KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆPXÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢ NĂNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA TINH DẦU LÁ QUÝT GAI Atalantia buxifolia Người hướng dẫn: TS TRƯƠNG THỊ DIỆU HIỀN Người thực hiện: PHẠM THỊ
Trang 1KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢ NĂNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA TINH
DẦU LÁ QUÝT GAI (Atalantia buxifolia)
Người hướng dẫn: TS TRƯƠNG THỊ DIỆU HIỀN
Người thực hiện: PHẠM THỊ THANH VY
Trang 2TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG
KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ
KHẢ NĂNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA
TINH DẦU LÁ QUÝT GAI
(Atalantia buxifolia)
Người hướng dẫn: TS TRƯƠNG THỊ DIỆU HIỀN
Người thực hiện: PHẠM THỊ THANH VY
Lớp : 14060302
Khoá : 18
THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2018
Trang 3Thắng đã tạo một môi trường tốt giúp em có thể học tập, rèn luyện và phát triển bảnthân Em xin cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa và các thầy cô trong khoa Khoa học ứngdụng đã tận tâm truyền dạy cho em những kiến thức và kinh nghiệm quý báu trong suốtkhoảng thời gian học tập tại trường Nhờ đó, em có một nền tảng kiến thức vững chắc
và các kỹ năng cần thiết để thực hiện khóa luận này
Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin đặc biệt gửi lời cảm ơn đến Ts.Trương Thị Diệu Hiền đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu và dànhnhiều thời gian hỗ trợ cũng như tạo mọi điều kiện tốt nhất để em có thể hoàn thành tốtkhóa luận này Nhờ sự hướng dẫn tâm huyết của cô mà em đã tìm được niềm đam mê
và rèn luyện sự kiên trì trong suốt quá trình nghiên cứu
Ngoài ra, em cũng xin cảm ơn các anh chị và các bạn trong phòng thí nghiệmchuyên đề đã chia sẻ nhiều kinh nghiệm quý báu giúp em khắc phục những sai sót vànhiệt tình hỗ trợ em trong suốt thời gian thực hiện đề tài
Cuối cùng, con xin được gửi lời cảm ơn chân thành nhất đến gia đình đã luônđộng viên và là chỗ dựa tinh thần vững chắc giúp con có đủ ý chí để hoàn thành tốtkhóa luận này
Một lần nữa em xin trân trọng cảm ơn!
Trang 4LỜI CAM ĐOAN CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG
Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi và được sự hướngdẫn khoa học của Ts Trương Thị Diệu Hiền Các nội dung nghiên cứu, kết quả trong
đề tài này là trung thực và chưa công bố dưới bất kỳ hình thức nào trước đây Những sốliệu trong các bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá được chính tácgiả thu thập từ các nguồn khác nhau có ghi rõ trong phần tài liệu tham khảo
Ngoài ra, trong luận văn còn sử dụng một số nhận xét, đánh giá cũng như số liệucủa các tác giả khác, cơ quan tổ chức khác đều có trích dẫn và chú thích nguồn gốc
Nếu phát hiện có bất kỳ sự gian lận nào tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm
về nội dung luận văn của mình Trường Đại học Tôn Đức Thắng không liên quan đến
những vi phạm tác quyền, bản quyền do tôi gây ra trong quá trình thực hiện (nếu có)
TP Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng 01 năm 2019
Tác giả
Phạm Thị Thanh Vy
Trang 5cây bụi mọc hoang khắp ở miền Bắc và miền Trung nước ta Loài cây này cũng được
sử dụng như là một loại dược liệu trong các bài thuốc dân gian để điều trị các bệnh vềđường hô hấp, thấp khớp và rắn cắn Hàm lượng tinh dầu trong có mặt trong loài câynày rất lớn, nhưng hiện nay vẫn chưa có nhiều tài liệu nghiên cứu về thành phần hóahọc cũng như chứng minh các hoạt tính sinh học của chúng Vì vậy, nghiên cứu này tậptrung vào việc xác định các thành phần hóa học và các đặc tính hóa lý cũng như đánh
giá khả năng chống đông máu của loại tinh dầu tách chiết từ lá cây Quýt gai (A buxifolia).
Bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước, tinh dầu tách chiết từ lá cây
Quýt gai (A buxifolia) đạt hiệu suất 0,3086 ± 0,0026 % (w/w) sau 5 giờ chưng cất.
