST thường Ở người, hợp tử trisomy NST thường có tiếp tục phát triển hay không, số lượng dị tật khả sống sót thai bên hay bên ngồi tử cung phụ thuộc vào trisomy NST NST Trong số 22 cặp NST thường, thường có trisomy 13, trisomy 18 trisomy 21 thai nhi sống sót sau sinh ra, đặc biệt trisomy 21 có khả sống lâu hơn, chí sống đến tuổi trưởng thành, có số bệnh nhân nữ sinh Nam mắc hội chứng Down bị vơ sinh Nhìn chung trisomy nhóm A (1-3), nhóm B (4-5) nhóm C (6-12), phơi thai thường chết giai đoạn sớm tử cung Những dòng tế bào hợp tử monosomy NST thường, nhìn chung khơng có khả phát triển thường chết giai đoạn sớm * Lệch bội NST giới tính Trường hợp 47,XXX thường khơng có biểu hình thái đặc biệt Đa số sinh đẻ bình thường có tình trạng thai sẩy, thai chết lưu, số trường hợp vô kinh thứ phát, thường mãn kinh sớm Trường hợp 47,XYY, phát triển đến tuổi trưởng thành có khơng có biểu 10 hình thái đặc biệt, tính tình hăng, có khả thai sẩy, thai lưu sau Chỉ có trường hợp monosomy NST giới X có khả sống đến tuổi trưởng thành có biểu đột biến phát triển hình thái thể, quan sinh dục chậm phát triển trí tuệ Các bệnh nhân thường vơ sinh, nhiên có trường hợp có thai sinh con, gặp trạng thái khảm 45,X/46,XX Ở phụ nữ trạng thái khảm thường có ST, TCL 1.2.1.2 Đột biến cấu trúc nhiễm sắc thể * Mất đoạn (deletion): tượng NST bị đứt rời nhiều đoạn, đoạn bị đứt rời khơng có tâm tiêu biến đi, phần lại mang tâm trở lên ngắn bình thường Sự đoạn NST tức vật liệu di truyền tùy theo mức độ tổn thương nhiều hay mà ảnh hưởng xấu tới phát triển phôi thai, thai nhi sinh với nhiều dị tật Ở người tần số gặp đoạn Ví dụ: hội chứng mèo kêu: 46,XX(XY),del(5p)… mô tả Lejeune cs năm 1963 Triệu chứng lâm sàng trọng lượng sinh thấp, thời kỳ sơ sinh, trẻ nhỏ có tiếng khóc khơng bình thường, yếu, rên rỉ giống tiếng mèo kêu, đầu nhỏ, mặt tròn mặt trăng, hai mắt xa nhau, có nếp quạt, lẹm cằm… Nhiều bệnh nhân sống đến tuổi trưởng thành thể tình trạng phát triển * Chuyển đoạn (Translocation): Chuyển đoạn NST xác định hay gặp đột biến cấu trúc NST Có hai kiểu chuyển đoạn chuyển đoạn tương hỗ (reciprocal translocation) chuyển đoạn không tương hỗ, chuyển đoạn tương hỗ có chuyển đoạn hòa nhập tâm (Robertsonian translocation) 73 Kim S K et al (2001) A case with balanced chromosome rearrangement involving chromosomes 9, 14, and 13 in a woman with recurrent abortion Yonsei Med J 42(3), 345-8 74 Iyer P et al (2009), A de novo Complex Chromosomal Rearrangement of 46,XX,t(7;15;13)(p15;q21;q31) in a Female with an Adverse Obstetric History 75 Rao L et al (2005) Chromosome inversions and a novel chromosome insertion associated with recurrent miscarriages in South India Arch Gynecol Obstet 272(4), 273-7 76 Sandesh Chopade C D., Harish Harde et al (2012) Impact of Chromosomal Heteromorphisms on Recurrent Miscarriages Human Genetics and Embryology 2(1) 77 Pokale Y S (2015) Does a Heterochromatic variant affect the Human Reproductive outcome? Research Journal of Recent Sciences 4, 108113 78 Akbaş H et al (2012), Chromosome heteromorphisms are more frequent in couples with recurrent abortions 79 Nguyễn Thị Hồng H (2016), Phân tích tính đa hình số nhiễm sắc thể đối tượng bất thường thai sản, in Khóa luận tốt nghiệp bác sĩ đa khoa Đại Học Y Hà Nội 80 Farcas S (2007) Considerations regarding the implication of polymorphic variant and chromosomal inversion in the current miscarriage Jurnalul pediatrului 10(10), 39- 40 81 Empson M L M., Craig J (2009) Prevention of recurrent miscarriage for women with antiphospholipid