khảo sát hoạt tính kháng các loài nấm gây hại trong nuôi trông nấm rơm, kháng khuẩn của dịch chiết cây cỏ lào (chromolaena odorata)

1 CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Việc sử dụng thực vật sản phẩm thực vật cho mục đích y học thói quen lâu đời trở nên bật toàn cầu Mặc dù số chế phẩm công thức dược phẩm có sẵn để chăm sóc chữa trị vết thương, cần tìm kiếm phương pháp điều trị hiệu quả, số cơng thức gây tác dụng phụ thiếu hiệu Các hợp chất từ nhiều loại thực vật cho thấy chúng có tác dụng tích cực giai đoạn khác trình chữa lành vết thương thông qua chế khác Một số loại thuốc thảo dược cho thấy hiệu rõ rệt việc chữa trị vết thương hợp chất tự nhiên khác xác minh tiềm chữa lành vết thương coi thuốc tiềm có nguồn gốc tự nhiên Chromolaena odorata (L.) R.M King H Robinson coi loại cỏ dại nhiệt đới Tuy nhiên, dùng để điều trị vết thương, bỏng nhiễm trùng da Hơn nữa, chứng minh có tính chất chống ung thư, chống đái tháo đường, chống độc gan, chống viêm, kháng khuẩn chống oxy Ở số nơi giới Chromolaena odorata loại thuốc truyền thống sử dụng để điều trị bệnh khác Bên cạnh nước ta nước nơng nghiệp ngành trồng nấm chiếm phần không nhỏ đặc biệt nuôi trồng nấm rơm Nhưng q trình ni trồng xuất số loài nấm gây hại làm ảnh hưởng đến suất chất lượng nấm đặt vấn đề lớn tiêu diệt lồi nấm gây hại mà khơng ảnh hưởng gây hại đến nấm rơm Trong cỏ lào có chất có hoạt tính kháng nấm nên ứng dụng thử vào việc kháng lồi nấm gây hại ni trồng nấm rơm Để hiểu rõ phần tính kháng khuẩn kháng nấm loài em xin thực đề tài khảo sát hoạt tính kháng lồi nấm gây hại ni trơng nấm rơm, kháng khuẩn dịch chiết cỏ lào (Chromolaena odorata) 1.2 Mục tiêu đề tài Mục tiêu đề tài phân lập số loài nấm gây hại nuôi trồng nấm rơm dùng dịch chiết cỏ lào(Chromolaena odorata) khảo sát tính kháng khuẩn, kháng nấm gây hại Ngồi khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình tách chiết dịch số thành phần có cỏ lào 1.3 Yêu cầu - Phân lập số loài nấm gây hại nuôi trồng nấm rơm Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình tách dịch chiết từ cỏ lào Khảo sát đối kháng nấm rơm với số loài nấm gây hại nuôi - trồng nấm rơm Khảo sát khả kháng số loại nấm gây hại nuôi trồng nấm rơm - dịch chiết cỏ lào Khảo sát khả kháng số loài vi khuẩn dịch chiết cỏ lào CHƯƠNG TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu cỏ lào(Chromolaena odorata) 2.1.1 Vị trí phân loại thực vật Phân loại khoa học Giới: Plantae (Thực vật) Ngành: Spermatophyta( Thực vật có hạt) Lớp: Dicotyledonae (Thực vật hai mầm) Bộ: Asterales (Cúc) Họ: Asteraceae (Cúc) Chi: Chromolaena (Thực vật có hoa) Hình 2.1 Cây cỏ lào (Chromolaena odorata) (Nguồn: www.vietnammoi.vn) Loài: C odorata Tên khoa học: Chromolaena odorata (L.) RM King & H Rob Tên thường gọi: Cỏ Nhật, Cỏ Việt Minh, Cây Cộng sản, phân xanh, bớp bớp 2.1.2 Nguồn gốc phân bố Cây cỏ lào thực vật nhiệt đới có nguồn gốc từ vùng Caribê Bắc Mỹ, loài phát tán qua vùng nhiệt đới Châu Á, Tây Phi phần Úc Ở Việt Nam cỏ lào mọc khắp vùng trung du, đồng bằng, vùng đồi núi thấp 2.1.3 Đặc điểm