Tinh dầu thu được sau quá trình chưng cất có thành phần acid tự do thấp và acid béothành phần có khối lượng nhỏ Tinh dầu phân tách hoàn toàn với nước và có tỉ trọngđạt giá trị 0,8733 ± 0,0097
Thành phần các hợp chất bay hơi trong tinh dầu được phân tích bằng phươngpháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) và đã xác định được tên của 33 hợp chất cótrong 40 cấu phần của tinh dầu Trong đó, caryophyllene là hợp chất chính với hàmlượng đạt 32,48 %
Khả năng chống đông máu của tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) được đánh giá
dựa trên khả năng kháng oxy hóa, khả năng kích thích tan huyết khối, khả năng ổn địnhmàng tế bào hồng cầu và khả năng ức chế sự biến tính albumin Cụ thể, tinh dầu lá
Quýt gai (A buxifolia) có khả năng kháng oxy hóa và khả năng kích thích tan huyết
khối tương đương với tinh dầu của các loại cây cùng họ với giá trị IC50 lần lượt là2393,02 ± 241,41 µg/mL và 25,99 ± 1,50 µL/mL Khả năng ổn định màng tế bào hồng
Trang 6cầu và khả năng ức chế sự biến tính albumin của loại tinh dầu này tốt hơn đáng kể sovới các loại tinh dầu của các loại cây cùng họ với giá trị IC50 lần lượt đạt giá trị 10,55 ±0,33 µL/mL và 11,91 ± 0,95 µL/mL.
Tóm lại, nghiên cứu này đã xác định được thành phần các hợp chất bay hơi và
các đặc tính hóa lý của tinh dầu tách chiết từ lá cây Quýt gai (A buxifolia) tại Việt
Nam Kết quả khảo sát một số hoạt tính sinh học cũng đã cho thấy sự ảnh hưởng đáng
kể lên quá trình chống đông máu của loại tinh dầu này từ đó có thể ứng dụng trong việcđiều trị các rối loạn gây ra bởi cục máu đông
Trang 7LỜI CẢM ƠN i
LỜI CAM ĐOAN ii
TÓM TẮT iii
MỤC LỤC v
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii
DANH MỤC CÁC HÌNH ix
DANH MỤC CÁC BẢNG x
CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1 Tinh dầu và ứng dụng 3
2.1.1 Giới thiệu chung về tinh dầu 3
2.1.2 Tinh dầu của các cây thuộc họ Rutaceae và ứng dụng của chúng 3
2.1.3 Tinh dầu Quýt gai (Atalatia buxifolia) 8
2.2 Chứng tắc nghẽn mạch máu và các phương pháp điều trị 8
2.2.1 Tắc nghẽn mạch máu và các bệnh lý liên quan 8
2.2.2 Tiêu huyết khối (Ly giải cục máu đông - Thrombolytic therapy) 9
2.2.3 Các loại thuốc đang được sử dụng trong việc điều trị tắc nghẽn mạch máu 11
2.2.4 Khả năng chống đông máu của một số loại thực vật 11
Trang 8CHƯƠNG 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 13
3.1 Địa điểm và thời gian thực hiện 13
3.2 Đối tượng nghiên cứu 13
3.3 Thiết bị, dụng cụ và hóa chất 13
3.3.1 Thiết bị và dụng cụ 13
3.3.2 Hóa chất 13
3.4 Phương pháp tiến hành 14
3.4.1 Xử lý nguyên liệu 14
3.4.2 Quy trình tách chiết tinh dầu từ lá Quýt gai (A buxifolia) 14
3.4.3 Hiệu suất thu hồi và các tính chất hóa lý của tinh dầu [41] 16
3.4.4 Xác định thành phần hóa học của tinh dầu 18
3.4.5 Họat tính kháng oxy hóa của tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) 19
3.4.6 Thí nghiệm xác định khả năng kích thích tan huyết khối (in vitro thrombolytic activity) 20
3.4.7 Thí nghiệm xác định khả năng ổn định màng tế bào hồng cầu (in vitro anti-hemolytic activity) 21
3.4.8 Thí nghiệm xác định khả năng ức chế sự biến tính albumin (Inhibition of albumin denaturation) 21
CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 23