antibody or lupus anticoagulant In: The Cochrane Library (4) 82 Gutierrez E C (2009) Chromosomal abnormalities and polymorphic variant in couples with repeated miscarriage in Mexico Reproductive BioMedicine Online 18(4), 543-548 83 Frenny M et al (1982) Chromosome abnormalities in 50 couples with multiple spontaneous abortions Feiti I Steri I 37, 379-380 84 Neha Saran B K (2017) Chromosomal Heteromorphisms and Karyotype Abnormalities in Humans International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences 6(5), 2940- 2953 85 Sipek P (2014) Heterochromatin variant in human karotypes: a possible association with reproductive failure Reproductive biomedicine online 86 France group (1989) Robersonian translocations and abnormal phenotypes Ann Genet 32(1), 5-9 87 Robinson W.P B F., Basaran S et al (1994) A somatic origin of homologous robetsonian translocation and isochromosomes Am.J Hum Genet 54, 290-302 88 Sorensen K., Nielsen J., Holm V et al (1979) Fragile site long arm chromosome 16 Hum Genet 48(1), 131-134 89 Cho E et al (2011) Extra G- positive band at chromosome 9q13 as a recurent heteromorphism in a Korean population Fetal Pediatr Pathol 30(4), 257-9 90 Dundar M (2008) Can the classical euchromatic variants of 9q12/qh+ cause recurrent abortion? Genet Count 19(3), 281-6 91 Herman E et al (2004) Atlas of chromosome heteromorphisms PHỤ LỤC QUY TRÌNH NI CẤY TẾ BÀO BẠCH CẦU LYMPHO MÁU NGOẠI VI, THU HOẠCH TẾ BÀO, NHUỘM BĂNG G Nuôi cấy tế bào bạch cầu lympho máu ngoại vi theo phương pháp Hungerford D.A (1965) Lấy 2ml máu tĩnh mạch cho vào ống li tâm tráng heparin đậy nút cao su kín vô trùng Các bước nuôi cấy phải thực buồng cấy tế bào điều kiện vô trùng Dùng ống hút nhỏ giọt pipet Pasteur cho từ - giọt máu tồn phần vào túyp ni cấy có chứa 6ml mơi trường ni cấy F10 F12, 2ml huyết bê 0,1ml PHA (phytohemaglutinin) Đậy nắp để túyp nuôi cấy tủ ấm 37oC thời gian 72 Đến thứ 70 bổ sung vào túyp nuôi cấy 1ml dung dịch Colcemid với nồng độ 1µg/1ml để tích lũy nhiều cụm kỳ thu hoạch tế bào thứ 72 Thu hoạch tế bào - Túyp nuôi cấy li tâm với tốc độ 800 - 1000 vòng/1 phút thời gian 10 phút - Loại bỏ dịch phía giữ lại phần cặn lắng chứa tế bào, 30ml dung dịch nhược trương KCl 0,075 M cho vào túyp nuôi cấy để tủ ấm 37oC thời gian khoảng 45 phút để phá vỡ màng tế bào - Li tâm, loại bỏ phần dịch phía trên, giữ lại phần cặn chứa nhân tế bào cụm NST kỳ - Làm mẫu vật cách trộn với dung dịch Carnoy (3 methanol: acid acetic) li tâm loại bỏ dịch phía (3 lần) - Lần cuối mẫu vật sạch, sau li tâm loại bỏ dịch phía trên, dùng ống hút nhỏ giọt pipet Pasteur hút lấy phần cặn chứa nhân tế bào cụm kỳ dàn tế bào lên lam kính để lạnh - Để tiêu khô tự nhiên tiến hành nhuộm tiêu Phương pháp nhuộm băng theo Seabright M (1971) - Nhuộm tiêu phương pháp nhuộm băng G theo phương pháp Seabright M (1971) Các bước tiến hành thực điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm: Nhúng tiêu vào cốc đựng dung dịch NaCl 0,15N thời gian khoảng 25 - 30 giây Sau tiêu cho vào cốc khác đựng dung dịch Trypsin 0,1% (Difco 1: 250) Rửa tiêu lặp lại lần cốc đựng dung dịch NaCl 0,15N Tiêu nhuộm thuốc nhuộm Giemsa 4% pH = 7, thời gian 10 phút Tất tiêu sau nhuộm xong rửa cốc đựng nước máy vời nước máy chảy nhẹ Kiểm tra độ phân vùng kính hiển vi, sau để tiêu khơ tự nhiên nhiệt độ phòng thí nghiệm BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHẠM THẾ VƯƠNG PH¢N TÝCH TíNH ĐA HìNH Và ĐộT BIếN NHIễM SắC THể CáC CặP Vợ CHồNG Có TIềN Sử SẩY THAI Và THAI CHÕT L¦U Chuyên ngành : Y