hình thái [14] Là lồi mọc thành bụi, có nhiều thân chính, thân có nhiều nhánh, thân có lơng tơ, cao từ 1,5 m đến m trưởng thành Các cánh già có màu nâu hóa gỗ gốc cành Chồi có màu xanh mọng nước Rễ dạng chùm mọc sâu khoảng 20 – 30 cm Lá mềm mỏng hình tam giác đến hình trứng, đầu nhọn, mọc đối xứng mép có cưa, non thường chưa hình thành dạng cưa, bề mặt có lơng nhung Trên có ba gân Phiến dài từ – 12 cm, rộng -6 cm Hoa hình ống mọc thành cụm từ 20 – 60 hoa chùm, hoa có màu hồng nhạt trắng, tràng hoa có màu xanh nhạt, nhị hoa mọc dài vươn khỏi tràng hoa Hạt màu nâu xám đến đen nhỏ năm cạnh có lơng 2.1.4 Cơng dụng cỏ lào [14], [15] Trong cỏ lào chứa 2,65% đạm; 0,5% photpho 2,48% kali, coumarine, alkaloit, anthraquinone, glucoxide, saponin chủ yếu tinh dầu flavonoid Toàn từ rễ, thân, lá, hoa sử dụng chủ yếu Cây cỏ lào có chứa chất kháng sinh, với tác dụng chống viêm kháng khuẩn, làm ức chế vi khuẩn gây mủ vết thương hở đặc biệt có khả cầm máu nhanh Công dụng chủ yếu: Chữa lỵ trực khuẩn: 150 g cỏ lào tươi nắm to rửa sạch, cắt nhỏ, hãm với nước nóng 800C (nước sơi để phút trời lạnh, 10 phút trời nóng) với 500 ml nước, giữ ấm bên đảm bảo 80 0C sau 15 phút lại đun phút Rút nước, vắt kiệt nước bã, lọc lấy nước thuốc 150 ml Thêm 30 – 50 g đường, đun sôi cho tan Người lớn uống lần 50 ml, lần/ngày, liên tục đến khỏi Nếu lỏng nước cần cho uống nước cháo loãng (gạo + khoai lang củ nhỏ) pha muối ngày 500 – 600 ml nước cháo loãng Chữa lỵ trực trùng ỉa chảy: dùng 12 g cỏ lào sắc lấy nước, pha thêm đường, chia lần uống ngày Chữa vết thương mắt xước loét giác mạc: cỏ lào non 50 g rửa thật sạch, giã nát cối chày Dùng miếng gạc chia thuốc gói thành gói Đặt vào bát sạch, cho vào nồi áp suất hấp (15 phút kể từ lúc thấy xì hơi) Nếu khơng có nồi áp suất hấp cách thuỷ 30 phút (kể từ lúc nước sôi đến lúc ngừng đun) Mắt nạn nhân rửa nước muối 2% đun sôi để nguội, đắp gói thuốc băng lại để nạn nhân nằm ngửa 12 thay thuốc lần Nếu bệnh nhẹ 24 khỏi Phòng đỉa cắn: hái phận cỏ lào giã vắt lấy nước bôi lên chân trước lần xuống nước Chữa máu chảy không ngừng bị đỉa, vắt cắn: lấy cỏ lào vò nát đắp vào vết bị cắn Chữa viêm dày: kết hợp loại với tỷ lệ sau: khôi 30 g, cỏ lào 20 g, cẩm 20 g, tam thất nam g sắc nước uống hàng ngày Cách dùng kinh nghiệm quý báu đồng bào dân tộc vùng cao Tây Bắc Chữa viêm đại tràng: cỏ lào khô 20 g, khổ sâm 10 g, bạch truật 25 g sắc nước uống dùng hàng ngày Hỗ trợ điều trị vết thương phần mềm, bầm tím tai nạn: lấy cỏ lào vò nát đắp vào vết thương ngày lần – ngày giúp giảm đau, chống sưng, giúp vết thương nhanh lành tốt hạn chế viêm nhiễm Hỗ trợ điều trị bong gân : cỏ lào rửa giã nát, bó vào chỗ bị bong gân Chữa đau nhức xương: dùng cỏ lào g tươi, dây đau xương 12 g, vàng, sắc nước uống ngày Ngồi cơng dụng chữa bệnh cỏ lào sử dụng dùng làm phân xanh có tác dụng diệt cỏ làm giảm tuyến trùng đất bỏ vò nát xuống ruộng 1-2 ngày để trừ ấu trùng ký sinh trùng (thể xoắn ốc có móc câu đầu) phòng xuống ruộng khỏi bị lây 2.1.5 Các nghiên cứu liên quan đến cỏ lào 2.1.5.1 Các nghiên cứu nước Năm 