4.1 Hiệu suất thu hồi và các chỉ tiêu hóa lý của tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) 23
4.2 Thành phần hóa học của tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) 24
Trang 94.5 Khả năng ổn định màng tế bào hồng cầu 29
4.6 Khả năng ức chế sự biến tính albumin 30
CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32
5.1 Kết luận 32
5.2 Kiến nghị 34
TÀI LIỆU THAM KHẢO 35
Tiếng Việt 35
Tiếng Anh 35
Trang 10DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
BSA : Bovine serum albumin
cs : Cộng sự
DMSO : Dimethyl sunfoxide
DPPH : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
EtOH : Ethanol
GC : Sắc ký khí - Gas chromatography
HPLC : Sắc ký lỏng hiệu năng cao - High-performance liquid chromatography
IC50 : Nồng độ tối thiểu ức chế 50% - half maximal inhibitory
concentrationKOH : Kali hydroxide
MIC : Nồng độ ức chế tối thiểu - Minimum inhibitory concentration
MS : Khối phổ - Mass Spectrometry
OD : Optical density
PBS : Phosphate buffer saline
RBC : Tế bào hồng cầu – Red blood cell
Trang 11Hình 3.1 Quy trình tách chiết tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) 14
Hình 3.2 Hệ thống chưng cất lôi cuốn hơi nước 15
Hình 4.1 Tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) 22
Trang 13CHƯƠNG 1 MỞ ĐẦU
Tinh dầu là một sản phẩm đặc biệt mà một số loài cây tạo ra để bảo vệ bản thântrước những tác động của môi trường như kháng nấm, kháng khuẩn, xua đuổi động vậtgây hại và thu hút những loài côn trùng có lợi cho việc phân tán phấn hoa và hạt giống
Từ xa xưa, con người đã tách chiết tinh dầu từ thực vật làm nguồn nguyên liệu để sảnxuất các sản phẩm với nhiều mục đích khác nhau như sản xuất nước hoa, làm hươngliệu trong thực phẩm, sản xuất các sản phẩm diệt khuẩn và côn trùng Ngoài ra, tinhdầu cũng được sử dụng nhiều trong lĩnh vực chăm sóc sức khỏe Một số loại tinh dầu
có khả năng giảm thiểu các triệu chứng của bệnh cảm và các bệnh về đường hô hấpcũng như có tác dụng an thần được tìm thấy rất nhiều trong các bài thuốc dân gian
Trong đó có thể kể đến Quýt gai (hay còn được gọi là Gai tầm xọong, Atalantia buxifolia) là một loại thực vật thuộc họ Rutaceae với hàm lượng tinh dầu trong cây khá
cao
Loài cây này được tìm thấy rất nhiều ở nước ta và cũng được sử dụng như mộtloại dược liệu trong điều trị các bệnh như ho hen, cảm sốt, thấp khớp và rắn cắn [1].Hiện nay, chưa có công bố khoa học cụ thể nào về thành phần hóa học và hoạt tính sinh
học của tinh dầu tách chiết từ Quýt gai (A buxifolia) tại Việt Nam Trên thế giới, một
số nghiên cứu sơ bộ về thành phần hóa học của tinh dầu Quýt gai (A buxifolia) đã
được thực hiện và kết quả chỉ ra rằng, thành phần chủ yếu trong loại tinh dầu này là cáchợp chất bay hơi thuộc các nhóm monoterpene, sesquiterpene, ester và một vài nhóm
chất khác [3, 4] Khả năng kháng khuẩn và kháng nấm của tinh dầu Quýt gai (A buxifolia) cũng đã được chứng minh bởi nghiên cứu của các tác giả tại Ai Cập [5] Điều đó cho thấy, tinh dầu Quýt gai (A buxifolia) là một đối tượng nghiên cứu tiềm
năng và việc thực hiện các khảo sát về hoạt tính sinh học cũng như tính chất hóa họccủa loại tinh dầu này ở Việt Nam thật sự cần thiết
Trang 14Từ những vấn đề trên, đề tài này đã chọn tinh dầu lá Quýt gai (A buxifolia) làm