sinh học di truyền Mã số : 60720106 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.BS ĐOÀN THỊ KIM PHƯỢNG HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn này, xin trân trọng cảm ơn: Ban Giám Hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo sau đại học Trung tâm tư vấn di truyền Bệnh viện Đại học Y Hà Nội, Bộ môn Y Sinh học Di truyền Trường Đại học Y Hà Nội Đã giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập hồn thành luận văn Đặc biệt tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS.BS Đồn Thị Kim Phượng, người thầy trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tơi q trình thực hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô cán Bộ mơn Y Sinh học Di truyền nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi thực luận văn Cuối xin gửi lời biết ơn tới bố mẹ, tồn thể gia đình bạn bè, người thân yêu khích lệ tinh thần, giúp đỡ mặt để yên tâm học tập Hà Nội, ngày 10 tháng 10 năm 2017 Phạm Thế Vương LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng em, hướng dẫn khoa học TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng Các nội dung nghiên cứu kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Các số liệu bảng biểu phục vụ cho mục đích nghiên cứu, phân tích, nhận xét em thu thập từ nhiều nguồn khác có kèm trích dẫn nguồn tài liệu Em xin cam đoan nội dung em trình bày hồn tồn trung thực Nếu sai sót em xin hồn tồn chịu trách nhiệm Em xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 10 năm 2017 Phạm Thế Vương DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT NST: Nhiễm sắc thể ST: Sẩy thai TCL: Thai chết lưu ISCN: An International System for Human Cytogenomic Nomenclature TCYTTG: Tổ chức y tế giới MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN .3 1.1 Đại cương sẩy thai, thai chết lưu 1.1.1 Khái niệm sẩy thai thai chết lưu 1.1.2 Nguyên nhân yếu tố nguy gây sẩy thai, thai chết lưu 1.2 Các đột biến nhiễm sắc thể tính đa hình nhiễm sắc thể 1.2.1 Các đột biến nhiễm sắc thể người 1.2.2 Chất dị nhiễm sắc tính đa hình nhiễm sắc thể 14 1.3 Tình hình nghiên cứu đột biến tính đa hình nhiễm sắc thể cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai thai chết lưu 20 1.3.1 Tình hình nghiên cứu đột biến nhiễm sắc thể cặp vợ chồng sẩy thai, thai chết lưu Việt Nam 20 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nhiễm sắc thể cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai thai chết lưu giới 22 1.3.3 Một số nghiên cứu tính đa hình NST liên quan đến bất thường sinh sản 29 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu33 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 33 2.2 Phương pháp nghiên cứu34 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 34 2.2.2 Cỡ mẫu34 2.2.3 Các biến số nghiên cứu 34 33 2.2.4 Các bước tiến hành 35 2.3 Xử lý số liệu 39 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 39 Chương KẾT QUẢ 40 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 40 3.1.1 Tuổi cặp vợ chồng sẩy thai, thai chết lưu 40 3.1.2 Phân bố theo tiền sử sẩy thai, thai chết lưu 3.2 Kết phân tích tính đa hình nhiễm sắc thể 40 41 3.2.1 Tỷ lệ đa hình NST đối tượng nghiên cứu 41 3.2.2 Các loại NST có tính đa hình phân bố chúng theo giới 42 3.2.3 Các dạng biến đổi tính đa hình NST 43 3.2.4 Tần số dạng đa hình nhiễm sắc thể số 1, số 9, số 16 NST Y 46 3.2.5 Tần số dạng đa hình nhiễm sắc thể nhóm D nhóm G 47 3.2.6 Tỷ lệ tính đa hình NST theo số lần ST, TCL 3.3 Kết phân tích đột biến nhiễm sắc thể 48 49 3.3.1 Tỷ lệ đột biến NST đối tượng