2001, Nguyễn Kim Phi Phụng Nguyễn Ngọc Sương (Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh) nghiên cứu cách tách chiết cô lập hợp chất hữu từ cỏ lào xác định hợp chất: ceryl alcohol, β-amyrine, βsitosterol, odoratin, Năm 2004, Lê Văn Hạc, Nguyễn Thị Thanh Hoài, Nguyễn Xuân Dũng nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu cỏ lào Nghệ An Hà Tĩnh phát 60 chất định danh khoảng 37 chất như: gecmacren, β-caryophyllene, geijerence, Năm 2005, Nguyễn Đức Cường, Nguyễn Minh Chính đánh giá độ ổn định xây dựng tiêu chuẩn sở cho thuốc mỡ Eupolin từ cao cỏ lào kết điều chế thuốc mỡ Năm 2006, Ngô Quốc Luân , Lâm Thanh Phong Nguyễn Ngọc Hạnh thực nghiên cứu số kết nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu flavonoid cỏ lào cho kết cao chiết có khả kháng Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtillis, Staphylococcus aureus, Aspergillus niger, Fusarium oxyporum, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae Năm 2010, Đào Thị Vân Trang, Đào Hùng Cường khảo sát điều kiện thích hợp để chiết flavonoid từ cỏ lào với tỉ lệ nước với ethanol 1:1, tỉ lệ nguyên liệu với dung môi 1:25, 850C 2.1.5.2 Các nghiên cứu giới Năm 2000, Taiwo Oludare B cộng cơng bố hoạt tính kháng viêm, hạ sốt chống co thắt trơn cao chiết MeOH cỏ lào loài chuột với liều lượng 50 – 200 mg/kg có hiệu Năm 2001, Bouda H cộng nghiên cứu ảnh hưởng tinh dầu từ cỏ lào, cỏ cứt lợn, trâm tỷ lệ chết mọt thóc Kết tinh dầu cỏ lào làm chết mọt thóc với tỷ lệ 6,78% Năm 2002, Zhang Maoxin nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính kháng nấm trùng tinh dầu cỏ lào Kết tinh dầu cỏ lào kháng số loài: Pyricularia grisea, Phytophthora nicotianae, Fusarium axysporum Năm 2004, Apichart Suksamrarn cộng công bố công trình nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn gây bệnh lao phổi độc tính tế bào hợp chất flavonoid từ hoa cỏ lào Năm 2005, Owoyele V.B., Adediji J.O Soladoyele A.O khảo sát hoạt tính kháng viêm cao chiết cỏ lào chuột Cho thấy với liều lượng 200mg/kg có khả kháng nấm đến 80,5% 2.2 Giới thiệu chủng nấm gây hại nuôi trồng nấm rơm 2.2.1 Coprinus ephemeroides [17] Giới: Fungi Ngành: Basidiomycota Lớp: Agaricomycetes Bộ: Agaricales Họ: Psathyrellaceae Chi: Coprinus Lồi: Coprinus ephemeroides Hình 2.2 Nấm Coprinus ephemeroides Mũ nấm nhỏ, non hình gần cầu, già mũ nấm bung dù trải phẳng cuối cuộn vào phía mũ nấm Đỉnh mũ nấm màu nâu vàng, xung quanh phủ dày đặc hạt màu trắng hạt chuyển sang màu nâu nhạt nấm già Giai đoạn đầu mũ nấm có màu trắng, sau chuyển sang màu nâu nhạt cuối màu đen Kích thước mũ nấm 0,4 – 0,6cm đường kính Hệ sợi phiến nấm có thành tương đối dày, suốt, khơng có vách ngăn ngang Đường kính 3,0 – 3,3µm Cuống nấm màu trắng đục, dễ nát, rỗng giữa, có lơng màu trắng mịn, cao 2,8 – 3,0 cm Có vòng nấm vị trí cuống nấm Hệ sợi cuống nấm có thành mỏng, có vách ngăn ngang Đường kính 6,6 – 9,9 µm Phiến nấm tự do, non màu trắng, già lại có màu đen tạo thành đường dọc màu đen mặt mũ nấm Hệ sợi phiến nấm có thành tương đối dày,khơng có vách ngăn ngang Đường kính 3,0 – 3,3 µm Bào tử đa số hình cầu, dạng elip, màng dày, màu nâu tối 2.2.2 Lentinus squarrosulus [18] Giới: Fungi Ngành: Basidiomycota Lớp: Agaricomycetes Bộ: Polyporales Họ: Polyporaceae Chi: Lentinus Lồi: Lentinus squarrosulus Hình 2.3 Nấm Lentinus squarrosulus Lentinus squarrosulus loài nấm ăn thuộc nhóm nấm hoại sinh thối trắng thường tìm thấy vùng có khí hậu nhiệt đới Sợi nấm phát triển tốt gelatin sucrose khoai tây với độ pH 6,5 − 7,0 nuôi cấy điều kiện sáng tối xen kẽ khoảng 31 – 32 0C Lồi có số đặc điểm tăng trưởng sợi nấm nhanh chóng, có tiềm sử dụng làm thực phẩm, thực phẩm chức dược phẩm Theo Nghiên cứu cho thấy Lentinus squarrosulus chứa hợp chất chống oxy hóa mạnh Trong nấm chứa hàm lượng protein cao (57,6%) tổng chất béo thấp (0,5%) giàu magiê (0,4%), kali (3,8%) vitamin B3 (0,2%) 2.2.3 Paecilomyces formosus [16] Giới: Fungi Ngành: Ascomycota Lớp: Sordariomycetes Bộ: Hypocreales Họ: Clavicipitaceae Chi: Paecilomyces Lồi: Paecilomyces formosus Hình 2.4 Nấm Paecilomyces formosus Paecilomyces formosus lồi nấm kí sinh hội diện phổ biến tự nhiên vùng nhiệt đới ôn đới Các lồi Paecilomyces dễ dàng tìm thấy đất tơi xốp, xác bã hữu cơ, thức ăn, tàn dư thực vật sản phẩm thực phẩm Loài thường kí sinh lồi trùng Ban đầu tơ nấm màu trắng xong dần chuyển sang màu vàng nâu 2.2.4 Vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans [3], [20] Giới: Bacteria Ngành: Firmicutes Lớp: Bacilli Bộ: Lactobacillales Họ: Streptococcaceae Chi: Streptococcus Lồi: Streptococcus mutans 2.2.2.1 Đặc điểm hình thái Hình 2.5 Vi khuẩn Streptococcus mutans (nguồn: http://www.khoa/benh-sau-rang/1628-vikhuan-nao-gay-benh-sau-rang.html) 10 Streptococcus mutans giống cầu khuẩn Gram dương Trái ngược với phân chia tụ cầu theo nhiều hướng khác tạo hình thể chùm nho tế bào đường kính khoảng 0,6 - 0,8 μm, xếp liên tiếp với thành chuỗi, dài ngắn khác đứng với thành đôi đám Liên cầu, lơng, khơng di động, khơng sinh nha bào, bắt màu Gram (+) 2.2.2.2 Đặc tính sinh hóa Liên cầu, hiếu khí, kỵ khí tùy tiện thường đòi hỏi mơi trường ni cấy có nhiều chất dinh dưỡng máu, huyết thanh, đường Vi khuẩn phát triển tốt điều kiện khí trường có thêm - 10% CO Nhiệt độ ni cấy thích hợp 37 0C, số phát triển 10 - 400C liên cầu đường ruột Khơng có enzym catalase, khơng bị ly giải muối mật, chuyển hóa nhanh đường thành acid lactic acid hữu khác 2.2.2.3 Độc tố 2.2.2.4 Khả gây bệnh 29 4.3.2 Phân lập nấm Paecilomyces formosus Ta thực bước lấy mẫu, đồng nhất, pha loãng, cấy phân lập giống mục 3.3.5.1 đem định danh theo phương pháp ITS thu lồi Paecilomyces formosus Hình 4.10 Nấm Paecilomyces formosus 4.3.3 Phân lập nấm Lentinus squarrosulus Ta thực bước lấy mẫu, đồng nhất, pha loãng, cấy phân lập giống mục 3.3.5.1 đem định danh theo phương pháp ITS thu lồi Lentinus squarrosulus Hình 4.11 Nấm Lentinus squarrosulus 4.4 Kết kháng nấm rơm loại nấm gây hại 4.4.1 Nấm dại Coprinus ephemeroides Hình 4.12 Sự đối kháng nấm rơm nấm Coprinus ephemeroides A: Nấm rơmB: Nấm rơm nấm Coprinus ephemeroides 30 A B Trong môi trường với thời gian điều kiện