đối tượng nghiên cứu với mục đích xác định thành phần hóa học và hoạt tính chốngđông máu của loại tinh dầu này tại Việt Nam nhằm cung cấp thêm những dữ kiện khoahọc và chứng minh giá trị y học của các bài thuốc dân gian từ nguồn dược liệu này.Hơn thế nữa, có thể ứng dụng kết quả của nghiên cứu này trong việc điều trị các bệnhliên quan đến quá trình đông máu trong cơ thể
Khóa luận “Xác định thành phần hóa học và khả năng chống đông máu của
tinh dầu lá Quýt gai (Atalantia buxifolia)” có các nhiệm vụ chính như sau:
Xác định các đặc tính hóa lý của tinh dầu tách chiết từ lá cây Quýt gai
Trang 15CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.1 Tinh dầu và ứng dụng
2.1.1 Giới thiệu chung về tinh dầu
Tinh dầu là hỗn hợp nhiều chất dễ bay hơi có nguồn gốc phần lớn từ thực vật, cómùi đặc trưng, thường tồn tại dưới dạng lỏng ở nhiệt độ phòng, bay hơi hoàn toàn màkhông bị phân hủy [2]
Trong thực vật, tinh dầu được tạo ra và tích lũy trong các mô Hình dạng của các
mô này thay đổi tùy theo vị trí của chúng ở trong cây, tinh dầu ở các bộ phận khác nhautrên cùng một cây có thể giống hoặc khác nhau về thành phần hóa học và hàm lượngtinh dầu Hàm lượng và chất lượng của tinh dầu cũng phụ thuộc vào các yếu tố khácnhư giống cây, điều kiện thổ nhưỡng, khí hậu, thời điểm thu hái [2]
Trong tự nhiên, tinh dầu có vai trò quan trọng trong việc bảo vệ thực vật nhưkháng khuẩn, kháng nấm, chống côn trùng… Các loài cây có tinh dầu có khả năng thuhút một số loài côn trùng có lợi cho việc phân tán phấn hoa hoặc hạt giống Trongngành công nghiệp sản xuất nước hoa và mỹ phẩm, tinh dầu là nguyên liệu quan trọng
để tạo mùi hương đặc trưng cho sản phẩm Do có đặc tính kháng khuẩn và kháng nấmnên tinh dầu cũng được ứng dụng để thay thế cho các sản phẩm hóa học nhằm giảmthiểu những tác dụng không mong muốn mà những loại hóa chất này gây ra cho conngười và môi trường [2] Bên cạnh đó một số loại tinh dầu có hoạt tính sinh học caocũng được sử dụng để bảo quản thực phẩm, giảm đau, an thần, chống viêm…[6]
2.1.2 Tinh dầu của các cây thuộc họ Rutaceae và ứng dụng của chúng.
Họ Rutaceae là một họ thực vật bao gồm tổng cộng 1600 loài Điểm chung củacác loài cây thuộc họ này là có hoa được chia thành 4 hoặc 5 phần và có mùi thơm rấtmạnh [7]
Các loài thuộc chi Cam chanh (Citrus) là những loài thực vật được biết đến
nhiều nhất và nổi bật nhất về giá trị thương mại trong họ Rutaceae Sản phẩm chính
Trang 16của các loài cây này là trái cây tươi và nước giải khát Hơn thế nữa, chúng cũng lànguồn nguyên liệu cho ngành công nghiệp sản xuất thực phẩm, dược phẩm và thức ăngia súc [8] Và trong đó, tinh dầu chiết xuất từ Cam chanh là một sản phẩm tiêu biểuđược sản xuất từ hàng ngàn năm trước và được sử dụng rất phổ biến cho đến ngày nay
2.1.2.1 Tính chất hóa lý
Tinh dầu của các loài thực vật thuộc họ Rutaceae nói chung đều là chất lỏng,trong suốt, dễ bay hơi, không màu hoặc ánh vàng (tùy loài thực vật và bộ phận nguyênliệu tách chiết tinh dầu), mùi thơm mạnh [6] Đa số tinh dầu thuộc họ này không tantrong nước nhưng tan trong dung môi hữu cơ, tỉ trọng so với nước nhỏ hơn 1 Các chỉ
số như chỉ số acid, chỉ số xà phòng hóa và chỉ số ester của tinh dầu họ Rutaceae đều cógiá trị khá thấp so với các loại tinh dầu khác [9]
2.1.2.2 Thành phần hóa học