nghiên cứu 49 3.3.2 Các dạng đột biến NST đối tượng nghiên cứu 50 3.3.3 Sự phân bố kiểu chuyển đoạn hòa nhập tâm nhóm 53 3.3.4 Tỉ lệ đột biến nhiễm sắc thể theo số lần ST, TCL 53 Chương BÀN LUẬN .54 4.1 Tuổi tiền sử sản khoa đối tượng nghiên cứu 54 4.1.1 Tuổi đối tượng nghiên cứu 54 4.1.2 Tiền sử sản khoa đối tượng nghiên cứu 55 4.2 Về đặc điểm tính đa hình NST 56 4.2.1 Về tỷ lệ đa hình nhiễm sắc thể nhóm ST, TCL 4.2.2 Sự khác biệt tính đa hình NST theo giới 56 57 4.2.3 Về dạng đa hình NST phân bố chúng 58 4.2.4 Tính đa hình NST số NST thường gặp 60 4.2.5 Ảnh hưởng tính đa hình NST tới ST, TCL 62 4.3 Phân tích đột biến NST 62 4.3.1 Về tỉ lệ đột biến nhiễm sắc thể đối tượng nghiên cứu 4.3.2 Sự khác biệt tỉ lệ đột biến NST theo giới 62 64 4.3.3 Phân tích dạng đột biến gặp nghiên cứu 64 4.3.4 Các dạng chuyển đoạn phân bố chúng theo giới 68 4.3.5 Về chuyển đoạn tương hỗ tác động tới ST, TCL 71 4.3.6 Về chuyển đoạn hòa hợp tâm tác động tới ST, TCL 4.3.7 Tác động đột biến đến mức độ ST, TCL 72 75 KẾT LUẬN 76 KIẾN NGHỊ 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Nguyên nhân thai Bảng 1.2: Tính đa hình NST thường gặp phương pháp nhuộm băng G theo ISCN 2016 16 Bảng 1.3: Phân bố dạng đa hình NST nghiên cứu Hemlata .30 Bảng 1.4: Phân bố dạng đa hình NST nghiên cứu Yamini.30 Bảng 1.5: Tỷ lệ tính đa hình số NST nghiên cứu H Akbas .31 Bảng 1.6: Phân bố tính đa hình NST NST nhóm D, G theo Chopade .32 Bảng 3.1: Tuổi đối tượng tham gia nghiên cứu 40 Bảng 3.2: Phân bố theo số lần ST, TCL .40 Bảng 3.3: Tỷ lệ đa hình NST đối tượng nghiên cứu 41 Bảng 3.4: Tỷ lệ đa hình nam nữ 41 Bảng 3.5: Tỷ lệ đa hình nhiễm sắc thể khác 42 Bảng 3.6: Tỷ lệ dạng biến đổi tính đa hình NST 43 Bảng 3.7: Tỷ lệ đa hình theo số lần ST, TCL 48 Bảng 3.8: Tỷ lệ dạng đột biến NST 50 Bảng 3.9: Karyotype đột biến phát .51 Bảng 3.10: Tần số kiểu chuyển đoạn hòa nhập tâm 53 Bảng 3.11: Tỷ lệ đột biến NST theo số lần ST, TCL 53 Bảng 4.1: Tỷ lệ tính đa hình NST số nghiên cứu 56 Bảng 4.2 Tỷ lệ đột biến NST cặp vợ chồng sẩy thai liên tiếp sinh bị dị tật bẩm sinh số tác giả 63 Bảng 4.3: Tỷ lệ chuyển đoạn NST cặp vợ chồng sẩy thai, thai chết lưu tác giả 70 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sự hình thành giao tử hợp tử người mang chuyển đoạn tương hỗ 11 Hình 1.2 Sơ đồ hình thành hợp tử người mang chuyển đoạn rob 12 Hình 1.3 Sơ đồ hình thành hợp tử người mang chuyển đoạn rob 13 Hình 1.4: Cơ chế hình thành dạng extra- band nhiễm sắc thể số .18 Hình 1.5 Một số dạng biến đổi tính đa hình NST 1, 9, 16, 15, Y 20 Hình 3.1: Hình ảnh dạng đa hình NST quan sát thấy nghiên cứu 46 Hình 3.2: Biểu đồ tần số dạng đa hình nhiễm sắc thể số 1, 9, 16 Y46 Hình 3.3: Biểu đồ tần số dạng đa hình NST nhóm D nhóm G 47 Hình 3.4: Biểu đồ tỷ lệ đột biến NST cặp vợ chồng ST, TCL 49 Hình 3.5: Biểu đồ tỷ lệ đột biến NST nam nữ .49 Hình 4.1 Karyotype trường hợp 47,XY,+mar 66 ... đa hình NST cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai, thai chết lưu Phân tích đột biến nhiễm sắc thể cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai, thai chết lưu 3 Chương TỔNG QUAN 1.1 Đại cương sẩy thai, thai chết. .. chứng lứa tuổi khơng có tiền sử sẩy thai liên tiếp [29] Ở cặp vợ chồng có tiền sử sẩy thai thai chết lưu, thai hỏng lần trước đột biến nhiễm sắc thể tỉ lệ đột biến nhiễm sắc thể thai lần sau tăng... 40 cặp vợ chồng thấy nguy thai có nhiễm sắc thể đột biến lên tới 70% trước cặp vợ chồng mang thai đột biến nhiễm sắc thể Nguy 20% thai trước khơng đột biến nhiễm sắc thể [33]  Tác động tính đa