nuôi cấy nấm rơm phát triển độc lập nhiễm nấm Coprinus ephemeroides tơ nấm phát triển hết bề mặt đĩa thạch khơng có cạnh tranh mặt chất dinh dưỡng không gian sống Còn điều kiện mà có xuất Coprinus ephemeroides kìm hãm phát triển nấm rơm cách cạnh tranh chất dinh dưỡng môi trường sống làm cho nấm rơm phát triển yếu lồi nấm phát triển mạnh nấm rơm lấn át nấm rơm mặt khơng gian Nếu có xuất lồi nấm qua trình ni trồng nấm rơm làm giảm suất nấm rơm 4.4.2 Nấm mốc Paecilomyces formosus A B Hình 4.13 Sự đối kháng nấm rơm nấm Paecilomyces formosus A: Nấm rơm Hình 4.4 B: Nấm rơm nấm Paecilomyces formosus 31 Nếu điều kiện môi trường nuôi cấy có nấm rơm phát triển tốt, mơi trường có xuất Paecilomyces formosus nấm rơm khơng thể phát triển Vì lồi nấm kí sinh hội nên ni cấy với nấm rơm lồi kí sinh lên nấm rơm đồng thời giết chết nấm rơm làm nấm rơm phát triển để môi trường lồi Paecilomyces formosus phát triển cách thuận lợi khơng bị cạnh tranh Có xuất Paecilomyces formosus ni trồng lồi giết chết tơ nấm rơm làm nấm phát triển gây mùa nấm, tốn tiền bạc công sức đầu tư 4.4.3 Nấm Lentinus squarrosulus A Hình 4.4 B Trong Hình 4.14 Sự đối kháng nấm rơm nấm Lentinus squarrosulus môi trường với thời gian điều kiện nuôi cấy nấm rơm phát triển A: Nấm rơm B: Nấm rơm nấm Coprinus độc lập khơng có nhiễm nấm Lentinus squarrosulus tơ nấm phát triển hết bề mặt đĩa thạch khơng có cạnh tranh mặt chất dinh dưỡng không gian sống Cũng điều kiện bị nhiễm lồi nấm Lentinus squarrosulus nấm rơm phát triển mạnh lồi Lentinus squarrosulus Hình 4.4 khơng phát triển hết bề mặt thạch bị lồi Lentinus squarrosulus cạnh tranh mặt không gian chất dinh dưỡng Vì xuất lồi nấm nuôi trồng nấm rơm làm suất bị giảm lồi nấm cạnh tranh nguồn dinh dưỡng với nấm rơm sử dụng chất dinh dưỡng 4.5 Kết khảo sát khả kháng nấm dịch chiết từ cỏ lào Chủng nấm Coprinus ephemeroides Khả kháng khuẩn Đối chứng Dịch chiết + Đường kính vòng kháng nấm (mm) 11,80 ± 0,30 32 Paecilomyces formosus Lentinus squarrosulus - + 6,12 ± 0,08 12,17 ± 0,25 Bảng 4.6 Khả kháng nấm gây hại dịch chiết cỏ lào Ghi chú: X ± D: Giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (-) khả kháng nấm khơng có khả kháng nấm (+) khả kháng nấm trung bình (++) khả kháng nấm tốt a ĐC Hình 4.15 Kháng nấm Coprinus ephemeroides (a): Mẫu dịch chiết(ĐC): Nước cất a ĐC Hình 4.16 Kháng nấm Paecilomyces formosus (a): Mẫu dịch chiết(ĐC): Nước cất ĐC a Hình 4.17 Kháng nấm Lentinus squarrosulus (a): Mẫu dịch chiết(ĐC): Nước cất 33 Khi chiết dịch cỏ lào với dung môi nước nhiệt độ 70 0C thời gian 45 phút dịch chiết thu có khả kháng Coprinus ephemeroides Lentinus squarrosulus mức độ trung bình với đường kính vòng kháng khuẩn 11,80 ± 0,30 mm 12,17 ± 0,25 mm khả kháng Paecilomyces formosus Vì ta ứng dụng dịch chiết cỏ lào vào việc phòng chống tiêu diệt hai loại nấm Coprinus ephemeroides Lentinus squarrosulus tìm cách khác để phòng trừ ức chế sinh trưởng loài Paecilomyces formosus 4.6 Kết khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết từ cỏ lào Chủng nấm Salmonella Streptococcus mutans