Tinh dầu của các loài thuộc họ Rutaceae nói chung và tinh dầu Cam chanh nóiriêng đều có thể được tách chiết từ vỏ quả, hoa, chồi non hoặc lá Tùy vào bộ phậnđược thu nhận làm nguyên liệu mà loại tinh dầu sẽ có thành phần hóa học khác nhau.Các loại tinh dầu này được chia thành 3 nhóm chính
a Tinh dầu vỏ quảChất lượng và hiệu suất thu hồi của loại tinh dầu này phụ thuộc vào nhiều yếu tốnhư bản chất tự nhiên của giống, nguồn gốc, đặc tính di truyền, điều kiện khí hậu, thổnhưỡng và phương pháp ly trích tinh dầu Hàm lượng tinh dầu trong vỏ quả của cácloài Cam chanh nằm trong khoảng 0.5 – 5.0 % (w/v) [6]
Tinh dầu chiết xuất từ vỏ Cam chanh là hỗn hợp của nhiều hợp chất hóa họckhác Các hợp chất này thường được chia thành hai thành phần: các hợp chất dễ bayhơi chiếm khoảng 85 – 99 % hàm lượng của nhiều loại tinh dầu Cam chanh và các hợpchất không bay hơi bao gồm các acid béo, sterols, carotenoids, sáp, coumarins vàpolymethoxylated flavonoids (2 – 6 %) có hàm lượng nẳm trong khoảng 1 – 15 % [10].Các hợp chất dễ bay hơi là hỗn hợp của các monoterpene, hydrocarbons sesquiterpene
Trang 17và các dẫn xuất của chúng bao gồm các aldehyde (citral), cetone, acid, alcohol(linalool) và ester [11, 12] Các thành phần dễ bay hơi trong tinh dầu thường được phântích bằng phương pháp sắc ký khí (Gas chromatography – GC), còn phương pháp sắc
ký lỏng như sắc ký bản mỏng (Thin-layer chromatography – TLC) hoặc sắc ký lỏnghiệu năng cao (High-performance liquid chromatography – HPLC) được sử dụng rộngrãi trong các nghiên cứu về các hợp chất không bay hơi trong thành phần tinh dầu Cácchất này phần lớn là các hydrocarbon dị vòng như coumarins, furanocoumarins vàpolymethoxylated
Hợp chất hữu cơ chính trong tinh dầu vỏ Cam chanh là limonene Hàm lượngcủa limonene trong tinh dầu của các cây thuộc chi Cam chanh thường nằm trongkhoảng 32 – 98 % Cụ thể, hàm lượng limonene trong tinh dầu vỏ cam dao động trongkhoảng 68 – 98 %, 45 – 76 % trong tinh dầu chanh vàng và 32 – 45 % trong tinh dầucam bergamot [13] Một dẫn xuất của limonene là linalool cũng là một thành phần đặctrưng trong tinh dầu Cam chanh với hàm lượng trong cam ngọt, chanh vàng và cambergamot lần lượt là 0,018, 0,015 và 10,231 % [14]
b Tinh dầu Neroli
Tinh dầu Neroli được thu nhận từ hoa của loài cam đắng (Citrus aurantium L.)
và các loài hoa khác trong chi Citrus Hiệu suất tách chiết và chất lượng của loại tinh
dầu này cũng phụ thuộc vào các yếu tố ngoại cảnh như thời điểm thu hoạch nguyênliệu, điều kiện vận chuyển, lưu trữ nguyên liệu và phương pháp tách chiết tinh dầu
Thành phần chính trong tinh dầu được tách chiết từ hoa của các loài trong chi Citrus là
linalool với hàm lượng lên đến 40 % (w/v) [15] Hợp chất trong các nhóm terpene,alcohol và acetate cũng được tìm thấy trong thành phần của tinh dầu Neroli [6]
c Tinh dầu PetitgrainThuật ngữ “Petitgrain” ban đầu được sử dụng để mô tả quả non của loài camđắng và dùng làm tên của loại tinh dầu được thu nhận từ bộ phận này Về sau, thuật
Trang 18a Thực phẩmTinh dầu thường được sử dụng như là một loại phụ gia để tạo hương vị cho thựcphẩm Hơn thế nữa, một số loại tinh dầu còn có thể được sử dụng để bảo quản thựcphẩm nhờ khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của chúng [6].
Vào năm 2012, Settanni và cs [16] đã khảo sát khả năng ức chế sự phát triển của một vài loại tinh dầu được tách chiết từ các loại cây thuộc chi Citrus (bưởi, cam, quất, quýt và chanh) trên các dòng vi khuẩn như Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica Kết quả cho thấy, hầu hết các loại tinh dầu trên đều có khả năng kháng lại các dòng vi khuẩn Gram dương tốt hơn Salmonella.
Khả năng kháng oxy hóa của tinh dầu từ các loài Cam chanh cũng được nghiêncứu để ứng dụng trong nước giải khát nhằm giảm thiểu sự biến đổi màu và tăng mùi vị
cho sản phẩm Vào năm 2011, Frassinetti và cs [17] đã công bố kết quả nghiên cứu khả năng kháng oxy hóa của 4 tinh dầu từ các loài cây Citrus aurantium, Citrus sinensis, Cirus limon và Citrus reticulata Tác giả đã kết luận rằng, các loại tinh dầu này đều có khả năng kháng oxy hóa rất tốt, trong đó tinh dầu của Citrus limon có khả năng kháng
đạt tới 70 %
Trang 19Vào năm 2013, Dias và cs [18] đã nghiên cứu phát triển một loại màng bọc thực
phẩm từ polyethylene được thấm thêm tinh dầu được tách chiết từ vỏ chanh Loạimàng bọc này có khả năng kéo dài thời gian bảo quản nhưng không làm ảnh hưởng đếnchất lượng và cảm quan của sản phẩm
b Dược phẩmTheo các tài liệu về hóa học, y học và dược lý, tinh dầu đem lại nhiều lợi íchquan trọng có thể ứng dụng trong điều trị bệnh và chăm sóc sức khỏe Một số nghiêncứu chỉ ra rằng, một số thành phần trong tinh dầu, đặc biệt là các monoterpen, có khảnăng chống lại tế bào ung thư [19]
Trong số các loài thực vật thuộc chi Rutaceae, C aurantium thường được sử
dụng để điều trị một số bệnh như thấp khớp, rối loạn tim mạch [20], viêm dạ dày và rối
loạn tiêu hóa [21] Vào năm 2009, Moraes và cs [21] đã khảo sát ảnh hưởng của tinh dầu C aurantium và limonene (hợp chất chính tách ra từ loại tinh dầu đó) trên tế bào
niêm mạc dạ dày động vật với các tác nhân thường gây loét dạ dày ở người Kết quảcho thấy, tinh dầu và limonene liên quan trực tiếp đến sự gia tăng sản xuất chất nhầy
trong dạ dày Từ đó, tinh dầu và limonene chiết xuất từ C aurantium có thể được ứng
dụng như là một chất bổ trợ tiềm năng trong các loại thuốc điều trị chứng viêm loét dạdày
Tinh dầu chanh vàng (C limon) thường được sử dụng trong điều trị trầm cảm
[22] Chúng cũng có khả năng kích thích sự sáng tạo và cải thiện cảm xúc theo hướng
tích cực [23] Theo nghiên cứu được thực hiện bởi Tsuchiya và cs [24], tinh dầu chanh
có khả năng giảm các hành vi căng thẳng và các triệu chứng rối loạn giấc ngủ trênchuột
Gần đây, nhiều nghiên cứu về khả năng kháng khuẩn và kháng nấm của tinh dầu
thực vật họ Rutaceae đã được thực hiện Cụ thể, Sanguinetti và cs [25] đã thử nghiệm
khả năng kháng của tinh dầu tách chiết từ cam begamot lên các loại nấm gây bệnh trên
da người như Trichophyton, Microsporum và Epidermophyton Kết quả thí nghiệm cho
Trang 20thấy loại tinh dầu này có ảnh hưởng đáng kể đến sự phát triển của các loại nấm trên và
có thể được ứng dụng trong sản xuất các loại thuốc trị bệnh da liễu Tinh dầu Nerolicũng được nghiên cứu và chứng minh là có ảnh hưởng tích cực trong việc điều trị cácbệnh viêm nhiễm do vi khuẩn và nấm gây ra, đặc biệt là các bệnh về tiêu hóa và hô hấp[10]