Khả kháng khuẩn Đối chứng Dịch chiết + Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) 9,77 ± 0,21 11,13 ± 0,15 Bảng 4.7 Khả kháng khuẩn dịch chiết cỏ lào Ghi chú: X ± D: Giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (-): khả kháng khuẩn khơng có khả kháng khuẩn (+): khả kháng khuẩn trung bình (++): khả kháng khuẩn tốt a ĐC b Hình 4.18 Kháng Salmonella typhi (a), (b): Mẫu dịch chiết (ĐC): Nước cất 34 a ĐC ịc Hình 4.19 Kháng Streptococcus mutans Dịch chiết từ cây(a): cỏMẫu lào dịch có chiết(ĐC): khả năngNước kháng cất trung bình Streptococcus mutans với đường kính vòng kháng khuẩn 11,13 ± 0,15 mm ta ứng dụng điều chế thuốc kháng sâu từ từ cỏ lào Ngoài dịch chiết kháng Salmonella typhi mức độ yếu với đường kính 9,77 ± 0,21 mm 35 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Thông qua khảo sát điều kiện thích hợp để chiết dịch từ cỏ lào ta thu điều kiện tối ưu là: dung môi nước thời gian 45 phút nhiệt độ 70 0C, với tỉ lệ nguyên liệu dung môi 1:20 Dịch chiết cỏ lào có chứa tanin, polyphenol, coumarin, steroid terpenoid dịch chiết có chứa hàm lượng polyphenol nên sử dụng thử nghiệm hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn Sau lấy mẫu, phân lập đem định danh loài nấm gây hại ni trồng nấm rơm ta có loài là: Coprinus ephemeroides, Lentinus squarrosulus, Paecilomyces formosus Dịch chiết từ cỏ lào có khả kháng khuẩn mức trung bình với lồi Streptococcus mutans với đường kính vòng kháng khuẩn 11,13 ± 0,15 mm Đối với Salmonela typhi khả kháng khuẩn với đường kính vòng kháng khuẩn 9,77 ± 0,21 mm Ngồi dịch chiết từ cỏ lào có khả kháng số lồi nấm gây hại ni trồng nấm rơm Coprinus ephemeroides , Lentinus squarrosulus với đường kính vòng kháng khuẩn 11,80 ± 0,30 mm, 12,17 ± 0.25 mm Nhưng lại khả kháng lại Paecilomyces formosu 36 5.2 Kiến nghị Vì kiến thức kinh nghiệm hạn chế đề tài thực thời gian ngắn nên chưa thể hoàn thiện đề tài cách tốt nên sau có nhiều thời gian em xin đưa số kiến nghị: - Tiếp tục khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết dịch từ cỏ lào để tìm điều kiện tối ưu để trích ly hồn tồn hợp chất có - đặc tính kháng nấm kháng khuẩn Nghiên cứu sản xuất chế phẩm kháng nấm gây hại nuôi trồng nấm - rơm từ cỏ lào Tìm hợp chất lồi có khả kháng Paecilomyces formosus 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Nguyễn Thanh Bảo, 2013, Vi khuẩn học, Nhà xuất Y dược Đại học y dược TP Hồ Chí Minh – Khoa y - Bộ mơn Vi sinh Lê Huy Chính, 2007, Vi sinh vật học, NXB Y học Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Nguyễn Đình Quyển, 2010, Vi sinh vật học, NXB Giáo dục Việt Nam Nguyễn Đức Lượng, 2002, Vi sinh vật học công nghiệp Tập 2, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Ngơ Quốc Ln , Lâm Thanh Phong Nguyễn Ngọc Hạnh, 2006, “Một số kết nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu flavonoid” Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007, Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Kim Phi Phụng , Nguyễn Ngọc Sương, 2001-2004, “Nghiên cứu tách chiết cô lập hợp chất hữu có hoạt tính sinh học từ Cỏ lào”, Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng anh: Anushika Sirinthipaporn and Wannee Jiraungkoorskul, 2007, Wound Healing Property Review of Siam Weed Chromolaena odorata, Pharmacogn Review 38 Stanley Anyanwu, Imeobong J Inyang, Enosakhare A Asemota, Okechi O Obioma, Dorathy C Okpokam,and Victoria O Agu, 2017, Effect of ethanolic extract of Chromolaena odorata on the kidneys and intestines of healthy albino rats, Integrative Medcine Research 10 Jalal Heshmatnia, Majid Marjani, Seyed Alireza Mahdaviani, Parvaneh Adimi, Mihan Pourabdollah, Payam Tabarsi, Fereshte Mahdavi, Hamidreza Jamaati, Ian M Adcock, Johan Garssen, Aliakbar Velayati , Davood Mansouri and Esmaeil Mortaz, 2016, Paecilomyces formosus Infection in an Adult Patientwith Undiagnosed Chronic Granulomatous Disease, J Clin Immunol 11 Odey MO, Iwara IA, Udiba UU, Johnson JT, Inekwe UV, Asenye ME, Victor O (2012), “Preparation of Plant Extracts from Indigenous Medicinal Plants”, 1(12), pp 688-692 12 Russell E Lewis, PharmD (2011), “Current concepts in antifungal pharmacology”, Mayo Clinic Proceedings, pp 805-817 13 Uyi O.O, Ekhator F, Ikuenobe C.E, Borokini T.I, Aigbokhan E.I, Egbon I.N,2014, Chromolaena odorata in vasion in Nigeria: a case for coordinated biological control Manag Biol Invasion 2014;5:377–393 Tài liệu internet: 13.https://vietnammoi.vn/yen-bach-cay-thuoc-quy-khong-phai-ai-cung-biet43410.html 14 https://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/colao.htm 15 http://duocthaothucdung.blogspot.com/2015/03/co-hoi-jack-in-bush.html 16 https://elurikkus.ee/bie-hub/species/213354#classification 17 https://en.wikipedia.org/wiki/Coprinopsis_ephemeroides\ 18 https://en.wikipedia.org/wiki/Lentinus 39 19 https://en.wikipedia.org/wiki/Streptococcus_mutans 20 https://vi.wikipedia.org/wiki/Salmonella PHỤ LỤC Phụ lục 1: Đường chuẩn acid gallic Bảng số liệu đo OD đường chuẩn acid gallic: Nồng độ (µg/mL) OD 10 20 30 40 50 0,019 0,138 0,254 0,386 0,463 0,573 Phụ lục 2: Đo độ đục chuẩn Mc Farland Độ đục chuẩn Mc Farland dùng để điều chỉnh độ đục dịch nuôi cấy vi khuẩn nấm thí nghiệm khảo sát khả kháng khuẩn kháng nấm dịch chiết từ cỏ lào Độ đục chuẩn Mc Faland 0,5 chuẩn bị trước 40 sử dụng quang phổ kế UV-VIS bước sóng 625 nm, giá trị cho phép từ 0,08 – 0,1 abs Cách pha dung dịch Mc Faland: 9,95 mL H2SO4 (1%) + 0,05 mL BaCl2.2H2O (1%) Phụ lục 3: Bảng số liệu kết xử lí số liệu phần mền SAS thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng dung môi đến hàm lượng polyphenol từ dịch chiết cỏ lào Loại dung môi Lần Hàm lượng polyphenol Lần (mgGAE/gdb) Lần Nước Cất 29,457 28,321 28,425 Ethanol (96%) 13,949 14,672 14,250 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels dm Number of Observations Read Number of Observations Used Source DF Sum of Mean Square Squares Model 312.9437040 312.9437040 Error 1.0525833 0.2631458 Corrected Total 313.9962873 R-Square 0.996648 Source dm Coeff Var 2.384574 DF Root MSE 0.512977 Anova SS 312.9437040 Values AB 6 F Value Pr > F 1189.24 F F F F F F F