2.1.3 Tinh dầu Quýt gai (Atalatia buxifolia)
Quýt gai (tên khoa học là Atalantia buxifolia) là một loài cây bụi thuộc họ
Rutaceae mọc hoang ở khắp Miền Bắc và Miền Trung nước ta [1] Các nghiên cứu sơ
bộ về thành phần hóa học trong A buxifolia chỉ ra rằng loài cây này có rất nhiều tinh
dầu [1] Tuy nhiên, có rất ít tài liệu về thành phần hóa học của nó
Vào năm 1965, Scora [3] đã phân tích bằng phương pháp sắc ký khí – lỏng (Gas
- liquid chromatography) và xác định được 24 thành phần hợp chất có trong tinh dầu lá
A buxifolia Vào năm 1994, tác giả trên cùng cộng sự đã công bố báo cáo về thành phần tinh dầu lá A buxifolia bao gồm 73 thành phần, chiếm tỉ lệ nhiều nhất là các
sesquiterpene, monoterpene limonene chiếm khoảng 18,9% [4] Kết quả này cũng
tương tự như nghiên cứu mới đây của Nour và cs [5] Ngoài ra, trong nghiên cứu của
nhóm tác giả trên cũng cho thấy ảnh hưởng của yếu tố khí hậu đến sự thay đổi tỉ lệ của
các thành phần hóa học trong tinh dầu A buxifolia
Cũng trong cùng nghiên cứu trên, Nour và cs [5] đã khảo sát hoạt tính kháng khuẩn và nấm của mẫu tinh dầu lá A buxifolia trên 4 loại vi khuẩn gram dương, 2 loại vi khuẩn gram âm và nấm Candida albicans Kết quả cho thấy loại tinh dầu này có khả năng kháng khuẩn và kháng nấm
đáng kể với nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum inhibitory concentration – MIC) vàokhoảng 1- 4 µg/mL
Trang 212.2 Chứng tắc nghẽn mạch máu và các phương pháp điều trị
2.2.1 Tắc nghẽn mạch máu và các bệnh lý liên quan
Sự hình thành cục máu đông trong hệ thống tuần hoàn chính là một cơ chế tựsửa chữa của cơ thể khi mạch máu bị tổn thương [26] Tuy nhiên, nếu cục máu đônghình thành khi không cần thiết có thể dẫn tới một số bệnh lý nghiêm trọng như tắcnghẽn mạch máu, thiếu máu cục bộ, đau tim, đột quỵ [27]
Tắc nghẽn mạch máu xảy ra khi cục máu đông hình thành bên trong mạch máuhoặc động mạch và ngăn chặn một phần hay toàn bộ dòng máu cung cấp cho cơ thểdẫn đến nhiều hậu quả nghiêm trọng Ví dụ như tắc nghẽn mạch máu phổi xảy ra khimột hoặc nhiều động mạch phổi bị tắc do cục máu đông, gây khó thở, ho ra máu và tứcngực [28] Cục máu đông có thể ngăn dòng máu hoặc oxy đến các mô gây thiếu máucục bộ Hiện tượng thiếu máu cục bộ ở tim xảy ra khi dòng máu tới các cơ tim bị hạnchế một phần hoặc hoàn toàn, dẫn đến một loạt các triệu chứng bệnh lý nguy hiểm nhưkhó thở, bất tỉnh, đau thắt ngực, nhồi máu cơ tim, rối loạn nhịp tim, thậm chí là tử vong[29] Cục máu đông cũng có thể làm gián đoạn dòng máu đến não gây đột quỵ [30].Nguyên nhân cụ thể của bệnh đột quỵ là do sự tắc nghẽn mạch máu cung cấp máu chonão hoặc cục máu đông hình thành ở vị trí khác trong cơ thể di chuyển đến một độngmạch nhỏ trong não [31]
2.2.2 Tiêu huyết khối (Ly giải cục máu đông - Thrombolytic therapy)
Liệu pháp tiêu huyết khối là một phương pháp điều trị loại bỏ các vấn đề phátsinh do cục máu đông (huyết khối) để phục hồi chức năng cho khu vực cơ thể bị ảnhhưởng [32] Phương pháp này loại bỏ hoàn toàn cục máu đông và giảm tỉ lệ tử vongcho bệnh nhân bị tắc nghẽn mạch máu xuống còn 5% trong một năm [33]
Liệu pháp tiêu huyết khối thường được sử dụng để điều trị một số bệnh liênquan như:
- Tắc nghẽn tĩnh mạch
- Thuyên tắc động mạch phổi
- Nhồi máu cơ tim
Trang 22- Tắc nghẽn động mạch
- Đột quỵ do thiếu máu cục bộ cấp tính
Các loại thuốc được sử dụng trong liệu pháp tiêu huyết khối đều làm tan cụcmáu đông bằng cách xúc tác sự hình thành serine protease plasmin [31]
Thrombin xúc tác fibrinogen thành fibrin (thành phần của cục máu đông) Khimạch máu đã liền lại, các sợi fibrin sẽ bị phân hủy bởi plasmin đã được hoạt hóa từplasminogen Các thuốc tiêu huyết khối đóng vai trò làm tác nhân xúc tác plasminogenthành plasmin [34]
Plasminogen activator
Streptokinase (SK)Tissue plasminogen activator (t-PA)Urokinase (UK)
Hình 2.1 Cơ chế tiêu hủy cục máu đông (Ali và cs, 2014)
Trang 232.2.3 Các loại thuốc đang được sử dụng trong việc điều trị tắc nghẽn mạch máu
2.2.3.1 Streptokinase
Trong các loại thuốc tiêu huyết khối được sử dụng hiện nay, streptokinase được
sừ dụng phổ biến nhất và nằm trong danh sách các thuốc thiết yếu của WHO [35].Streptokinase là một loại protein có cấu trúc bao gồm các polypeptide sợi đơn có khảnăng kết hợp với plasminogen Phức hợp emzyme này chuyển plasminogen ở đạngkhông hoạt động thành plasmin phân giải các sợi fibrin trong cục máu đông
2.2.3.2 Tissue plasminogen activator (tPA)
tPA là một loại protein gắn với fibrin trên bề mặt của cục máu đông kích hoạtplasminogen liên kết fibrin Plasmin được tách khỏi phức hợp plasminogen liên kết vớifibrin Các phân tử fibrin bị phá vỡ bởi plasmin và cục máu đông tan [36] tPA thươngmại hiện nay được sản xuất bằng công nghệ DNA tái tổ hợp [37]
2.2.3.3 Urokinase
Urokinase là một loại enzyme được tổng hợp ở thận trực tiếp chuyểnplasminogen thành plasmin [26] Đây là loại thuốc đang được sử dụng trong việc điềutrị đột quy
2.2.4 Khả năng chống đông máu của một số loại thực vật
Các loại thuốc đặc trị đang được sử dụng hiện nay đều có hiệu quả chữa trị khácao Tuy nhiên, chúng vẫn có thể gây ra những biến chứng liên quan đến chảy máu chobệnh nhân [34] Để khắc phục tình trạng này, các nghiên cứu để tìm ra các loại thuốc
hỗ trợ và thay thế vẫn đang được thực hiện Xu hướng nghiên cứu hiện nay là sử dụngcác sản phẩm tách chiết từ thực vật nhằm thay thế các loại thuốc hiện tại Một sốnghiên cứu về khả năng làm tan cuc máu đông của một số loại thực vật có thể được kểđến như sau:
Vào năm 2014, Ramjan và cs [34] đã khảo sát khả năng kích thích tan huyết khối của ba loài thực vật được sử dụng làm dược liệu ở Bangladesh là Averrhoa
Trang 24bilimbi, Clerodendrum viscosum, Drynaria quercifolia và kết luận rằng chúng đều có khả năng làm tan 28-35 % cục máu đông Cũng vào thời gian này, Hussain và cs [38] cũng công bố kết quả nghiên cứu trên dịch chiết từ rễ của các loại cây Acacia nilotica, Lagerstroemia speciosa, Azadirachta indica, Justicia adhatoda cho khả năng
kích thích tiêu huyết khối vào khoảng 15,10 – 21,26 %
Năm 2015, Imran và cs [39] đã báo cáo về khả năng phân giải cục máu đông lên đến 36,32 % của dịch chiết methanol từ lá cây Mesua ferrea.
Đến năm 2017, Vinodhini và cs [40] đã khảo sát hoạt tính cùa tinh dầu vỏ quả Citrus sinensis và phát hiện rằng loại tinh dầu này có khả năng làm tan đến 90% cục
máu đông
2.3